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稳定表达猪水疱病病毒P1基因的PK-15细胞系的建立
被引量:
2
1
作者
田宏
吴锦艳
+5 位作者
龚真莉
郑海学
孙世琪
尚佑军
刘湘涛
谢庆阁
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第4期478-482,共5页
从猪水疱病全长感染性cDNA中,应用PCR技术扩增到SVDV结构蛋白P1基因,并在目的片段的5′端引入Kozak序列(Kozak,1987),定向克隆于逆转录病毒载体pBABE puro。经PCR、酶切和序列分析鉴定,获得阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒...
从猪水疱病全长感染性cDNA中,应用PCR技术扩增到SVDV结构蛋白P1基因,并在目的片段的5′端引入Kozak序列(Kozak,1987),定向克隆于逆转录病毒载体pBABE puro。经PCR、酶切和序列分析鉴定,获得阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获假型病毒,在Polybrene的介导下感染PK-15细胞,嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆。免疫荧光连续检测阳性克隆传代细胞,发现在不同代次的细胞中均有SVDV P1蛋白表达,而且表达的蛋白可被SVD阳性血清所识别;同时应用PCR技术,可从体外反复传代阳性细胞基因组中扩增到SVD P1基因。表明本次所筛选的阳性细胞克隆不但能持续稳定地表达SVD P1蛋白,而且可携带外源基因进行传代,具有良好的遗传稳定性。
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关键词
猪水疱病病毒p1基因
重组逆转录
病毒
载体
p
K-
1
5细胞
基因
表达
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职称材料
猪水泡病病毒结构蛋白VP1基因的核苷酸序列分析
被引量:
1
2
作者
龚振华
田相军
+2 位作者
刘俊辉
王玉东
蒋正军
《中国动物检疫》
CAS
北大核心
2005年第2期23-26,共4页
提取SVDV毒株的RNA ,用两对引物经反转录PCR扩增了包括VP1基因在内的约872bp的DNA片段 ,采用双脱氧DNA末端终止法测得VP1基因的核苷酸序列。分析表明 ,病毒VP1基因的核苷酸序列与已报道的VP1基因的同源性在89 %和98 %之间 ,对应的氨基酸...
提取SVDV毒株的RNA ,用两对引物经反转录PCR扩增了包括VP1基因在内的约872bp的DNA片段 ,采用双脱氧DNA末端终止法测得VP1基因的核苷酸序列。分析表明 ,病毒VP1基因的核苷酸序列与已报道的VP1基因的同源性在89 %和98 %之间 ,对应的氨基酸在89%和98 %之间。
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关键词
猪
水泡
病
病毒
结构蛋白
V
p
1
基因
核苷酸序列分析
猪
水泡
病
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职称材料
猪圆环病毒病的诊断及防控
3
作者
宋谦
刘彦威
《北方牧业》
2023年第4期38-38,共1页
猪圆环病毒(PCV)属于圆环病毒科圆环病毒属成员,此病毒包括4个基因型。其中PCV1于1974年作为猪肾细胞的污染物而被发现,但不具有致病性。PCV2于1995年最早发现于加拿大西部的患有PMWS的猪体中,被认为是引起PMWS的主要病原,并与PCV1的序...
猪圆环病毒(PCV)属于圆环病毒科圆环病毒属成员,此病毒包括4个基因型。其中PCV1于1974年作为猪肾细胞的污染物而被发现,但不具有致病性。PCV2于1995年最早发现于加拿大西部的患有PMWS的猪体中,被认为是引起PMWS的主要病原,并与PCV1的序列进行比较,结果显示两种毒株之间DNA同源性较高,为76%左右。2016年,PCV3在美国被宏基因组测序检测到,后有研究者在中国的黑龙江、吉林、辽宁、河北等10个省份的样本中检测出PCV3阳性。PCV4是2019年4月在湖南省首次被发现的,但它的流行状况及感染力尚不明确。
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关键词
猪
圆环
病毒
病
主要
病
原
p
MWS
p
CV
1
p
CV2
圆环
病毒
科
宏
基因
组测序
加拿大西部
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职称材料
题名
稳定表达猪水疱病病毒P1基因的PK-15细胞系的建立
被引量:
2
1
作者
田宏
吴锦艳
龚真莉
郑海学
孙世琪
尚佑军
刘湘涛
谢庆阁
机构
中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第4期478-482,共5页
基金
国家863高技术研究发展计划(2003AA241110)
文摘
从猪水疱病全长感染性cDNA中,应用PCR技术扩增到SVDV结构蛋白P1基因,并在目的片段的5′端引入Kozak序列(Kozak,1987),定向克隆于逆转录病毒载体pBABE puro。经PCR、酶切和序列分析鉴定,获得阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获假型病毒,在Polybrene的介导下感染PK-15细胞,嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆。免疫荧光连续检测阳性克隆传代细胞,发现在不同代次的细胞中均有SVDV P1蛋白表达,而且表达的蛋白可被SVD阳性血清所识别;同时应用PCR技术,可从体外反复传代阳性细胞基因组中扩增到SVD P1基因。表明本次所筛选的阳性细胞克隆不但能持续稳定地表达SVD P1蛋白,而且可携带外源基因进行传代,具有良好的遗传稳定性。
关键词
猪水疱病病毒p1基因
重组逆转录
病毒
载体
p
K-
1
5细胞
基因
表达
Keywords
SVDV
p
1
gene
retroviral vector
p
K-
1
5 cell
gene ex
p
ression
分类号
Q813 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
猪水泡病病毒结构蛋白VP1基因的核苷酸序列分析
被引量:
1
2
作者
龚振华
田相军
刘俊辉
王玉东
蒋正军
机构
农业部动物检疫所
山东农业大学动物科技学院
出处
《中国动物检疫》
CAS
北大核心
2005年第2期23-26,共4页
文摘
提取SVDV毒株的RNA ,用两对引物经反转录PCR扩增了包括VP1基因在内的约872bp的DNA片段 ,采用双脱氧DNA末端终止法测得VP1基因的核苷酸序列。分析表明 ,病毒VP1基因的核苷酸序列与已报道的VP1基因的同源性在89 %和98 %之间 ,对应的氨基酸在89%和98 %之间。
关键词
猪
水泡
病
病毒
结构蛋白
V
p
1
基因
核苷酸序列分析
猪
水泡
病
Keywords
Swine vesicular disease virus
V
p
1
(
1
D)
Nucleotide sequence
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
猪圆环病毒病的诊断及防控
3
作者
宋谦
刘彦威
机构
河北工程大学生命科学与食品工程学院
中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室、国家口蹄疫参考实验室
出处
《北方牧业》
2023年第4期38-38,共1页
文摘
猪圆环病毒(PCV)属于圆环病毒科圆环病毒属成员,此病毒包括4个基因型。其中PCV1于1974年作为猪肾细胞的污染物而被发现,但不具有致病性。PCV2于1995年最早发现于加拿大西部的患有PMWS的猪体中,被认为是引起PMWS的主要病原,并与PCV1的序列进行比较,结果显示两种毒株之间DNA同源性较高,为76%左右。2016年,PCV3在美国被宏基因组测序检测到,后有研究者在中国的黑龙江、吉林、辽宁、河北等10个省份的样本中检测出PCV3阳性。PCV4是2019年4月在湖南省首次被发现的,但它的流行状况及感染力尚不明确。
关键词
猪
圆环
病毒
病
主要
病
原
p
MWS
p
CV
1
p
CV2
圆环
病毒
科
宏
基因
组测序
加拿大西部
分类号
S85 [农业科学—兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
稳定表达猪水疱病病毒P1基因的PK-15细胞系的建立
田宏
吴锦艳
龚真莉
郑海学
孙世琪
尚佑军
刘湘涛
谢庆阁
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
猪水泡病病毒结构蛋白VP1基因的核苷酸序列分析
龚振华
田相军
刘俊辉
王玉东
蒋正军
《中国动物检疫》
CAS
北大核心
2005
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
猪圆环病毒病的诊断及防控
宋谦
刘彦威
《北方牧业》
2023
0
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职称材料
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0
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