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狂犬病毒糖蛋白研究进展 被引量:22
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作者 徐兰 郭增柱 +2 位作者 张永振 熊成龙 Zhen F.Fu 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期876-879,共4页
关键词 狂犬病毒糖蛋白 人兽共患传染病 负链RNA病毒 保护性抗原 基因编码 急性传染病 病毒基因 结构基因
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狂犬病毒糖蛋白衍生物作为靶脑载体初探 被引量:3
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作者 王逸麟 付爱玲 《科学技术与工程》 2011年第36期8974-8977,共4页
血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)阻碍了具有治疗潜力的大分子化合物从外周组织进入脑内。为了寻找一种高效、快速通过BBB的靶向性载体,实验通过罗丹明B标记的狂犬病毒糖蛋白衍生肽(RDP)注射入昆明小鼠体内,并于15 min、5 h取大脑、... 血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)阻碍了具有治疗潜力的大分子化合物从外周组织进入脑内。为了寻找一种高效、快速通过BBB的靶向性载体,实验通过罗丹明B标记的狂犬病毒糖蛋白衍生肽(RDP)注射入昆明小鼠体内,并于15 min、5 h取大脑、脊髓及肝、肾等外周组织,冷冻切片观察其在体内的分布,并通过构建pET28a-RDP-luciferase重组质粒,结果发现融合蛋白能快速地穿过血脑屏障分布于中枢神经系统,为治疗中枢神经系统的药物开发提供新的思路。 展开更多
关键词 狂犬病毒糖蛋白衍生物 血脑屏障 靶脑转运
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基于核糖体展示技术进行抗狂犬病毒人源抗体的制备
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作者 赵小玲 陈伟强 +5 位作者 冯红 沈成凤 纪艳 李静梅 张素娟 杨志华 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第10期945-952,共8页
构建了核糖体展示人源抗狂犬病毒单链抗体(scFv)库,筛选制备特异抗狂犬病毒糖蛋白(RVGp)的稳定性人源抗体.应用核糖体抗体库技术,从经狂犬病毒Vero疫苗免疫的志愿者外周血淋巴细胞中分离、构建核糖体展示scFv基因库.体外转录翻译后,以R... 构建了核糖体展示人源抗狂犬病毒单链抗体(scFv)库,筛选制备特异抗狂犬病毒糖蛋白(RVGp)的稳定性人源抗体.应用核糖体抗体库技术,从经狂犬病毒Vero疫苗免疫的志愿者外周血淋巴细胞中分离、构建核糖体展示scFv基因库.体外转录翻译后,以RVGp重组蛋白作筛选抗原,采用亲和富集法淘选RVGp特异性scFv抗体基因.在原核系统pET22b(+)/BL21(DE3)中实现scFv抗体片段的可溶性表达,ELISA鉴定阳性克隆.然后对筛选的scFv进行稳定性改构,构建VH-Lc-VK稳定性抗体,并对其生物学活性进行初步研究.成功构建了库容量约为6.2×1012的核糖体展示scFv抗体基因库.在180个筛选克隆中,克隆RB24、RB71、RB109和RB156显示出较高的ELISA值,其基因序列分析结果显示,它们是全新的人源抗RVGp抗体.改构后的抗RVGp VH-Lc-VK抗体的稳定性明显改进,可特异识别RVGp并有效中和狂犬病毒,抑制狂犬病毒对靶细胞的感染.以上结果表明,人源抗RVGp特异性抗体的获得,为狂犬病的有效预防、诊断和治疗提供了新的途径,而且将为其他人源抗体的制备提供理论依据和技术基础. 展开更多
关键词 核糖体展示 人源抗体 稳定性 狂犬病毒糖蛋白
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3种细胞穿透肽对体外转录mRNA的递送效果
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作者 王军华 罗画叶 +1 位作者 张翠玲 李军伟 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2022年第4期35-39,44,共6页
为了开发合适的mRNA递送载体,本试验采用体外转录、加帽、加尾修饰及氯化锂(LiCl)纯化的方法获得具有生物活性的绿色荧光蛋白mRNA(mRNA-EGFP),然后用合成的3种细胞穿透肽(RVG、RVG9dR、RVG11dR)进行递送。先通过凝胶阻滞试验确定mRNA与... 为了开发合适的mRNA递送载体,本试验采用体外转录、加帽、加尾修饰及氯化锂(LiCl)纯化的方法获得具有生物活性的绿色荧光蛋白mRNA(mRNA-EGFP),然后用合成的3种细胞穿透肽(RVG、RVG9dR、RVG11dR)进行递送。先通过凝胶阻滞试验确定mRNA与3种细胞穿透肽的最佳包被质量比例;再在293T细胞水平上测试3种细胞穿透肽的细胞毒性、包被mRNA后对RNase A的耐受性,并通过凝胶阻滞试验和细胞荧光试验来测试3种细胞穿透肽对mRNA的包被和递送效力。细胞毒性试验结果显示,3种细胞穿透肽的半抑制浓度(IC_(50))分别是95、90μmol/L和81μmol/L;RNase A保护试验结果显示,3种细胞穿透肽均可保护mRNA不被RNase A降解;凝胶阻滞试验和细胞荧光试验结果显示,3种细胞穿透肽均可成功包被mRNA-EGFP,并把mRNA递送到细胞内进行表达,其中RVG11dR对mRNA的递送效果最好。结果表明,在细胞穿透肽RVG的末端添加一定数量的精氨酸可提高其对mRNA的递送效力。 展开更多
关键词 细胞穿透肽 狂犬病毒糖蛋白 MRNA 体外转录 递送效果
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