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甲型副伤寒沙门菌特异性基因筛选及PCR检测体系建立
被引量:
4
1
作者
翟立公
王俊颖
+4 位作者
张小雨
孟欣
崔葆
赵婉晴
牛萍
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2018年第2期151-157,共7页
以甲型副伤寒沙门菌为检测目标,通过比较基因组和聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)验证方法筛选到4个该血清型的特异性基因,其中以gene_3105作为该血清型的检测靶点设计引物PA23;并结合沙门菌属特异性引物139-141,建立一...
以甲型副伤寒沙门菌为检测目标,通过比较基因组和聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)验证方法筛选到4个该血清型的特异性基因,其中以gene_3105作为该血清型的检测靶点设计引物PA23;并结合沙门菌属特异性引物139-141,建立一种甲型副伤寒沙门菌的PCR检测方法。优化PCR反应体系,并对该检测体系的特异性、灵敏度、抗干扰能力及人工污染样品检出限等方面进行评价。结果表明,当样品中含有甲型副伤寒沙门菌时,该体系能扩增出2条特异性条带,含有其他血清型的沙门菌仅能扩增出284 bp条带,不含沙门菌无扩增条带产生。灵敏度评价表明,基因组DNA和纯菌菌落检出限分别为32.4 pg/μL和4.3×10~3 CFU/m L;抗干扰能力实验显示,当鸡肉背景菌群和猪肉背景菌群浓度在10~6 CFU/m L和4.87×10~7 CFU/m L时,检出限为6.43×10~4 CFU/m L。当无菌的鸡肉和猪肉样品中添加N CFU/25 g甲型副伤寒沙门菌时,经10 h增菌,检测结果为阳性(0<N<10)。实验建立甲型副伤寒沙门菌PCR检测方法具有较好的特异性和灵敏度,有很好的应用价值,可在食品安全领域广泛应用。
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关键词
甲型副伤寒沙门菌
比较基因组
血清
型
特异性基因
聚合酶链式反应
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职称材料
胰腺囊肿脓液中检出1株甲型副伤寒沙门菌
被引量:
1
2
作者
储从家
潘丽
+1 位作者
吴惠玲
孔繁林
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第6期362-362,共1页
关键词
胰腺囊肿
甲型副伤寒沙门菌
检测
血清学鉴定
药敏试验
细
菌
培养
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职称材料
多重耐药甲型副伤寒沙门菌耐药基因的研究
被引量:
1
3
作者
李军
陈桂林
+1 位作者
黄海
陶建蜀
《济宁医学院学报》
2009年第4期233-235,共3页
目的提取贵阳地区1株甲型副伤寒沙门菌基因组,以确定其是否带有抗性基因。方法从30例样本中筛选一例贵阳地区当前单簇耐药谱最广的菌株,选择一株含抗药性最多的甲型副伤寒沙门菌,提取其基因组,进行PCR扩增Ⅰ类整合子和相关耐药基因。结...
目的提取贵阳地区1株甲型副伤寒沙门菌基因组,以确定其是否带有抗性基因。方法从30例样本中筛选一例贵阳地区当前单簇耐药谱最广的菌株,选择一株含抗药性最多的甲型副伤寒沙门菌,提取其基因组,进行PCR扩增Ⅰ类整合子和相关耐药基因。结果通过对该菌Ⅰ类整合子和抗性基因的检测,发现Ⅰ类整合子并携带抗性基因sul2t、etA(G)、blaTEM1等,抗性基因应定位在染色体上。结论多药耐药的甲型副伤寒沙门菌为临床分离株,抗性基因定位在于染色体上,不在以往学者怀疑的3.6kb质粒上。结果显示,此株甲型副伤寒沙门菌的抗性基因应是以Ⅰ类整合子的形式存在染色体上。
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关键词
甲型副伤寒沙门菌
多药耐药
基因组
整合子
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职称材料
从胸部脓液中分离出1株甲型副伤寒沙门菌
4
作者
王卫萍
邵海枫
+1 位作者
李珍大
张小卫
《医学研究生学报》
CAS
2007年第9期1006-1006,共1页
关键词
甲型副伤寒沙门菌
脓液
药物敏感试验
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职称材料
从卵巢囊肿脓液中检出1株甲型副伤寒沙门菌
5
作者
储从家
吴惠玲
+1 位作者
高晓玲
孔繁林
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第5期346-346,共1页
关键词
卵巢囊肿
甲型副伤寒沙门菌
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职称材料
拔牙后感染甲型副伤寒沙门菌败血症1例
6
作者
敖道畅
《广州医学院学报》
2007年第5期62-62,共1页
关键词
败血症
甲型副伤寒沙门菌
拔牙
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职称材料
甲型副伤寒杆菌pagC基因分布及其重组表达产物免疫保护作用
被引量:
4
7
作者
张佳
范欣丽
+2 位作者
葛玉梅
严杰
孙爱华
《浙江大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第2期171-176,231,共7页
目的:了解甲型副伤寒沙门菌临床菌株pagC基因携带率及序列保守性,确定甲型副伤寒沙门菌pagC基因原核重组表达产物rPagC免疫原性和保护作用。方法:采用PCR及其产物测序了解甲型副伤寒沙门菌临床菌株pagC基因携带率及序列保守性。构建甲...
目的:了解甲型副伤寒沙门菌临床菌株pagC基因携带率及序列保守性,确定甲型副伤寒沙门菌pagC基因原核重组表达产物rPagC免疫原性和保护作用。方法:采用PCR及其产物测序了解甲型副伤寒沙门菌临床菌株pagC基因携带率及序列保守性。构建甲型副伤寒沙门菌pagC基因原核表达系统,Ni-NTA亲和层析法提纯表达的rPagC。采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检测rPagC表达情况及其产量。采用免疫扩散法、ELISA和Western Blot鉴定其抗原性和免疫反应性。采用小鼠感染模型了解rPagC对甲型副伤寒杆菌感染的免疫保护效果,微量肥达试验检测rPagC免疫小鼠血清凝集伤寒和副伤寒沙门菌的效果。结果:所有被检测的甲型副伤寒沙门菌临床菌株均携带pagC基因,其核苷酸和氨基酸序列相似性分别高达99.1%~100%和98.4%~100%。所构建的原核表达系统能高效表达rPagC。rPagC免疫家兔可产生高效价抗体并能与甲型副伤寒杆菌全菌抗血清产生阳性Western杂交信号。ELISA结果显示,97.1%(66/68)甲型副伤寒患者血清标本rPagC抗体阳性。100μg和200μg rPagC对感染小鼠的免疫保护率分别为73.3%(11/15)和86.7%(13/15)。rPagC免疫小鼠血清对甲型副伤寒沙门菌和伤寒沙门菌H抗原凝集效价高达1∶10~1∶40。结论:pagC基因在甲型副伤寒沙门菌株中分布广泛。rPagC有良好的免疫原性及较强的免疫保护作用,可作为甲型副伤寒杆菌基因工程疫苗候选抗原。
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关键词
沙门
菌
甲
型
副伤寒
免疫学
沙门
菌
甲
型
副伤寒
遗传学
基因表达调控
细
菌
重组
遗传
基因表达
pagC基因
重组表达
免疫原性
免疫保护性
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职称材料
肥达试验在甲型副伤寒诊断中的价值
被引量:
5
8
作者
叶慧
刘真真
+1 位作者
刘焱斌
冯萍
《临床荟萃》
CAS
北大核心
2006年第16期1195-1196,共2页
关键词
沙门
菌
甲
型
副伤寒
血凝集试验
诊断
鉴别
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职称材料
题名
甲型副伤寒沙门菌特异性基因筛选及PCR检测体系建立
被引量:
4
1
作者
翟立公
王俊颖
张小雨
孟欣
崔葆
赵婉晴
牛萍
机构
安徽科技学院食品药品学院
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2018年第2期151-157,共7页
基金
安徽高校自然科学研究重点项目(KJ2016A182)
安徽科技学院人才引进项目(SPYJ201602)
安徽科技学院大学生创新项目(16ZCX34)
文摘
以甲型副伤寒沙门菌为检测目标,通过比较基因组和聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)验证方法筛选到4个该血清型的特异性基因,其中以gene_3105作为该血清型的检测靶点设计引物PA23;并结合沙门菌属特异性引物139-141,建立一种甲型副伤寒沙门菌的PCR检测方法。优化PCR反应体系,并对该检测体系的特异性、灵敏度、抗干扰能力及人工污染样品检出限等方面进行评价。结果表明,当样品中含有甲型副伤寒沙门菌时,该体系能扩增出2条特异性条带,含有其他血清型的沙门菌仅能扩增出284 bp条带,不含沙门菌无扩增条带产生。灵敏度评价表明,基因组DNA和纯菌菌落检出限分别为32.4 pg/μL和4.3×10~3 CFU/m L;抗干扰能力实验显示,当鸡肉背景菌群和猪肉背景菌群浓度在10~6 CFU/m L和4.87×10~7 CFU/m L时,检出限为6.43×10~4 CFU/m L。当无菌的鸡肉和猪肉样品中添加N CFU/25 g甲型副伤寒沙门菌时,经10 h增菌,检测结果为阳性(0<N<10)。实验建立甲型副伤寒沙门菌PCR检测方法具有较好的特异性和灵敏度,有很好的应用价值,可在食品安全领域广泛应用。
关键词
甲型副伤寒沙门菌
比较基因组
血清
型
特异性基因
聚合酶链式反应
Keywords
Salmonella Paratyphi A
comparative genomics
serotype-specific genes
PCR
分类号
TS201.6 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
胰腺囊肿脓液中检出1株甲型副伤寒沙门菌
被引量:
1
2
作者
储从家
潘丽
吴惠玲
孔繁林
机构
玉溪市人民医院检验科
出处
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第6期362-362,共1页
关键词
胰腺囊肿
甲型副伤寒沙门菌
检测
血清学鉴定
药敏试验
细
菌
培养
分类号
R735.9 [医药卫生—肿瘤]
R516.3 [医药卫生—内科学]
在线阅读
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职称材料
题名
多重耐药甲型副伤寒沙门菌耐药基因的研究
被引量:
1
3
作者
李军
陈桂林
黄海
陶建蜀
机构
济宁医学院附属第一人民医院
嘉祥县第一人民医院
贵阳医学院临床生物化学教研室
出处
《济宁医学院学报》
2009年第4期233-235,共3页
基金
贵州省优秀教育人才省长专项基金资助
文摘
目的提取贵阳地区1株甲型副伤寒沙门菌基因组,以确定其是否带有抗性基因。方法从30例样本中筛选一例贵阳地区当前单簇耐药谱最广的菌株,选择一株含抗药性最多的甲型副伤寒沙门菌,提取其基因组,进行PCR扩增Ⅰ类整合子和相关耐药基因。结果通过对该菌Ⅰ类整合子和抗性基因的检测,发现Ⅰ类整合子并携带抗性基因sul2t、etA(G)、blaTEM1等,抗性基因应定位在染色体上。结论多药耐药的甲型副伤寒沙门菌为临床分离株,抗性基因定位在于染色体上,不在以往学者怀疑的3.6kb质粒上。结果显示,此株甲型副伤寒沙门菌的抗性基因应是以Ⅰ类整合子的形式存在染色体上。
关键词
甲型副伤寒沙门菌
多药耐药
基因组
整合子
Keywords
Salmonella enterica Paratyphi A
Multidrug resistance
Geonm
Integron
分类号
R378.24 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
从胸部脓液中分离出1株甲型副伤寒沙门菌
4
作者
王卫萍
邵海枫
李珍大
张小卫
机构
南京军区南京总医院解放军临床检验医学研究所
出处
《医学研究生学报》
CAS
2007年第9期1006-1006,共1页
关键词
甲型副伤寒沙门菌
脓液
药物敏感试验
分类号
R516.3 [医药卫生—内科学]
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职称材料
题名
从卵巢囊肿脓液中检出1株甲型副伤寒沙门菌
5
作者
储从家
吴惠玲
高晓玲
孔繁林
机构
玉溪市人民医院检验科
出处
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第5期346-346,共1页
关键词
卵巢囊肿
甲型副伤寒沙门菌
分类号
R446.5 [医药卫生—诊断学]
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职称材料
题名
拔牙后感染甲型副伤寒沙门菌败血症1例
6
作者
敖道畅
机构
中山大学附属中山医院感染科
出处
《广州医学院学报》
2007年第5期62-62,共1页
关键词
败血症
甲型副伤寒沙门菌
拔牙
分类号
R782.11 [医药卫生—口腔医学]
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职称材料
题名
甲型副伤寒杆菌pagC基因分布及其重组表达产物免疫保护作用
被引量:
4
7
作者
张佳
范欣丽
葛玉梅
严杰
孙爱华
机构
温州医学院检验医学院和生命科学学院
浙江医学高等专科学校
浙江大学医学院病原生物学系
出处
《浙江大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第2期171-176,231,共7页
基金
浙江省卫生高层次创新人才培养工程资助项目(2012-241)
浙江省医药卫生科学研究基金资助项目(2011KYB006)
文摘
目的:了解甲型副伤寒沙门菌临床菌株pagC基因携带率及序列保守性,确定甲型副伤寒沙门菌pagC基因原核重组表达产物rPagC免疫原性和保护作用。方法:采用PCR及其产物测序了解甲型副伤寒沙门菌临床菌株pagC基因携带率及序列保守性。构建甲型副伤寒沙门菌pagC基因原核表达系统,Ni-NTA亲和层析法提纯表达的rPagC。采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检测rPagC表达情况及其产量。采用免疫扩散法、ELISA和Western Blot鉴定其抗原性和免疫反应性。采用小鼠感染模型了解rPagC对甲型副伤寒杆菌感染的免疫保护效果,微量肥达试验检测rPagC免疫小鼠血清凝集伤寒和副伤寒沙门菌的效果。结果:所有被检测的甲型副伤寒沙门菌临床菌株均携带pagC基因,其核苷酸和氨基酸序列相似性分别高达99.1%~100%和98.4%~100%。所构建的原核表达系统能高效表达rPagC。rPagC免疫家兔可产生高效价抗体并能与甲型副伤寒杆菌全菌抗血清产生阳性Western杂交信号。ELISA结果显示,97.1%(66/68)甲型副伤寒患者血清标本rPagC抗体阳性。100μg和200μg rPagC对感染小鼠的免疫保护率分别为73.3%(11/15)和86.7%(13/15)。rPagC免疫小鼠血清对甲型副伤寒沙门菌和伤寒沙门菌H抗原凝集效价高达1∶10~1∶40。结论:pagC基因在甲型副伤寒沙门菌株中分布广泛。rPagC有良好的免疫原性及较强的免疫保护作用,可作为甲型副伤寒杆菌基因工程疫苗候选抗原。
关键词
沙门
菌
甲
型
副伤寒
免疫学
沙门
菌
甲
型
副伤寒
遗传学
基因表达调控
细
菌
重组
遗传
基因表达
pagC基因
重组表达
免疫原性
免疫保护性
Keywords
Salmonella paratyphi A/immunology
Salmonella paratyphi A/genetics
Gene expression regulation, bacterial
Recombination, genetic
Gene expression
pagC gene
Recombinant expression
Immunogenicity
Immunoprotection
分类号
R392.1 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
肥达试验在甲型副伤寒诊断中的价值
被引量:
5
8
作者
叶慧
刘真真
刘焱斌
冯萍
机构
四川大学华西医院感染性疾病中心
出处
《临床荟萃》
CAS
北大核心
2006年第16期1195-1196,共2页
关键词
沙门
菌
甲
型
副伤寒
血凝集试验
诊断
鉴别
分类号
R516.3 [医药卫生—内科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
甲型副伤寒沙门菌特异性基因筛选及PCR检测体系建立
翟立公
王俊颖
张小雨
孟欣
崔葆
赵婉晴
牛萍
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2018
4
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职称材料
2
胰腺囊肿脓液中检出1株甲型副伤寒沙门菌
储从家
潘丽
吴惠玲
孔繁林
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003
1
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职称材料
3
多重耐药甲型副伤寒沙门菌耐药基因的研究
李军
陈桂林
黄海
陶建蜀
《济宁医学院学报》
2009
1
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职称材料
4
从胸部脓液中分离出1株甲型副伤寒沙门菌
王卫萍
邵海枫
李珍大
张小卫
《医学研究生学报》
CAS
2007
0
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职称材料
5
从卵巢囊肿脓液中检出1株甲型副伤寒沙门菌
储从家
吴惠玲
高晓玲
孔繁林
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005
0
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职称材料
6
拔牙后感染甲型副伤寒沙门菌败血症1例
敖道畅
《广州医学院学报》
2007
0
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职称材料
7
甲型副伤寒杆菌pagC基因分布及其重组表达产物免疫保护作用
张佳
范欣丽
葛玉梅
严杰
孙爱华
《浙江大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2013
4
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职称材料
8
肥达试验在甲型副伤寒诊断中的价值
叶慧
刘真真
刘焱斌
冯萍
《临床荟萃》
CAS
北大核心
2006
5
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职称材料
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