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白念珠菌酵母相细胞长片段基因表达系列分析文库的构建和初步分析 被引量:1
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作者 周村建 郝飞 +3 位作者 邓永键 李永平 王鲁 钟白玉 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期966-968,共3页
目的构建白念珠菌酵母相细胞长片段基因表达系列分析文库并探讨其基因表达特点。方法采用长片段基因表达系列分析技术(LongSAGE)构建白念珠菌酵母相细胞LongSAGE文库,并从中挑取1000个阳性克隆进行测序。结果成功构建了白念珠菌酵母相细... 目的构建白念珠菌酵母相细胞长片段基因表达系列分析文库并探讨其基因表达特点。方法采用长片段基因表达系列分析技术(LongSAGE)构建白念珠菌酵母相细胞LongSAGE文库,并从中挑取1000个阳性克隆进行测序。结果成功构建了白念珠菌酵母相细胞LongSAGE文库。1000个测序文件中,共获得标签17773个,代表单一转录本7333种,其中单一匹配标签占16·65%,多重匹配标签占6·59%,推测蛋白标签占16·27%,基因组及粘粒等标签占1·64%,新标签为58·86%。标签拷贝数超过35的33个高表达标签中有11个可能属于新的表达序列。结论LongSAGE是一种能够快速、高通量地研究细胞基因表达谱及其丰度的方法,可发现新的表达序列。 展开更多
关键词 念珠菌 白色 二态性 基因表达谱 片段基因表达系列分析
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PCR技术及影响扩增大片段基因产量的因素 被引量:3
2
作者 段子渊 《草食家畜》 1997年第4期18-20,共3页
从PCR技术的原理和操作程序出发,分析与综述了影响扩增大片段目的基因的因素,提出了提高扩增大片段基因产量及特异性的可能途径。
关键词 PCR 片段基因 产量 特异性
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菌丝相白假丝酵母菌长片段基因表达系列分析文库的构建及结果分析
3
作者 周村建 邓永键 +3 位作者 郝飞 钟白玉 王鲁 李永平 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第13期1384-1387,共4页
目的构建菌丝相白假丝酵母菌长片段基因表达系列分析文库并探讨其基因表达特点。方法采用长片段基因表达系列分析技术(LongSAGE)构建菌丝相白假丝酵母菌LongSAGE文库,从文库中挑取阳性克隆测序,用SAGEs-oftware对测序结果进行分析和检索... 目的构建菌丝相白假丝酵母菌长片段基因表达系列分析文库并探讨其基因表达特点。方法采用长片段基因表达系列分析技术(LongSAGE)构建菌丝相白假丝酵母菌LongSAGE文库,从文库中挑取阳性克隆测序,用SAGEs-oftware对测序结果进行分析和检索,从而了解菌丝相白假丝酵母菌基因表达情况。结果在菌丝相白假丝酵母菌的1 000个测序文件中,共获得标签17 552个,代表单一转录本6 627种,其中单一匹配标签占20.5%,多重匹配标签占6.64%,假设蛋白标签为18.47%,新标签为53.07%。标签拷贝数超过35拷贝的36个高表达标签中有15个可能属于新的表达序列。结论用LongSAGE技术获得了菌丝相白假丝酵母菌基因表达谱及其丰度的量化信息,可以发现新的表达序列,为进一步研究提供了基础。 展开更多
关键词 白假丝酵母菌 二态性 片段基因表达系列分析
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近江牡蛎核糖体DNA片段基因序列及其分子分类研究 被引量:8
4
作者 罗巍 邹丽珍 +1 位作者 郑天凌 林荣澄 《台湾海峡》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期322-329,i0001,共9页
本文应用分子系统发育学的方法,以“白蚝”和“赤蚝”的18SrDNA、ITS1和ITS2片段序列信息为分子标记,对它们的分类地位进行了探讨.综合上述3种分子标记的分析结果,初步认为“白蚝”应属于近江牡蛎,而“赤蚝”可能不属于近江牡蛎.
关键词 分子生物学 片段基因系列 分子系统发育 近江牡蛎
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采用PCR技术从高GC含量绿脓杆菌模板中扩增长片段外毒素A全基因 被引量:5
5
作者 胡晓梅 饶贤才 +3 位作者 黄建军 金晓琳 朱军民 胡福泉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期833-834,共2页
关键词 PCR技术 高GC含量 绿脓杆菌模板 DNA 外毒素A PCR扩增 片段基因
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利用同序异尾限制性内切酶快速克隆多基因片段的新方法 被引量:10
6
作者 杜广营 朱乃硕 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第6期584-588,共5页
介绍一种可以快速进行多基因片段克隆的新方法——同序异尾限制性内切酶(isoschizomer-heterotailrestrictionendonuclease,IHRE)一步克隆法,该方法可以一步完成多达6个DNA片段的连接,具有简单快速、节省试剂、成功率高、不引入非目的... 介绍一种可以快速进行多基因片段克隆的新方法——同序异尾限制性内切酶(isoschizomer-heterotailrestrictionendonuclease,IHRE)一步克隆法,该方法可以一步完成多达6个DNA片段的连接,具有简单快速、节省试剂、成功率高、不引入非目的基因序列等很多优点.应用该方法已经成功完成对人肠激酶轻链多基因克隆、HSV多表位DNA疫苗的构建等. 展开更多
关键词 分子生物学 同序异尾限制性内切酶(IHRE) 克隆 片段基因
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变形链球菌表面蛋白多肽片段在转基因番茄中的表达 被引量:5
7
作者 郑雨燕 凌均棨 麦穗 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期180-183,共4页
目的在获得含编码变形链球菌表面蛋白唾液粘附区片段基因的转基因番茄原代种子的基础上,应用分子生物学的方法检测外源基因在转基因植株中的表达。方法用CTAB法提取子代番茄总DNA,PCR筛选含变形链球菌PAc基因唾液粘附区片段的转基因番... 目的在获得含编码变形链球菌表面蛋白唾液粘附区片段基因的转基因番茄原代种子的基础上,应用分子生物学的方法检测外源基因在转基因植株中的表达。方法用CTAB法提取子代番茄总DNA,PCR筛选含变形链球菌PAc基因唾液粘附区片段的转基因番茄子代植株;用Trizol提取番茄总RNA,RT-PCR检测外源基因的转录情况;提取番茄果实总蛋白,用Bradford法测定番茄果实总蛋白含量;通过Western blot检测外源蛋白的表达情况,并用ELISA法对外源蛋白含量进行定量测定。结果获得植物细胞染色体上整合有外源基因并发生表达的转基因番茄子代植株;Western blot和ELISA分析表明含编码变形链球菌表面蛋白唾液粘附区片段基因的转基因番茄子代植株能有效表达外源蛋白,该蛋白含量占番茄可溶性总蛋白的1.2%。结论含编码变形链球菌表面蛋白唾液粘附区片段基因的转基因番茄子代植株能有效表达外源蛋白。 展开更多
关键词 变形链球菌表面蛋白唾液粘附区片段基因 基因番茄 基因表达
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魁蚶线粒体16S rRNA和COI基因片段序列测定及其应用前景 被引量:22
8
作者 孔晓瑜 姜艳艳 +2 位作者 相建海 喻子牛 刘亚军 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2001年第12期46-48,共3页
Mitochondrial gene(16S rRNA and COI) fragments of Bloody clam Scapharca broughtonii were amplified via PCR, the PCR products were ligated into T vectors, cloned and sequenced. 823 bp and 703 bp nucleotide sequences of... Mitochondrial gene(16S rRNA and COI) fragments of Bloody clam Scapharca broughtonii were amplified via PCR, the PCR products were ligated into T vectors, cloned and sequenced. 823 bp and 703 bp nucleotide sequences of partial 16S rRNA gene and partial COI gene were obtained respectively. The contents of A, T, G and C were 24.79%,23.57%,29.16% and 22.48% in 16S rDNA; 22.05%,33.85%,23.33% and 20.77% in COI. The potential uses of these two sequences were discussed for genetic variation, differentiation and relevant research of different geographic populations in the species. 展开更多
关键词 魁蚶 16SrDNA COI 序列测定 线粒体 基因片段 蚶科贝类
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香樟延伸因子EF1a基因片段的克隆及表达分析 被引量:15
9
作者 张力维 李勇鹏 +2 位作者 姚瑶 梁优 杜丽 《中南林业科技大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期122-128,共7页
通过同源克隆的方法从香樟Cinnamomum camphora中分离到一个编码延伸因子EF1a的c DNA序列片段。根据已经在Gen Bank中登录的其它物种的EF1a基因的保守序列设计一对兼并引物,通过反转录PCR技术获得一个1 297 bp的基因片段。同源比对表明:... 通过同源克隆的方法从香樟Cinnamomum camphora中分离到一个编码延伸因子EF1a的c DNA序列片段。根据已经在Gen Bank中登录的其它物种的EF1a基因的保守序列设计一对兼并引物,通过反转录PCR技术获得一个1 297 bp的基因片段。同源比对表明:Cc EF1a与Gen Bank中注册的其它植物EF1a基因核苷酸序列的相似性均在80%以上,氨基酸序列的相似性高达96%以上。将所获得基因片段命名为Cc EF1a并提交Gen Bank,登录号为KM086740。实时定量PCR结果显示,Cc EF1a在低温胁迫下的叶片中表达量稳定,可以在实时定量PCR分析中作为内参基因。 展开更多
关键词 香樟 延伸因子 EF1a基因片段 克隆 表达分析
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家蚕、野桑蚕线粒体Cyt b基因片段序列分析及分子进化研究 被引量:17
10
作者 李爱玲 徐安英 +3 位作者 沈兴家 唐顺明 张志芳 潘沈元 《蚕业科学》 CAS CSCD 2004年第1期80-84,共5页
以家蚕中系一化地理品种延吉、印度多化品种迈索尔、欧系一化品种法 4 0 8油和中国镇江地区野桑蚕为材料 ,采用PCR技术扩增了其线粒体 (mitochondrialDNA ,mtDNA)细胞色素b(cytochromeb ,Cytb)基因 ,测定其 5′端5 91bp的核苷酸序列 ,并... 以家蚕中系一化地理品种延吉、印度多化品种迈索尔、欧系一化品种法 4 0 8油和中国镇江地区野桑蚕为材料 ,采用PCR技术扩增了其线粒体 (mitochondrialDNA ,mtDNA)细胞色素b(cytochromeb ,Cytb)基因 ,测定其 5′端5 91bp的核苷酸序列 ,并从GenBank中调取中系家蚕品种C10 8、夏芳 ,日系家蚕品种青熟 ,韩国家蚕品种Backokjam和日本野桑蚕的相应序列 ,进行同源性比较 ,发现日系家蚕品种青熟 ,印度家蚕品种迈索尔 ,欧系家蚕品种法 4 0 8油 ,韩国家蚕品种Backokjam和中系家蚕品种C10 8、延吉序列间的同源性最高 ,相互间均为 10 0 % ;日本野桑蚕与各家蚕品种序列间的同源性约 94 %~ 95 % ;中国野桑蚕与各家蚕品种序列间同源性约 98%~ 99%。分子进化树分析显示日本野桑蚕和各家蚕品种相应序列的分歧时间远远早于中国野桑蚕与各家蚕品种序列的分歧时间 ,这是在分子水平上证实家蚕起源于中国野桑蚕的证据之一。 展开更多
关键词 家蚕 野桑蚕 线粒体 Cytb基因片段 序列分析 分子进化 细胞色素B基因
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中华假磷虾线粒体DNA COI基因片段序列分析 被引量:7
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作者 林元烧 曹文清 +2 位作者 方旅平 刘茜茜 李少菁 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期842-846,共5页
采用苯酚-氯仿提取、异丙醇沉淀提取中华假磷虾基因组DNA;以相应引物经PCR扩增得到线粒体DNACOI片段;PCR产物采用化学法与载体(pGEM-TEasyVector)重组基因、热休克法转化重组质粒至感受态大肠杆菌(JM109)、氨苄LB培养基扩大培养;测序.... 采用苯酚-氯仿提取、异丙醇沉淀提取中华假磷虾基因组DNA;以相应引物经PCR扩增得到线粒体DNACOI片段;PCR产物采用化学法与载体(pGEM-TEasyVector)重组基因、热休克法转化重组质粒至感受态大肠杆菌(JM109)、氨苄LB培养基扩大培养;测序.结果表明,中华假磷虾线粒体COI碱基709bp,其碱基组成A、T、G、C含量分别为28 59%、35 35%、17 61%和18 45%(国际基因库索引号AY754819);与同科内其它3属10种磷虾的mtCOI基因片段核苷酸组成相似. 展开更多
关键词 基因片段 线粒体DNA 醇沉 CO 重组基因 重组质粒 热休克 磷虾 碱基 PCR产物
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弓形虫表面抗原SAG2基因片段的克隆与原核表达 被引量:7
12
作者 龙彩虹 吴少庭 +4 位作者 翁亚彪 高世同 张仁利 林敏 周爱琴 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期42-45,共4页
目的 扩增弓形虫主要表面抗原 (SAG2 )编码基因片段并进行重组表达。方法 设计合成 1对引物 ,从弓形虫基因组DNA中扩增SAG2基因序列 ,以低熔点琼脂糖回收纯化 ,并以限制性内切酶BamHⅠ和SalⅠ进行双酶切、纯化后 ,再插入表达载体 pGEX... 目的 扩增弓形虫主要表面抗原 (SAG2 )编码基因片段并进行重组表达。方法 设计合成 1对引物 ,从弓形虫基因组DNA中扩增SAG2基因序列 ,以低熔点琼脂糖回收纯化 ,并以限制性内切酶BamHⅠ和SalⅠ进行双酶切、纯化后 ,再插入表达载体 pGEX - 4T - 2 ,经PCR和双酶切筛选 ,测序验证后 ,在大肠杆菌中进行表达 ,并用SDS -PAGE和Westernblot鉴定。结果 从弓形虫核酸提取物中扩增出约 477bp的SAG2基因 ,构建成功了重组质粒 pGEX - 4T - 2 -SAG2 ;SAG2基因在大肠杆菌中得到高效表达。SDS -PAGE电泳 pGEX - 4T - 2 -SAG2的融合蛋白条带的分子量约为 42kD ,Westen -blot显示融合蛋白能被兔抗弓形虫血清识别。结论 GST融合表达载体的构建和SAG2基因片段成功表达 ,为进一步为SAG2重组疫苗及重组诊断抗原的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 弓形虫表面抗原 SAG2基因片段 克隆 原核表达 免疫印迹
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水稻黑条矮缩病毒基因组片段S10的cDNA克隆及全序列分析 被引量:8
13
作者 张恒木 陈剑平 +1 位作者 薛庆中 雷娟利 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期24-28,共5页
基于 RT- PCR策略克隆了水稻黑条矮缩病毒 (rice black- streaked dwarf virus,RBSDV)浙江分离株基因组 S10 ,并测定了它的全序列。结果表明 ,水稻黑条矮缩病毒浙江分离物 (RBSDV- Zj)基因组片段 S10全长 180 1nt(EMBL登录号为AJ2 97433... 基于 RT- PCR策略克隆了水稻黑条矮缩病毒 (rice black- streaked dwarf virus,RBSDV)浙江分离株基因组 S10 ,并测定了它的全序列。结果表明 ,水稻黑条矮缩病毒浙江分离物 (RBSDV- Zj)基因组片段 S10全长 180 1nt(EMBL登录号为AJ2 97433) ,仅含有一个大的开放阅读框 (open reading frame,ORF) ,编码一个 6 3.1k D的多肽 ,与日本的水稻黑条矮缩病毒基因组片段 S10在核苷酸和氨基酸水平上同源性分别为 93.8%和 96 .2 %;与意大利玉米粗缩病毒 (maize rough dwarfvirus,MRDV)的基因组片段 S10在核苷酸和氨基酸水平上的同源性分别为 87.7%和 92 .0 %,推测它们是同一病毒的不同地理小种。 展开更多
关键词 水稻黑条矮缩病毒 基因线片段 序列分析 CDNA克隆
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水稻黑条矮缩病毒基因组片段6编码一种非结构蛋白 被引量:11
14
作者 方守国 王朝辉 +2 位作者 韩成贵 李大伟 于嘉林 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2007年第6期5-8,共4页
水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)是引起我国水稻黑条矮缩病和玉米粗缩病的病原。引起玉米粗缩病的RBSDV湖北分离物10条基因组dsRNA全序列已被确定,其中基因组片段6(S6)全长序列为2645bp,只含有一个阅... 水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)是引起我国水稻黑条矮缩病和玉米粗缩病的病原。引起玉米粗缩病的RBSDV湖北分离物10条基因组dsRNA全序列已被确定,其中基因组片段6(S6)全长序列为2645bp,只含有一个阅码框(82—2460nt),编码一个分子量约为89.6kDa的蛋白(P6)。为进一步研究该蛋白的生物学功能,在大肠杆菌中表达了RBSDV基因组片段6编码的P6蛋白并制备了相应的抗血清。Western blotting分析显示,P6抗血清不与纯化的RBSDV粒子蛋白发生反应,而在被RBSDV感染的玉米叶片和带毒的传播介体——灰飞虱中可检测到P6。此结果表明,RBSDV—S6编码的蛋白是一种非结构蛋白。 展开更多
关键词 水稻黑条矮缩病毒 基因片段6 原核表达 非结构蛋白
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HCVNS3基因片段酵母展示文库的构建和鉴定 被引量:8
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作者 贾帅争 孙红琰 +4 位作者 刘晓达 杜芝燕 杜勇 王全立 章扬培 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期56-60,共5页
HCV NS3特异的 CD4+T细胞反应与 HCV感染的良性转归相关 .为了筛选其 CD4+T细胞表位 ,构建了 HCV NS3基因片段酵母展示文库 .首先 DNase 不完全酶切 HCV NS3基因产生长度为 1 0 0~ 30 0 bp的随机片段 ,然后在它们两端加上含限制性内切... HCV NS3特异的 CD4+T细胞反应与 HCV感染的良性转归相关 .为了筛选其 CD4+T细胞表位 ,构建了 HCV NS3基因片段酵母展示文库 .首先 DNase 不完全酶切 HCV NS3基因产生长度为 1 0 0~ 30 0 bp的随机片段 ,然后在它们两端加上含限制性内切酶 Bam H 作用位点的接头 ,再以接头序列作引物进行 PCR扩增 .最后扩增产物用 Bam H 酶切后与 Bam H 线性化的穿梭载体 p YD1连接 ,转化大肠杆菌 (E.coli) DH5α,共得到 2× 1 0 6个转化子 .转化菌落的 PCR扩增结果表明 ,约 50 %转化子含插入片段 .随机选择 5个插入片段测序 ,然后与 DNA序列数据库中的序列比较 .结果显示它们分别与 HCV NS3序列有 96%~ 99%的同源性 .用从转化菌落中提取的质粒转化酵母 (S.cerevisiae)菌株 EBY1 0 0 ,得到含 2× 1 0 5个插入片段的 HCV NS3基因片段酵母展示文库 .半乳糖诱导的酵母细胞通过和 FITC标记的抗体结合 ,用 FACS可以在 2 0 %的细胞表面检测到融合蛋白的表达 . 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 非结构蛋白3 酵母展示 基因片段随机文库
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高羊茅CBF转录激活因子基因片段的克隆 被引量:7
16
作者 吴关庭 胡张华 +3 位作者 郎春秀 陈笑芸 陈锦清 夏英武 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期353-356,共4页
根据拟南芥CBF基因序列的保守区设计 1对特异引物 ,采用PCR方法从高羊茅基因组中扩增出 1个DNA片段并克隆到pUCm T载体中。经序列测定和分析 ,该片段长 60 8bp ,与 3个拟南芥CBF基因的核苷酸及其推导氨基酸序列分别具有 81~ 84%和 75~... 根据拟南芥CBF基因序列的保守区设计 1对特异引物 ,采用PCR方法从高羊茅基因组中扩增出 1个DNA片段并克隆到pUCm T载体中。经序列测定和分析 ,该片段长 60 8bp ,与 3个拟南芥CBF基因的核苷酸及其推导氨基酸序列分别具有 81~ 84%和 75~ 79%的同源性 ,而且推导氨基酸序列中包含有同源性更高的AP2DNA结合域以及CBF蛋白的两段特征序列PKK RPAGRxKFxETRHP和DSAWR。这些结果表明 。 展开更多
关键词 转录激活因子 基因片段 克隆 UC 扩增 蛋白 AP 高羊茅 特异引物 同源性
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浙江红肉柚类胡萝卜素合成酶基因片段的SNP分析 被引量:4
17
作者 林绍生 刘冬峰 +3 位作者 陈巍 郭秀珠 徐文荣 黄品湖 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1052-1057,共6页
【目的】对浙江红肉柚类资源进行遗传多样性分析,为其搜集保护和合理利用提供理论依据。【方法】采用RTPCR技术从11份浙江红肉柚类资源中克隆6个类胡萝卜素合成主链上的关键酶基因片段,分析所得基因片段中的SNP位点,对浙江红肉柚类资源... 【目的】对浙江红肉柚类资源进行遗传多样性分析,为其搜集保护和合理利用提供理论依据。【方法】采用RTPCR技术从11份浙江红肉柚类资源中克隆6个类胡萝卜素合成主链上的关键酶基因片段,分析所得基因片段中的SNP位点,对浙江红肉柚类资源的遗传多样性进行精确研究。【结果】在11份供试材料中克隆到的八氢番茄红素合成酶(PSY)、八氢番茄红素脱氢酶(PDS)、ζ-胡萝卜素脱氢酶(ZDS)、番茄红素β环化酶(LBCY)、番茄红素ε环化酶(LECY)、β-胡萝卜素羟化酶(BCH)的基因片段长度分别为348、521、426、429、403、459 bp,其中PSY、ZDS、LBCY、LECY、BCH的基因序列在供试材料中分别有2、12、2、1、1个单核苷酸位点发生变异,多态性频率分别为1 SNP/174 bp、1 SNP/43.3 bp、1 SNP/213 bp、1 SNP/403 bp和1 SNP/459 bp,而PDS基因序列在11份供试材料中高度保守,无核苷酸位点变异。利用Mega软件NJ聚类法对6个基因片段的核苷酸序列进行遗传多样性分析显示,11个样品聚为3大类群。‘官南红柚’‘文成红心柚’‘处红柚’‘木兰柚’亲缘关系较近,归于第一类;‘古磉柚’‘永嘉红心柚’‘青田红柚’归于第二类;‘红肉蜜柚’‘麻步文旦’‘四季柚’和‘红心四季柚’归于第三类。【结论】浙江红肉柚类资源果肉中类胡萝卜素合成主链上的关键酶基因在编码区除PDS外均存在SNP变异,其中ZDS的单核苷酸多态性频率较高,PSY、LBCY、LECY和BCH 4个基因片段的SNP变异位点较少,说明类胡萝卜素生物合成基因在柚品种间总体较为保守,但这些变异可能是导致果肉红色深浅程度的变因。根据6个基因片段核苷酸序列的遗传多样性分析,‘官南红柚’、‘文成红心柚’、‘处红柚’和‘木兰柚’,‘古磉柚’‘永嘉红心柚’和‘青田红柚’,‘红肉蜜柚’‘麻步文旦’‘四季柚’和‘红心四季柚’,分别归于亲缘关系较近的同一类群。 展开更多
关键词 红肉 类胡萝卜素 基因片段 SNP分析
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犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因片段的克隆和表达 被引量:4
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作者 杨敬 范薇 +4 位作者 隋丽华 李俊梅 刘永梅 李文龙 陈振文 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2002年第3期165-168,共4页
目的 构建pMal N重组表达载体 ,转化E .coliDH5α ,诱导表达犬瘟热病毒 (CDV)重组核衣壳 (N)蛋白。方法 采用RT PCR技术 ,从CDVRNA中扩增编码N蛋白的基因片段 ,通过连接反应 ,构建重组克隆载体和重组表达载体 ,转化感受态。E .coliDH... 目的 构建pMal N重组表达载体 ,转化E .coliDH5α ,诱导表达犬瘟热病毒 (CDV)重组核衣壳 (N)蛋白。方法 采用RT PCR技术 ,从CDVRNA中扩增编码N蛋白的基因片段 ,通过连接反应 ,构建重组克隆载体和重组表达载体 ,转化感受态。E .coliDH5α细胞。通过IPTG诱导表达CDV重组N蛋白。结果 扩增出约 1 7kbCDV全长的主要结构蛋白N蛋白基因 ,通过PCR获得 5 36bpN蛋白基因片段。将N蛋白基因片段克隆入原核表达载体pMal C2 ,表达产物麦芽糖结合蛋白 (MAP)与N蛋白的融合蛋白的相对分子质量约 6 0× 10 3,与预期大小一致。结论 构建的pMal N重组载体所表达的CDVN蛋白为进一步研究CDV的特异。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 核衣壳蛋白 基因片段 克隆 表达
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利用高效农杆菌遗传转化系统将ACP反义基因片段导入油菜 被引量:8
19
作者 张承妹 钱炳俊 +4 位作者 许斌贝 黄亚红 潘爱虎 梁婉琪 张大兵 《上海农业学报》 CSCD 2003年第2期5-8,共4页
通过对已有的油菜农杆菌遗传转化体系的改进 ,建立了一种利用农杆菌感染油菜子叶柄的高效遗传转化方法 ,经过农杆菌感染的子叶柄在含有 6 BA 2 .0mg/L ,IBA 0 .15mg/L ,AgNO33 .5mg/L的MS培养基上由卡那霉素抗性愈伤组织分化出抗性幼苗... 通过对已有的油菜农杆菌遗传转化体系的改进 ,建立了一种利用农杆菌感染油菜子叶柄的高效遗传转化方法 ,经过农杆菌感染的子叶柄在含有 6 BA 2 .0mg/L ,IBA 0 .15mg/L ,AgNO33 .5mg/L的MS培养基上由卡那霉素抗性愈伤组织分化出抗性幼苗的频率达到 12 .2 8%。利用已经构建的含有油菜Napin启动子加上反义ACP脱饱和酶第一外显子、内含子的基因片段的植物双元表达载体 pNACP ,将该反义 ACP基因片段转入油菜“沪油 15” ;PCR和GUS染色结果表明抗性植株中有 60 %的植株含有导入的目的基因。 展开更多
关键词 高效农杆菌 遗传转化系统 ACP反义基因 基因片段 基因导入 油菜
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猪肺炎支原体P216基因片段的表达及黏附活性研究 被引量:4
20
作者 杜海霞 刘茂军 +4 位作者 冯志新 熊祺琰 白方方 王海燕 邵国青 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1324-1329,共6页
本研究旨在研究猪肺炎支原体P216蛋白的黏附活性并初步建立猪肺炎支原体蛋白黏附模型。根据软件分析和文献报道从P216全基因中选取亲水性、抗原性、黏附性较好的目的片段,利用PCR从Mhp NJ株扩增P216基因片段,克隆到表达载体pET-32a(+)中... 本研究旨在研究猪肺炎支原体P216蛋白的黏附活性并初步建立猪肺炎支原体蛋白黏附模型。根据软件分析和文献报道从P216全基因中选取亲水性、抗原性、黏附性较好的目的片段,利用PCR从Mhp NJ株扩增P216基因片段,克隆到表达载体pET-32a(+)中,获得重组质粒pET-32a(+)/P216,经IPTG诱导获得重组蛋白,通过Western blot和间接免疫荧光试验检测重组蛋白的免疫原性及黏附活性。结果表明,PCR扩增的目的基因大小为l 636bp;SDS-PAGE检测重组蛋白相对分子质量为80.1ku;Western blot检测表明重组蛋白能与Mhp阳性血清发生特异性反应;间接免疫荧光试验表明该蛋白对猪肺炎支原体黏附SJPL细胞产生占位抑制作用。结果提示,P216蛋白具有良好的黏附活性,能黏附SJPL细胞,从而为猪肺炎支原体其他黏附因子的研究奠定基础。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 P216基因片段 黏附活性
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