表达猪瘟病毒E2蛋白的重组杆状病毒反应器工艺研究 被引量：1

1

作者 陈晓 李伟国 +4 位作者 宋欢欢 苏晓蕊 王同燕 谭菲菲 田克恭 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第2期49-57,共9页

为建立一套表达猪瘟病毒E2蛋白的重组杆状病毒反应器工艺,提高反应器上猪瘟病毒E2蛋白的表达量,以商业化培养基为基础,通过对关键营养组分添加量的DOE试验设计优化,获得一种组合补料配方,并在3 L反应器上对补料方式进行优化,以最大限度... 为建立一套表达猪瘟病毒E2蛋白的重组杆状病毒反应器工艺,提高反应器上猪瘟病毒E2蛋白的表达量,以商业化培养基为基础,通过对关键营养组分添加量的DOE试验设计优化,获得一种组合补料配方,并在3 L反应器上对补料方式进行优化,以最大限度提高细胞密度。进一步在反应器上摸索了通气策略,以精确调控猪瘟E2重组杆状病毒培养过程的营养代谢平衡,解决副产物乳酸和氨过度积累导致细胞活力下降的问题。首次使用半连续补料工艺与渗透压动态平衡相结合的补料策略以及定向调节通气的工艺模式,使猪瘟病毒E2蛋白的表达量由130 mg/L增加至520 mg/L,提高了3倍。将3 L反应器工艺在100 L反应器上进行了连续3个批次的验证,结果猪瘟病毒E2蛋白的表达量均大于500 mg/L,收获猪瘟E2蛋白制备的疫苗抗体均在2周后转阳,且抗体水平持续上升,接种后8周抗体阻断率仍维持在80%左右。综上,3 L反应器工艺能够稳定放大至100 L反应器,建立了表达猪瘟病毒E2蛋白的重组杆状病毒100 L反应器工艺,且100 L反应器上重组蛋白的表达量稳定、免疫原性良好。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 e2蛋白 重组杆状病毒 关键营养单元 半连续补料 定向调节

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪瘟病毒糖基化E2蛋白在重组杆状病毒中的表达与鉴定 被引量：4

2

作者 李文良 毛立 +3 位作者 张纹纹 杨蕾蕾 王小敏 江杰元 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第2期341-345,共5页

为获得糖基化的重组猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白,通过PCR扩增出去除C端跨膜区的猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)E2蛋白基因,前面包含糖基化信号肽,末端引入StrepⅡ标签序列,将其克隆到Bac-to-Bac杆状病毒表达系统pFastBacTMHT B载体中,筛选获得阳性... 为获得糖基化的重组猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白,通过PCR扩增出去除C端跨膜区的猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)E2蛋白基因,前面包含糖基化信号肽,末端引入StrepⅡ标签序列,将其克隆到Bac-to-Bac杆状病毒表达系统pFastBacTMHT B载体中,筛选获得阳性重组质粒pF-ge2,转化至含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态大肠杆菌中,经蓝白菌落筛选和PCR鉴定,获得重组表达载体rBac-ge2。在脂质体介导下转染对数生长期的Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rAc-gE2。Western-blot试验结果表明,重组蛋白得到正确表达,具有良好的抗原性;用糖苷酶PNGase F处理后重组蛋白分子量减小到40 000,证明重组蛋白为糖基化蛋白。这为进一步研究E2蛋白的功能及CSFV新型亚单位疫苗的开发奠定了基础。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 e2蛋白 糖基化 杆状病毒表达系统

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪瘟E2蛋白重组杆状病毒灭活疫苗在非典型猪瘟病例中的控制效果 被引量：2

3

作者 韩永刚 刘浩 《养猪》 2019年第2期97-100,共4页

猪瘟是由猪瘟病毒引起的高度接触性传染病最早发现于美国俄亥俄州。世界动物卫生组织(OIE)将其列入OIE疫病名录,为必须申报的(Notifiable)动物传染病,我国也将其列为一类动物传染病[1]。该病在世界范围内流行,以流行范围广、发病率和致... 猪瘟是由猪瘟病毒引起的高度接触性传染病最早发现于美国俄亥俄州。世界动物卫生组织(OIE)将其列入OIE疫病名录,为必须申报的(Notifiable)动物传染病,我国也将其列为一类动物传染病[1]。该病在世界范围内流行,以流行范围广、发病率和致死率高为主要特征,给世界养猪业造成严重危害。近年来,猪瘟在亚洲、欧洲、南美洲等地区呈现复发的趋势,一些已宣布消灭了猪瘟的国家(如法国、荷兰、德国等)又见猪瘟复发的报道[2]。 展开更多

关键词 断奶仔猪 e2 重组杆状病毒 猪瘟活疫苗 控制效果

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪瘟病毒石门株E2蛋白在杆状病毒系统中的表达 被引量：2

4

作者 周向阳 万婧 +4 位作者 廖迅 朱竹君 陈晓玮 刘菲芬 方维焕 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第1期28-32,共5页

以杆状病毒Bac-to-Bac表达系统表达猪瘟病毒(CSFV)石门株的E2蛋白,将CSFV石门株的E2囊膜糖蛋白基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTA中,获得重组转移质粒pFastBacHTA-E2。转化大肠埃希菌DH10Bac感受态细胞,获得重组Bacmid质粒后转染... 以杆状病毒Bac-to-Bac表达系统表达猪瘟病毒(CSFV)石门株的E2蛋白,将CSFV石门株的E2囊膜糖蛋白基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTA中,获得重组转移质粒pFastBacHTA-E2。转化大肠埃希菌DH10Bac感受态细胞,获得重组Bacmid质粒后转染Sf9昆虫细胞,获得重组病毒。传毒3代后对表达蛋白进行Western blot和间接免疫荧光试验检测。结果显示,E2蛋白获得高效表达,能被抗E2蛋白的单克隆抗体2B10和6×His-单克隆抗体特异性识别,表明CSFV石门株E2囊膜糖蛋白在Sf9昆虫细胞中得到成功表达,具有良好的抗原反应性。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 e2囊膜糖蛋白 杆状病毒表达系统

在线阅读 下载PDF 职称材料

重组猪瘟病毒C株E2蛋白的猪繁殖与呼吸综合征病毒的构建及鉴定 被引量：11

5

作者 高飞 曲泽慧 +7 位作者 姜一峰 李丽薇 虞凌雪 周艳君 杨莘 夏天奇 郑海红 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2015年第5期1-9,共9页

本研究在猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)弱毒株(Hu N4-F112)感染性克隆的基础上,在其基因组ORF1b和ORF2之间插入(classical swine fever,CSF)疫苗毒C株的E2基因,并在E2基因3'... 本研究在猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)弱毒株(Hu N4-F112)感染性克隆的基础上,在其基因组ORF1b和ORF2之间插入(classical swine fever,CSF)疫苗毒C株的E2基因,并在E2基因3'端下游插入PRRSV的转录调控序列6(transcription regulatory sequence 6,TRS6),构建成重组全长感染性克隆(p A-C-E2)。用SwaI线性化该质粒,并体外转录后,将RNA转染MARC-145细胞并传代1次,即可拯救出重组病毒vA-C-E2,在至少20代的传代过程中能够保持遗传稳定性。重组病毒与亲本病毒vHu N4-F112在病毒滴度、空斑形态、蛋白表达等方面没有明显差异;多步生长曲线结果显示,该重组病毒与亲本毒具有相似的生长特性。间接免疫荧光(indirect immunofl uorescence,IFA)结果显示,重组病毒不仅能够表达PRRSV N蛋白,也可以表达猪瘟病毒E2蛋白。本研究结果为研制CSF和PRRS新型基因重组疫苗奠定了坚实物质基础。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪瘟病毒 重组病毒 e2蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗在兔体上的免疫原性分析 被引量：3

6

作者 张小苗 张恒 +6 位作者 杨玉艾 张志 孙健 陶晓珊 李晓成 范根成 孙永科 《动物医学进展》 北大核心 2015年第9期8-12,共5页

研究表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗(rAd-E0-E2)在兔体上的免疫原性,并确定其最小免疫保护剂量。将rAd-E0-E2按10倍梯度稀释为107.0 IFU、106.0 IFU、105.0 IFU,分别免疫接种家兔,14d后,用猪瘟脾淋苗对各组兔子进行攻毒。结果107.... 研究表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗(rAd-E0-E2)在兔体上的免疫原性,并确定其最小免疫保护剂量。将rAd-E0-E2按10倍梯度稀释为107.0 IFU、106.0 IFU、105.0 IFU,分别免疫接种家兔,14d后,用猪瘟脾淋苗对各组兔子进行攻毒。结果107.0 IFU组和猪瘟脾淋苗组均未出现定型热反应(0/4),脾重/体重指数比值分别为0.055%、0.05%,脾组织切片均未见充血、淤血,用RT-PCR和IFA方法均未检测到脾脏内有猪瘟脾淋苗病毒;106.0 IFU组3/4出现定型热反应,脾重/体重指数比值为0.074%,脾组织切片3/4可见充血、淤血,用RT-PCR和IFA方法可检测到3/4脾脏有猪瘟脾淋苗病毒;105.0 IFU组和对照组全部出现定型热反应(4/4),脾重/体重指数比值分别为0.099%和0.102%,脾组织切片充血、淤血严重,用RT-PCR和IFA方法均可检测到兔子脾脏内有猪瘟脾淋苗病毒。结果表明与对照组均不保护和猪瘟脾淋苗组全部保护相比,rAd-E0-E2在兔体的最小免疫保护剂量为107.0 IFU,本研究成功完成了rAd-E0-E2在兔体上的免疫原性分析。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 e0-e2基因 重组腺病毒疫苗 兔 免疫原性

在线阅读 下载PDF 职称材料

家兔与BALB/c小鼠对猪瘟病毒E2蛋白靶向化树突状细胞疫苗敏感性的比较 被引量：1

7

作者 王金良 董炳梅 +5 位作者 魏凤 孙全文 王爱华 唐娜 张春玲 沈志强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第1期80-83,共4页

为比较家兔与BALB/c小鼠对猪瘟病毒E2蛋白靶向化树突状细胞疫苗的敏感性,本研究首先根据小鼠与家兔体重比,分别免疫糖基化E2蛋白与E2蛋白(家兔2mg/只,小鼠20μg/只),在不同时间采血制备血清,通过ELISA方法测定血清中IgG水平。结果显示,... 为比较家兔与BALB/c小鼠对猪瘟病毒E2蛋白靶向化树突状细胞疫苗的敏感性,本研究首先根据小鼠与家兔体重比,分别免疫糖基化E2蛋白与E2蛋白(家兔2mg/只,小鼠20μg/只),在不同时间采血制备血清,通过ELISA方法测定血清中IgG水平。结果显示,接种后BALB/c小鼠出现了轻度的免疫应答,而家兔产生了强而持久的免疫保护。本研究对BALB/c小鼠的接种量进行了进一步摸索,结果表明,50与100μg/只免疫效果明显优于20μg/只;其中50μg/只E2蛋白与糖基化E2蛋白免疫后,血清IgG水平较高且稳定;而100μg/只糖基化E2蛋白免疫后,免疫初期,糖基化E2蛋白组产生了免疫抑制,至21d抗体水平逐渐升高且达极高水平;但100μg/只E2蛋白免疫后,整个免疫期内抗体水平均较低,只有轻微波动。以上结果表明,家兔对糖基化E2蛋白与E2蛋白的敏感性均显著高于BALB/c小鼠,且糖基化E2蛋白免疫效果明显好于E2蛋白,BALB/c小鼠的糖基化E2蛋白最佳免疫剂量为50μg/只。 展开更多

关键词 家兔 BALB C小鼠 猪瘟病毒 e2蛋白 树突状细胞疫苗 敏感性

在线阅读 下载PDF 职称材料

表达猪瘟病毒E0-E2蛋白的重组腺病毒疫苗免疫效力研究 被引量：2

8

作者 梁易晓 张会 +4 位作者 王志鹏 杨玉艾 范根成 孙永科 张恒 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期377-382,共6页

为研究重组猪瘟腺病毒活载体疫苗(rAd-E0-E2株)对猪的免疫保护效力,并确定其最小免疫剂量及免疫期,本研究将40头健康仔猪随机分为8组,每组5头,1~5组为最小免疫剂量测试组,分别接种rAd-E0-E2株活疫苗1/20头份、1/10头份、1/2头份、1头份(... 为研究重组猪瘟腺病毒活载体疫苗(rAd-E0-E2株)对猪的免疫保护效力,并确定其最小免疫剂量及免疫期,本研究将40头健康仔猪随机分为8组,每组5头,1~5组为最小免疫剂量测试组,分别接种rAd-E0-E2株活疫苗1/20头份、1/10头份、1/2头份、1头份(1.58×107.0IFU),另设生理盐水对照组。于免疫后7 d、14 d收集血清,采用ELISA方法检测猪瘟病毒抗体,免疫后14 d攻毒;6~8组为免疫期组,分别接种1头份的rAd-E0-E2株活疫苗和1头份的猪瘟活疫苗(脾淋源,C株),于免疫后7 d、14 d、21 d、30 d、60 d、90 d、120 d、150 d、180 d、210 d收集血清,采用ELISA方法检测猪瘟病毒抗体,免疫后7个月攻毒。所有试验组猪攻毒后监测体温变化,观察猪瘟临床症状和剖检病变。最小免疫剂量检测结果显示,1/20头份剂量组攻毒后1/5保护,4/5出现高热稽留、典型CSF症状和剖检病变;1/10头份、1/2头份和1头份剂量组攻毒后均5/5保护,体温无明显变化,无猪瘟临床症状和剖检病变。免疫期结果显示,免疫组攻毒后均为5/5保护,且r Ad-E0-E2株免疫后7个月抗体水平高于C株,阴性对照组猪攻毒后均发病。综上所述,疫苗的最小免疫剂量为1/10头份(1.58×106.0IFU),考虑到临床实际应用影响因素较多,为确保免疫效果,将疫苗的使用剂量定为最小免疫剂量的10倍,即1头份。r Ad-E0-E2株活疫苗免疫猪1头份后免疫期至少为7个月。本研究为r Ad-E0-E2株后续应用提供了参考依据。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 e0-e2蛋白 重组腺病毒疫苗 最小免疫剂量 免疫期

在线阅读 下载PDF 职称材料

构建表达猪瘟病毒E0基因的重组杆状病毒 被引量：1

9

作者 陈振海 王琴 +3 位作者 范学政 宁宜宝 王在时 夏春 《上海农业学报》 CSCD 2006年第1期10-13,共4页

为了得到可溶性重组猪瘟病毒E0蛋白并便于观察重组蛋白的表达情况，将增强型水母绿色荧光蛋白基因（EGFP）与E0基因相连插入昆虫杆状病毒转移载体中，与线性杆状病毒DNA共转染Sf9细胞后通过噬斑纯化得到纯的重组杆状病毒，将其感染Sf9... 为了得到可溶性重组猪瘟病毒E0蛋白并便于观察重组蛋白的表达情况，将增强型水母绿色荧光蛋白基因（EGFP）与E0基因相连插入昆虫杆状病毒转移载体中，与线性杆状病毒DNA共转染Sf9细胞后通过噬斑纯化得到纯的重组杆状病毒，将其感染Sf9细胞制备P1种子液，同时用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达情况，剔除表达效果差的重组杆状病毒。再用P1种子液感染Sf9细胞制备高效价的P2种子液。通过病毒液的梯度稀释和噬斑测定，确定P2种子液的病毒滴度达1．14×10^7pfu／mL。将P2种子液以MOI5～10接种指数期SD细胞．3d后呈现出最强的荧光。重组杆状病毒在Sf9细胞中的初步成功表达为进一步制各重组E0糖蛋白．研究E0蛋白的结构与功能、免疫诊断新方法和猪瘟基因工程疫苗奠定基础。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 e0蛋白 增强型水母绿色荧光蛋白 重组杆状病毒

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒不同品牌酶标板包被效果的比较

10

作者 刘文 焦玲帅 +5 位作者 赵彦岭 曲会 许玉静 李翀 杜平丽 董明奇 《畜牧兽医科技信息》 2025年第7期37-39,共3页

为比较HEK293细胞表达的猪瘟病毒重组E2蛋白在不同品牌酶标板上的包被效果,进而提升猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒的稳定性,本研究将稀释至工作浓度的重组E2蛋白作为包被原,分别包被于不同品牌的酶标板,通过对比各酶标板的检测敏感性,及... 为比较HEK293细胞表达的猪瘟病毒重组E2蛋白在不同品牌酶标板上的包被效果,进而提升猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒的稳定性,本研究将稀释至工作浓度的重组E2蛋白作为包被原,分别包被于不同品牌的酶标板,通过对比各酶标板的检测敏感性,及在37℃和4℃条件下的稳定性试验,筛选包被效果相对最优的酶标板。结果显示,进口酶标板和国产品牌1的酶标板的各项检测指标相当,且两种品牌酶标板制备的包被板在4℃条件下有效期均可达12个月。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 重组e2蛋白 eLISA 酶标板 稳定性

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪瘟病毒cF114株E_2基因在家蚕杆状病毒表达系统中的融合表达

11

作者 郑小坚 贡成良 +4 位作者 曹广力 朱江 薛仁宇 缪竞诚 沈卫德 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期340-344,共5页

为进一步利用家蚕杆状病毒表达系统研制猪瘟病毒(CSFV)新型的亚单位疫苗,将猪瘟病毒cF114株囊膜糖蛋白E2基因克隆至带有GST标签的分泌表达杆状病毒转移载体pAcSecG2T的EcoRⅠ和BamHⅡ位点之间,获得了带有杆状病毒囊膜蛋白gp67信号肽-GST... 为进一步利用家蚕杆状病毒表达系统研制猪瘟病毒(CSFV)新型的亚单位疫苗,将猪瘟病毒cF114株囊膜糖蛋白E2基因克隆至带有GST标签的分泌表达杆状病毒转移载体pAcSecG2T的EcoRⅠ和BamHⅡ位点之间,获得了带有杆状病毒囊膜蛋白gp67信号肽-GST-E2元件的重组杆状病毒转移载体pAcSecG2T-E2,与线性化家蚕杆状病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕BmN细胞,筛选重组病毒(Bm-BacPAK6-E2),PCR证实所分离的重组病毒含有目的片段E2基因。SDS-PAGE图谱显示,感染重组病毒后,在细胞培养液上清和家蚕幼虫、蛹的血淋巴中均可检测到一条分子量为63 kD左右的特异性条带;感染Bm-BacPAK6-E2家蚕蛹的血淋巴可检测到GST活性,接种病毒148 h后重组蛋白的表达水平达到17.11μg/mL。 展开更多

关键词 猪瘟病毒囊膜糖蛋白e2基因 杆状病毒 家蚕 融合表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪瘟病毒E2蛋白靶向化树突状细胞疫苗诱导的BALB/c小鼠体内/外免疫应答的研究 被引量：3

12

作者 董炳梅 谢金文 +5 位作者 魏凤 孙全文 王爱华 张春玲 沈志强 王金良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期305-309,共5页

为确定猪瘟病毒(CSFV)糖基化E2蛋白(Gly-E2)的免疫效力,本研究首先利用体外糖基化修饰技术,在对E2蛋白(E2)进行N-糖基化修饰的基础上,分别进行Gly-E2、DCs与T细胞体外共培养并接种BALB/c小鼠。通过ELISA方法对细胞上清液及BALB/c小鼠血... 为确定猪瘟病毒(CSFV)糖基化E2蛋白(Gly-E2)的免疫效力,本研究首先利用体外糖基化修饰技术,在对E2蛋白(E2)进行N-糖基化修饰的基础上,分别进行Gly-E2、DCs与T细胞体外共培养并接种BALB/c小鼠。通过ELISA方法对细胞上清液及BALB/c小鼠血清中IFN-γ、IL-4及IgG含量进行测定,结合体外试验中CTL特异性杀伤率的检测,综合评价该疫苗的免疫效果。结果显示,CSFV E2的糖基化修饰显著增强了DCs的抗原提呈功能,可以同时促进Th1与Th2免疫应答,但主要以Th2体液免疫应答为主,刺激机体产生了快而持久的抗体保护,并且具有良好的免疫记忆,其免疫效果显著优于CSFV与E2;同时,随着Gly-E2浓度的提高,效应细胞的杀伤率均明显升高,表明Gly-E2可以更有效的刺激效应细胞的杀伤作用。以上结果表明,Gly-E2对提高CSFV的免疫反应具有良好的效果,作为新型疫苗开发的优选抗原,Gly-E2具有很深的开发潜力。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 e2蛋白 树突状细胞疫苗 免疫效力

在线阅读 下载PDF 职称材料

含绿色荧光蛋白基因和猪瘟E_2基因的伪狂犬病毒Bartha-K_(61)株TK基因缺失转移载体的构建 被引量：11

13

作者 范伟兴 张雪莲 +2 位作者 魏荣 赵宏坤 陈溥言 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2003年第3期3-8,共6页

提取伪狂犬病毒 ( PRV) Bartha- K6 1 株基因组 DNA为 PCR扩增模板 ,并根据 Genbank已发表的 PRV Kaplan株 UL区 UL2 5、U L2 4、U L2 3、U L2 2基因序列 ,选择保守序列设计了两对引物 ,这两对引物分别扩增出位于 UL2 3( TK)两侧 (含部... 提取伪狂犬病毒 ( PRV) Bartha- K6 1 株基因组 DNA为 PCR扩增模板 ,并根据 Genbank已发表的 PRV Kaplan株 UL区 UL2 5、U L2 4、U L2 3、U L2 2基因序列 ,选择保守序列设计了两对引物 ,这两对引物分别扩增出位于 UL2 3( TK)两侧 (含部分TK基因 )的可用于同源重组的左臂片段 ( L )和右臂片段 ( R) ,L包括部分 UL 2 5、全部 UL 2 4、部分 TK,R包括部分 TK及部分U L2 2 ,L 和 R的拼接片段中 TK基因内部缺失 2 70个核苷酸。将 L 片段和 R片段克隆于 p Bluescript M13-载体上 ,获得p SKL R;再将绿色荧光蛋白载体 p EGFP- C1上含 GFP及其多克隆位点的完整的基因表达盒插入 p SKL R的 L 片段和 R片段之间构成转移载体 p SKL KG;又将猪瘟病毒 1.2 3 kb的 E2 ( CSFV- E2 )基因片段插入 p SKL RG的多克隆位点的 Bg1 与 Pst 之间获得转移载体 p SKL 展开更多

关键词 绿色荧光蛋白基因 伪狂犬病 伪狂犬病毒Bartha-K61株 TK基因 eGFP基因 猪瘟病毒e2基因 基因缺失 转移载体 疫苗

在线阅读 下载PDF 职称材料

表达猪瘟病毒E2蛋白的BacMam病毒的构建及其免疫原性分析 被引量：2

14

作者 李淼 王宇飞 +5 位作者 王煜 高辉 李娜 孙元 梁冰冰 仇华吉 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第7期916-922,共7页

含具有哺乳动物细胞活性的启动子的重组杆状病毒(BacMam病毒)可有效转导多种哺乳动物细胞,并被广泛用于开发新型非复制型载体疫苗.将水泡性口炎病毒G蛋白(VSV-G)基因插入多角体启动子下游,得到经修饰的杆状病毒转移载体,将对虾白斑综合... 含具有哺乳动物细胞活性的启动子的重组杆状病毒(BacMam病毒)可有效转导多种哺乳动物细胞,并被广泛用于开发新型非复制型载体疫苗.将水泡性口炎病毒G蛋白(VSV-G)基因插入多角体启动子下游,得到经修饰的杆状病毒转移载体,将对虾白斑综合症病毒(WSSV)ie1启动子控制下的猪瘟病毒E2基因表达盒插入此载体中,构建了BacMam病毒BacMam/G-ie1-E2,以其感染Sf9细胞和转导HeLa细胞,通过间接免疫荧光试验和Western blot分析检测E蛋白的表达,同时用BacMam病毒直接免疫小鼠,用检测猪瘟病毒抗体的间接ELISA方法检测免疫小鼠血清抗体,用基于CFSE和WST-8的淋巴细胞增殖试验评价其细胞免疫应答.结果显示,BacMam/G-ie1-E2能同时在昆虫细胞和哺乳动物细胞中高效表达E2蛋白,免疫小鼠能诱导产生针对猪瘟病毒的特异性抗体,免疫小鼠脾细胞经猪瘟病毒刺激后能诱导特异性的淋巴细胞增殖.这表明,由BacMam病毒介导的基因转移有望用于开发针对猪瘟病毒的非复制型载体疫苗. 展开更多

关键词 猪瘟病毒 e2蛋白 重组杆状病毒 免疫原性

在线阅读 下载PDF 职称材料

表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗在小鼠体内的存留时间分析 被引量：1

15

作者 熊贝嘉 张会 +3 位作者 孙永科 范根成 张恒 杨玉艾 《动物医学进展》 北大核心 2019年第3期49-53,共5页

研究E0-E2基因和表达蛋白及抗体水平在小鼠体内的最长存留时间,以确定表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗(rAd-E0-E2)在小鼠体内的存留规律。本试验选用30只SPF级别的健康小鼠,随机分为A、B组,各免疫组以1×106 IFU/只剂量接种rAd... 研究E0-E2基因和表达蛋白及抗体水平在小鼠体内的最长存留时间,以确定表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗(rAd-E0-E2)在小鼠体内的存留规律。本试验选用30只SPF级别的健康小鼠,随机分为A、B组,各免疫组以1×106 IFU/只剂量接种rAd-E0-E2,对照组注射生理盐水。A组20只于接种后不同特定时间(2只/次)采集血液和组织进行PCR和IFA检测E0-E2基因及表达蛋白残留情况;B组10只于接种后1、3、5、7、10、14、21、28d采集血清检测猪瘟抗体水平。PCR和IFA检测显示,在接种12、24、36h后肝、脾、肾组织和血清中E0-E2基因和蛋白检出率为100%,接种48h后小鼠肝、脾组织检出率为50%,肾组织和血清检出率为100%。接种72h以后,小鼠血液和组织检测均为阴性。接种后7d试验组体内抗体阳性率为40%,接种后10d小鼠体内抗体阳性率为100%,抗体阻断率在43%～51.2%,接种后28d,猪瘟抗体阳性率为100%,抗体阻断率在75.6%～87.5%。表明rAd-E0-E2在小鼠体内的存留时间最长72h,接种时间与E2抗体水平呈正相关。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 e0-e2基因 重组腺病毒疫苗 存留规律

在线阅读 下载PDF 职称材料

用裁截的E_2重组蛋白作为抗原建立ELISA检测猪瘟病毒抗体

16

作者 AClavijo 邱昌庆 《中国畜牧兽医》 CAS 2002年第5期46-48,共3页

关键词 e2重组蛋白 抗原 eISA检测 猪瘟 病毒抗体

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪瘟病毒囊膜糖蛋白DNA疫苗的研制 被引量：6

17

作者 王宁 张楚瑜 +1 位作者 付烈振 丁建华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第3期201-203,共3页

构建了含有猪瘟病毒石门株囊膜糖蛋白（Ｅ２）基因的重组真核表达质粒ｐＲＣＳＥ２。将ｐＲＣＳＥ２和空载体ｐＲＣ分别免疫小鼠，ＥＬＩＳＡ检测结果表明：仅ｐＲＣＳＥ２免疫鼠可以产生猪瘟病毒的特异抗体。ＤＮＡ疫苗在许多传染病研... 构建了含有猪瘟病毒石门株囊膜糖蛋白（Ｅ２）基因的重组真核表达质粒ｐＲＣＳＥ２。将ｐＲＣＳＥ２和空载体ｐＲＣ分别免疫小鼠，ＥＬＩＳＡ检测结果表明：仅ｐＲＣＳＥ２免疫鼠可以产生猪瘟病毒的特异抗体。ＤＮＡ疫苗在许多传染病研究中已取得可喜成果，因此猪瘟病毒ＤＮＡ疫苗可能会成为防制猪瘟的一条新的途径。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 e2基因 DNA疫苗 囊膜糖蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪瘟重组蛋白E2的兔体免疫保护试验 被引量：3

18

作者 田宏 吴锦艳 +3 位作者 尹双辉 尚佑军 郑海学 刘湘涛 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第B12期225-228,共4页

鉴于猪瘟病毒不能使家兔发病,但能使之产生免疫原性,而且猪瘟兔化弱度苗能在兔体的定型热反应。本研究选用家兔为试验模型,将自制的亚单位疫苗用弗氏佐剂乳化后免疫家兔,持续一定的免疫周期后,用猪瘟活疫苗(II)攻击免疫及对照试验家兔... 鉴于猪瘟病毒不能使家兔发病,但能使之产生免疫原性,而且猪瘟兔化弱度苗能在兔体的定型热反应。本研究选用家兔为试验模型,将自制的亚单位疫苗用弗氏佐剂乳化后免疫家兔,持续一定的免疫周期后,用猪瘟活疫苗(II)攻击免疫及对照试验家兔。根据T淋巴细胞增殖试验、阻断ELISA及攻毒保护试验对所制备的抗原进行了全面的评价。结果表明,该免疫原具有良好的免疫原性,而且能保护免疫家兔为4/4。可以进行下一步的开发和利用价值。以期该疫苗能为猪瘟的防治做出贡献。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 亚单位疫苗 e2蛋白 免疫试验

在线阅读 下载PDF 职称材料

基因缺失杆状病毒载体的构建及应用

19

作者 王同燕 仝晓丹 +5 位作者 苏晓蕊 宋欢欢 李伟国 刘武杰 谭菲菲 田克恭 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第1期48-55,共8页

为解决杆状病毒表达系统存在的表达量低和毒种种子批代次窄问题,加快杆状病毒表达系统产业化进程。本研究首次通过Red和Cas9两种重组技术,先后对影响蛋白表达的V-cath、ChiA、P10和重组杆状病毒基因组稳定性的FP25K和DA26基因进行缺失... 为解决杆状病毒表达系统存在的表达量低和毒种种子批代次窄问题,加快杆状病毒表达系统产业化进程。本研究首次通过Red和Cas9两种重组技术,先后对影响蛋白表达的V-cath、ChiA、P10和重组杆状病毒基因组稳定性的FP25K和DA26基因进行缺失。同时基于对CSFV-E2蛋白的结构和糖基化预测分析,突变影响同源二聚体二硫键形成的糖基化位点。最后通过悬浮转染的方式提高拯救病毒的滴度。结果表明对E2基因突变后,表达的E2蛋白95%以同源二聚体形式存在。通过供体质粒优化和病毒载体基因缺失,E2蛋白的表达水平提高约4倍,可稳定表达蛋白的重组杆状病毒毒株代次从P7代延长至P20代。悬浮转染获得的重组杆状病毒滴度提高约70倍,同时获得足量低代次的毒种,有效缩短从毒种构建到蛋白表达时间,有效解决杆状病毒表达系统表达量低和毒种种子批代次窄的问题,为猪瘟亚单位疫苗研发奠定基础。 展开更多

关键词 杆状病毒 猪瘟病毒 基因缺失 e2蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪瘟病毒E_2基因乳腺特异表达载体的构建

20

作者 顾玲 王强 +3 位作者 郑月茂 安志兴 马利兵 张涌 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2004年第11期11-14,共4页

　为进一步研究基因疫苗的免疫机制与免疫效果,探讨外源基因在乳腺中的定位表达,应用重组PCR方法,将猪瘟病毒(CSFV)E2基因与牛β-乳球蛋白(BLG)5′部分调控序列连接起来,并插入到真核表达载体pEGFP-C1上,构建了含有CSFVE2基因的乳腺特... 　为进一步研究基因疫苗的免疫机制与免疫效果,探讨外源基因在乳腺中的定位表达,应用重组PCR方法,将猪瘟病毒(CSFV)E2基因与牛β-乳球蛋白(BLG)5′部分调控序列连接起来,并插入到真核表达载体pEGFP-C1上,构建了含有CSFVE2基因的乳腺特异表达载体。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 e2基因 表达载体 基因疫苗 牛β-乳球蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料