烟草脆裂病毒甜椒环斑花叶分离物（TRV－PRSM）的鉴定 被引量：3

1

作者 田文会 张书萍 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第4期32-35,T001,共5页

从邯郸市甜椒田间采集呈环斑花叶或黄斑花叶症状材料编号为８２—６—３５（２）．经生物学、血清、电镜下的形态观察证实８２—６—３５（２）为烟草脆裂病毒（Ｔｏｂａｃｃｏｒａｔｔｌｅｖｉｒｕｓ）的一个分离物，称之为ＴＲＶ—Ｐ... 从邯郸市甜椒田间采集呈环斑花叶或黄斑花叶症状材料编号为８２—６—３５（２）．经生物学、血清、电镜下的形态观察证实８２—６—３５（２）为烟草脆裂病毒（Ｔｏｂａｃｃｏｒａｔｔｌｅｖｉｒｕｓ）的一个分离物，称之为ＴＲＶ—ＰＲＳＭ．该病毒以汁液接种传染，感染５科２２种植物，引起局部坏死斑、褪绿斑、花叶、系统坏死、黄脉、黄化等。病毒粒体呈直杆状，有２种粒体，长粒体１９０～２１０ｎｍ×２５ｕｍ．短粒体４０～８０ｎｍ×２０～２５ｎｍ．长短粒体比１：２、ＴＲＶ－ＰＲＳＭ分离物同ＴＲＶ标准抗血清形成特异的沉淀线。 展开更多

关键词 甜椒 环斑花叶 黄斑花叶 烟草脆裂病毒

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适于烟草脆裂病毒诱导的本氏烟基因沉默分析的对照载体构建(英文) 被引量：6

2

作者 程维舜 徐秋芳 +2 位作者 黎飞 徐幼平 蔡新忠 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期10-20,共11页

对烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)诱导的基因沉默分析体系中目前最常用的对照载体——空pYL156载体(pYL156∷00)对沉默处理后番茄和本氏烟(Nicotiana benthamiana)植株的病毒症状和生长影响进行分析.结果表明:pYL156∷00沉默... 对烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)诱导的基因沉默分析体系中目前最常用的对照载体——空pYL156载体(pYL156∷00)对沉默处理后番茄和本氏烟(Nicotiana benthamiana)植株的病毒症状和生长影响进行分析.结果表明:pYL156∷00沉默处理后的番茄和本氏烟植株均表现出严重的系统性病毒症状,生长受到显著抑制,因此,pYL156∷00并不是一个用于TRV诱导的番茄和本氏烟基因沉默分析的好的对照载体;为获得更好的对照载体,试验构建了2个新的对照载体pYL156∷NIRi和pYL156∷eGFP,它们分别通过在pYL156∷00载体多克隆位点插入253bp菜豆亚硝酸还原酶基因内含子序列和400bp eGFP基因片段而获得,对这2个对照载体对沉默处理后本氏烟植株的病毒症状和生长情况的影响与pYL156∷00进行比较分析.结果表明:pYL156∷00沉默处理后的植株表现出较严重的系统性病毒症状,生长受到显著抑制,其中26.7%植株死亡;pYL156∷NIRi沉默处理后的植株也表现出明显的病毒症状以及生长受抑制现象,但与pYL156∷00相比,所受影响较小,只有13.3%植株死亡;而pYL156∷eGFP沉默处理后的植株不表现明显的病毒症状,植株生长也不受显著影响;病毒积累量检测结果显示,3个对照载体沉默处理的植株病毒症状和生长受抑制情况与植株体内TRV病毒的积累水平密切相关.这些结果表明,新构建的pYL156∷eGFP可以作为一个优越的对照载体应用于TRV诱导的基因沉默分析. 展开更多

关键词 烟草脆裂病毒 基因沉默 对照载体 pYL156∷eGFP pYL156∷NIRi

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侵染辣（甜）椒的烟草脆裂病毒及蚕豆萎蔫病毒的鉴定 被引量：2

3

作者 王述彬 赵华崙 +3 位作者 丁犁平 孙洁波 钱芝龙 刘金兵 《江苏农业学报》 CSCD 1994年第3期62-64,共3页

侵染辣（甜）椒的烟草脆裂病毒及蚕豆萎蔫病毒的鉴定王述彬，赵华，丁犁平，孙洁波，钱芝龙，刘金兵关键词：青椒；烟草脆裂病毒；蚕豆萎蔫病毒；鉴定青椒病毒病是青椒上的最重要病害。自１９２５年Ｏｏｌｉｔｔｅ证实黄瓜花叶病毒（Ｃ... 侵染辣（甜）椒的烟草脆裂病毒及蚕豆萎蔫病毒的鉴定王述彬，赵华，丁犁平，孙洁波，钱芝龙，刘金兵关键词：青椒；烟草脆裂病毒；蚕豆萎蔫病毒；鉴定青椒病毒病是青椒上的最重要病害。自１９２５年Ｏｏｌｉｔｔｅ证实黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）侵染辣椒以来，迄今，世界各国... 展开更多

关键词 辣椒 烟草脆裂病毒 蚕豆萎蔫病毒

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水仙上分离出的烟草脆裂病毒的鉴定 被引量：4

4

作者 郑祥洋 林奇英 谢联辉 《福建农学院学报》 CSCD 1990年第1期58-63,共6页

从福建省平潭县的矮化畸形水仙病株中获得一个分离物 NFV-4,并从病株根围土壤分离物中得到一种毛刺线虫(Trichodorus sp.)。该线虫传毒接种在苋色藜、昆诺藜、普通烟草和豌豆上产生坏死斑;在蔓陀罗、豇豆、牵牛上表现为系统症状。病叶... 从福建省平潭县的矮化畸形水仙病株中获得一个分离物 NFV-4,并从病株根围土壤分离物中得到一种毛刺线虫(Trichodorus sp.)。该线虫传毒接种在苋色藜、昆诺藜、普通烟草和豌豆上产生坏死斑;在蔓陀罗、豇豆、牵牛上表现为系统症状。病叶榨出液采用 ELISA 测定,与荷兰水仙上的烟草脆裂病毒(TRV)标准抗血清呈阳性反应。电镜下病原为78×24nm 和195×24nm 2种竖杆状空心粒体。据此认为该分离物属于 TRV。本文还就 TRV 的株系问题及其所致的水仙病害进行了讨论。 展开更多

关键词 水仙 烟草脆裂病毒 鉴定

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基于烟草脆裂病毒构建同时表达2种外源蛋白的载体及其应用

5

作者 郭歌 常发光 +3 位作者 赖家良 张先文 杜志游 廖乾生 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2022年第7期1381-1390,共10页

目的构建在整个寄主植物中能同时表达两个非融合蛋白的病毒载体。方法以烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus,TRV)基因组RNA2的农杆菌侵染性克隆pYL156为材料,缺失TRV RNA2的2b基因5’端279 bp并将其起始密码子ATG改变为AGG、同时引入豌... 目的构建在整个寄主植物中能同时表达两个非融合蛋白的病毒载体。方法以烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus,TRV)基因组RNA2的农杆菌侵染性克隆pYL156为材料,缺失TRV RNA2的2b基因5’端279 bp并将其起始密码子ATG改变为AGG、同时引入豌豆早枯病毒(pea early-browning virus,PEBV)外壳蛋白(coat protein,cp)基因启动子,获得pTRV2e2载体;在pTRV2e2载体的2b和PEBV的cp启动子下游插入不同的外源基因,测定病毒TRVe2表达外源蛋白的能力、携带外源基因后重组病毒的稳定性以及分析蛋白质的生物学功能。结果病毒TRVe2能快速同时表达2个非融合的外源蛋白,且至少能表达70 ku外源蛋白,且该病毒携带~2.0 kb外源基因能稳定存活于寄主植物中;病毒TRVe2可用于分析蛋白质的生物学功能以及2个蛋白质间的相互作用。结论本文构建的重组病毒TRVe2为快速有效地表达2个外源蛋白以及分析2个蛋白质间的相互作用提供技术工具。 展开更多

关键词 烟草脆裂病毒 基因组RNA2 双元表达载体 蛋白质功能分析 本氏烟

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第十届中国花博会中烟草脆裂病毒生物学特性及检测监控技术应用 被引量：2

6

作者 田沂民 朱雅君 +3 位作者 印丽萍 陈仲兵 滕凯 于翠 《园林》 2021年第7期44-48,共5页

第十届中国花博会于2021年5月21日7月2日在上海崇明岛举办。其中从国内外大规模输入新品种植物种球、种苗、种子、种植介质及木质包装品。这些植物及其相关产品很可能会携带大量外来生物,使得崇明岛的生态安全遭受重大威胁。病毒是迄今... 第十届中国花博会于2021年5月21日7月2日在上海崇明岛举办。其中从国内外大规模输入新品种植物种球、种苗、种子、种植介质及木质包装品。这些植物及其相关产品很可能会携带大量外来生物,使得崇明岛的生态安全遭受重大威胁。病毒是迄今为止人们在超微世界里所认知的最小生物之一,其随植物传播扩散更为隐秘,这严峻考验着防控能力。其中烟草脆裂病毒是一种能侵染多种花卉植物的植物病毒,通过寄主植物繁殖材料(种球、砧木、芽条等)的贸易活动进行远距离病毒传播,或借助带毒介体线虫进行短距离扩散,为阿根廷、巴西、加拿大、墨西哥、土耳其等国家的检疫性有害生物,在我国局部地区有发生。本次花博会大面积布置的百合、芍药、玉簪等都是其主要寄主,一旦传入可引起严重生态影响和经济损失。研究从烟草脆裂病毒的寄主范围、危害症状、传播扩散途径等生物学特性及经济影响、检测监控技术应用等方面进行阐述,为防止其再次入侵和进一步传播扩散提供参考,为花博会生态安全提供技术保障。 展开更多

关键词 第十届中国花博会 烟草脆裂病毒 生物学特性 检测监控技术

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病毒诱导烟草的基因沉默 被引量：6

7

作者 傅达奇 朱本忠 +3 位作者 赵晓丹 朱宏亮 谢远红 罗云波 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期1517-1520,共4页

病毒诱导基因沉默是利用RNA介导病毒防卫机制的一项技术.构建含有目的基因片段的人工改造病毒载体,通过农杆菌侵染导致植物内源目的基因沉默.为建立病毒诱导基因沉默体系,选用烟草脆裂病毒(TRV)和烟草为实验材料.构建了八氢番茄红素去... 病毒诱导基因沉默是利用RNA介导病毒防卫机制的一项技术.构建含有目的基因片段的人工改造病毒载体,通过农杆菌侵染导致植物内源目的基因沉默.为建立病毒诱导基因沉默体系,选用烟草脆裂病毒(TRV)和烟草为实验材料.构建了八氢番茄红素去饱和酶基因(PDS)的基因沉默病毒载体,病毒载体侵染结果显示目的基因PDS沉默导致烟草幼苗出现光漂白现象.采用RT-PCR的方法检测目的基因PDS的沉默效果,结果显示PDS基因mRNA被显著降解.该体系的建立有利于将来对植物基因进行高通量功能分析. 展开更多

关键词 烟草脆裂病毒 基因沉默 烟草 LePDS

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TRV病毒介导的基因沉默体系在新疆陆地棉和亚洲棉中的建立 被引量：3

8

作者 刘慧 于秀立 黄先忠 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2016年第5期485-492,共8页

为研究烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)介导的基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)技术应用的广谱性,以陆地棉(Gossypium hirsutum)CLA1为标记基因,通过构建基因沉默载体,在新陆早33和亚洲棉(Gossypium arboreum)建立... 为研究烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)介导的基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)技术应用的广谱性,以陆地棉(Gossypium hirsutum)CLA1为标记基因,通过构建基因沉默载体,在新陆早33和亚洲棉(Gossypium arboreum)建立了TRV-VIGS体系。半定量PCR分析表明,与对照相比,TRV侵染的新陆早33和亚洲棉中CLA1基因的表达均被有效抑制,真叶表现出明显的白化症状。同时在45份新陆中系列棉花材料中重复该体系,并且通过控制培养温度来检验温度对VIGS的影响,结果表明,当昼/夜温度分别为23℃/21℃和32℃/28℃时,不同品种的新陆中系列棉花均可以维持不同程度的白化表型。证明,TRV介导的VIGS可以用于室内研究新陆中系列棉花和亚洲棉基因功能。 展开更多

关键词 GOSSYPIUM arboreum GOSSYPIUM hirsutum 基因沉默 烟草脆裂病毒 trv-VIGS CLA1

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病毒诱导的基因沉默防控烟草马铃薯Y病毒病研究 被引量：9

9

作者 刘天波 蔡海林 +7 位作者 滕凯 曾维爱 毛辉 魏润洁 周志成 周向平 戴良英 唐前君 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第5期82-89,共8页

【背景】病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)是植物抗病毒侵染的一种自然机制。【方法】以马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)脉坏死株系(PVYN)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因为靶向序列,构建烟草脆裂病毒(Tobacco ... 【背景】病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)是植物抗病毒侵染的一种自然机制。【方法】以马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)脉坏死株系(PVYN)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因为靶向序列,构建烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)介导的基因沉默表达载体pTRV2-CP,转化农杆菌GV3101后,与pTRV1-GV3101混合成TRV::CP(OD6000.4~0.6)喷施处理剪叶后的烟苗,测定其侵染效率。人工接种PVY于对照及TRV::CP处理的烟苗,RT-qPCR检测、表型观察和小区试验评价TRV介导的VIGS体系对PVY侵染的沉默效果。【结果】①与TRV::00相比,接种PVY 35 d时,TRV::CP处理的烟株中PVY累积量减少了72.8%;②VIGS表达载体45 d内能有效表达;③温室盆栽和田间小区试验TRV::CP处理对PVY防治效果分别达到85.12%和73.08%。【结论】研究建立的VIGS体系能够沉默PVY CP基因的表达,有效防治烟草马铃薯Y病毒病,为PVY的防治提供了新的方法。 展开更多

关键词 病毒诱导的基因沉默 马铃薯Y病毒病 烟草脆裂病毒 防治效果

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辣椒上TRV介导的番茄斑萎病毒N基因沉默体系构建及鉴定 被引量：3

10

作者 李慧芳 桂敏 +3 位作者 张萍萍 张美玲 李永忠 刘雅婷 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期409-416,共8页

【目的】研究番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt orthotospovirus,TSWV)核衣壳蛋白基因(N)对辣椒抗病性的影响。【方法】以易感TSWV的辣椒湘研11为研究对象,采用同源序列克隆获得辣椒CaPDS基因和TSWV N基因;利用烟草脆裂病毒(Tobacco ra... 【目的】研究番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt orthotospovirus,TSWV)核衣壳蛋白基因(N)对辣椒抗病性的影响。【方法】以易感TSWV的辣椒湘研11为研究对象,采用同源序列克隆获得辣椒CaPDS基因和TSWV N基因;利用烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)和病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术构建辣椒CaPDS基因沉默载体(pTRV2-CaPDS)和TSWV N基因沉默载体(pTRV2-N),农杆菌GV3101注射接种辣椒,通过qRT-PCR检测重组载体沉默效率。【结果】湘研11接种含pTRV2-CaPDS载体菌液3周后,新叶出现白化现象,说明辣椒上的pTRV2-CaPDS沉默载体构建成功。qRT-PCR结果表明:pTRV2-N载体可高效沉默N基因,其表达量仅为6.79%±2.56%,说明沉默N基因后,湘研11不易感染TSWV。【结论】本研究成功构建了pTRV2-N沉默载体,沉默TSWV的N基因后辣椒对入侵的TSWV产生一定的抗性。 展开更多

关键词 番茄斑萎病毒 病毒诱导的基因沉默 实时荧光定量PCR 烟草脆裂病毒 核衣壳蛋白基因

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TRV病毒诱导大豆基因沉默体系优化及应用 被引量：8

11

作者 李文辰 刘鑫 +4 位作者 康越 李伟 齐泽铮 于璐 王芳 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期143-150,共8页

病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术已广泛用于植物基因功能研究,以烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus,TRV)为载体的沉默体系介导大豆基因沉默效率有待明确,采用无缝克隆技术构建TRV-VIGS沉默体系,探索不同接... 病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术已广泛用于植物基因功能研究,以烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus,TRV)为载体的沉默体系介导大豆基因沉默效率有待明确,采用无缝克隆技术构建TRV-VIGS沉默体系,探索不同接种方法对大豆靶基因在不同组织间的沉默效率,为大豆基因功能研究提供依据。以八氢番茄红素去饱和酶(phytoene desaturase,GmPDS)及泛素连接酶(GmATL3)基因为靶基因,将含有pTRV1和重组载体菌液采用注射、灌根(agroinoculation)、注射与灌根相结合3种方法分别接种大豆中黄13,接种28 d观察沉默表型现象,并使用RT-qPCR技术检测根部与叶部基因相对表达量,明确不同方法沉默效果。注射接种的大豆叶边缘及叶内出现黄化褪绿,灌根接种与注射加灌根接种的叶片表面出现褪绿斑点及褶皱褪绿表型。RT-qPCR结果表明,3种接种方法对沉默GmPDS效果接近100%;注射接种对GmATL3的沉默效率在叶部为80%-95%,根部为40%-60%;灌根与注射加灌根接种,根部沉默效率为70%-90%,叶部沉默效率为15%-50%。不同接种方法产生不同程度沉默表型,且对不同内源基因沉默效率不同。接种方法对不同组织沉默效率存在差异,注射方法对叶片沉默效率最高,注射加灌根结合的方法对根部沉默效率最高。 展开更多

关键词 大豆 病毒诱导的基因沉默 烟草脆裂病毒

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病毒诱导番茄的基因沉默 被引量：11

12

作者 马红珍 裴冬丽 +3 位作者 耿慧霞 王来 王文静 李成伟 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1531-1537,共7页

该实验通过RT-PCR获得了番茄八氢番茄红素脱氢酶(Phytoene desaturase,PDS)基因的部分序列,双酶切PDS片段和烟草脆裂病毒载体(pTV00),构建重组载体pTV00-PDS,经农杆菌GV3101介导侵染番茄叶片并观察植株表型变化。结果显示,被侵染的番茄... 该实验通过RT-PCR获得了番茄八氢番茄红素脱氢酶(Phytoene desaturase,PDS)基因的部分序列,双酶切PDS片段和烟草脆裂病毒载体(pTV00),构建重组载体pTV00-PDS,经农杆菌GV3101介导侵染番茄叶片并观察植株表型变化。结果显示,被侵染的番茄表现出明显的光漂白现象。半定量RT-PCR检测表明,PDS的mRNA被显著降解。该沉默体系的建立为下一步大规模验证番茄基因功能奠定了基础。 展开更多

关键词 番茄 八氢番茄红素脱氢酶 病毒诱导基因沉默 烟草脆裂病毒

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蔊菜病毒诱导基因沉默体系构建 被引量：6

13

作者 张怡 徐克东 +5 位作者 杨松 李豪 曹鹏 魏森 韦丹丹 李成伟 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2013年第6期65-70,共6页

构建蔊菜的病毒诱导基因沉默(Virus induced gene silencing,VIGS)体系,旨在建立蔊菜的快速基因功能验证的方法。通过RT-PCR扩增出棉花、大豆、拟南芥的1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶(Cloroplasto alterados,CLA)基因片段,并将其分别构建... 构建蔊菜的病毒诱导基因沉默(Virus induced gene silencing,VIGS)体系,旨在建立蔊菜的快速基因功能验证的方法。通过RT-PCR扩增出棉花、大豆、拟南芥的1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶(Cloroplasto alterados,CLA)基因片段,并将其分别构建到烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)介导的VIGS载体,通过农杆菌GV3101侵染蔊菜并观察蔊菜的表型变化。结果显示,3种不同的CLA基因所侵染的蔊菜均出现不同程度的白化现象,半定量RT-PCR检测显示CLA的mRNA被显著降解,表明成功构建了蔊菜的VIGS体系。 展开更多

关键词 病毒诱导的基因沉默 蔊菜 CLA基因 烟草脆裂病毒

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病毒诱导的基因沉默技术实验教学设计和实践 被引量：9

14

作者 侯巧明 张立 +1 位作者 贺新强 丁琦 《实验技术与管理》 CAS 北大核心 2015年第9期191-193,共3页

病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术是近年发展起来研究植物基因功能的新方法。利用含有目的基因片段的病毒载体侵染植物,导致植物体内相应的功能基因表达受到抑制成为沉默基因,相应功能缺失,从而推测目的基因的功能。该文克隆了烟草番茄红... 病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术是近年发展起来研究植物基因功能的新方法。利用含有目的基因片段的病毒载体侵染植物,导致植物体内相应的功能基因表达受到抑制成为沉默基因,相应功能缺失,从而推测目的基因的功能。该文克隆了烟草番茄红素脱氢酶(PDS)基因片段,插入到烟草脆裂病毒载体(TRV)中,构建了pTRV-PDS的VIGS载体,转入农杆菌侵染烟草后成功沉默了PDS基因,使烟草叶片出现白化表型,成功建立了烟草VIGS体系。将VIGS这个当前生物学研究热点引入教学实验中,改革更新实验教学内容,有益于学生扩展科研思维。 展开更多

关键词 VIGS RNAI 烟草脆裂病毒 番茄红素脱氢酶

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同步检测为害非洲菊3种病毒的多重RT-PCR方法研究 被引量：3

15

作者 张丽莉 杨翠云 +2 位作者 于翠 袁文辉 马青 《上海农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第2期20-24,共5页

以接种番茄斑萎病毒(TSWV)的烟草和侵染烟草脆裂病毒(TRV)及烟草花叶病毒(TMV)的非洲菊为试验材料,建立了同步检测非洲菊上述3种病毒的多重RT-PCR方法。结果表明,建立的多重RT-PCR方法可一次性扩增出3种病毒的DNA条带,可以从RNA含量1 m... 以接种番茄斑萎病毒(TSWV)的烟草和侵染烟草脆裂病毒(TRV)及烟草花叶病毒(TMV)的非洲菊为试验材料,建立了同步检测非洲菊上述3种病毒的多重RT-PCR方法。结果表明,建立的多重RT-PCR方法可一次性扩增出3种病毒的DNA条带,可以从RNA含量1 mg的带毒叶片中检测到混合病毒;同时对单一病毒RT-PCR的灵敏度检测表明:最低可以从RNA含量分别为1 mg、10μg和100ng的带毒材料中检测到TSWV、TRV和TMV。 展开更多

关键词 番茄斑萎病毒 烟草脆裂病毒 烟草花叶病毒 多重RT—PCR 非洲菊

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TRV介导的小报春基因沉默技术体系的建立 被引量：2

16

作者 付偲僮 司未佳 +4 位作者 刘颖 程堂仁 王佳 张启翔 潘会堂 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期295-302,共8页

小报春是报春花科报春花属的二年生草本花卉,具有较高的观赏价值和园林应用前景,是研究花柱二型的理想材料,建立快速高效的报春花属基因功能验证技术,是小报春基因功能研究中的关键问题。以小报春为材料,以八氢番茄红素脱氢酶(PDS)基因... 小报春是报春花科报春花属的二年生草本花卉,具有较高的观赏价值和园林应用前景,是研究花柱二型的理想材料,建立快速高效的报春花属基因功能验证技术,是小报春基因功能研究中的关键问题。以小报春为材料,以八氢番茄红素脱氢酶(PDS)基因作为标记基因,探索TRV病毒载体在小报春中的最佳侵染对象、侵染液配方、菌液浓度和侵染方式,建立适用于小报春的VIGS体系。结果表明,用含有200μmol/L乙酰丁香酮(AS)、10 mmol/L MgCl_(2)和10 mmol/L乙磺酸缓冲液(MES)的浸染液,将含有pTRV1和pTRV2-PfPDS的菌液OD_(600)值均调至1.0等体积混合后通过叶背注射方式侵染小报春,以TRV病毒载体上的引物对处理后的植株叶片进行PCR,在出现表型变化的植株和空载组中均检测到TRV1和TRV2的病毒载体,白化植株的PfPDS表达量显著低于空载组和对照组。建立的VIGS体系侵染效率达60%,沉默表型可持续12个月之久,并能在小报春植株的各部位(从叶片到萼片)均起到沉默作用。建立了小报春基因沉默体系,由于沉默效果持续时间长,所有基因都可以利用这一方法进行功能验证。 展开更多

关键词 小报春 烟草脆裂病毒 基因沉默

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利用病毒诱导的基因沉默技术沉默TSWV的NSm基因 被引量：2

17

作者 张萍萍 桂敏 +3 位作者 李慧芳 张美玲 李永忠 刘雅婷 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期582-589,共8页

【目的】番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt orthotospovirus,TSWV)在全球范围内严重危害农业生产,病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术主要用于植物内源基因的功能研究,而其沉默植物外源病毒基因用于病毒防控... 【目的】番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt orthotospovirus,TSWV)在全球范围内严重危害农业生产,病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术主要用于植物内源基因的功能研究,而其沉默植物外源病毒基因用于病毒防控鲜有报道。本研究利用VIGS技术在辣椒中沉默植物外源病毒TSWV的NSm基因,为辣椒产业防控TSWV病害奠定技术基础。【方法】以辣椒(Capsicum annuum L.)为研究材料,首先构建辣椒PDS基因的沉默载体pTRV2-PDS以评估该沉默载体在辣椒中的有效性,再构建TSWV NSm基因的沉默载体pTRV2-NSm评估该沉默载体对TSWV NSm基因的沉默效果。【结果】构建的沉默载体pTRV2-PDS在辣椒中有效,沉默载体pTRV2-NSm可以高效沉默TSWV的NSm基因,NSm的表达量仅为对照组的4.6%,且表现出对TSWV的抗性。【结论】构建的沉默载体pTRV2-NSm可以沉默TSWV的NSm基因,并使辣椒对TSWV产生一定的抗性。 展开更多

关键词 辣椒 番茄斑萎病毒 病毒诱导的基因沉默 烟草脆裂病毒 NSm基因

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基于三角梅的病毒诱导基因沉默体系的建立与优化 被引量：2

18

作者 刘珍银 段郅臻 +2 位作者 彭婷 王童欣 王健 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期123-130,共8页

三角梅是紫茉莉科灌木,具有较高的观赏价值,是研究花色叶色调控的理想材料。建立快速高效的基因验证体系,是三角梅基因功能研究的关键。以三角梅‘金心双色’品种为材料,选用八氢番茄红素脱氢酶基因(PDS)为指示基因,探索不同接种部位和... 三角梅是紫茉莉科灌木,具有较高的观赏价值,是研究花色叶色调控的理想材料。建立快速高效的基因验证体系,是三角梅基因功能研究的关键。以三角梅‘金心双色’品种为材料,选用八氢番茄红素脱氢酶基因(PDS)为指示基因,探索不同接种部位和基因片段长度对烟草脆裂病毒(TRV)诱导三角梅叶片内源PDS mRNA沉默效果的影响,建立适用于三角梅的病毒诱导基因沉默体系(VIGS)。结果表明,摩擦注射嫩叶法相比顶端嫩茎沉默效果更明显;基因沉默片段长度在336 bp和457 bp均可诱导PDS基因沉默,后者效果更加明显。初步构建了三角梅VIGS体系,为后续基因功能研究提供了技术参考。 展开更多

关键词 三角梅 八氢番茄红素脱氢酶 烟草脆裂病毒 基因沉默

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番茄环纹斑点病毒N和NSm基因的VIGS载体构建

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作者 崔玥 赵立华 +4 位作者 陈思 文俊元 邱润霜 张仲凯 赵明富 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第1期98-104,共7页

【目的】番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot orthotospovirus,TZSV)由传毒介体蓟马以持久增殖型方式传播,且能与其他病毒复合侵染作物,对中国西南地区重要蔬菜的产量和观赏作物的品质造成严重影响,给当地农业生产带来了严重危害。TZS... 【目的】番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot orthotospovirus,TZSV)由传毒介体蓟马以持久增殖型方式传播,且能与其他病毒复合侵染作物,对中国西南地区重要蔬菜的产量和观赏作物的品质造成严重影响,给当地农业生产带来了严重危害。TZSV的N和NSm基因与病毒分类、运动和系统侵染密切相关。本研究通过构建N和NSm基因沉默载体,以期为进一步研究TZSV N和NSm基因在病毒侵染方面的功能提供材料,为抗病育种以及田间绿色防控提供一些依据。【方法】根据TZSV N和NSm基因序列设计特异性引物,利用RT-RCR技术扩增得到TZSV N和NSm基因片段,将扩增得到的目的基因连接到pEASY-Blunt-Zero载体上,含有N和NSm基因序列的pEASY-Blunt-Zero载体和pTRV-pTV00载体用Bam HI和Hind III限制性内切酶进行双酶切,并将酶切产物进行纯化回收,纯化后产物与pTRV-pTV00载体使用T4 DNA连接酶连接,获得pTRV-PTV00-N和pTRV-PTV00-NSm重组载体,将其转入根癌农杆菌GV3101中,并注射到本氏烟和栽培烟K326中,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测病毒N和NSm基因的沉默效率,间接酶联免疫吸附试验(ID-ELISA)检测N和NSm蛋白的含量。【结果】RT-qPCR分析表明,本生烟和栽培烟K326中N和NSm基因在接种TZSV后5 d沉默效率均大于90%。ID-ELISA结果显示,2个蛋白含量在不同时间内均显著下降,其中NSm蛋白含量连续9 d显著下降。【结论】TZSV N和NSm基因沉默载体构建成功,并成功试验于本氏烟和栽培烟K326。通过构建TZSV N和NSm基因沉默载体,为研究TZSV致病机理提供了材料,为田间抗TZSV育种和防控提供了理论依据。 展开更多

关键词 番茄环纹斑点病毒 病毒诱导的基因沉默 实时荧光定量PCR 烟草脆裂病毒

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辣椒CaDXS和CaPDS基因沉默的表型比较 被引量：1

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作者 张鑫 桂敏 +2 位作者 刘弟 张金峰 刘雅婷 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期125-131,共7页

【目的】沉默辣椒CaDXS和CaPDS基因,比较分析两者白化表型的差异,寻找新的辣椒沉默标记基因。【方法】利用双酶切克隆技术构建CaDXS和CaPDS基因的沉默载体;通过农杆菌介导转化侵染辣椒,观察辣椒的沉默表型;采用实时荧光定量PCR技术检测C... 【目的】沉默辣椒CaDXS和CaPDS基因,比较分析两者白化表型的差异,寻找新的辣椒沉默标记基因。【方法】利用双酶切克隆技术构建CaDXS和CaPDS基因的沉默载体;通过农杆菌介导转化侵染辣椒,观察辣椒的沉默表型;采用实时荧光定量PCR技术检测CaDXS和CaPDS基因的沉默效率。【结果】农杆菌浸润21 d后,沉默CaDXS基因的辣椒叶片出现褪绿症状,沉默CaPDS基因的辣椒叶片出现白化。农杆菌浸润30 d后,沉默CaDXS基因的辣椒叶片出现较为明显的白化;沉默CaPDS基因的辣椒叶片白化程度加剧,新叶近乎白化。与CaDXS基因相比,沉默CaPDS基因导致的辣椒白化表型更明显和高效。沉默组辣椒叶片中CaDXS和CaPDS基因的表达量均显著降低(P<0.05),沉默效率分别为86.80%和93.08%,表明辣椒CaDXS和CaPDS基因被成功沉默。【结论】CaDXS基因可以作为辣椒的沉默标记基因,但沉默CaPDS基因的辣椒白化表型出现更早且明显,因此,CaPDS基因比CaDXS基因更适合作为辣椒沉默标记基因。 展开更多

关键词 病毒诱导的基因沉默 八氢番茄红素脱氢酶 1-脱氧木酮糖-5-磷酸合酶 辣椒 标记基因 烟草脆裂病毒

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