目的观察矿物三氧化物凝聚体(Mineral Trioxide Aggregate,MTA)和三种改良盖髓剂(nRoot、Vitapex、iRoot BP Plus)对人牙髓干细胞(hDPSCs)增殖、分化为成牙本质细胞的促进作用。方法①不同浓度四种盖髓剂对hDPSCs增殖的促进作用观察。取...目的观察矿物三氧化物凝聚体(Mineral Trioxide Aggregate,MTA)和三种改良盖髓剂(nRoot、Vitapex、iRoot BP Plus)对人牙髓干细胞(hDPSCs)增殖、分化为成牙本质细胞的促进作用。方法①不同浓度四种盖髓剂对hDPSCs增殖的促进作用观察。取第5代hDPSCs细胞分为MTA组、iRoot BP Plus组、nRoot组、Vitapex组及空白组,MTA组、iRoot BP Plus组、nRoot组、Vitapex组分别加入不同浓度(0.02、0.2、1、2 mg/mL)的MTA、iRoot BP Plus、nRoot和Vitapex培养液,空白组加入含10%FBS的DMEM/F12培养液。分别于培养24、48 h时,采用CCK-8法测算各组细胞增殖活性。②四种盖髓剂对hDPSCs分化为成牙本质细胞的促进作用观察。通过ALP活性检测筛选出四种材料对hDPSCs最适诱导浓度。取第4代hDPSCs分为五组:空白组、MTA组、iRoot BP Plus组、nRoot组和Vitapex组换为0.2 mg/mL的MTA、iRoot BP Plus、nRoot和Vitapex成骨培养基,空白组为正常成骨培养基。培养第21天时采用茜素红染色和半定量分析法观察各组细胞矿化结节形成情况,培养第7天时采用Western Blotting法检测细胞相关蛋白类核转录因子(Runt-related transcription factor 2,RUNX-2)、骨钙素(Osteocalcin,OCN)、牙本质涎磷蛋白(Dentin sialophosphoprotein,DSPP)以及牙本质基质蛋白1(Dentin matrix protein 1,DMP-1)。结果与空白组相比,培养第2天时0.02、0.2、1 mg/mL的MTA组、iRoot BP Plus在和nRoot组细胞增殖活性高(P均<0.05);与培养第1天时相比,培养第2天时2 mg/mL的MTA组和Vitapex组细胞增殖活性低(P均<0.05)。筛选0.2 mg/mL为后续受试浓度。与nRoot组和Vitapex组相比,iRoot BP Plus组和MTA组细胞钙沉积量高(P均<0.05)。与空白组相比,MTA组、iRoot BP Plus组、nRoot组和Vitapex组细胞OCN、RUNX-2、DSPP、DMP-1相对表达量均升高(P均<0.05);与nRoot组、Vitapex组相比,iRoot BP Plus组细胞OCN、RUNX-2、DSPP、DMP-1相对表达量均高(P均<0.05)。结论相比于MTA、Vitapex,nRoot和iRoot BP Plus更能促进hDPSCs的细胞增殖、诱导细胞分化为成牙本质细胞。展开更多
目的:提取牙本质细胞外基质蛋白(Dentin extracellular matrix proteins,DEMPs)研究其对人脱落的乳牙牙髓干细胞(Stem cell from human exfoliated deciduous teeth,SHED)体外增殖分化能力的影响。方法:采用组织块联合酶消化法获得SHED...目的:提取牙本质细胞外基质蛋白(Dentin extracellular matrix proteins,DEMPs)研究其对人脱落的乳牙牙髓干细胞(Stem cell from human exfoliated deciduous teeth,SHED)体外增殖分化能力的影响。方法:采用组织块联合酶消化法获得SHED并进行体外培养。成骨诱导液诱导细胞,鉴定其多向分化能力;拔取健康牛牙,用4mol/L盐酸胍和0.5mol/L EDTA提取DEMPs,四唑盐比色法(MTT)检测不同浓度DEMPs对SHED增殖能力的影响,同时测定DEMPs对SHED碱性磷酸酶(ALP)活性的影响;实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测牙本质磷蛋白与牙本质基质蛋白1的mRNA表达情况。结果:DEMPs诱导细胞培养3d、5d可促进细胞增殖。细胞培养5、7d上调ALP活性,RT-PCR结果显示,DEMPs诱导后可促进DSPP与DMP-1基因的表达。结论:牙本质细胞外基质蛋白可以促进SHED的增殖与牙向分化能力。展开更多
文摘目的观察矿物三氧化物凝聚体(Mineral Trioxide Aggregate,MTA)和三种改良盖髓剂(nRoot、Vitapex、iRoot BP Plus)对人牙髓干细胞(hDPSCs)增殖、分化为成牙本质细胞的促进作用。方法①不同浓度四种盖髓剂对hDPSCs增殖的促进作用观察。取第5代hDPSCs细胞分为MTA组、iRoot BP Plus组、nRoot组、Vitapex组及空白组,MTA组、iRoot BP Plus组、nRoot组、Vitapex组分别加入不同浓度(0.02、0.2、1、2 mg/mL)的MTA、iRoot BP Plus、nRoot和Vitapex培养液,空白组加入含10%FBS的DMEM/F12培养液。分别于培养24、48 h时,采用CCK-8法测算各组细胞增殖活性。②四种盖髓剂对hDPSCs分化为成牙本质细胞的促进作用观察。通过ALP活性检测筛选出四种材料对hDPSCs最适诱导浓度。取第4代hDPSCs分为五组:空白组、MTA组、iRoot BP Plus组、nRoot组和Vitapex组换为0.2 mg/mL的MTA、iRoot BP Plus、nRoot和Vitapex成骨培养基,空白组为正常成骨培养基。培养第21天时采用茜素红染色和半定量分析法观察各组细胞矿化结节形成情况,培养第7天时采用Western Blotting法检测细胞相关蛋白类核转录因子(Runt-related transcription factor 2,RUNX-2)、骨钙素(Osteocalcin,OCN)、牙本质涎磷蛋白(Dentin sialophosphoprotein,DSPP)以及牙本质基质蛋白1(Dentin matrix protein 1,DMP-1)。结果与空白组相比,培养第2天时0.02、0.2、1 mg/mL的MTA组、iRoot BP Plus在和nRoot组细胞增殖活性高(P均<0.05);与培养第1天时相比,培养第2天时2 mg/mL的MTA组和Vitapex组细胞增殖活性低(P均<0.05)。筛选0.2 mg/mL为后续受试浓度。与nRoot组和Vitapex组相比,iRoot BP Plus组和MTA组细胞钙沉积量高(P均<0.05)。与空白组相比,MTA组、iRoot BP Plus组、nRoot组和Vitapex组细胞OCN、RUNX-2、DSPP、DMP-1相对表达量均升高(P均<0.05);与nRoot组、Vitapex组相比,iRoot BP Plus组细胞OCN、RUNX-2、DSPP、DMP-1相对表达量均高(P均<0.05)。结论相比于MTA、Vitapex,nRoot和iRoot BP Plus更能促进hDPSCs的细胞增殖、诱导细胞分化为成牙本质细胞。
