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牛骨胶原蛋白肽对于血管紧张素转化酶和二肽基肽酶-Ⅳ抑制活性的生物信息学预测及验证
1
作者 李永富 陈珺雯 +2 位作者 周玲 黄金荣 史锋 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第15期166-173,共8页
为进一步挖掘牛骨胶原蛋白肽的功能,该研究采用生物信息学方法对其血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)和二肽基肽酶-Ⅳ(dipeptidyl peptidase-Ⅳ,DPP-Ⅳ)的抑制活性进行高效分析预测。通过生物信息学筛选出60条新的... 为进一步挖掘牛骨胶原蛋白肽的功能,该研究采用生物信息学方法对其血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)和二肽基肽酶-Ⅳ(dipeptidyl peptidase-Ⅳ,DPP-Ⅳ)的抑制活性进行高效分析预测。通过生物信息学筛选出60条新的具有潜在生物活性的肽,并预测出对ACE和DPP-Ⅳ具有潜在抑制活性;分子对接可视化结果显示,肽可以与酶的活性位点通过氢键和疏水相互作用产生结合,从而发挥抑制作用。体外实验表明,牛骨胶原蛋白肽对ACE、DPP-Ⅳ的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))分别为3.48 mg/mL和19.94 mg/mL,其对于ACE具有较强的抑制活性,符合生物信息学的活性预测结果。该研究通过生物信息学方法预测并验证了牛骨胶原蛋白肽具有良好的ACE和DPP-Ⅳ抑制活性,这为应用生物信息学预测牛骨胶原蛋白肽的功能提供了科学指导。 展开更多
关键词 牛骨胶原蛋白肽 血管紧张素转化酶 二肽基肽酶-Ⅳ 生物信息学 分子对接 验证
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α-倒捻子素C3和C6位衍生物的合成及其抑制磷酸二酯酶4活性
2
作者 陈思竹 王雪 +5 位作者 吴银飞 黄尚瑛 于思 黄仪有 曹影影 何细新 《中山大学学报(自然科学版)(中英文)》 北大核心 2025年第3期26-35,共10页
以α-倒捻子素为先导化合物,对其C-3及C-6位羟基进行结构修饰,经烷基化、水解反应引入不同碳链长度的羧酸酯、羧酸、酰胺取代基,设计并合成了18个衍生物。采用[3H]标记液体闪烁计数法测试了衍生物体外抑制磷酸二酯酶4(PDE4)活性。活性... 以α-倒捻子素为先导化合物,对其C-3及C-6位羟基进行结构修饰,经烷基化、水解反应引入不同碳链长度的羧酸酯、羧酸、酰胺取代基,设计并合成了18个衍生物。采用[3H]标记液体闪烁计数法测试了衍生物体外抑制磷酸二酯酶4(PDE4)活性。活性测试结果表明5个衍生物(2a~6a)的PDE4抑制活性优于α-倒捻子素,其中7碳链长度的羧酸类衍生物5a的活性最强(IC_(50)319 nmol/L)。 展开更多
关键词 α-倒捻子素 衍生物 磷酸二酯酶4
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圆斑酶联免疫吸附试验诊断囊虫病——生物素-亲和素酶复合物在该方法中的应用 被引量：1
3
作者 吕刚 《海南医学院学报》 CAS 1999年第4期153-155,共3页
目的：应用生物素－亲和素－酶复合物系统，建立一种繁感、特异、经济简便的囊虫病血清学诊断。方法：生物素－亲和素－酶复合物圆斑酶联免疫吸附试验（ＡＢＣ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）、滤纸血斑ＡＢＣ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ。结果：ＡＢ... 目的：应用生物素－亲和素－酶复合物系统，建立一种繁感、特异、经济简便的囊虫病血清学诊断。方法：生物素－亲和素－酶复合物圆斑酶联免疫吸附试验（ＡＢＣ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）、滤纸血斑ＡＢＣ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ。结果：ＡＢＣ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ 诊断囊虫病，检出率（９５．９２％ ）远较圆斑酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）高８３．６７％ ，平均几何滴度（１∶２ ８０１．７３）约为Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ（１∶５８７．２６）的５ 倍；用该方法对４℃条件下保存３ 月的患者滤纸血斑样本进行检测，阳性率为９４．７４％ （５４／５７），无假阳性反应（０／４５）；对相同患者血清和滤纸血斑双份血样进行检测，阳性率均为９０％ （２０／２２）。结论：该方法提高了检出率，简化了采样及送样程序，适合于边远地区和用于流行病学调查。 展开更多
关键词 囊尾蚴病 诊断 生物素-亲和素-酶复合物 圆斑酶联免疫吸附试验
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CA125的生物素-亲和素酶联免疫检测方法的建立 被引量：3
4
作者 曾昭伟 王学谦 李会强 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第9期1675-1678,共4页
目的:建立CA125的生物素-亲和素酶联免疫检测(BA-ELISA)方法,进行方法学评价。方法:纯化卵巢癌患者腹水得到CA125抗原,制备生物素化CA125抗体,酶标板包被生物素化BSA,建立BA-ELISA反应系统。观察本方法的灵敏度、回收率、特异度、稳定... 目的:建立CA125的生物素-亲和素酶联免疫检测(BA-ELISA)方法,进行方法学评价。方法:纯化卵巢癌患者腹水得到CA125抗原,制备生物素化CA125抗体,酶标板包被生物素化BSA,建立BA-ELISA反应系统。观察本方法的灵敏度、回收率、特异度、稳定性等指标。测定卵巢癌患者以及卵巢良性肿瘤患者血清CA125水平,与化学发光免疫检测结果对比。结果:BA-ELISA方法灵敏度为3.18U/L,与CEA、PSA等交叉反应率低;高低浓度样品平均回收率分别为107.11%、99.96%,批内和批间变异分别为7.97%、8.04%,稳定性好。本研究与化学发光免疫检测检出结果差异无统计学意义,检测卵巢癌患者血清CA125水平,回归方程为y=-6.830+1.014x,r=0.993。检测卵巢良性肿瘤患者血清CA125水平,回归方程为y=1.936+0.937x,r=0.986。结论:BA-ELISA检测方法的建立在诊断卵巢癌等方面灵敏度高、特异性强,操作简便,无需昂贵仪器,适合广泛应用。 展开更多
关键词 CA-125抗原 生物素-亲和素酶联免疫法 卵巢癌 化学发光
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人血清癌胚抗原的生物素-亲和素ELISA检测方法的建立 被引量：6
5
作者 杨静 曾昭伟 +3 位作者 王学谦 赵倩 孙辉 李会强 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期871-873,875,共4页
目的:建立检测血清癌胚抗原(CEA)的高灵敏度生物素-亲和素酶联免疫检测(BA-ELISA)方法。方法:亲和层析纯化得到CEA,免疫新西兰家兔制备多克隆抗体。将得到的抗体连接生物素和辣根过氧化物酶,在生物素化BSA包被的96微孔板上建立生物素-... 目的:建立检测血清癌胚抗原(CEA)的高灵敏度生物素-亲和素酶联免疫检测(BA-ELISA)方法。方法:亲和层析纯化得到CEA,免疫新西兰家兔制备多克隆抗体。将得到的抗体连接生物素和辣根过氧化物酶,在生物素化BSA包被的96微孔板上建立生物素-亲和素ELISA(BA-ELISA)。对这一体系的线性、灵敏度、特异度、稳定性、回收率等参数进行鉴定,并和常规ELISA、放射免疫检测以及化学发光法相比较检测了临床标本中的CEA浓度。结果:线性检测范围为(0.42～50)U/mL,检测结果表明,体系稳定性良好;灵敏度为0.42 U/mL,批内、批间差异均小于10.0%。该研究建立的方法与常规ELISA对比差异有统计学意义,与放射免疫检测对比差别无统计学意义。与化学发光法相比较,回归方程为:y=0.04825+0.99674x,r=0.994,差异无统计学意义。结论:建立的CEA的BA-ELISA检测方法易于操作、灵敏度高、价格低廉,适合应用于临床检测。 展开更多
关键词 癌胚抗原 乳腺癌 生物素-亲和素酶联免疫吸附法 生物素 亲和素
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基于生物素-亲和素放大的SPR传感器检测大肠杆菌研究 被引量：10
6
作者 刘儒平 王程 +3 位作者 徐万帮 岳钊 牛文成 刘国华 《传感技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期757-761,共5页
建立了一种基于表面等离子体共振(SPR)技术的大肠杆菌特异性快速检测方法。采用EDC/NHS将葡聚糖修饰的CM5芯片表面活化,通过亲和素固定生物素标记的二抗(羊抗兔IgG抗体),利用一抗(兔抗大肠杆菌ATCC25922单克隆抗体)和二抗反应,将兔抗大... 建立了一种基于表面等离子体共振(SPR)技术的大肠杆菌特异性快速检测方法。采用EDC/NHS将葡聚糖修饰的CM5芯片表面活化,通过亲和素固定生物素标记的二抗(羊抗兔IgG抗体),利用一抗(兔抗大肠杆菌ATCC25922单克隆抗体)和二抗反应,将兔抗大肠杆菌单克隆抗体固定在传感芯片表面。利用一抗和二抗的质量扩增效应和生物素-亲和素的多级放大效应,实现了对低浓度大肠杆菌ATCC25922的快速检测,提高了SPR传感器灵敏度。利用NaOH溶液对芯片再生,可对多个不同浓度样品进行检测,采用相对响应单位(RU)记录数据。本传感芯片对大肠杆菌ATCC25922响应的线性范围为1.5×102 CFU/mL～1.5×107 CFU/mL,检测限为1.5×102 CFU/mL,相关系数r为0.981 5。这种方法简便快捷,有望成为一种在线检测治病菌的有力手段。 展开更多
关键词 SPR传感器 生物素-亲和素多级放大 大肠杆菌ATCC25922 快速检测
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亲和素-生物素间接偶联的压电DNA传感器研究 被引量：10
7
作者 高志贤 晁福寰 +4 位作者 王红勇 房彦军 宁保安 潘海峰 朱惠忠 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第3期454-459,共6页
采用 33′ 二巯基硫代丙酸的金电极自组装技术 ,用乙基 3 (3 二甲氨基 )碳二亚胺盐酸盐 (EDC)和N 羟基磺基琥珀酰亚胺 (NHS)偶联剂将亲和素固定于金电极上 ,联于生物素标记的探针 ,制备成压电DNA传感器的检测电极 ,和杂交液中的待检葡... 采用 33′ 二巯基硫代丙酸的金电极自组装技术 ,用乙基 3 (3 二甲氨基 )碳二亚胺盐酸盐 (EDC)和N 羟基磺基琥珀酰亚胺 (NHS)偶联剂将亲和素固定于金电极上 ,联于生物素标记的探针 ,制备成压电DNA传感器的检测电极 ,和杂交液中的待检葡萄球菌肠毒素B的ssDNA进行杂交 ,通过频率信号检测DNA杂交的量 ,达到检测的目的 .采用不同长度的基因片段进行了研究 ,制作的传感器一致性、特异性都较好 ;杂交后的电极 ,电极再生后 。 展开更多
关键词 亲和素-生物素间接偶联 压电DNA传感器 分子自组装膜
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生物素-链霉亲和素技术一步法检测淋球菌抗原的研究 被引量：5
8
作者 沈建根 朱永良 董玉娥 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2000年第6期250-252,共3页
目的 :建立一种灵敏、快速诊断淋球菌感染的酶免疫测定法。方法 :检测淋球菌抗原的生物素 -链霉亲和素酶联免疫一步法。结果 :36例临床淋球菌标本中淋球菌抗原含量 1 0 8.47± 5 1 .39μg/ L ,阳性率 97.2 % ,显著高于非淋球菌标本... 目的 :建立一种灵敏、快速诊断淋球菌感染的酶免疫测定法。方法 :检测淋球菌抗原的生物素 -链霉亲和素酶联免疫一步法。结果 :36例临床淋球菌标本中淋球菌抗原含量 1 0 8.47± 5 1 .39μg/ L ,阳性率 97.2 % ,显著高于非淋球菌标本的 4.71± 2 .1 3μg/ L ,阳性率 0 % (P均 <0 .0 1 ) ,本法检测灵敏度 0 .6 2 5 μg/ L,特异性 1 0 0 % ,敏感性 97.2 %。结论 :该法可作为灵敏、快速诊断淋球菌的新的辅助方法。 展开更多
关键词 淋病奈瑟氏球菌 单克降抗体 生物素-链霉亲和素
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应用生物素-链霉亲和素的时间分辨荧光免疫分析检测玉米赤霉烯酮 被引量：3
9
作者 马智鸿 黄飚 +3 位作者 屠蔷 高蕾 张珏 王柯 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第4期905-909,共5页
采用基于生物素（Biotin）-链霉亲和素（Strepavidin）的时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）技术建立了快速灵敏的玉米赤霉烯酮（ZEN）检测方法。以strepavidin包被板条，加入生物素化的ZEN—BSA，结合在板条上的ZEN—BSA与标准／样本中的游... 采用基于生物素（Biotin）-链霉亲和素（Strepavidin）的时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）技术建立了快速灵敏的玉米赤霉烯酮（ZEN）检测方法。以strepavidin包被板条，加入生物素化的ZEN—BSA，结合在板条上的ZEN—BSA与标准／样本中的游离ZEN共同竞争限量的抗ZEN单克隆抗体，用稀土离子Eu“标记的羊抗鼠IgG进行示踪，建立了间接竞争的ZEN-TRFIA。该方法的检测灵敏度为0．2ng／ml，测量范围是0．2～200．0ng／ml，批内、批间变异系数分别为5．7％和8．3％，平均回收率为91．1％。与玉米赤霉醇的平均交叉反应是12．3％，与赭曲霉素A、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、黄曲霉素B1无交叉反应，说明该方法的特异性较好。相关试剂在4℃放6个月后各检测参数基本无变化，说明该方法稳定。样品同时用ZEN—TRFIA和商品ELISA试剂盒测定样品ZEN含量，两者的相关系数为0．9664，说明该方法测量准确。ZEN—TRFIA具有测量准确、检测灵敏度高、检测范围宽、操作简便、标记物稳定等优点，适合于ZEN大量筛查的应用。 展开更多
关键词 玉米赤霉烯酮(ZEN) 时间分辨荧光免疫分析(TRFIA) 生物素-链霉亲和素 真菌毒素
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生物素-亲和素系统在压电免疫传感器中质量放大作用研究 被引量：2
10
作者 裴仁军 胡继明 +2 位作者 刘栗加 胡毅 曾云鹗 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1999年第6期879-880,共2页
生物素－亲和素系统（ＢｉｏｔｉｎＡｖｉｄｉｎＳｙｓｔｅｍ，ＢＡＳ）是７０年代后期迅速发展起来的一种新型生物放大系统，具有高灵敏度、高特异性以及简便、经济、快速等优点，在现代生物免疫学领域中已得到广泛的应用［１］．我们... 生物素－亲和素系统（ＢｉｏｔｉｎＡｖｉｄｉｎＳｙｓｔｅｍ，ＢＡＳ）是７０年代后期迅速发展起来的一种新型生物放大系统，具有高灵敏度、高特异性以及简便、经济、快速等优点，在现代生物免疫学领域中已得到广泛的应用［１］．我们首次将生物素－亲和素系统用于压电免... 展开更多
关键词 压电免疫传感器 生物素-亲和素系统 质量放大免疫检测 检测信号放大
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生物素-链霉亲和素介导受体靶向卵巢癌SKOV3细胞量子点体外成像的研究 被引量：1
11
作者 聂丽菊 许恒毅 +3 位作者 叶称连 黄小林 刘雯婷 傅芬 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2014年第19期1254-1258,共5页
目的:研制一种生物素-亲和素系统(BAS)介导叶酸受体(FR)靶向量子点(QD)荧光探针,初步验证其靶向性及信号放大效应。方法:采用活泼酯法,将链霉亲和素(SA)与QD共价偶联制备QD-SA并对其物理特性进行验证;采用活泼酯法以牛血清蛋白为载体合... 目的:研制一种生物素-亲和素系统(BAS)介导叶酸受体(FR)靶向量子点(QD)荧光探针,初步验证其靶向性及信号放大效应。方法:采用活泼酯法,将链霉亲和素(SA)与QD共价偶联制备QD-SA并对其物理特性进行验证;采用活泼酯法以牛血清蛋白为载体合成生物素化叶酸(FA)。通过生物素化FA与QD-SA结合制备BAS介导叶酸受体(FR)靶向QD探针,比较该探针对卵巢癌SKOV3细胞及FR表达阴性的肺癌A549细胞的识别情况,并验证其靶向特异性;对比该探针在生物素化FA孵育1、4 h时成像的效果;比较该探针与未经BAS介导的QD-FA探针在不同孵育时间对卵巢癌SKOV3细胞成像的差异。结果:BAS介导FR靶向QD探针可特异性识别FR表达阳性的卵巢癌SKOV3细胞,且孵育4 h较1 h荧光信号明显增强,同等条件下其产生的荧光强度较未经BAS介导的QD-FA探针明显增强。结论:制备了一种特异性好、灵敏度高的BAS介导FR靶向QD探针,该探针在卵巢癌早期诊断方面具有潜在应用价值。 展开更多
关键词 生物素-链霉亲和素 叶酸量子点 卵巢癌细胞 体外成像
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用生物素-亲和素系统测定放射性标记生物物质的活性 被引量：1
12
作者 范我 S.Guhlke +2 位作者 钱建华 朱本兴 H.Biersack 《核化学与放射化学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期49-51,60,共4页
分别用131I和188Re标记亲和素,测定其与生物素结合的能力,并与未标记的亲和素、罗丹明标记的亲和素进行比较,测定标记亲和素与生物素结合曲线和半解吸量;探讨用生物素 亲和素系统测定放射性核素标记生物物质活性的可能性。结果表明,未... 分别用131I和188Re标记亲和素,测定其与生物素结合的能力,并与未标记的亲和素、罗丹明标记的亲和素进行比较,测定标记亲和素与生物素结合曲线和半解吸量;探讨用生物素 亲和素系统测定放射性核素标记生物物质活性的可能性。结果表明,未标记的亲和素、罗丹明标记亲和素、188Re 亲和素和131I 亲和素,它们与生物素的结合能力依次下降,与生物素半解吸量分别为21.9,19.5,25.7和47.9μg;放射性标记的亲和素与生物素结合的能力低于未放射性标记的亲和素和罗丹明 亲和素。由此推测,有可能用亲和素 生物素系统来评价标记方法对生物活性的影响。131I和188Re; 展开更多
关键词 亲和素-生物素系统 放射性标记 标记活性 铼188 碘131 放射性核素
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生物素-亲和素系统在MR靶向成像中的应用 被引量：1
13
作者 刘岘 许乙凯 叶靖 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第10期1130-1132,共3页
目的探讨利用生物素-亲和素系统的靶向定位效应和生物放大作用,提高MR分子成像的敏感性。方法制备生物素化HAb18单克隆抗体并测定其生物素化程度及抗原结合活性。将8只荷人肝细胞癌裸鼠静脉注射生物素化单克隆抗体600 μg,24 h后腹腔注... 目的探讨利用生物素-亲和素系统的靶向定位效应和生物放大作用,提高MR分子成像的敏感性。方法制备生物素化HAb18单克隆抗体并测定其生物素化程度及抗原结合活性。将8只荷人肝细胞癌裸鼠静脉注射生物素化单克隆抗体600 μg,24 h后腹腔注射80 μg 亲和素,30 min后再静脉给予Gd-DTPA-链霉亲和素。对实验动物行MR扫描,测量SE T1WI平扫及增强后10、30 min及2、6、12、24 h图像内肿瘤、肝脏、肌肉的信号强度,绘制信号强度-时间曲线,并计算其强化率及对比度噪声比。结果HAb18单克隆抗体经生物素化后,每个抗体分子平均可结合20个分子生物素,其抗原结合活性约为91%。增强后肿瘤信号强度缓慢升高,在注射对比剂后第6小时,肿瘤的强化率、比度噪声比达到最大值,与其他各时间点有显著性差异。肝脏在注射对比剂后第6小时的信号强度达到最高,而后信号强度下降,增强后12 h的信号强度与平扫相似。肌肉表现为轻度强化,增强后各时间点的信号强度与平扫相比无明显差异。结论利用生物素-亲和素技术对肿瘤进行MR靶向成像,具有特异性强化作用并能延长肿瘤的强化时间,但Gd-DTPA-SA的血池效应也造成了肝脏的持续强化。 展开更多
关键词 生物素-亲和素系统 链霉亲和素 磁共振成像 单克隆抗体
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α-倒捻子素衍生物合成及其抑制磷酸二酯酶4活性研究 被引量：3
14
作者 邓金辉 黄悦 +6 位作者 梁津豪 朱嘉琪 于思 刘昊柏 罗海彬 黄仪有 何细新 《中山大学学报（自然科学版）（中英文）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期53-61,共9页
以α-倒捻子素为先导化合物设计合成一系列衍生物并测试其对磷酸二酯酶4(PDE4,phosphodiesterase 4)的抑制活性。首先α-倒捻子素在DDQ作用下氧化环合得到中间体1,然后经烷基化、还原、水解、酰化等化学反应合成6-位取代的目标化合物;采... 以α-倒捻子素为先导化合物设计合成一系列衍生物并测试其对磷酸二酯酶4(PDE4,phosphodiesterase 4)的抑制活性。首先α-倒捻子素在DDQ作用下氧化环合得到中间体1,然后经烷基化、还原、水解、酰化等化学反应合成6-位取代的目标化合物;采用[3H]标记液体闪烁计数法测试了衍生物体外抑制PDE4活性。最终设计、合成了11个目标化合物,其结构经1H NMR、13C NMR、HRMS等波谱数据分析确证。活性测试结果表明7个化合物(4a、4b、5、6、8、11和13)的PDE4抑制活性强于α-倒捻子素,其中化合物5的活性最强(IC_(50)=247 nmol/L)。 展开更多
关键词 α-倒捻子素 衍生物 磷酸二酯酶4 抑制剂
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基于SiC@Ag基底和银-生物素-链霉亲和素纳米聚集体双重SERS放大的miRNA-106a检测 被引量：2
15
作者 梁照恒 王哲 +2 位作者 彭乐 王福艳 周骏 《光子学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第7期171-179,共9页
基于SiC@Ag基底与Ag纳米颗粒的表面增强拉曼散射效应,提出了利用银-生物素-链霉亲和素纳米聚集体二次表面增强拉曼散射放大的超灵敏miRNA-106a检测方案.首先,将地高辛修饰的捕获DNA与固定在SiC@Ag基底上的抗地高辛链接,制备SiC@Ag@anti-... 基于SiC@Ag基底与Ag纳米颗粒的表面增强拉曼散射效应,提出了利用银-生物素-链霉亲和素纳米聚集体二次表面增强拉曼散射放大的超灵敏miRNA-106a检测方案.首先,将地高辛修饰的捕获DNA与固定在SiC@Ag基底上的抗地高辛链接,制备SiC@Ag@anti-digoxin/digoxin-DNA基底;将4-巯基苯甲酸(4MBA)标记的银纳米颗粒与修饰有氨基和生物素的探针DNA链接,制备Ag@4MBA@DNA-biotin探针.然后将制备的基底、探针与待测miRNA-106a组成“三明治”结构,获得表面增强拉曼散射信号放大.最后,依次加入链霉亲和素和制备的探针,形成银-生物素-链霉亲和素纳米聚集体,实现检测信号的二次放大.实验结果表明,利用SiC@Ag基底和银-生物素-链霉亲和素纳米聚集体双重表面增强拉曼散射放大,可以实现miRNA-106a的超灵敏检测,检测极限达到0.579fmol/L,对于肿瘤的早期诊断具有应用潜力. 展开更多
关键词 表面增强拉曼散射 银纳米颗粒 生物素-链霉亲和素 核酸检测 miRNA-106a
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免疫亲和柱净化/高效液相色谱-串联质谱法检测婴幼儿配方乳粉中生物素含量 被引量：2
16
作者 吴宏 林玉宙 +2 位作者 黄彩云 陈小波 韦玮 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1135-1138,共4页
建立了免疫亲和柱净化/高效液相色谱串联质谱法测定婴幼儿配方乳粉中生物素的方法。样品用磷酸盐缓冲液溶解，并通过生物素免疫亲和柱净化后，采用Ultimate AQ-C18（2.1 mm×100 mm，3 μm）色谱柱分离，以甲醇-0.1%甲酸（30∶70）... 建立了免疫亲和柱净化/高效液相色谱串联质谱法测定婴幼儿配方乳粉中生物素的方法。样品用磷酸盐缓冲液溶解，并通过生物素免疫亲和柱净化后，采用Ultimate AQ-C18（2.1 mm×100 mm，3 μm）色谱柱分离，以甲醇-0.1%甲酸（30∶70）为流动相，进样量为5.0 μL，流速为0.3 mL/min，柱温为30 ℃，并经电喷雾电离串联质谱在多离子反应监测（MRM）模式下进行测定，定量子离子为227.2，定性子离子为227.2、96.9，碰撞能量分别为10、30 V。结果显示，生物素在0.1-1.0 μg/mL范围内线性关系良好，方法检出限为20.3 μg/kg。对空白试样进行3个浓度水平的加标回收实验，测得加标回收率为92.7%-98.5%，相对标准偏差为1.7%-1.9%。该方法具有样品处理简单、灵敏度高、重现性好、分析时间短等优点，可以满足婴幼儿配方乳粉中生物素含量的测定要求。 展开更多
关键词 免疫亲和柱 乳粉 生物素 高效液相色谱-串联质谱
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糖蛋白-凝集素自组装构筑有序膜及在酶电极的应用 被引量：5
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作者 李扬眉 江秀明 +2 位作者 陈志春 傅水玉 林贤福 《物理化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第2期216-220,共5页
利用糖蛋白-凝集素的识别作用交替沉积伴刀豆球蛋白(ConA)与辣根过氧化物酶(HRP)制备酶自组装多层膜,用原子力显微镜(AFM)观测了自组装膜的表面形貌、表面粗糙度;AFM和椭圆偏振研究测定了自组装膜的厚度.结果表明,ConA和HRP膜厚分别为9.... 利用糖蛋白-凝集素的识别作用交替沉积伴刀豆球蛋白(ConA)与辣根过氧化物酶(HRP)制备酶自组装多层膜,用原子力显微镜(AFM)观测了自组装膜的表面形貌、表面粗糙度;AFM和椭圆偏振研究测定了自组装膜的厚度.结果表明,ConA和HRP膜厚分别为9.0和4.6nm,与两者的晶体衍射结果一致,说明生物识别自组装方法能很好地保持分子的原有形态.以亚甲蓝(MB)溶液为介体,用循环伏安法测定了表面修饰了三层(ConA/HRP)自组装膜的金电极对H2O2的电化学催化还原作用,在H2O2浓度为0.2～1.0mmol·L-1时,响应电流对H2O2浓度变化成线性,酶电极灵敏度为24.0mA·mol-1·L,表观米氏常数为4.2mmol·L-1. 展开更多
关键词 糖蛋白-凝集素 自组装多层膜 酶电极 伴刀豆球蛋白 辣根过氧化物酶 表面形貌 生物膜 生物传感器 有序膜 电化学特性
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抗亲和素鼠单克隆抗体增强亲和素-生物素免疫技术和免疫组织学染色的敏感性
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作者 W.F.Cassano 张红毅 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1989年第2期64-64,共1页
亲和素、生物素已应用于增加传统免疫酶方法的敏感性。但有时发现在检测微量抗原时，敏感性依然不够。为此，作者建立了几株抗卵清和素糖蛋白的鼠单抗，通过选择性扩大ABC复合物，增加底物信号，增强亲和素一生物素免疫测定法的敏感性。
关键词 免疫组织学染色 亲和素-生物素 敏感性 鼠单克隆抗体 免疫技术 免疫测定法 微量抗原 免疫酶 鼠单抗 糖蛋白 复合物 ABC
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生物素-亲合素预定位技术在肿瘤磁共振免疫成像中的初步应用研究
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作者 许乙凯 柴青芬 +3 位作者 刘岘 吴元魁 吕国士 黄其鎏 《中国医学影像学杂志》 CSCD 2002年第2期129-131,共3页
目的 :探讨生物 亲合素预定位技术提高肿瘤磁共振免疫成像诊断效果的可能性。材料和方法 :制备生物素化抗CEA单克隆抗体 (Bt McAb)、Gd标记生物素 (Gd DTPA Bt)和Gd DTPA McAb复合物 ;建立 8只荷人结肠癌裸鼠模型 ;实验组 (n =4)分别注... 目的 :探讨生物 亲合素预定位技术提高肿瘤磁共振免疫成像诊断效果的可能性。材料和方法 :制备生物素化抗CEA单克隆抗体 (Bt McAb)、Gd标记生物素 (Gd DTPA Bt)和Gd DTPA McAb复合物 ;建立 8只荷人结肠癌裸鼠模型 ;实验组 (n =4)分别注射Bt McAb→链霉亲和素→Gd DTPA Bt预定位于裸鼠瘤结 ,观测注射前、注射后 3 0min、1、2、6、12、2 4和75h瘤结的信号变化 ;对照组分别注射Gd DTPA McAb或Gd DTPA(n分别为 2 ) ,在同样时间点成像。结果 :预定位技术法特异性提高了瘤结的增强程度 ,增强持续 2 4小时 ,增强程度高于Gd DTPA McAb组 ,与Gd DTPA的速升速降增强形式也不同。结论 :生物素 (链霉 ) 展开更多
关键词 生物素-亲合素预定位技术 MRI 单克隆抗体 生物素-亲和素 肿瘤诊断 磁共振免疫成像
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大鼠XAF1基因启动子荧光素酶报告质粒的构建及IRF-1结合位点的鉴定
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作者 周建博 邱文 +3 位作者 卢燕来 单锴 赵聃 王迎伟 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期295-300,共6页
目的:构建大鼠X染色体连锁的凋亡抑制蛋白相关因子1(X-linked inhibitor of apoptosis associated factor 1,XAF1)基因启动子(全长和截断)荧光素酶报告质粒,并观察在人胚肾细胞HEK293中过表达干扰素调节因子-1(interferon regulatoryfac... 目的:构建大鼠X染色体连锁的凋亡抑制蛋白相关因子1(X-linked inhibitor of apoptosis associated factor 1,XAF1)基因启动子(全长和截断)荧光素酶报告质粒,并观察在人胚肾细胞HEK293中过表达干扰素调节因子-1(interferon regulatoryfactor-1,IRF-1)对XAF1基因启动活性的影响,同时,筛选其可能的IRF-1结合位点。方法:采用PCR技术,扩增出大鼠XAF1基因启动子序列(-1497～+166 nt),将XAF1基因启动子插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中获得pGL3-XAF1-QC,与大鼠野生型IRF-1表达质粒(pcDNA3.1-IRF-1)共转染HEK293细胞,检测其荧光素酶活性,确定IRF-1对XAF1基因的启动作用。同时,应用生物信息学软件预测XAF1基因启动子上IRF-1潜在的结合位点,并构建截断的XAF1基因启动子荧光素酶报告质粒(pGL3-XAF1-1、pGL3-XAF1-2、pGL3-XAF1-3和pGL3-XAF1-4)。将上述全长和各截断的XAF1基因启动子荧光素酶报告质粒和IRF-1过表达质粒共转染HEK293细胞,再行荧光素酶活性测定,筛选IRF-1的结合位点。结果:菌液PCR及核酸测序证实,上述荧光素酶报告质粒均构建成功。将pGL3-XAF1-QC和pcDNA3.1-IRF-1共转染HEK293细胞发现,XAF1基因启动子活性显著增加。而将pGL3-XAF1-QC、pGL3-XAF1(1～4号)和pcDNA3.1-IRF-1共转染HEK293细胞后证实,pGL3-XAF1-3的启动活性显著低于pGL3-XAF1-1和pGL3-XAF1-2。提示IRF-1可能结合在大鼠XAF1基因启动子的-337～-47 nt区域。结论:本实验成功构建了大鼠全长及截断的XAF1基因启动子荧光素酶报告质粒,并初步筛查出IRF-1在XAF1基因启动子上的结合区域,为后续研究奠定了基础。 展开更多
关键词 X染色体连锁的凋亡抑制蛋白相关因子1(XAF1) 干扰素调节因子-1(IRF-1) 启动子 生物信息学 荧光素酶报告质粒
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