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稳定表达猪水疱病病毒P1基因的PK-15细胞系的建立 被引量:2
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作者 田宏 吴锦艳 +5 位作者 龚真莉 郑海学 孙世琪 尚佑军 刘湘涛 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期478-482,共5页
从猪水疱病全长感染性cDNA中,应用PCR技术扩增到SVDV结构蛋白P1基因,并在目的片段的5′端引入Kozak序列(Kozak,1987),定向克隆于逆转录病毒载体pBABE puro。经PCR、酶切和序列分析鉴定,获得阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒... 从猪水疱病全长感染性cDNA中,应用PCR技术扩增到SVDV结构蛋白P1基因,并在目的片段的5′端引入Kozak序列(Kozak,1987),定向克隆于逆转录病毒载体pBABE puro。经PCR、酶切和序列分析鉴定,获得阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获假型病毒,在Polybrene的介导下感染PK-15细胞,嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆。免疫荧光连续检测阳性克隆传代细胞,发现在不同代次的细胞中均有SVDV P1蛋白表达,而且表达的蛋白可被SVD阳性血清所识别;同时应用PCR技术,可从体外反复传代阳性细胞基因组中扩增到SVD P1基因。表明本次所筛选的阳性细胞克隆不但能持续稳定地表达SVD P1蛋白,而且可携带外源基因进行传代,具有良好的遗传稳定性。 展开更多
关键词 猪水疱病病毒p1基因 重组逆转录病毒载体 pK-15细胞 基因表达
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猪水泡病病毒结构蛋白VP1基因的核苷酸序列分析 被引量:1
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作者 龚振华 田相军 +2 位作者 刘俊辉 王玉东 蒋正军 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2005年第2期23-26,共4页
提取SVDV毒株的RNA ,用两对引物经反转录PCR扩增了包括VP1基因在内的约872bp的DNA片段 ,采用双脱氧DNA末端终止法测得VP1基因的核苷酸序列。分析表明 ,病毒VP1基因的核苷酸序列与已报道的VP1基因的同源性在89 %和98 %之间 ,对应的氨基酸... 提取SVDV毒株的RNA ,用两对引物经反转录PCR扩增了包括VP1基因在内的约872bp的DNA片段 ,采用双脱氧DNA末端终止法测得VP1基因的核苷酸序列。分析表明 ,病毒VP1基因的核苷酸序列与已报道的VP1基因的同源性在89 %和98 %之间 ,对应的氨基酸在89%和98 %之间。 展开更多
关键词 水泡病毒 结构蛋白 Vp1基因 核苷酸序列分析 水泡
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猪圆环病毒病的诊断及防控
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作者 宋谦 刘彦威 《北方牧业》 2023年第4期38-38,共1页
猪圆环病毒(PCV)属于圆环病毒科圆环病毒属成员,此病毒包括4个基因型。其中PCV1于1974年作为猪肾细胞的污染物而被发现,但不具有致病性。PCV2于1995年最早发现于加拿大西部的患有PMWS的猪体中,被认为是引起PMWS的主要病原,并与PCV1的序... 猪圆环病毒(PCV)属于圆环病毒科圆环病毒属成员,此病毒包括4个基因型。其中PCV1于1974年作为猪肾细胞的污染物而被发现,但不具有致病性。PCV2于1995年最早发现于加拿大西部的患有PMWS的猪体中,被认为是引起PMWS的主要病原,并与PCV1的序列进行比较,结果显示两种毒株之间DNA同源性较高,为76%左右。2016年,PCV3在美国被宏基因组测序检测到,后有研究者在中国的黑龙江、吉林、辽宁、河北等10个省份的样本中检测出PCV3阳性。PCV4是2019年4月在湖南省首次被发现的,但它的流行状况及感染力尚不明确。 展开更多
关键词 圆环病毒 主要 pMWS pCV1 pCV2 圆环病毒 基因组测序 加拿大西部
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