三种芸香糖苷酶的底物特异性和酶学特征

1

作者 肖枫伟 孙江 +2 位作者 叶家影 李利君 倪辉 《食品工业科技》 北大核心 2025年第2期25-34,共10页

芸香糖苷类黄酮化合物的水解产物槲皮素、柚皮素、橙皮素具有丰富的生物活性和应用前景。为了探讨不同芸香糖苷酶水解制备槲皮素、柚皮素和橙皮素的特性,选择了Aspergillus niger CBS 513.88的芸香糖苷酶AnRut,Acremonium sp. DSM 2469... 芸香糖苷类黄酮化合物的水解产物槲皮素、柚皮素、橙皮素具有丰富的生物活性和应用前景。为了探讨不同芸香糖苷酶水解制备槲皮素、柚皮素和橙皮素的特性,选择了Aspergillus niger CBS 513.88的芸香糖苷酶AnRut,Acremonium sp. DSM 24697的αRβD Ⅰ和αRβD Ⅱ进行底物特异性和酶学性质的比较研究。结果表明,三种芸香糖苷酶均只能水解α-1,6连接的芸香糖苷类黄酮化合物,对α-1,2连接的新橙皮糖苷类黄酮化合物无作用。AnRut偏好水解3-O连接的芦丁,αRβD Ⅰ偏好水解7-O连接的芸香柚皮苷和橙皮苷,αRβD Ⅱ对两种类型底物都具有良好的水解活性。分子对接结果表明三种酶与芦丁、芸香柚皮苷和橙皮苷的结合模式不同,三种酶与底物的苷元结构的相互作用差异影响了底物特异性。AnRut最适温度50℃,最适pH4.0,10 mmol/L的β-ME和DTT对AnRut酶活有明显促进作用,相对酶活是未处理酶的223%和242%。αRβD Ⅰ最适温度70℃,最适pH4.0,在酸性条件下对芸香柚皮苷和橙皮苷具有良好的水解活性。αRβD Ⅱ最适温度40℃,最适pH6.0,较适用于中性条件下对三种底物的水解。本研究为应用不同芸香糖苷酶制备槲皮素、柚皮素、橙皮素以及芸香糖苷酶构效关系的后续研究提供了实验和理论依据。 展开更多

关键词 芸香糖苷酶 芸香糖苷类黄酮 底物特异性 酶学特征 分子对接

在线阅读 下载PDF 职称材料

玉米赤霉烯酮降解酶热稳定性及底物特异性改造策略 被引量：1

2

作者 秦立晔 刘晓萌 +4 位作者 王寿南 张晓琳 印铁 任顺成 仉磊 《中国粮油学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期42-51,共10页

玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)及其衍生物是污染范围较大的真菌毒素,广泛存在于玉米、大麦、小麦和高粱等谷物及其副产品中,对饲料行业和畜牧养殖业造成严重的经济损失。利用生物技术对ZEN及其衍生物进行降解和脱除是未来解决ZEN污染... 玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)及其衍生物是污染范围较大的真菌毒素,广泛存在于玉米、大麦、小麦和高粱等谷物及其副产品中,对饲料行业和畜牧养殖业造成严重的经济损失。利用生物技术对ZEN及其衍生物进行降解和脱除是未来解决ZEN污染的重要途径。然而,目前发现的ZEN降解酶热稳定性差,催化效率低,难以满足工业生产中高温、酸、碱等极端条件的需求。本文综述了近年来利用蛋白质工程提升ZEN降解酶热稳定性和底物特异性的改造策略,阐明ZEN降解酶改造的研究进展及存在问题,为开发ZEN降解酶的工程改造提供参考。 展开更多

关键词 玉米赤霉烯酮 降解酶 热稳定性 底物特异性 分子改造

在线阅读 下载PDF 职称材料

一株曲霉果糖转移酶酶学性质及底物特异性 被引量：4

3

作者 王立梅 周惠明 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第3期79-82,共4页

一株野生曲霉(Aspergillussp.JN19)所产果糖转移酶为胞内酶,该酶的最适反应温度为50℃,在45～52℃范围内能够保持较高的酶活性;反应的最适pH为5.5,pH在4.0～6.0的范围内酶活力稳定;Mg2+对该酶具有激活作用,可以使酶活力提高2.2倍,Cu2+... 一株野生曲霉(Aspergillussp.JN19)所产果糖转移酶为胞内酶,该酶的最适反应温度为50℃,在45～52℃范围内能够保持较高的酶活性;反应的最适pH为5.5,pH在4.0～6.0的范围内酶活力稳定;Mg2+对该酶具有激活作用,可以使酶活力提高2.2倍,Cu2+则完全抑制果糖转移酶活力;该酶能够催化蔗糖分子中的果糖基转移形成新的低聚糖;该酶具有广泛的受体特异性。 展开更多

关键词 低聚糖 果糖转移酶 底物特异性

在线阅读 下载PDF 职称材料

醛酮还原酶AKR7A5蛋白的纯化及其对萘醌类化合物的底物特异性研究 被引量：2

4

作者 李丹 刘雅茹 +1 位作者 张岐山 初阳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期825-827,共3页

目的:探讨小鼠醛酮还原酶AKR7A5蛋白对萘醌及其衍生物的底物特异性。方法:IPTG(异丙基硫代半乳糖糖苷)诱导BL21pLysS大肠杆菌中His标签的AKR7A5融合蛋白大量表达,利用FPLC系统通过HiTrap亲和柱纯化His-AKR7A5融合蛋白,经SDS-PAGE和Weste... 目的:探讨小鼠醛酮还原酶AKR7A5蛋白对萘醌及其衍生物的底物特异性。方法:IPTG(异丙基硫代半乳糖糖苷)诱导BL21pLysS大肠杆菌中His标签的AKR7A5融合蛋白大量表达,利用FPLC系统通过HiTrap亲和柱纯化His-AKR7A5融合蛋白,经SDS-PAGE和Western blot法鉴定纯化的AKR7A5蛋白。使用AKR酶活性实验检测纯化的重组AKR7A5蛋白对萘醌类化合物的底物特异性。结果:经SDS-PAGE和Western blot验证,成功纯化了His标签的AKR7A5融合蛋白;AKR酶活性实验结果显示,重组AKR7A5蛋白对散沫花醌有中等亲和力,对胡桃醌和维生素K3有较低的亲和力,对1,4-萘醌无亲和力。结论:成功纯化了重组AKR7A5蛋白,并检测了其对萘醌类化合物的底物特异性,结果表明醛酮还原酶很可能选择性地参与萘醌类化合物的代谢。 展开更多

关键词 醛酮还原酶 萘醌类化合物 蛋白纯化 底物特异性

在线阅读 下载PDF 职称材料

α-半乳糖苷酶水解底物的特异性及其在保育猪日粮中的应用 被引量：4

5

作者 张波 王继强 张宝彤 《中国饲料》 北大核心 2013年第1期18-20,共3页

为研究α-半乳糖苷酶水解底物的特异性及日粮中添加与α-半乳糖苷酶(α-Gal)对保育猪生长的影响,进行了两个试验。试验一:1 mL浓度为1.0 mg/mL的蜜二糖、棉子糖和水苏糖分别与3 U的α-Gal于37℃孵育16 h,用离子色谱检测释放的α-D-半乳... 为研究α-半乳糖苷酶水解底物的特异性及日粮中添加与α-半乳糖苷酶(α-Gal)对保育猪生长的影响,进行了两个试验。试验一:1 mL浓度为1.0 mg/mL的蜜二糖、棉子糖和水苏糖分别与3 U的α-Gal于37℃孵育16 h,用离子色谱检测释放的α-D-半乳糖。结果表明,α-Gal可以水解95.7%的蜜二糖,72.5%的棉子糖以及32.9%的水苏糖。试验二:选用72头平均体重为(12.5±0.2)kg的仔猪为研究对象,分为2个处理,每个处理6个重复,每个重复6头猪,研究α-Gal对保育猪生长的影响。处理1为对照组,处理2在对照组的基础上添加300 U/kg的α-Gal。21 d试验结果表明,加酶组平均日增重641 g,比不加酶组提高了9.8%(P=0.015);与对照组相比,加酶组饲料转化率提高了10.1%(P=0.020);两组之间平均日采食量差异不显著(P=0.944)。总之,α-Gal可以有效地降解棉子糖类寡糖,保育猪玉米-豆粕基础日粮中添加300 U/kgα-Gal显著提高了平均日增重和饲料转化率。 展开更多

关键词 Α-半乳糖苷酶 底物特异性 保育猪 生长性能

在线阅读 下载PDF 职称材料

脂肪酶的底物特异性及其应用潜力 被引量：13

6

作者 曹淑桂 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1995年第1期9-13,共5页

不同来源的Ｌｉｐａｓｅ对底物油脂中脂肪酸的链长、不饱和度及不饱和脂肪酸的双键位置表现出不同的脂肪酸特异性；对甘油酯中Ｓｎ－１（３）和Ｓｎ－２位酯键具有不同的位置特异性；对甘油酯中立体对映结构的１位和３位酯键呈现不同的... 不同来源的Ｌｉｐａｓｅ对底物油脂中脂肪酸的链长、不饱和度及不饱和脂肪酸的双键位置表现出不同的脂肪酸特异性；对甘油酯中Ｓｎ－１（３）和Ｓｎ－２位酯键具有不同的位置特异性；对甘油酯中立体对映结构的１位和３位酯键呈现不同的立体特异性，脂肪酶能够催化酯水解和酯合成（或酯交换）反应，用于制备甘油单酯、多不饱和脂肪酸及其酯和具有光学活性的有机化合物，因此它在油酯加工和有机合成中具有很大的应用潜力。 展开更多

关键词 脂肪酶 底物特异性 油脂加工 有机合成 应用

在线阅读 下载PDF 职称材料

甘蓝型油菜脂肪酸碳链延长酶BnaA.FAE1与BnaC.FAE1的底物特异性分析 被引量：1

7

作者 淮东欣 张园园 +2 位作者 张椿雨 Edgar B.CAHOON 周永明 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期624-632,共9页

研究脂肪酸碳链延长酶(FAE1)的底物特异性,旨在为改良油料种子脂肪酸提供信息,将甘蓝型油菜A、C基因组的BnaA. FAE1和BnaC. FAE1分别在亚麻荠种子中表达。其转基因种子中,山嵛酸与芥酸含量的比值(C22∶0/C22∶1)分别为0. 18和0. 88,表明... 研究脂肪酸碳链延长酶(FAE1)的底物特异性,旨在为改良油料种子脂肪酸提供信息,将甘蓝型油菜A、C基因组的BnaA. FAE1和BnaC. FAE1分别在亚麻荠种子中表达。其转基因种子中,山嵛酸与芥酸含量的比值(C22∶0/C22∶1)分别为0. 18和0. 88,表明BnaA. FAE1对单不饱和脂肪酸亲和力较高,而BnaC. FAE1则对饱和脂肪酸亲和力较高,这种差异在各转基因世代表现稳定。通过分析T3转基因家系种子中酰基辅酶A(Acyl-Co As)的组成,进一步证明了上述结论。但是在拟南芥中分别异源表达上述基因,并没有观察到类似的底物特异性差异。在甘蓝型油菜祖先种,白菜型油菜和甘蓝种子中调查其C22∶0/C22∶1比值,同样未发现其FAE1底物特异性存在差异。综上认为BnaA. FAE1和BnaC. FAE1在亚麻荠中存在底物特异性。 展开更多

关键词 油菜 FAE1 底物特异性 脂肪酸 亚麻荠 转基因

在线阅读 下载PDF 职称材料

α-半乳糖苷酶的催化机理及底物特异性 被引量：4

8

作者 李楠 李苏红 +2 位作者 徐杰 李润国 董墨思 《粮油食品科技》 北大核心 2014年第3期92-97,108,共7页

α-半乳糖苷酶属外切糖苷酶类,普遍存在于动、植物及微生物中,在食品、饲料、医药、造纸等领域应用广泛。论述了α-半乳糖苷酶的催化机理、底物特异性方面的研究进展,并讨论了其在食品工业中的应用及发展前景。

关键词 Α-半乳糖苷酶 糖水解酶家族 催化机理 底物特异性

在线阅读 下载PDF 职称材料

蛋白酶底物特异性改变对白鲢鱼肉蛋白酶解效率和产物抗氧化性的影响 被引量：1

9

作者 田宝玉 赖丽蓉 +4 位作者 蔡婉玲 黄薇 郭菁 蓝灿华 宋永康 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2013年第3期323-327,共5页

通过对比水产品加工蛋白酶及其底物特异性位点突变酶E156S、E156N和E156D对白鲢鱼肉蛋白水解能力及其酶解产物抗氧化性的差异,探讨底物特异性改变对酶的酶解效率和产物活性的影响.结果表明,突变酶E156D的终水解度最高(15.22%),其次为E15... 通过对比水产品加工蛋白酶及其底物特异性位点突变酶E156S、E156N和E156D对白鲢鱼肉蛋白水解能力及其酶解产物抗氧化性的差异,探讨底物特异性改变对酶的酶解效率和产物活性的影响.结果表明,突变酶E156D的终水解度最高(15.22%),其次为E156S(13.60%),远高于E156N与原酶的9.37%.原酶和突变酶E156S酶解白鲢鱼肉产物的抗氧化性无明显差异,分别为83.79%和84.05%.而突变酶E156N酶解白鲢鱼肉产物的抗氧化性为76.6%;E156D酶解白鲢鱼肉产物的抗氧化性最低(50.05%).说明枯草蛋白酶BPN底物特异性相关的156位点突变对蛋白酶水解鲢鱼蛋白能力和产物活性都具有重要影响. 展开更多

关键词 蛋白酶 底物特异性突变子 鲢鱼蛋白 酶解 抗氧化性

在线阅读 下载PDF 职称材料

环状芽孢杆菌β-半乳糖苷酶水解乳糖和ONPG的底物特异性(英文) 被引量：1

10

作者 秦燕 宁正祥 《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第1期58-62,共5页

在细菌乳糖酶的菌株筛选过程中发现 ,OHA与LHA的比值范围在 1.3～ 32 .2之间 ,表明OHA与LHA差异很大 ,无相关性 .对环状芽孢杆菌的乳糖酶研究发现 ,Na+和K+能不同程度地促进OHA和LHA ;Mg2 +能增强OHA ,对LHA却表现出抑制作用 .酶作用于O... 在细菌乳糖酶的菌株筛选过程中发现 ,OHA与LHA的比值范围在 1.3～ 32 .2之间 ,表明OHA与LHA差异很大 ,无相关性 .对环状芽孢杆菌的乳糖酶研究发现 ,Na+和K+能不同程度地促进OHA和LHA ;Mg2 +能增强OHA ,对LHA却表现出抑制作用 .酶作用于ONPG和乳糖的最适 pH和温度也存在差异 .一定反应体系中 ,OHA/LHA的值随反应条件的变化而不同 ,因此用OHA来评价LHA会对酶的实际应用带来很大影响 . 展开更多

关键词 Β-半乳糖苷酶 底物特异性 ONPG 水解能力 乳糖 环状芽孢杆菌 抑制作用

在线阅读 下载PDF 职称材料

小鼠3种α1,2岩藻糖转移酶的底物特异性 被引量：1

11

作者 林蓓 齐藤真木子 岩森正男 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期761-766,共6页

目的对比小鼠3种GDP岩藻糖O!半乳糖苷"112-岩藻糖转移酶("112-FT)的底物特异性。方法利用RT-PCR方法克隆小鼠3种"112-FT基因编码区MFUT-Ⅰ、MFUT-Ⅱ、MFUT-Ⅲ,测序后分别将其插入表达载体pcDNA3.1的多克隆位点,构建表达... 目的对比小鼠3种GDP岩藻糖O!半乳糖苷"112-岩藻糖转移酶("112-FT)的底物特异性。方法利用RT-PCR方法克隆小鼠3种"112-FT基因编码区MFUT-Ⅰ、MFUT-Ⅱ、MFUT-Ⅲ,测序后分别将其插入表达载体pcDNA3.1的多克隆位点,构建表达载体pcDNA3.1-MFUT-Ⅰ、pcDNA3.1-MFUT-Ⅱ及pcDNA3.1-MFUT-Ⅲ;采用磷酸钙法将其转染于COS-7细胞进行表达,通过检测3种酶对不同种底物特性比较酶的特异性。结果小鼠基因MFUT-Ⅰ、MFUT-Ⅱ、MFUT-Ⅲ分别与人类H基因(77%)、Se基因(79%)和Sec1基因(75%)具有序列同源性。MFUT-Ⅰ和MFUT-Ⅱ基因转染后的COS-7细胞均具有"112-FT活性1而MFUT-Ⅲ基因转染的COS-7细胞无此活性。MFUT-Ⅱ同时对底物缺乏唾液酸的神经节苷脂(GA1)及单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)存在活性1分别生成产物岩藻糖基化GA1(FGA1)及岩藻糖基化神经节苷脂GM1(FGM1)<而MFUT-Ⅰ仅对底物GA1存在活性。MFUT-Ⅱ对GA1的比活性约为MFUT-Ⅰ的80～90倍。MFUT-Ⅱ对GA1的比活性为GM1的10￣20倍。MFUT-Ⅱ不仅具有合成Ⅳ型H抗原FGA1及FGM1活性,同时具有对乳丁糖神经酰胺(Lc4Cer)及异乳丁糖神经酰胺(nLc4Cer)的活性,可合成Ⅰ型及Ⅱ型H抗原。结论MFUT-Ⅱ是小鼠的主要"112-FT,具有合成Ⅳ型H抗原FGA1及FGM1的功能;MFUT-I仅有合成Ⅳ型H抗原FGA1的功能;MFUT-Ⅲ无"112-FT活性。 展开更多

关键词 小鼠 α1 2-岩藻糖转移酶 基因 糖脂 底物特异性

在线阅读 下载PDF 职称材料

底物特异性的生物催化与酶设计改造 被引量：8

12

作者 姜恬 冯旭东 +1 位作者 李岩 李春 《化工进展》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第1期606-614,共9页

随着生物产业的发展,生物酶催化发挥着越来越重要的作用。然而,部分酶在应用过程中仍然存在诸多问题,影响了生物催化的进一步发展。本文以酶的底物特异性为切入点,回顾了酶的专一性、高效性和环保性;介绍了酶在药物合成和天然产物改性... 随着生物产业的发展,生物酶催化发挥着越来越重要的作用。然而,部分酶在应用过程中仍然存在诸多问题,影响了生物催化的进一步发展。本文以酶的底物特异性为切入点,回顾了酶的专一性、高效性和环保性;介绍了酶在药物合成和天然产物改性领域的应用以及所遇到的问题;综述了酶的底物特异性改造过程中各种方法的应用,包括化学修饰、非理性和理性设计。化学修饰作为一种直观的修饰方法,通过化学反应对酶分子进行改造;非理性设计是利用易错PCR和DNA Shuffling等手段获得底物特异性提高的突变体;理性设计是基于序列和结构信息对酶分子进行改造。本文从重塑活性口袋提高酶的底物特异性和重塑活性口袋改变酶促反应类型两个方面出发,详述了理性设计改变酶的底物特异性的方法,为酶的特异性改造提供借鉴。 展开更多

关键词 生物催化 酶设计 底物特异性 分子改造

在线阅读 下载PDF 职称材料

裂殖壶菌脂肪酶基因克隆及底物特异性研究 被引量：2

13

作者 麻梅梅 张涛 +3 位作者 刘睿杰 常明 金青哲 王兴国 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期129-133,共5页

裂殖壶菌甘油三酯合成和水解的过程中,脂肪酶起着重要的作用。根据同源性分析结果,筛选得到裂殖壶菌脂肪酶基因STGL2。以cDNA为模板获得STGL2脂肪酶基因,将其连接到pPIC9K载体上,得到重组质粒pPIC9K-STGL2,并在毕赤酵母中表达;系统分析... 裂殖壶菌甘油三酯合成和水解的过程中,脂肪酶起着重要的作用。根据同源性分析结果,筛选得到裂殖壶菌脂肪酶基因STGL2。以cDNA为模板获得STGL2脂肪酶基因,将其连接到pPIC9K载体上,得到重组质粒pPIC9K-STGL2,并在毕赤酵母中表达;系统分析了重组脂肪酶(Stgl2p)的底物特异性。结果表明:STGL2脂肪酶基因在毕赤酵母中成功表达;裂殖壶菌脂肪酶Stgl2p的最适底物为对硝基苯酚月桂酸酯(p-NPL),其最适p H为7.5,最适反应温度为35℃。综上所述,脂肪酶Stgl2p在裂殖壶菌细胞内对甘油三酯中长碳链脂肪酸的水解起着重要的作用。 展开更多

关键词 裂殖壶菌 脂肪酶基因 毕赤酵母 底物特异性

在线阅读 下载PDF 职称材料

重组氨肽酶底物特异性及协同水解玉米蛋白质 被引量：4

14

作者 林颖 孔峰 田亚平 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1274-1280,共7页

以9种不同的氨基酸一对硝基苯胺为底物，考察重组枯草芽孢杆菌氨肽酶对底物的特异性。结果显示，该氨肽酶对由疏水氨基酸组成的Leu-pNA水解活力最强。其次是两种由碱性氨基酸组成的Arg-pNA、Lys-pNA，对其它几种由疏水氨基酸组成的Ala—... 以9种不同的氨基酸一对硝基苯胺为底物，考察重组枯草芽孢杆菌氨肽酶对底物的特异性。结果显示，该氨肽酶对由疏水氨基酸组成的Leu-pNA水解活力最强。其次是两种由碱性氨基酸组成的Arg-pNA、Lys-pNA，对其它几种由疏水氨基酸组成的Ala—pNA、Ile-pNA、Val-pNA、Phe-pNA、Pro-pNA表现出较弱的水解活力．而对酸性氨基酸组成的Glu-pNA则无水解活力。在此基础上考察其与内切蛋白酶协同水解玉米蛋白质的效果。以水解度为指标进行单因素试验，明确氨肽酶与碱性蛋白酶复配水解玉米蛋白质的效果较佳。双酶水解产物中新增游离氨基酸含量分别为碱性蛋白酶和氨肽酶单独水解的4．89倍、6．05倍；水解产物中多肽相对分子质量多在1000Da以下，其中500～1000Da的寡肽占14．57％。180～500Da的小肽质量分数为68．42％，水解度达65％。这些结果表明,氨肽酶和碱性蛋白酶协同水解蛋白质原料具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 重组氨肽酶 底物特异性 协同水解 玉米蛋白质

在线阅读 下载PDF 职称材料

变幻青霉氨基甲酸乙酯降解酶产酶条件优化及酶的底物特异性 被引量：7

15

作者 谷晓蕾 田亚平 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期603-607,共5页

在单因素优化基础上,运用正交试验设计理论,优化氨基甲酸乙酯降解酶产生菌P.variabile JN-A525的产酶条件。优化发酵培养基配方为:葡萄糖20 g/L,牛肉膏10 g/L,KH2PO45g/L、NaCl 1 g/L、KCl 5 g/L;发酵条件为:初始pH 6.0、培养温度32℃... 在单因素优化基础上,运用正交试验设计理论,优化氨基甲酸乙酯降解酶产生菌P.variabile JN-A525的产酶条件。优化发酵培养基配方为:葡萄糖20 g/L,牛肉膏10 g/L,KH2PO45g/L、NaCl 1 g/L、KCl 5 g/L;发酵条件为:初始pH 6.0、培养温度32℃、接种体积分数3%、250 mL摇瓶装量70 mL、摇床转速100 r/min,在此优化条件下酶活比优化前提高了3.47倍。对经超声破碎、(Na)2SO4盐析、Superdex G-75凝胶过滤层析步骤初步纯化的酶之底物特异性的研究表明,在模拟黄酒体系下,该酶对尿素和氨基甲酸乙酯有相对强的降解作用,对一些酯类和氨基酸没有降解作用。 展开更多

关键词 氨基甲酸乙酯降解酶 优化 纯化 底物特异性

在线阅读 下载PDF 职称材料

理性设计提高华根霉脂肪酶对不饱和长链脂肪酸的底物特异性及其在大豆油水解中的应用 被引量：2

16

作者 江传欢 徐岩 喻晓蔚 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期121-128,共8页

为了提高华根霉脂肪酶在大豆油水解制备脂肪酸中的应用效果,通过理性设计的方法改造脂肪酶的脂肪酸特异性。对突变酶的酶学性质进行了研究,并通过单因素实验优化脂肪酶催化水解大豆油的反应条件。结果表明:利用定点突变技术获得了一系... 为了提高华根霉脂肪酶在大豆油水解制备脂肪酸中的应用效果,通过理性设计的方法改造脂肪酶的脂肪酸特异性。对突变酶的酶学性质进行了研究,并通过单因素实验优化脂肪酶催化水解大豆油的反应条件。结果表明:利用定点突变技术获得了一系列脂肪酸特异性改变的脂肪酶,其中突变酶HQL增强了对不饱和长链脂肪酸的特异性,并且对p-NPP(C16)的水解活力相比野生型提高了2.72倍;所有突变酶的最适温度和最适p H均为40℃和8.0,与野生型脂肪酶一致;得到脂肪酶催化水解大豆油的最适反应条件为反应时间24 h、水油质量比1∶1、加酶量500 U/g(以油质量计)、p H 8.0、温度40℃,在最适反应条件下,野生型酶催化大豆油水解率仅为80%,而突变酶HQL由于增强了对长链不饱和脂肪酸的底物特异性,对大豆油水解率提高到98%。 展开更多

关键词 脂肪酶 脂肪酸 理性设计 底物特异性 大豆油水解

在线阅读 下载PDF 职称材料

屎肠球菌R40产胆盐水解酶发酵动力学及底物特异性分析 被引量：5

17

作者 雷霜江 吕青遥 +4 位作者 王文杰 杨浩 孙博瑞 武雪梅 焦士蓉 《中国酿造》 CAS 北大核心 2021年第11期144-148,共5页

该研究以产胆盐水解酶的屎肠球菌(Enterococcus faecium)R40为研究对象,模拟人体胆盐条件,对其发酵动力学进行分析。采用Logistic、Luedeking-Piret、Luedeking方程描述屎肠球菌R40发酵过程中菌体生长、产物生成、底物消耗的内在关系,... 该研究以产胆盐水解酶的屎肠球菌(Enterococcus faecium)R40为研究对象,模拟人体胆盐条件,对其发酵动力学进行分析。采用Logistic、Luedeking-Piret、Luedeking方程描述屎肠球菌R40发酵过程中菌体生长、产物生成、底物消耗的内在关系,并比较不同胆盐条件对屎肠球菌R40生长和降胆固醇能力的影响,判断其产生的胆盐水解酶是否存在底物特异性。结果表明,拟合模型的相关系数R2均>0.9,效果良好,模型预测值与试验测量值的误差均<10%,说明可以通过建立发酵动力学模型对屎肠球菌R40产酶情况进行预测和描述。胆盐的添加有利于屎肠球菌R40发挥降胆固醇作用,使菌株R40提前4 h进入对数生长期,且提高了菌株R40的生物量。不同胆盐对菌株R40生长的影响存在差异性,甘氨酸脱氧胆盐虽能提高生物量,但未缩短适应期。牛磺酸胆盐和甘氨酸胆盐缩短了菌株R40的适应期,但对生物量并无显著影响,说明菌株R40产的胆盐水解酶具有一定的底物特异性。 展开更多

关键词 屎肠球菌 胆盐水解酶 发酵动力学 底物特异性

在线阅读 下载PDF 职称材料

非核糖体肽合成酶腺苷化结构域在E.coli中的表达及底物特异性分析

18

作者 刘欣 魏小雅 +1 位作者 于宏伟 郭润芳 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期110-115,132,共7页

侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)S62-9产生的抗菌肽(Brevibacillin,BBL)是一种非核糖体多肽,由非核糖体肽合成酶催化合成。本研究所用基因是从侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)S62-9质粒基因组中克隆的一个非核糖体肽合成酶... 侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)S62-9产生的抗菌肽(Brevibacillin,BBL)是一种非核糖体多肽,由非核糖体肽合成酶催化合成。本研究所用基因是从侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)S62-9质粒基因组中克隆的一个非核糖体肽合成酶的腺苷化结构域(Nonribosomal peptide synthetase adenylation,NRPS-A)基因,根据此NRPS-A基因构建了pET21b-N1、pET21b-B2、pET22b-N1、pET22b-N3四个重组表达载体。将以上重组表达载体分别转化E.coli BL21、E.coli Rosetta(DE3)和E.coli Origami B(DE3)受体细胞,并用1 mmol/L异丙基β-d-硫代吡喃半乳糖吡喃糖苷(IPTG)在16°C 200 r/min下进行诱导,将诱导产物用SDS-PAGE检测分析。结果显示,4种重组载体在E.coliBL21中均无表达,在E.coliRosetta(DE3)大量表达但均以包涵体形式存在,在E.coli Origami B(DE3)均表达,但只有pET22b-N3这一重组表达载体出现了可溶性融合蛋白。可溶性融合蛋白对赖氨酸有较高的腺苷化活性,表明该A结构域负责抗菌肽BBL中的赖氨酸的识别和上载。该研究结果不仅为其它NRPS-A域的可溶性表达提供了方法,同时为研究抗菌肽BBL的生物合成机制提供依据。 展开更多

关键词 侧孢短芽孢杆菌 抗菌肽 非核糖体肽合成酶 腺苷化结构域 底物特异性

在线阅读 下载PDF 职称材料

利用机器学习提高M.jannaschii酪氨酰tRNA合成酶底物特异性分子建模预测的准确度 被引量：2

19

作者 段秉亚 孙应飞 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1214-1232,共19页

设计结合不同化学结构底物的酶结合袋是一个巨大的挑战.传统的湿实验要筛选成千上万甚至上百万个突变体来寻找对特定配体结合的突变体,此过程需要耗费大量的时间和资源.为了加快筛选过程,我们提出了一种新的工作流程,将分子建模和数据... 设计结合不同化学结构底物的酶结合袋是一个巨大的挑战.传统的湿实验要筛选成千上万甚至上百万个突变体来寻找对特定配体结合的突变体,此过程需要耗费大量的时间和资源.为了加快筛选过程,我们提出了一种新的工作流程,将分子建模和数据驱动的机器学习方法相结合,生成具有高富集率的突变文库,用于高效筛选能识别特定底物的蛋白质突变体.M.jannaschii酪氨酰tRNA合成酶(Mj.TyrRS)能识别特定的非天然氨基酸并催化形成氨酰tRNA,其不同的突变体能够识别不同结构的非天然氨基酸,并且已经有了许多报道和数据的积累,因此我们使用TyrRS作为一个例子来进行此筛选流程的概念验证.基于已知的多个Mj.TyrRS的晶体结构及分子建模的结果,我们发现D158G/P是影响残基158~163位α螺旋蛋白骨架变化的关键突变.我们的模拟结果表明,在含有687个突变体的测试数据中,与随机突变相比,分子建模和打分函数计算排序可以将目标突变体的富集率提高2倍,而使用已知突变体和对应的非天然氨基酸数据训练的机器学习模型进行校准后,筛选富集率可提高11倍.这种分子建模和机器学习相结合的计算和筛选流程非常有助于Mj.TyrRS的底物特异性设计,可以大大减少湿实验的时间和成本.此外,这种新方法在蛋白质计算设计领域具有广泛的应用前景. 展开更多

关键词 酪氨酰tRNA合成酶 遗传密码扩展 酶底物特异性 ROSETTA 分子建模 机器学习

在线阅读 下载PDF 职称材料

清香酒醅来源Lactobacillus plantarum SL32-2自溶酶的酶学性质及其底物特异性初探 被引量：1

20

作者 来欢欢 张凯悦 +4 位作者 田青 董晋文 赵微 崔美林 张秀红 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期64-69,共6页

为研究Lactobacillus plantarum SL32-2自溶酶的酶学性质及底物特异性,以该细菌细胞为底物分析其自溶酶的最适温度及最适pH,结合该菌株在有无外加自溶酶、自溶前后还原糖和氨基酸的变化以及对4种底物的敏感性,分析其自溶酶的底物特异性... 为研究Lactobacillus plantarum SL32-2自溶酶的酶学性质及底物特异性,以该细菌细胞为底物分析其自溶酶的最适温度及最适pH,结合该菌株在有无外加自溶酶、自溶前后还原糖和氨基酸的变化以及对4种底物的敏感性,分析其自溶酶的底物特异性。结果表明,L.plantarum SL32-2在对数早期培养4 h时,自溶度最高;其自溶酶的最适pH为7.5,最适温度为37℃;添加自溶酶后,L.plantarum SL32-2的自溶度增加了12.04%、还原糖和氨基酸分别增加了1.05和42.83倍;底物特异性分析发现,L.plantarum SL32-2自溶酶中β-N-乙酰葡萄糖胺酶、酰胺酶、羧肽酶、内肽酶的活性分别为0.0036、0.0027、1.1267和2.0987 U,表明作用于肽链的酶活性远高于作用于糖链的酶。因此,有望通过添加自溶酶的方式,控制酒醅中乳酸菌的过量生长。 展开更多

关键词 乳杆菌 自溶酶 酶学性质 自溶度 底物特异性

在线阅读 下载PDF 职称材料