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一株猪高致病性蓝耳病病毒的分离鉴定与遗传变异分析 被引量:3
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作者 张维达 杨康 李自力 《中国兽药杂志》 2020年第2期7-15,共9页
为研究猪蓝耳病病毒(PRRSV)的遗传进化规律,于2018年从新疆某猪场采集的病猪血液中分离了一株PRRSV,命名为XJ-b。对临床样品采用RT-PCR扩增鉴定,将阳性样品过滤处理之后接种在Marc-145细胞系进行培养,将盲传3代之后出现病变(CPE)的Marc-... 为研究猪蓝耳病病毒(PRRSV)的遗传进化规律,于2018年从新疆某猪场采集的病猪血液中分离了一株PRRSV,命名为XJ-b。对临床样品采用RT-PCR扩增鉴定,将阳性样品过滤处理之后接种在Marc-145细胞系进行培养,将盲传3代之后出现病变(CPE)的Marc-145样品进行间接免疫荧光鉴定。通过噬斑纯化后,利用RT-PCR对分离株的全基因组进行扩增,使用SeqMan软件对测序结果进行拼接,并根据NCBI上已公布的PRRSV全基因组及Nsp2基因核苷酸序列进行遗传进化与同源性比对分析。结果表明,临床病料RT-PCR检测呈PRRSV核酸阳性,处理后的病料接种至Marc-145细胞72 h之后产生CPE,间接免疫荧光鉴定为PRRSV抗原阳性;序列拼接显示分离株全基因组开放阅读框大小为15119 bp;全基因组和Nsp2基因核苷酸序列分析和同源性比对显示该分离毒株属于中国的高致病性PRRSV亚群。研究结果可为近年来新疆地区PRRSV的毒株差异分析提供参考。 展开更多
关键词 猪高致病性蓝耳病病毒 分离 MARC-145细胞 基因组 进化分析
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猪高致病性蓝耳病病毒致病机制探讨 被引量:3
2
作者 宋淑英 刘耀川 +3 位作者 张泽辉 王庄 闫明 徐炜 《湖北畜牧兽医》 2015年第2期17-18,共2页
猪繁殖与呼吸综合征也称猪高致病性蓝耳病,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的、对养殖业造成严重危害的疾病。对该病及相应病毒进行了简要介绍,并对病毒的致病机制以及与其相关的受体进行了介绍。
关键词 致病蓝耳 致病机制 受体
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生猪高致病性蓝耳病临床症状及综合防治
3
作者 王涛 《中国动物保健》 2025年第5期107-108,共2页
生猪养殖是养殖业中重要的内容之一,不仅影响养殖户的经济收益及养殖业的良好发展,同时也会影响食品行业的发展。高致病性蓝耳病作为生猪养殖过程中常见问题之一,若没有及时解决处理,则会对养殖质量及健康造成威胁,最终影响食品安全。对... 生猪养殖是养殖业中重要的内容之一,不仅影响养殖户的经济收益及养殖业的良好发展,同时也会影响食品行业的发展。高致病性蓝耳病作为生猪养殖过程中常见问题之一,若没有及时解决处理,则会对养殖质量及健康造成威胁,最终影响食品安全。对此,相关单位以及工作人员也应加大对该病的研究力度,对主要因素进行分析研究,并结合实际情况制定预防对策,保障生猪健康生长以及良好存活,使养殖人员获取更多的经济效益。 展开更多
关键词 致病蓝耳 临床症状 综合防治
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高致病性猪蓝耳病综合防控措施探讨
4
作者 赵高绍 《今日养猪业》 2025年第1期81-83,共3页
[目的]探讨高致病性猪蓝耳病的有效诊断方法及综合防控策略,以保障猪群的健康状态,进而减少养猪场因该病导致的经济损失。[方法]通过大量文献研究,对高致病性猪蓝耳病的病原体特征、致病机理及其流行特点进行梳理,并总结该病的临床症状... [目的]探讨高致病性猪蓝耳病的有效诊断方法及综合防控策略,以保障猪群的健康状态,进而减少养猪场因该病导致的经济损失。[方法]通过大量文献研究,对高致病性猪蓝耳病的病原体特征、致病机理及其流行特点进行梳理,并总结该病的临床症状及病理变化,提出一套针对性的综合防御措施。[结果]通过加强引种检疫管理、制定科学的免疫程序、完善生物安全体系、加强饲养管理等措施,从根源上控制疫病的发生与传播。[结论]通过了解高致病性猪蓝耳病的病原特征及致病机理,结合其流行特点、临床症状和病理特征,迅速诊断病情,阻控该病的传播与蔓延,为养猪业的可持续发展提供坚实基础。 展开更多
关键词 致病 蓝耳 防控措施
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高致病性猪蓝耳病与猪流感、猪瘟的鉴别诊断
5
作者 刘晓明 《农家致富》 2025年第3期35-35,共1页
一、高致病性猪蓝耳病1.发热情况病猪体温可达40℃以上,发热时间相对较久。2.呼吸道症状表现为咳嗽、气喘,呼吸困难,呈腹式呼吸,有些猪会出现流鼻涕的症状。3.繁殖障碍表现怀孕母猪常出现早产、流产,产死胎、木乃伊胎,产后无乳等症状。4... 一、高致病性猪蓝耳病1.发热情况病猪体温可达40℃以上,发热时间相对较久。2.呼吸道症状表现为咳嗽、气喘,呼吸困难,呈腹式呼吸,有些猪会出现流鼻涕的症状。3.繁殖障碍表现怀孕母猪常出现早产、流产,产死胎、木乃伊胎,产后无乳等症状。4.病理变化鉴别肺脏呈间质性肺炎变化,肿胀,质地变硬,有的呈花斑状。淋巴结肿大,尤其是腹股沟淋巴结等,切面多汁、出血。 展开更多
关键词 致病蓝耳 腹股沟淋巴结 产后无乳 间质肺炎 繁殖障碍 淋巴结肿大 呼吸困难 流感
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高致病性猪蓝耳病病毒GS/LZh/07株的分离、鉴定及其非结构蛋白Nsp2基因特性分析 被引量:19
6
作者 吴锦艳 田宏 +9 位作者 尚佑军 刘湘涛 郑海学 靳野 尹双辉 满自萍 赵娜 蔡承茹 蔺芳 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期438-443,共6页
将高致病性猪蓝耳病疑似病料接种Marc145细胞,发现该病料可使Marc145细胞产生CPE,应用猪蓝耳病病原检测试剂盒从细胞培养物中检测到PRRSV,命名为Gs/Lzh/07株。同时应用RT-PCR方法扩增该分离毒株的非结构蛋白Nsp2基因,并进行了序列测定,... 将高致病性猪蓝耳病疑似病料接种Marc145细胞,发现该病料可使Marc145细胞产生CPE,应用猪蓝耳病病原检测试剂盒从细胞培养物中检测到PRRSV,命名为Gs/Lzh/07株。同时应用RT-PCR方法扩增该分离毒株的非结构蛋白Nsp2基因,并进行了序列测定,发现所扩增到的Nsp2基因有90个核苷酸的缺失。序列比对结果表明:该分离病毒Nsp2基因与经典毒株PRRSV-ch-1a核苷酸同源性为83.0%,氨基酸同源性为72.7%;与高致病性变异毒株NX和SD核苷酸同源性为95.5%,氨基酸同源性为90.9%,可见该毒来源于2006-2007年流行毒株,说明高致病性猪蓝耳病变异病毒已经在甘肃省存在。该毒株的成功分离为高致病性猪蓝耳病流行病学调查分析提供数据,也为预防控制该病积累了资料。Nsp2的特性分析为揭示高致病性猪蓝耳病PRRSV在甘肃省的流行特点提供参考。 展开更多
关键词 致病蓝耳病毒 分离 鉴定 NSP2 分析
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表达高致病性猪蓝耳病病毒GP5重组伪狂犬病病毒的构建及鉴定 被引量:10
7
作者 陈瑾 田志军 +4 位作者 彭金美 王瑜 周艳君 安同庆 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期20-23,共4页
将PCR扩增的高致病性猪蓝耳病病毒(HP-PRRSV)HuN4株GP5基因与含绿色荧光蛋白(EGFP)基因的表达盒插入到伪狂犬病毒通用转移载体pgG-uni中,构建了转移载体pgG-HPGP5-EGFP。通过磷酸钙法将转移载体pgG-HPGP5-EGFP和PRV Bartha-K61株的基因... 将PCR扩增的高致病性猪蓝耳病病毒(HP-PRRSV)HuN4株GP5基因与含绿色荧光蛋白(EGFP)基因的表达盒插入到伪狂犬病毒通用转移载体pgG-uni中,构建了转移载体pgG-HPGP5-EGFP。通过磷酸钙法将转移载体pgG-HPGP5-EGFP和PRV Bartha-K61株的基因组共转染Vero细胞,经过8轮荧光蚀斑筛选和PCR鉴定获得了稳定表达EGFP的重组病毒,命名为rPRV-HPGP5。IFA和western blot结果证实HP-PRRSV HuN4株GP5在重组病毒中得到了有效表达。该重组病毒的获得为高致病性猪蓝耳病基因工程疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 致病蓝耳病毒 HUN4 GP5 伪狂犬病毒 重组
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美洲型猪蓝耳病病毒高致病性变异株RT-LAMP检测方法的建立 被引量:12
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作者 曾少灵 孙洁 +9 位作者 秦智锋 阮周曦 林庆燕 花群义 曹琛福 杨俊兴 吕建强 张彩虹 陈兵 陈书琨 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第12期22-27,共6页
设计两套反转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)引物,建立了检测美洲型猪蓝耳病病毒及其高致病性变异株的RT-LAMP方法。采用RT-LAMP方法与实时荧光RT-PCR方法检测58份病料,结果一致,但RT-LAMP方法的灵敏度大约高出10倍。RT-LAMP方法特异性良好... 设计两套反转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)引物,建立了检测美洲型猪蓝耳病病毒及其高致病性变异株的RT-LAMP方法。采用RT-LAMP方法与实时荧光RT-PCR方法检测58份病料,结果一致,但RT-LAMP方法的灵敏度大约高出10倍。RT-LAMP方法特异性良好,检测猪瘟、伪狂犬病和细小病毒等均未出现交叉反应。结果表明,建立的美洲型猪蓝耳病病毒及其高致病性变异株RT-LAMP检测方法具有特异、灵敏、高效和简便的特点,在我国猪蓝耳病快速检测领域将有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 RT-LAMP 蓝耳 蓝耳病毒致病变异株
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我国五省区部分猪场高致病性猪蓝耳病毒感染情况检测与分析 被引量:12
9
作者 高许雷 吴发兴 +6 位作者 朱紫祥 李平 张燕霞 张志 刘爽 李晓成 黄保续 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第11期32-36,共5页
对2008年-2009年我国五省区发病猪场235份、屠宰场的218份样品进行了高致病性猪蓝耳病病毒(HP-PRRSV)RT-PCR检测,挑选具有代表性的HP-PRRSV阳性样品进行HP-PRRSV ORF5基因扩增、测序及分析。结果表明,这五个省区发病场蓝耳病的检出率平... 对2008年-2009年我国五省区发病猪场235份、屠宰场的218份样品进行了高致病性猪蓝耳病病毒(HP-PRRSV)RT-PCR检测,挑选具有代表性的HP-PRRSV阳性样品进行HP-PRRSV ORF5基因扩增、测序及分析。结果表明,这五个省区发病场蓝耳病的检出率平均74.6%。屠宰场的检出率平均44%,混合感染主要以二重感染为主,且发病场较屠宰场严重。对获得的13株HP-PRRSV ORF5进行测序分析,发现序列长度均为603 bp,未见缺失或插入,仅在9 aa^29 aa存在点突变;序列比较发现,与普通株标准序列VR-2332株核苷酸同源性达85.9%~87.2%;与高致病性毒株的同源性JXA1-06核苷酸同源性达96.0%~99.0%。而其推导氨基酸序列与普通型、高致病性毒株的同源性分别为87.1%~88.1%和97.5%~98.0%。从遗传进化以及变异情况看,获得的PRRSV ORF5序列均为与JXA1类似的高致病性PRRSV序列,与JXA1和HB-1同属美洲型中的一个亚群。 展开更多
关键词 致病蓝耳病毒 RT-PCR检测 ORF5基因
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我国高致病性猪蓝耳病病毒的演化分析 被引量:12
10
作者 安同庆 田志军 +5 位作者 李冉 彭金美 周艳君 华育平 刘娣 童光志 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2011年第4期3-6,共4页
自2006年以来,我国大面积暴发高致病性猪蓝耳病,但目前对其病原HP-PRRSV的起源还不得而知。本试验通过对多株HP-PRRSV进行全长基因组分析,发现HP-PRRSV中存在4处缺失,而且这4处缺失是逐步形成的,在中间过渡类型的毒株中存在着缺失1处、... 自2006年以来,我国大面积暴发高致病性猪蓝耳病,但目前对其病原HP-PRRSV的起源还不得而知。本试验通过对多株HP-PRRSV进行全长基因组分析,发现HP-PRRSV中存在4处缺失,而且这4处缺失是逐步形成的,在中间过渡类型的毒株中存在着缺失1处、2处、3处的毒株。此外,中间过渡类型毒株中的一些氨基酸基序也是逐步变化的。本试验初步阐明了我国HP-PRRSV的起源是CH-1a-like PRRSV,在中间过渡的毒株中能够发现逐步演变的轨迹。 展开更多
关键词 致病蓝耳病毒 基因组序列分析 进化
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高致病性猪蓝耳病的诊断与综合防控 被引量:4
11
作者 王平阳 《中国畜牧业》 2024年第3期97-98,共2页
随着生猪贩卖调运的日益频繁,高致病性猪蓝耳病日益呈高发态势。高致病性猪蓝耳病主要以育肥猪呼吸障碍、仔猪高死亡率、母猪流产及产死胎为临床特征。一旦暴发不仅会对生猪养殖效益造成严重损失,而且会严重阻碍辖区生猪养殖业健康发展... 随着生猪贩卖调运的日益频繁,高致病性猪蓝耳病日益呈高发态势。高致病性猪蓝耳病主要以育肥猪呼吸障碍、仔猪高死亡率、母猪流产及产死胎为临床特征。一旦暴发不仅会对生猪养殖效益造成严重损失,而且会严重阻碍辖区生猪养殖业健康发展。正因如此,我国早在1996年就将高致病猪蓝耳病纳入我国二类动物疫病,联合国也将高致病性猪蓝耳病纳入法定报告动物疫病。因此,为了更好地防控高致病性猪蓝耳病,在当前背景下对高致病性蓝耳猪病的流行病学、临床症状、诊断方法及防控措施等展开探讨具有非常重要的现实意义。 展开更多
关键词 致病蓝耳 养殖业 呼吸障碍 动物疫 法定报告 流行 育肥 防控措施
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高致病性猪蓝耳病的临床症状、诊疗和防控措施 被引量:3
12
作者 张敏 李杰 《特种经济动植物》 2024年第11期84-86,共3页
高致病性猪蓝耳病是一种对生猪养殖业造成严重威胁的病毒性疾病,其主要特征包括高发病率和高死亡率,对养殖经济造成重大损失。该病主要由猪繁殖与呼吸道综合征病毒引起,具有广泛的传播性和较高的发病率,导致猪只高死亡率和生产性能下降... 高致病性猪蓝耳病是一种对生猪养殖业造成严重威胁的病毒性疾病,其主要特征包括高发病率和高死亡率,对养殖经济造成重大损失。该病主要由猪繁殖与呼吸道综合征病毒引起,具有广泛的传播性和较高的发病率,导致猪只高死亡率和生产性能下降,直接造成养殖户的经济损失,对公共卫生和经济稳定性带来负面影响。研究旨在综述高致病性猪蓝耳病的临床症状、诊断方法、治疗措施及防控策略,以期为高致病性猪蓝耳病的有效防控提供理论支持和实践指导。 展开更多
关键词 致病蓝耳 临床症状 诊断与治疗 防控措施
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应用荧光RT-PCR技术检测高致病性猪蓝耳病病毒 被引量:3
13
作者 罗长保 肖性龙 +4 位作者 鱼海琼 田纯见 林志雄 余以刚 吴晖 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第1期85-86,共2页
关键词 荧光RT-PCR 蓝耳病毒 致病 技术检测 繁殖与呼吸综合征病毒 繁殖与呼吸综合症 应用
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高致病性猪蓝耳病防疫接种的注意事项 被引量:2
14
作者 赵凯 杨晓爱 《北方牧业》 2024年第20期27-27,共1页
猪蓝耳病具有高致病性特征,患病后会对猪生长速度产生影响。仔猪蓝耳病发病率可达100%、死亡率可达50%以上,母猪患蓝耳病后流产率可达30%以上,育肥猪也可发病死亡。猪场管理人员和兽医人员应充分认识到防疫接种的重要性,并切实做好相关... 猪蓝耳病具有高致病性特征,患病后会对猪生长速度产生影响。仔猪蓝耳病发病率可达100%、死亡率可达50%以上,母猪患蓝耳病后流产率可达30%以上,育肥猪也可发病死亡。猪场管理人员和兽医人员应充分认识到防疫接种的重要性,并切实做好相关工作。1疫苗选择,应使用正规厂家生产的经过国家认证的疫苗。疫苗的选择应根据猪场的情况、猪的品种、年龄和健康状况等因素进行综合考虑。1.1选择优质疫苗有资质名誉好的厂家通常具备先进的生产技术和严格的质量控制体系,能够确保疫苗的安全和有效。疫苗必须经过国家相关部门的认证,具备合法的生产许可证和批签发证明,以确保合法性和可信度。 展开更多
关键词 兽医人员 蓝耳 场管理 生产许可证 流产率 育肥 致病 批签发
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高致病性猪蓝耳病的流行特点及综合防治措施 被引量:2
15
作者 刘国香 李小敏 《世界热带农业信息》 2024年第8期80-81,共2页
高致病性猪蓝耳病是一种严重的猪病,会导致严重经济损失。该病的主要特点包括高发病率、高病死率、易于传染。本文旨在探讨该病流行特点及综合防治措施。针对该病病原学、病理学、流行病学特点进行分析,提出了从源头、场址、病原体控制... 高致病性猪蓝耳病是一种严重的猪病,会导致严重经济损失。该病的主要特点包括高发病率、高病死率、易于传染。本文旨在探讨该病流行特点及综合防治措施。针对该病病原学、病理学、流行病学特点进行分析,提出了从源头、场址、病原体控制、免疫防护等多方面综合控制该病的方法。 展开更多
关键词 致病蓝耳 综合防治措施 流行学特点 流行特点 理学 原学 经济损失
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猪高致病性蓝耳病综合防治措施 被引量:1
16
作者 龙志忠 《农村新技术》 2024年第1期40-41,共2页
猪高致病性蓝耳病又名猪繁殖与呼吸综合征,该病病毒具有极强的传染力,对生猪健康危害巨大,一旦发病,将给猪场带来毁灭性灾难。因此,做好高致病性猪蓝耳病的防控工作对保证猪群安全、确保生猪养殖产业健康发展具有十分重要的作用。
关键词 致病蓝耳 繁殖与呼吸综合征 致病蓝耳 防控工作 综合防治措施 传染力 毁灭灾难 健康危害
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一起猪高致病性蓝耳病和Ⅱ型圆环病毒病混合多重细菌感染的实验室诊断 被引量:4
17
作者 吴云飞 黄邦伟 +3 位作者 高寒松 胡雪梅 陈亮 朱玲 《四川畜牧兽医》 2014年第11期33-35,共3页
2014年4月,四川省某猪场出现高发病率和死亡率疫情,根据临床症状和流行病学特点无法确诊病因。随后笔者无菌采集典型病死猪的脾脏、肝脏、肺脏、淋巴结、扁桃体、腹腔积液、胸腔积液等病料进行实验室诊断,最后确诊该猪场的发病原因为猪I... 2014年4月,四川省某猪场出现高发病率和死亡率疫情,根据临床症状和流行病学特点无法确诊病因。随后笔者无菌采集典型病死猪的脾脏、肝脏、肺脏、淋巴结、扁桃体、腹腔积液、胸腔积液等病料进行实验室诊断,最后确诊该猪场的发病原因为猪II型圆环病毒(PCV-2)、猪高致病性蓝耳病病毒、猪大肠杆菌、猪金黄色葡萄球菌和猪链球菌混合感染所致。 展开更多
关键词 猪高致病性蓝耳病病毒 圆环病毒II型(PCV-2) 实验室诊断 多重感染
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猪高致病性蓝耳病的诊断与综合防控 被引量:1
18
作者 崔腾飞 陈宏达 《北方牧业》 2024年第1期31-31,共1页
猪高致病性蓝耳病是由猪繁殖与呼吸综合征病毒变异体所引发的一类急性、接触性、高致死性传染病。猪高致病性蓝耳病具有传染性强、传播速度快、致死率高、危害性大等特征,是危害当前养猪业发展的重要“杀手”,目前我国将该病列为一类动... 猪高致病性蓝耳病是由猪繁殖与呼吸综合征病毒变异体所引发的一类急性、接触性、高致死性传染病。猪高致病性蓝耳病具有传染性强、传播速度快、致死率高、危害性大等特征,是危害当前养猪业发展的重要“杀手”,目前我国将该病列为一类动物传染病。做好猪高致病性蓝耳病防控工作对保障猪业稳定发展有重要的意义。 展开更多
关键词 致病蓝耳 繁殖与呼吸综合征病毒 动物传染 防控工作 传播速度 变异体 综合防控 致死率
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高致病性猪蓝耳病及防控 被引量:1
19
作者 蒋铁宇 《中国畜牧业》 2024年第15期125-126,共2页
猪养殖规模的不断扩大促进了畜牧业的快速发展,传统养殖方式逐渐被规模化养殖方式所取代。然而,随着生猪养殖数量的增加,各类猪传染性疾病也相继出现。其中,高致病性猪蓝耳病作为生猪养殖中常见的疾病,给生猪养殖业的健康发展造成了显... 猪养殖规模的不断扩大促进了畜牧业的快速发展,传统养殖方式逐渐被规模化养殖方式所取代。然而,随着生猪养殖数量的增加,各类猪传染性疾病也相继出现。其中,高致病性猪蓝耳病作为生猪养殖中常见的疾病,给生猪养殖业的健康发展造成了显著影响。高致病性猪蓝耳病传播途径多、传播速度快、传播范围广、潜伏期长,且致死率高,给生猪养殖户带来严重的经济损失。鉴于此,笔者将讨论高致病性猪蓝耳病的流行特征与诊疗措施,为高致病性猪蓝耳病的防控要点提供有价值的参考。 展开更多
关键词 致病蓝耳 养殖业 传统养殖 规模化养殖 传播速度 养殖户 养殖 致死率
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高致病性猪蓝耳病病毒湖北分离株细胞培养特性研究 被引量:2
20
作者 杨克礼 曹宏云 +8 位作者 田永祥 梁望旺 伍锐 段正赢 刘泽文 邓均华 郭锐 周丹娜 徐涤平 《江西农业学报》 CAS 2010年第9期103-106,共4页
高致病性猪蓝耳病是近年来严重危害我国养猪业的一种传染病.为了探明高致病性猪蓝耳病病毒在Marc145细胞上的增殖特性,本研究在分离获得高致病性猪蓝耳病病毒湖北株的基础上进行了细胞培养特性研究.结果表明:高致病性猪蓝耳病病毒湖北株... 高致病性猪蓝耳病是近年来严重危害我国养猪业的一种传染病.为了探明高致病性猪蓝耳病病毒在Marc145细胞上的增殖特性,本研究在分离获得高致病性猪蓝耳病病毒湖北株的基础上进行了细胞培养特性研究.结果表明:高致病性猪蓝耳病病毒湖北株在Marc145细胞上增殖所需的最佳条件分别为:营养液最佳血清含量为10%;最佳pH值为7.2~7.4;细胞最佳培养密度为105~ 2×105/mL;病毒增殖的最佳接毒量为8×103 TCID50/mL;病毒增殖的最佳吸附时间为37 ℃,60 min;最佳收毒时间为接毒后60~84 h;病毒最佳冻融次数为反复冻融3次. 展开更多
关键词 致病 蓝耳 病毒增殖 湖北 分离株 细胞培养 研究 Culture Characteristics Cell Marc145细胞 最佳条件 增殖特 严重危害 血清含量 吸附时间 收毒时间 培养密度 反复冻融 冻融次数 营养液
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