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贵州半细毛羊促生长激素分泌素受体基因SNPs筛查与变异分析 被引量:1
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作者 张琼娣 宋德荣 +5 位作者 周大荣 彭华 刘若余 吴蕊汝 江兴美 吴萍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第4期189-193,共5页
通过研究促生长激素分泌素受体(growth hormone secretagogue receptor,GHSR)基因多态性,为贵州半细毛羊选种选育提供进一步的分子生物学依据。试验选取36只贵州半细毛羊构建DNA池,设计1对引物扩增其GHSR基因第2外显子及第1、2内含子部... 通过研究促生长激素分泌素受体(growth hormone secretagogue receptor,GHSR)基因多态性,为贵州半细毛羊选种选育提供进一步的分子生物学依据。试验选取36只贵州半细毛羊构建DNA池,设计1对引物扩增其GHSR基因第2外显子及第1、2内含子部分序列并进行双向测序,对SNPs位点等位基因频率进行估算,利用在线生物信息学软件分析SNPs位点对GHSR基因RNA二级结构的影响。结果发现,在贵州半细毛羊GHSR基因中筛选到2个SNPs:T70G和G229A,均为同义突变,SNPs位点导致GHSR基因mRNA二级结构发生变化。GHSR基因多态性可能影响贵州半细毛羊的生长。 展开更多
关键词 贵州半细毛羊 生长激素分泌素受体基因 SNP DNA池
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猪生长激素促分泌素受体基因真核表达载体的构建及鉴定
2
作者 石琳 蔺帅 +2 位作者 周东庆 孙艳君 王志强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第1期43-46,共4页
本试验旨在构建猪生长激素促分泌素受体(pGHS-R)真核表达系统,并瞬时转染人源胚胎肾细胞(HEK293T)观察其表达情况。以猪基因组为模板,通过剪接重叠延伸聚合酶链式反应(SOE-PCR)克隆出pGHS-R的编码区序列,插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中... 本试验旨在构建猪生长激素促分泌素受体(pGHS-R)真核表达系统,并瞬时转染人源胚胎肾细胞(HEK293T)观察其表达情况。以猪基因组为模板,通过剪接重叠延伸聚合酶链式反应(SOE-PCR)克隆出pGHS-R的编码区序列,插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/pGHS-R,酶切鉴定并测序,加myc标签,瞬时转染HEK293T细胞,用Western blotting鉴定该重组质粒是否能在真核细胞中表达相应的目的蛋白。结果显示,本试验成功扩增出pGHS-R编码序列,酶切和测序结果表明pcDNA3.1(+)-myc/pGHS-R构建正确,Western blotting方法证实转染的该质粒能在HEK293T细胞中正确表达目的蛋白。结果表明,本试验成功构建了pGHS-R真核表达载体,并正确表达蛋白,为进一步研究GHS-R的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 生长激素分泌素受体 真核表达 剪接重叠延伸聚合酶链式反应 人源胚胎肾细胞
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9种WADA禁用生长激素释放肽和生长激素促分泌素的HPLC-MS/MS检测及尿中稳定性研究 被引量:3
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作者 申利 杨辛兰 +4 位作者 张力思 河春姬 周鑫淼 徐友宣 闫宽 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期420-426,共7页
目的:选取世界反兴奋剂机构(WADA)禁用的7种生长激素释放肽(GHRP-1,GHRP-2,GHRP-4,GHRP-5,GHRP-6,Hexarelin和Alexamorelin)和2种生长激素促分泌素(Anamorelin和Ipamorelin)为研究对象,建立人尿中的HPLC-MS/MS检测方法,进行稳定性实验... 目的:选取世界反兴奋剂机构(WADA)禁用的7种生长激素释放肽(GHRP-1,GHRP-2,GHRP-4,GHRP-5,GHRP-6,Hexarelin和Alexamorelin)和2种生长激素促分泌素(Anamorelin和Ipamorelin)为研究对象,建立人尿中的HPLC-MS/MS检测方法,进行稳定性实验。方法:使用Oasis?WCX固相提取小柱(1cc,30mg)对尿样进行化学前处理,尿样加入内标后离心,取1m L加入小柱,依次用5%NH4OH和20%CH3CN清洗后,用含2%甲酸的水/乙腈(1/3)洗脱液洗脱,35℃氮气流下吹干,复溶后进样于LC-MS/MS。使用1290/6470液相色谱质谱仪和Zorbax 300SB-C18色谱柱进行定性分析,流动相采用含0.2%甲酸的水/乙腈体系。结果:检测限根据不同物质分布在0.01~0.5 ng/m L(S/N>3)。回收率分布在40%~76%之间,日内精密度和日间精密度均小于15%,尿中基质无明显干扰。室温,冷藏条件储存和反复冻融对Anamorelin、GHRP-2、GHRP-4和GHRP-5有明显影响。结论:建立了尿中9种生长激素释放肽和生长激素促分泌素的HPLC-MS/MS检测方法,方法简单,特异性、灵敏度均可满足WADA实验室国际标准和技术文件要求。现已应用于我实验室的常规检测。尿样在传送、检测及实验室长期保存过程中应尽量避免反复冻融。 展开更多
关键词 禁用物质 生长激素释放肽 生长激素分泌素 固相提取 反复冻融
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鲑鱼生长激素基因表达产物的促生长效应 被引量:3
4
作者 张培军 徐永立 王艳秋 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 1995年第6期1-3,共3页
关键词 鲑鱼 生长激素 基因 生长效应
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重组鲑鱼生长激素基因酵母对鲤鱼苗促生长作用研究 被引量:4
5
作者 李晶 沙长青 杨成辉 《中国饲料》 北大核心 2004年第18期30-30,33,共2页
关键词 重组鲑鱼生长激素基因酵母 鲤鱼苗 生长作用 饲料添加剂
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牛生长激素基因向鲤鱼受精卵的导人与促生长效应
6
作者 魏彦章 许克圣 +2 位作者 李国华 谢岳峰 朱作言 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1992年第5期17-19,共3页
关键词 生长激素 基因 生长效应鱼
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鲤鱼(Cyprinus carpio)生长激素基因克隆及原核表达 被引量:32
7
作者 白俊杰 马进 +2 位作者 简清 李新辉 罗建仁 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第3期409-412,共4页
采用逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,从鲤鱼脑垂体总RNA中扩增出编码鲤鱼生长激素(GH)成熟肽基因序列.定向克隆至质粒pUC18,克隆的鲤鱼GHcDNA不含信号肽序列并以新的起始密码子ATG取代鲤鱼GHc... 采用逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,从鲤鱼脑垂体总RNA中扩增出编码鲤鱼生长激素(GH)成熟肽基因序列.定向克隆至质粒pUC18,克隆的鲤鱼GHcDNA不含信号肽序列并以新的起始密码子ATG取代鲤鱼GHcDNA第1个密码子TCA.序列分析表明,与Koren报道的鲤鱼GHcDNA相比有两个碱基差异,但推断的氨基酸序列完全一致.将鲤鱼GHcDNA定向克隆至原核表达载体pBV220,构建成重组鲤鱼GH基因表达载体pBVcGH8.SDS-PAGE和薄层扫描分析表明:经42℃诱导,pBVcGH8在大肠杆菌中可表达一分子量约22000的特异蛋白,表达量占细胞总蛋白的29.2%.该基因重组的鲤鱼GH添加到饲料中投喂罗非鱼。 展开更多
关键词 鲤鱼 原核表达 生长 生长激素基因
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重组虹鳟生长激素酵母对罗非鱼的促生长作用研究 被引量:9
8
作者 马进 白俊杰 +2 位作者 简清 李新辉 罗建仁 《大连水产学院学报》 CSCD 北大核心 2001年第3期219-222,共4页
采用表达重组虹鳟生长激素的酵母工程菌Y33作为饲料添加剂投喂奥尼罗非鱼鱼种。结果表明 ,酵母胞内表达的虹鳟生长激素具有生物活性 ,能够经口服被鱼体肠道吸收 。
关键词 虹鳟 生长激素 罗非鱼 生长作用 饲料添加剂 基因重组
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重组鲈鱼生长激素酵母饲料添加剂及对网箱喂养海水鱼的促长效应 被引量:9
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作者 陈荣忠 双宝 +1 位作者 张锐 杨丰 《台湾海峡》 CAS CSCD 2003年第2期180-186,共7页
该文应用基因工程方法开展了具有加速鱼生长的鱼生长激素基因工程研究 ,构建了高效表达的鲈鱼生长激素甲醇毕赤酵母工程菌 .研究中试规模的培养基配方 ,解决中试工艺设计和生产试验及质量检验方面的问题 ;通过发酵培养该工程菌获得重组... 该文应用基因工程方法开展了具有加速鱼生长的鱼生长激素基因工程研究 ,构建了高效表达的鲈鱼生长激素甲醇毕赤酵母工程菌 .研究中试规模的培养基配方 ,解决中试工艺设计和生产试验及质量检验方面的问题 ;通过发酵培养该工程菌获得重组鱼生长激素产品 ,研究掺入饲料的合适比例 ,并进行生产规模的海水经济鱼类喂养试验 .先后对花尾胡椒鲷 (Plectorhinchuscinctus) ,卵形鲳鱼参(Trachinotusovatus) ,大黄鱼 (Pseudosciaenacrocea)等 3种海水经济鱼 (4批共约 6万尾 )进行生长状况对比 ,增重比率均值分别为 2 0 .0 %、1 7.3%、1 8.4 %和 56 .8% . 展开更多
关键词 基因工程 生长激素 鲈鱼 酵母饲料添加剂 网箱喂养 海水鱼 长效应 微生物 酵母工程菌
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生长激素释放肽(ghrelin)促生长作用和应用前景 被引量:2
10
作者 来景辉 范红结 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1085-1088,共4页
生长激素释放肽(ghrelin)是在大鼠和人胃内发现的,是一种生长激素促分泌素受体(growth hormone secretagogue receptor,GHSR)的内源性配体。ghrelin与位于垂体、下丘脑的GHSR结合后,具有促进生长激素释放、增加食欲、调节消化系统功能... 生长激素释放肽(ghrelin)是在大鼠和人胃内发现的,是一种生长激素促分泌素受体(growth hormone secretagogue receptor,GHSR)的内源性配体。ghrelin与位于垂体、下丘脑的GHSR结合后,具有促进生长激素释放、增加食欲、调节消化系统功能和能量代谢等作用。本文对ghrelin的结构、分布、生物学功能的近期研究成果及畜牧业上的应用前景进行综述,以期为相关添加剂的研究和开发提供依据。 展开更多
关键词 生长激素释放肽 生长激素分泌素受体 生物学功能
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猪生长激素cDNA克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量:4
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作者 白俊杰 叶星 +2 位作者 李新辉 简清 罗建仁 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期99-102,共4页
用逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)方法 ,从猪脑垂体总RNA中扩增出编码猪生长激素 (GH)成熟肽基因序列 ,定向克隆至质粒pUC18。序列分析表明 ,克隆的猪GHcDNA长 5 73bp ,不含信号肽序列 ,并在该序列之前加入一起始密码子ATG。将猪GHcDN... 用逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)方法 ,从猪脑垂体总RNA中扩增出编码猪生长激素 (GH)成熟肽基因序列 ,定向克隆至质粒pUC18。序列分析表明 ,克隆的猪GHcDNA长 5 73bp ,不含信号肽序列 ,并在该序列之前加入一起始密码子ATG。将猪GHcDNA定向克隆至原核表达载体pBV2 2 0 ,构建成重组猪GH基因表达载体pBVpGH7。SDS PAGE和薄层扫描分析表明 :经 42℃诱导 ,pBVpGH7在大肠杆菌中可表达一分子量约 2 2 0 0 0的特异蛋白 ,表达量约占细胞总蛋白的 2 0 .5 %。 展开更多
关键词 生长激素CDNA 基因克隆 大肠杆菌表达 鱼用饲料添加剂 生长作用 RT-PCR
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重组鲤鱼生长激素的试验制备与纯化 被引量:1
12
作者 简清 白俊杰 +3 位作者 李英华 叶星 罗建仁 劳海华 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期55-58,共4页
采用高效表达鲤鱼生长激素的大肠杆菌基因工程菌株E .coli(pBVcGH8)进行发酵培养 ,经温度诱导可产生一分子量约为 3.6 3× 10 -2 0 g的特异表达产物 ,该表达产物主要以包涵体的形式存在 ,表达量占菌体总蛋白的 2 9.2 %。表达产物经... 采用高效表达鲤鱼生长激素的大肠杆菌基因工程菌株E .coli(pBVcGH8)进行发酵培养 ,经温度诱导可产生一分子量约为 3.6 3× 10 -2 0 g的特异表达产物 ,该表达产物主要以包涵体的形式存在 ,表达量占菌体总蛋白的 2 9.2 %。表达产物经包涵体收集、洗涤等初步纯化后 ,纯度可达 85 .0 %。再经变性与复性后 ,用阴离子交换层析进一步分离纯化 ,最终可获得纯度为 96 .0 %的重组鲤鱼生长激素。用该纯化过的重组鲤鱼生长激素注射罗非鱼 。 展开更多
关键词 鲤鱼生长激素 生长作用 基因变组 制备 纯化
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生长激素释放肽及其生物学效应 被引量:1
13
作者 来景辉 范红结 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第11期66-69,共4页
生长激素释放肽(Ghrelin)是一种在动物体内广泛存在的生长激素促分泌素受体(GHSR)的内源性配体,Ghrelin与位于下丘脑的GHSR结合后,具有促进生长激素释放、增加食欲、调节消化系统功能及能量代谢等作用。文章就Ghrelin的结构、分布、生... 生长激素释放肽(Ghrelin)是一种在动物体内广泛存在的生长激素促分泌素受体(GHSR)的内源性配体,Ghrelin与位于下丘脑的GHSR结合后,具有促进生长激素释放、增加食欲、调节消化系统功能及能量代谢等作用。文章就Ghrelin的结构、分布、生物学效应及在畜牧业上的应用前景等方面进行综述,以期促进Ghrelin的进一步深入研究。 展开更多
关键词 GHRELIN 生长激素分泌素 生物学效应 展望
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转基因技术促进动物生长的研究进展
14
作者 杜晓惠 吴登俊 《畜禽业》 2002年第6期8-9,共2页
本文着重概述了转基因技术在促进动物生长方面的大量实验研究,尤其是生长激素的促生长效应,给不同动物的转基因研究以启发。
关键词 生长激素 生长效应 实验 基因技术 动物生长
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尼罗罗非鱼ghrelin基因的多态性及其与生长性状相关SNP位点的筛选 被引量:9
15
作者 王春晓 卢迈新 +7 位作者 高风英 刘志刚 曹建萌 朱华平 可小丽 王淼 叶星 叶卫 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期50-57,共8页
为了研究尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)生长激素促分泌素基因(ghrelin)的多态性及其与生长的相关性,研究以两个尼罗罗非鱼群体(快长群体和基础群体)的DNA样本各40份为模板,通过PCR扩增和测序获得ghrelin基因序列。通过Dnasp v5和ME... 为了研究尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)生长激素促分泌素基因(ghrelin)的多态性及其与生长的相关性,研究以两个尼罗罗非鱼群体(快长群体和基础群体)的DNA样本各40份为模板,通过PCR扩增和测序获得ghrelin基因序列。通过Dnasp v5和MEGA 5.0分析序列多态性、筛选有效SNP位点;采用Snapshot法对两个群体子代ghrelin基因中SNP位点进行基因分型,然后分析SNP位点基因型与生长性状的相关性。结果表明,快长群体ghrelin基因中的单核苷酸变异位点数(S)比基础群体要少,而核苷酸多态性(Pi)和平均核苷酸差异数(K)要略高于基础群体。共筛得3个有效SNP位点(S1、S2和S3),均分布于第1个内含子中。遗传结构分析表明,3个SNP位点在两个群体的子代中均为低度多态性位点(PIC<0.25),但处于Hardy-Weinberg平衡(P>0.05);快长群体子代中3个SNP位点的观测杂合度、期望杂合度和多态信息含量等遗传多样性参数均小于基础群体子代的相应值,3个SNP位点的遗传多样性参数、基因型和基因频率在同一群体中高度一致,SNP位点之间完全连锁。两个群体子代中3个SNP位点处的优势基因型相同,但快长群体子代中优势基因型频率要明显大于基础群体子代中相应基因型频率。对两个群体子代的生长性状与SNP基因型进行关联性分析的结果表明,尼罗罗非鱼个体的多项生长指标(体重、体长、体高、头长和尾柄高等)在不同基因型中存在显著差异(S1:GG>AG,S2:TT>AT,S3:AA>AT)(P<0.05)。D1双倍型(S1:GG,S2:TT,S3:AA)所对应的尼罗罗非鱼个体的多项生长指标(体重、体长、体高、头长和尾柄高等)显著高于D2双倍型(S1:AG,S2:AT,S3:AT)。以上结果表明,尼罗罗非鱼ghrelin基因3个SNP位点完全连锁,D1双倍型与快长性状密切相关,可作为尼罗罗非鱼分子标记辅助育种的候选标记。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 生长激素促分泌素基因 单核苷酸多态性位点 生长性状
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注射PGRF基因质粒于仔猪骨骼肌后促生长及代谢调控
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《生物技术通报》 CAS CSCD 2004年第5期57-57,共1页
关键词 仔猪 骨骼肌 下丘脑生长激素性腺激素释放因子 基因表达质粒 PGRF 生长激素释放因子
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生长肥育猪骨骼肌注射表达pGRF基因质粒的效应研究 被引量:6
17
作者 张勇 周安国 +3 位作者 吴德 朱宇旌 王康宁 杨凤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期375-381,共7页
将猪的GRF基因表达质粒注射于猪的骨骼肌后,研究其促生长效应与机理。选用始重6.3kg的44头去势长白×太湖仔猪,分6组,采用2×3因子安排的完全随机区组设计,按6~10kg、10~20kg、20~50kg、50~100kg4个阶段饲养。4个饲养阶段... 将猪的GRF基因表达质粒注射于猪的骨骼肌后,研究其促生长效应与机理。选用始重6.3kg的44头去势长白×太湖仔猪,分6组,采用2×3因子安排的完全随机区组设计,按6~10kg、10~20kg、20~50kg、50~100kg4个阶段饲养。4个饲养阶段的饲粮低蛋白水平分别是20.70%,17.90%,15.03%,13.00%;高蛋白水平分别是23.70%,20.90%,18.02%,16.00%。pGRF基因质粒注射剂量设0mg、0.5mg、1.0mg3个水平,于试验开始与试验猪体重达60kg时共注射基因质粒2次。测定各阶段日增重,饲料消耗量,耗料增重比以及30、70、100kg时血液中GH、GRF、IGF-I的浓度。100kg时屠宰进行胴体品质测定。结果表明:饲粮蛋白水平对各阶段及全期试验猪日增重均有显著影响(P<0.05或P<0.01),对50~100kg阶段与全期日采食量和耗料增重比有显著影响(P<0.05或P<0.01)。注射pGRF基因质粒对各阶段及全期日增重均有显著影响(P<0.05),对6~10kg、10~20kg、50~100kg3阶段及全期日采食量有显著影响(P<0.05),对6~10kg阶段、50~100kg阶段及全期耗料增重比有显著影响(P<0.05)。注射pGRF基因质粒对30kg及70kg体重时猪血液中GRF、GH、IGF-I浓度均有显著影响(P<0.05)。提高饲粮蛋白水平与注射pGRF基因质粒均可明显降低超声波测膘厚及屠宰测膘厚、增大眼肌面积(P<0.05)。 展开更多
关键词 生长肥育猪 骨骼肌 基因表达 PGRF基因质粒 生长效应 生长激素释放因子
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肌肉异位表达pGHRH的两种质粒对大鼠的促生长作用 被引量:1
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作者 孟庆勇 张雅丽 +2 位作者 解启发 巩霞 李宁 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第4期357-361,共5页
构建了两种猪生长激素释放激素(GHRH)的肌肉特异表达质粒ppG-A53f-H6-GHRH(ppG-H6)及ppG-A53f-H4-GHRH(ppG-H4).通过对大鼠进行肌肉注射,并于注射后分别记录0,3,7,11,14,17,20,24,27,31,34,38以及第41天的体重变化结果,同时分析了第20... 构建了两种猪生长激素释放激素(GHRH)的肌肉特异表达质粒ppG-A53f-H6-GHRH(ppG-H6)及ppG-A53f-H4-GHRH(ppG-H4).通过对大鼠进行肌肉注射,并于注射后分别记录0,3,7,11,14,17,20,24,27,31,34,38以及第41天的体重变化结果,同时分析了第20、27、34和第41天的血清生长激素(GH)浓度,以研究促生长表达质粒在动物体内的促生长作用.通过研究表明,外源的GHRH表达质粒在肌肉中获得了表达,并使动物体内的GH水平维持在一个相对稳定的较高水平上,导致的直观效果表现为:通过肌肉注射表达质粒ppG-H6对大鼠的生长有促进效果,在第34天的净增重显著于对照组((200.57±3.99)gvs(185.85±9.45)g,P<0.05).实验结果预示,利用注射肌肉特异异位表达GHRH蛋白可能促进动物生长. 展开更多
关键词 生长激素释放激素 肌肉表达 生长 质粒 基因治疗
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生长抑素基因工程苗对育肥猪肌肉嫩度和氨基酸的影响
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作者 黄波 王春凤 韦毕芬 《上海畜牧兽医通讯》 2006年第2期33-33,共1页
关键词 生长抑素基因工程苗 氨基酸含量 肌肉嫩度 育肥猪 免疫调控机理 生长激素 活载体疫苗 南京农业大学 绿色畜禽产品 免疫动物
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荷那龙罗非鱼两种GHSR基因的克隆与序列分析 被引量:5
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作者 高风英 王欢 +3 位作者 叶星 卢迈新 黄樟翰 朱华平 《广东海洋大学学报》 CAS 2011年第4期6-12,共7页
用RT-PCR和RACE方法,从荷那龙罗非鱼(Oreochromis hornorum)垂体中克隆到生长激素促分泌素受体(GHSR)cDNA全序列。荷那龙罗非鱼GHSR基因具有GHSR-1a与GHSR-1b两个高度保守cDNA序列。GHSR-1a序列全长1 646 bp,包括225 bp的5′非编码区,26... 用RT-PCR和RACE方法,从荷那龙罗非鱼(Oreochromis hornorum)垂体中克隆到生长激素促分泌素受体(GHSR)cDNA全序列。荷那龙罗非鱼GHSR基因具有GHSR-1a与GHSR-1b两个高度保守cDNA序列。GHSR-1a序列全长1 646 bp,包括225 bp的5′非编码区,266 bp的3′非编码区和1 155 bp的开放阅读框,编码384个氨基酸残基,具有7个跨膜结构域结构(transmembrane domains,TM);GHSR-1b序列全长1 877 bp,包括225 bp的5′非编码区,755 bp的3′非编码区和897 bp的开放阅读框,编码298个氨基酸残基,只具有前5个TM,在第6个TM的第4个氨基酸处开始缺失。将GHSR cDNA序列与基因组序列比较发现,这两种cDNA转录本来自同一个基因的不同变体。 展开更多
关键词 荷那龙罗非鱼 生长激素分泌素受体(GHSR) 基因克隆 基因序列
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