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炎症癌相关成纤维细胞介导结直肠癌细胞耐药的机制研究 被引量：1
1
作者 蔡家洛 朱锐秋 +2 位作者 李森 曹亦军 黄坊 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1065-1072,共8页
背景与目的:结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是常见的消化系统恶性肿瘤之一,但是其产生肿瘤耐药的机制仍不清楚。肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME),尤其是其中的癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAF),在肿瘤的... 背景与目的:结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是常见的消化系统恶性肿瘤之一,但是其产生肿瘤耐药的机制仍不清楚。肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME),尤其是其中的癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAF),在肿瘤的发生、发展及耐药过程中都发挥重要作用。本研究旨在探讨炎症CAF(inflammatory CAF,iCAF)对CRC细胞耐药的影响及可能的分子机制。方法:提取来自上海中医药大学附属普陀医院(2022年8月——2022年9月)诊治的CRC患者并经手术切除的CRC组织以获得原代CAF[获得上海中医药大学附属普陀医院伦理委员会批准,编号:PTEC-A-2023-5(S)-1],按照CAF的表面标志物血小板源性生长因子受体α(platelet derived growth factor receptor alpha,PDGFRA)对原代细胞进行分选,筛选出iCAF。使用不添加血清的培养基分别对人结肠成纤维细胞(human intestinal fibroblast,HIF)和iCAF进行培养以获取HIF条件培养基(HIF-conditioned medium,HIF-CM)和iCAF条件培养基(iCAFconditioned medium,iCAF-CM)。根据处理方式将结肠癌细胞分为对照组(不处理)、实验组1(加入HIF-CM)和实验组2(加入iCAF-CM)。观察经HIF或iCAF刺激后CRC细胞的存活率变化、凋亡率、蛋白水平、mRNA水平变化及对Wnt/β-catenin信号转导通路的影响。结果:经iCAF刺激后,CRC细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)较对照组和HIF-CM组升高(P<0.05)。与对照组和HIF-CM组相比,iCAF-CM组肿瘤细胞的凋亡率明显下降,凋亡蛋白caspase-3的表达量下降,抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL和survivin表达量均上升(P<0.05)。iCAF-CM组Wnt/β-catenin信号转导通路被激活。结论:iCAF可以介导CRC细胞产生耐药,其机制与激活Wnt/β-catenin信号转导通路有关。 展开更多
关键词 结直肠癌 炎症癌相关成纤维细胞 耐药 WNT/Β-CATENIN信号转导通路
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甲状腺乳头状癌中VCAN、THBS2蛋白的表达与肿瘤相关成纤维细胞的关系
2
作者 武胤彤 方艳 +5 位作者 彭薇 汪树静 黄山 王弦 虞红珍 吴强 《临床与实验病理学杂志》 北大核心 2025年第1期60-69,共10页
目的 探讨甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma, PTC)中多功能蛋白聚糖(versican, VCAN)、血小板反应蛋白2(thrombospondin 2, THBS2)的表达及与肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts, CAFs)的关系和临床病理意义... 目的 探讨甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma, PTC)中多功能蛋白聚糖(versican, VCAN)、血小板反应蛋白2(thrombospondin 2, THBS2)的表达及与肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts, CAFs)的关系和临床病理意义。方法 采用生物信息学技术分析,从基因表达综合数据库(gene expression omnibus, GEO)及癌症基因组图谱(the cancer genome atlas, TCGA)数据库提取PTC单细胞测序数据,利用加权基因共表达网络分析识别CAFs相关基因,并对与CAFs相关的枢纽基因进行富集分析;采用免疫组化EnVision法检测130例PTC组织中VCAN、THBS2和α-SMA的表达,采用Masson染色法评估肿瘤间质纤维化程度。分析它们之间的关系,探讨其临床病理意义。结果 生物信息学分析显示VCAN、THBS2位于GEO数据库和TCGA数据库与CAFs相关性最强模块的交集核心基因中,与CAFs显著相关,富集分析显示VCAN、THBS2主要参与细胞外基质相关通路。PTC中CAFs的增生率为83.1%(108/130),VCAN、THBS2阳性率分别为96.9%(126/130)、75.4%(98/130)。PTC的间质纤维化指数中位数为32.4,四分位距为22.7~50.0。CAFs的高度增生与淋巴结转移(P<0.001)、高TNM分期(P<0.05)呈正相关,并且与PTC的组织学亚型相关。VCAN表达、THBS2表达及PTC间质纤维化程度与淋巴结转移均呈正相关(P<0.001,P<0.05,P<0.001),并且THBS2表达及PTC间质纤维化程度与PTC的组织学亚型相关。肿瘤间质α-SMA阳性细胞百分比与VCAN及THBS2的免疫反应评分(IRS)均呈正相关(r_(s)=0.713,P<0.001;r_(s)=0.646,P<0.001)。PTC中Masson染色面积百分比与肿瘤间质α-SMA阳性细胞百分比、VCAN及THBS2的IRS均呈正相关(r_(s)=0.892,P<0.001;r_(s)=0.729,P<0.001;r_(s)=0.616,P<0.001)。结论 VCAN与THBS2可作为评估PTC侵袭性与淋巴结转移的潜在标志物;VCAN、THBS2与CAFs的密切关系为进一步探究PTC的恶性生物学行为提供了依据。 展开更多
关键词 甲状腺肿瘤 甲状腺乳头状癌 肿瘤相关成纤维细胞 VCAN THBS2
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胃癌Lauren分型中癌相关成纤维细胞分泌因子的差异表达
3
作者 琚璐 任国涛 +4 位作者 郑诗祺 孙也淇 蔡磊 王瑞芬 王立峰 《临床与实验病理学杂志》 北大核心 2025年第3期324-333,共10页
目的探讨胃癌Lauren分型中弥漫型胃癌相关成纤维细胞(diffuse-type gastric cancer-associated fibroblasts,DGC-CAFs)和肠型胃癌相关成纤维细胞(intestinal-type gastric cancer-associated fibroblasts,IGC-CAFs)分泌因子的表达差异... 目的探讨胃癌Lauren分型中弥漫型胃癌相关成纤维细胞(diffuse-type gastric cancer-associated fibroblasts,DGC-CAFs)和肠型胃癌相关成纤维细胞(intestinal-type gastric cancer-associated fibroblasts,IGC-CAFs)分泌因子的表达差异。方法选取手术切除的6例胃癌新鲜标本,其中弥漫型胃癌(diffuse-type gastric cancer,DGC)和肠型胃癌(intestinal-type gastric cancer,IGC)各3例,分别提取DGC-CAFs、IGC-CAFs原代细胞以获得条件培养基,采用高效液相色谱-质谱联用法(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)检测DGC-CAFs与IGC-CAFs分泌因子的表达;根据HPLC-MS/MS结果,选择3个差异因子进行免疫组化检测,研究两者在DGC和IGC配对标本中的表达差异;收集GEO和TCGA数据库中1174个胃癌转录组数据,通过ESTIMATE获取基质细胞的分布并对DGC和IGC进行基质评分,应用Kaplan-Meier生存分析研究高基质评分和癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)比例与预后的关系,运用GO富集进行基因和生物学功能分析。结果HPLC-MS/MS分析显示,在DGC-CAFs和IGC-CAFs中均检测到的蛋白仅有10种,即SPARC、COL6A1、COL1A2、COL1A1、COL3A1、FN1、DCN、ACTG1、TIMP1和SHROOM3。在DGC-CAFs中10种蛋白表达均高于IGC-CAFs,且比值>2的蛋白为COL3A1(5.28)、COL1A2(3.98)、DCN(3.71)、TIMP1(3.40)、COL6A1(3.35)、ACTG1(3.13)、COL1A1(2.84)和SHROOM3(2.50)。3例DGC-CAFs中均检测到TUBB和BASP1,1例IGC-CAFs中检测到TUBB,3例IGC-CAFs中均未检测到BASP1。免疫表型:DCN、ACTG1和COL3A1在DGC中的表达高于IGC,与HPLC-MS/MS分析一致。生信分析显示,DGC的基质评分高于IGC,与预后差相关。分析细胞组分发现,相关基因富集在ECM、含胶原的ECM和细胞-细胞连接处,其相关分子功能和生物学过程也以该组分为基础,与HPLC-MS/MS分析一致。结论DGC-CAFs和IGC-CAFs的分泌因子在种类、含量上均存在差异,其差异多集中在ECM相关的信号通路上;基质中高CAFs含量可能通过影响ECM的基因表达和受体通路等影响胃癌患者预后。 展开更多
关键词 胃肿瘤 Lauren分型 癌相关成纤维细胞 高效液相色谱-质谱联用 分泌因子
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雷公藤多苷对甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞脂肪分化、炎症及纤维化的影响 被引量：1
4
作者 朱劲 朱姝 +2 位作者 钟宇玲 陈宏 林文劼 《眼科新进展》 北大核心 2025年第3期202-210,共9页
目的探究雷公藤多苷(TGs)对甲状腺相关眼病(TAO)眼眶成纤维细胞(OFs)脂肪分化、炎症及纤维化的影响。方法首先培养从12例TAO患者中提取的OFs并进行鉴定。采用CCK-8实验检测不同浓度TGs(0、12.5、25.0、50.0、100.0 mg·L^(-1))对OF... 目的探究雷公藤多苷(TGs)对甲状腺相关眼病(TAO)眼眶成纤维细胞(OFs)脂肪分化、炎症及纤维化的影响。方法首先培养从12例TAO患者中提取的OFs并进行鉴定。采用CCK-8实验检测不同浓度TGs(0、12.5、25.0、50.0、100.0 mg·L^(-1))对OFs活性的影响。其次,诱导OFs脂肪分化表型并分组:对照组(Control组)、脂肪分化组(DM组)、不同浓度TGs组(12.5 mg·L^(-1)TGs组、25.0 mg·L^(-1)TGs组、50.0 mg·L^(-1)TGs组);诱导OFs炎症表型并分组:Control组、白介素-1β(IL-1β)诱导组(IL-1β组)、不同浓度TGs组(分组及浓度均同上);诱导OFs纤维化表型并分组:Control组、TGF-β1诱导组(TGF-β1组)、不同浓度TGs组(分组及浓度均同上)。油红O染色检测脂肪分化表型各组OFs内脂滴;ELISA检测炎症表型各组OFs的IL-6与TNF-α表达水平,以及纤维化表型各组OFs的HA表达水平;Transwell实验观察纤维化表型各组OFs的细胞迁移率;RT-qPCR及Western blot检测脂肪分化表型OFs各组细胞内PPAR-γ、c/EBP-α、FABP-4、perilipin-1、adiponectin的mRNA及蛋白质表达水平、炎症表型OFs各组细胞内IL-6、TNF-α、COX-2、MCP-1、ICAM-1的mRNA及蛋白质表达水平、纤维化表型OFs各组细胞内Vimentin、Fibronectin、COL1A1、COL1A2、ACTA2的mRNA及蛋白质表达水平。结果细胞鉴定为OFs,12.5、25.0、50.0 mg·L^(-1)TGs干预的OFs细胞活性无明显变化,后续选择这些浓度TGs进行后续实验。在脂肪分化表型的OFs中,经TGs处理后,细胞内橙红色脂滴明显减少;与DM组相比,各TGs组细胞内PPAR-γ、c/EBP-α、FABP-4、perilipin-1、adiponectin的mRNA和蛋白表达水平均明显降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。在炎症表型的OFs中,与IL-1β组相比,各TGs组细胞培养上清液中IL-6与TNF-α表达水平均明显降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与IL-1β组相比,各TGs组细胞内IL-6、TNF-α、COX-2、MCP-1、ICAM-1的mRNA和蛋白表达水平均明显降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。在纤维化表型的OFs中,与TGF-β1组相比,各TGs组细胞迁移率均明显降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与TGF-β1组相比,各TGs组细胞上清液中HA表达水平均明显降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与TGF-β1组相比,各TGs组细胞内Vimentin、Fibronectin、COL1A1、COL1A2、ACTA2的mRNA和蛋白表达水平均明显降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论TGs能够抑制TAO-OFs脂肪分化,抑制IL-1β诱导的TAO-OFs炎症反应和TGF-β1诱导的TAO-OFs纤维化。 展开更多
关键词 甲状腺相关眼病 雷公藤多苷 眼眶成纤维细胞 脂肪分化 炎症 纤维化
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癌相关成纤维细胞与M2型巨噬细胞相互作用促进肿瘤发生发展的研究进展 被引量：1
5
作者 吴江为 张巧玲 +4 位作者 杨泽羊 张瑞 张舰 曾柱 吴介恒 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期168-173,共6页
癌相关成纤维细胞(CAF)是肿瘤微环境(TME)中主要成分之一。在TME中,肿瘤细胞与非肿瘤细胞之间或非肿瘤细胞与非肿瘤细胞之间的相互作用能促进肿瘤发生发展。CAF可与多种免疫细胞之间产生相互作用,通过抑制适应性免疫细胞功能,重塑TME中... 癌相关成纤维细胞(CAF)是肿瘤微环境(TME)中主要成分之一。在TME中,肿瘤细胞与非肿瘤细胞之间或非肿瘤细胞与非肿瘤细胞之间的相互作用能促进肿瘤发生发展。CAF可与多种免疫细胞之间产生相互作用,通过抑制适应性免疫细胞功能,重塑TME中免疫微环境促进肿瘤的发生发展。其中CAF与巨噬细胞相互作用,并诱导巨噬细胞向M2型极化在促进肿瘤发生发展中起到重要作用。 展开更多
关键词 癌相关成纤维细胞(CAF) M2型巨噬细胞 肿瘤微环境(TME) 细胞相互作用 综述
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肿瘤相关成纤维细胞上调hsa-miR-18b-5p靶向FBXL3促进前列腺癌的增殖及转移 被引量：2
6
作者 骆金光 陶怀祥 +3 位作者 闻志远 陈龙 胡昊 关翰 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1284-1296,共13页
目的探讨受肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)调控的hsa-miR-18b-5p在前列腺癌(PCa)中的表达水平及作用,并研究对其在PCa发生发展过程中的分子机制。方法利用生物信息学技术分析在PCa中高表达的miRNA,构建肿瘤相关成纤维细胞并与PCa细胞系共培养... 目的探讨受肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)调控的hsa-miR-18b-5p在前列腺癌(PCa)中的表达水平及作用,并研究对其在PCa发生发展过程中的分子机制。方法利用生物信息学技术分析在PCa中高表达的miRNA,构建肿瘤相关成纤维细胞并与PCa细胞系共培养,验证CAFs对PCa细胞增殖和迁移的影响及对hsa-miR-18b-5p的调控作用;RT-qPCR验证20例患者癌组织及癌旁正常组织、前列腺正常上皮增生细胞及PCa各细胞系中hsa-miR-18b-5p的表达水平;通过脂质体法将阴性对照及hsamiR-18b-5p抑制物分别转染入PCa细胞C4-2、LNCAP中,分为NC inhibitor组和hsa-miR-18b-5p inhibitor组;采用细胞集落形成、CCK-8实验、划痕愈合、Transwell、IC_(50)实验、流式细胞术分别检测C4-2、LNCAP细胞增殖、迁移、侵袭、耐药能力、凋亡和周期;建立PCa裸鼠移植瘤模型,定期测量移植瘤的质量和体积,Kaplan-Meier生存曲线分析裸鼠生存情况;利用靶基因预测分析网站(Targetscan、Mirtarbase、miRDB、miRDIP)预测has-miR-18b-5p的靶基因,并通过双荧光素酶报告基因分析验证hsa-miR-18b-5p与靶基因的靶向关系,RT-qPCR、Western blotting检测各组细胞靶基因的表达水平。结果生物信息学分析结果显示,在PCa中高表达的miRNA有17个,结合差异表达程度以及相关文献筛选出拟研究的基因:miR-148a、miR-17、miR-18b-5p、miR-770、miR-297-3p。CAFs与PCa细胞系共培养后hsa-miR-18b-5p的表达水平升高(P<0.01),且促进PCa细胞的增殖与迁移(P<0.01),敲除has-miR-18b-5p可抵消CAFs对PCa细胞增殖及迁移的影响,确定has-miR-18b-5p为研究基因。与正常前列腺上皮细胞或肿瘤旁组织相比,PCa细胞或肿瘤组织中hsa-miR-18b-5p的表达升高(P<0.05);敲除hsa-miR-18b-5p可抑制C4-2、LNCAP细胞的增殖、迁移、侵袭以及耐药(P<0.05);敲除hsa-miR-18b-5p可抑制裸鼠移植瘤质量和体积的增长,增加裸鼠的生存时间(P<0.05)。靶基因预测分析网站显示,FBXL3是hsa-miR-18b-5p的一个潜在作用靶点,双荧光素酶报告基因证实has-miR-18b-5p与FBXL3基因间存在结合位点,且敲除hsa-miR-18b-5p可增加C4-2、LNCAP细胞中FBXL3的蛋白表达(P<0.05)。结论CAFs上调前列腺癌细胞hsa-miR-18b-5p的表达水平,后者可能通过靶向调控FBXL3基因的表达促进PCa细胞的增殖和转移。 展开更多
关键词 hsa-miR-18b-5p 肿瘤相关成纤维细胞 FBXL3 前列腺癌 促癌
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IL-6通过活化STAT3/Notch信号促进癌相关成纤维细胞衰老及宫颈癌上皮细胞侵袭与放疗抵抗的机理研究 被引量：14
7
作者 任春霞 马锦琪 +3 位作者 吕祝武 娄雪玲 吕蓓 杨恭 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期961-967,共7页
背景与目的:肿瘤微环境中衰老的癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)介导上皮肿瘤的转移和放化疗抵抗,而CAFs分泌的炎性细胞因子IL-6可能促进宫颈癌的侵袭和放疗抵抗,但其作用机制并不清楚。该研究旨在探讨IL-6对CAF... 背景与目的:肿瘤微环境中衰老的癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)介导上皮肿瘤的转移和放化疗抵抗,而CAFs分泌的炎性细胞因子IL-6可能促进宫颈癌的侵袭和放疗抵抗,但其作用机制并不清楚。该研究旨在探讨IL-6对CAFs衰老及宫颈癌上皮细胞侵袭与放疗抵抗的作用。方法:以宫颈癌CAFs、宫颈组织正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)、宫颈癌细胞系He La、Siha和ME180为材料,采用IL-6、STAT3和Notch抑制剂处理不同细胞,用细胞染色、免疫荧光、蛋白[质]印迹法(Western blot)和流式细胞术等方法测定细胞衰老、STAT3、Notch信号、细胞侵袭能力和对放射线诱导的细胞凋亡变化。结果:CAFs条件培养基(conditioned medium,CM)或IL-6可以激活STAT3和Notch信号诱导细胞衰老或促进宫颈癌细胞的侵袭能力;CAFs与宫颈癌细胞混合培养能促进宫颈癌细胞的侵袭,但IL-6抗体、STAT3抑制剂S31-201或Notch抑制剂DAPT处理细胞则会抑制宫颈癌细胞的侵袭。IL-6/STAT3作为Notch信号的上游分子,可能主要通过自分泌或旁分泌的方式上调成纤维细胞或癌细胞中Notch信号关键配体Jagged-1而活化Notch信号,最后赋予宫颈癌细胞对放射线的抵抗作用。结论:CAFs在肿瘤微环境中可能通过IL-6/STAT3活化Notch信号诱导宫颈癌上皮细胞的侵袭和放疗抵抗,靶向STAT3/Notch信号相关分子有可能提高宫颈癌的放疗效果。 展开更多
关键词 癌相关成纤维细胞 白细胞介素6 衰老 STAT3 NOTCH 放射抵抗
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癌相关成纤维细胞通过Gro-α激活NF-кB核转位和VEGF表达促进卵巢癌的生长 被引量：12
8
作者 任春霞 徐娜 +4 位作者 宋亚琴 赵敏 陈亚萍 吕蓓 杨恭 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期321-328,共8页
背景与目的：卵巢癌相关成纤维细胞（cancer-associated fibroblasts，CAF）促进上皮肿瘤的发生，其分泌的趋化因子即生长调节致癌基因α（growth-regulated oncogene alpha，Gro-α）蛋白在肿瘤间质微环境中促进上皮卵巢癌的发生，但... 背景与目的：卵巢癌相关成纤维细胞（cancer-associated fibroblasts，CAF）促进上皮肿瘤的发生，其分泌的趋化因子即生长调节致癌基因α（growth-regulated oncogene alpha，Gro-α）蛋白在肿瘤间质微环境中促进上皮卵巢癌的发生，但其作用机制并不清楚。本研究拟测定Gro-α蛋白是否通过激活间质成纤维细胞中NF-кB核转位和VEGF表达，促进卵巢癌的生长。方法：本研究采用ELISA法测定了两株卵巢癌CAF和两株正常卵巢组织成纤维细胞（normal fibroblasts，NF）条件培养基（conditioned medium，CM）中Gro-α的表达；用CAF-CM或Gro-α分别处理NF，并以NF-кB抑制剂处理作为对照；用蛋白质印迹法（Western blot）测定样品处理前后NF-кB和血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）等分子的变化；然后用CAF或NF分别与卵巢癌细胞系OVCA429混合接种BALB/c裸小鼠，或在有、无NF-кB抑制剂PS1145处理的NF中，用CAF-CM或Gro-α处理后，分别与OVCA429混合接种动物，观察和比较动物移植瘤生长及移植瘤组织中微血管形成情况。结果：Gro-α在CAF中比在NF中高5-6倍；与对照组相比，用CAF条件培养基或Gro-α处理的NF中NF-кB p65的核转位升高，且VEGF上升，但血管生成抑制因子-血小板反应蛋白1下降；用NF-кB抑制剂同时处理NF，可以逆转其VEGF和TSP-1的表达水平；动物试验结果发现CAF要比NF更易促进肿瘤生长，而CAF-CM或Gro-α处理的NF细胞可以促进动物移植瘤的快速增长和移植瘤组织中微血管的生成，但用NF-кB抑制剂处理的NF则抑制肿瘤生长和血管形成能力。结论：卵巢癌CAF在肿瘤微环境中通过自分泌Gro-α，激活NF-кB核转位和VEGF表达，促进卵巢癌组织血管增生和肿瘤的生长。 展开更多
关键词 癌相关成纤维细胞 生长调节致癌基因α NF-кB核转位 血管内皮细胞生长因子 卵巢癌 Gro-α
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癌相关成纤维细胞通过IL-6诱导的“上皮-间质”转换促进宫颈癌细胞的迁移和侵袭 被引量：13
9
作者 任春霞 赵敏 +4 位作者 徐娜 宋亚琴 陈亚萍 吕蓓 杨恭 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期252-257,共6页
背景与目的：癌相关成纤维细胞（cancer-associated fibroblasts，CAFs）能促进上皮肿瘤的侵袭和转移，细胞因子IL-6在肿瘤间质微环境中可能介导间质和上皮的相互作用，促进肿瘤的侵袭和转移，但其具体机制尚不十分清楚。方法：以宫颈... 背景与目的：癌相关成纤维细胞（cancer-associated fibroblasts，CAFs）能促进上皮肿瘤的侵袭和转移，细胞因子IL-6在肿瘤间质微环境中可能介导间质和上皮的相互作用，促进肿瘤的侵袭和转移，但其具体机制尚不十分清楚。方法：以宫颈癌细胞HeLa为研究模型，用ELISA测定宫颈癌CAFs和正常宫颈组织成纤维细胞（normal fibroblasts，NFs）条件培养基中IL-6的表达；用条件培养基或IL-6分别处理宫颈癌细胞系HeLa；用Western blot测定样品处理前后上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）标志物（如N-Cadherin和Vimentin等）的变化，同时用划痕和transwell小室测定细胞迁移和侵袭能力的变化。结果：CAF中IL-6表达比NF高4～5倍；与对照组相比，用CAF条件培养基或IL-6处理的HeLa细胞间充质细胞标志物Vimentin和N-Cadherin升高，而上皮细胞标志物E-Cadherin和Cytokeratin下降，表明IL-6可以促进细胞的EMT发生；进一步研究发现过量IL-6处理的HeLa细胞中干细胞转录因子Snail 1随STAT3的激活而上升；同时发现过量IL-6处理的HeLa细胞的迁移和侵袭能力大幅增加。结论：CAF在肿瘤微环境中可能通过IL-6/STAT3/Snail通路诱导宫颈癌上皮细胞的EMT转化，从而促进宫颈癌的侵袭和转移能力。 展开更多
关键词 癌相关成纤维细胞 宫颈癌 白介素6 上皮-间质转换 迁移和侵袭 INTERLEUKIN-6
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口腔鳞癌癌细胞和癌相关成纤维细胞的原代培养、鉴定及其生物学特性研究 被引量：7
10
作者 吴国民 胡敏 +3 位作者 袁红艳 张茹慧 孙秀梅 周悦 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期687-689,共3页
目的:对口腔鳞状细胞癌细胞(OSCCs)及癌相关成纤维细胞(CAFs)进行培养、纯化和鉴定,初步探讨其生物学特性。方法:取自临床手术的新鲜标本,通过抗污染处理,应用机械分离法和胶原酶Ⅳ消化法获得OSCC及CAFs,0.25%胰蛋白酶消化反复贴壁差数... 目的:对口腔鳞状细胞癌细胞(OSCCs)及癌相关成纤维细胞(CAFs)进行培养、纯化和鉴定,初步探讨其生物学特性。方法:取自临床手术的新鲜标本,通过抗污染处理,应用机械分离法和胶原酶Ⅳ消化法获得OSCC及CAFs,0.25%胰蛋白酶消化反复贴壁差数培养法分离、纯化细胞,正常口腔成纤维细胞(NFs)和舌鳞癌细胞系Tca8113作为对照组。通过形态学观察、波形蛋白和角蛋白免疫组化染色对纯化的细胞进行鉴定。应用MTT法绘出OSCCs、CAFs、NFs和Tca8113细胞的生长曲线。结果:获得纯化的OSCCs和CAFs,通过对比研究阐明OS-CC和CAFs的生物学特点;OSCCs中免疫组化染色角蛋白呈阳性、波形蛋白呈阴性,CAFs中角蛋白呈阴性、波形蛋白呈阳性。结论:通过本实验研究成功获得纯化的OSCCs和CAFs,对比研究发现CAFs和NFs在形态结构、生长特点等方面不同。 展开更多
关键词 鳞状细胞癌 癌相关成纤维细胞 原代培养
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乳腺癌相关成纤维细胞miRNA表达的检测和分析 被引量：7
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作者 曾宗跃 胡萍 +4 位作者 唐曦 张海龙 杜艳娥 文思阳 柳满然 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1071-1075,共5页
目的研究人乳腺癌微环境癌相关成纤维细胞(CAF)与正常成纤维细胞(NF)miRNA表达的差异及其对CAF的生物学功能的影响。方法运用1型胶原酶消化法分别处理临床乳腺癌患者的癌组织和对应癌旁组织标本,原代分离培养CAF和NF细胞;利用免疫荧光法... 目的研究人乳腺癌微环境癌相关成纤维细胞(CAF)与正常成纤维细胞(NF)miRNA表达的差异及其对CAF的生物学功能的影响。方法运用1型胶原酶消化法分别处理临床乳腺癌患者的癌组织和对应癌旁组织标本,原代分离培养CAF和NF细胞;利用免疫荧光法和Western blot法分析CAF和NF细胞成纤维细胞分泌蛋白(FSP)的表达情况,对所分离培养的细胞进行纯度和特性鉴定;利用TranswellTM实验比较CAF与NF细胞的侵袭能力;利用miRNA芯片和芯片结果显著性差异(SAM)分析法分析CAF与NF细胞miRNA表达的差异;对差异miR-205和miR-221,在原代培养的CAF和NF进行实时定量PCR(qRT-PCR)验证;利用多种生物信息学软件预测差异miRNA的靶基因;利用DAVID软件对靶基因进行信号通路富集度分析。利用ELISA检测TGF-β和IL-6信号通路的核心蛋白基质金属蛋白酶1(MMP-1)、MMP-2和MMP-9的表达差异。结果成功分离得到原代培养的CAF与NF细胞,纯度大于95%;与NF细胞相比,CAF细胞的侵袭能力明显增强;miRNA芯片分析结果显示,CAF有10个变化倍数>1.5的异常表达miRNA(P<0.05),其中3个上调表达(miR-221-5p、miR-31-3p、miR-221-3p),7个下调表达(miR-205、miR-200b、miR-200c、miR-141、miR-101、miR-342-3p、let-7g)。信号通路富集度分析发现,miRNA靶基因与细胞分化、细胞黏附、细胞迁移、细胞增殖、细胞分泌和细胞间相互作用等密切相关,其中,异常表达的miR-200b/c和miR-141等miRNA通过抑制其靶基因,影响TGF-β信号通路、IL-6信号通路,进而影响CAF的侵袭和转移。结论人乳腺癌微环境CAF的miRNA表达谱发生显著变化,CAF细胞中异常表达miRNA可能参与了NF向CAF的转化,并与CAF细胞的增殖、黏附、侵袭、转移有密切关系。 展开更多
关键词 癌相关成纤维细胞 乳腺癌 miRNA表达谱 肿瘤微环境
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口腔癌相关成纤维细胞对人工基底膜的降解作用及其机制 被引量：6
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作者 宋惠云 何昕 +3 位作者 周红梅 李胜富 付春华 龙丹 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期223-225,共3页
目的观察口腔癌相关成纤维细胞(CAFs)降解人工基底膜matrigel的能力,并探讨其可能的作用机制。方法matrigel凝胶与CAFs和NFs共同培养24、48、72h后,收集培养上清液,按照羟脯氨酸检测试剂盒说明测定羟脯氨酸含量;用考马斯亮兰微孔板法行... 目的观察口腔癌相关成纤维细胞(CAFs)降解人工基底膜matrigel的能力,并探讨其可能的作用机制。方法matrigel凝胶与CAFs和NFs共同培养24、48、72h后,收集培养上清液,按照羟脯氨酸检测试剂盒说明测定羟脯氨酸含量;用考马斯亮兰微孔板法行微量蛋白定量;用明胶酶谱分析对基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)含量进行测定。结果在各时间段,口腔CAFs上清超滤液中羟脯氨酸含量、上清液总蛋白浓度及MMP-2酶原含量明显高于NFs,且CAFs组表达大量MMP-2活性酶。口腔CAFs和NFs皆不表达MMP-9。结论CAFs具有较强的降解细胞外基质的能力,提示其与肿瘤-宿主微环境中基质重建及肿瘤侵袭有关。 展开更多
关键词 癌相关成纤维细胞 人工基底膜 降解
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口腔癌相关成纤维细胞对人淋巴管内皮细胞增殖、迁移、侵袭、成管的影响 被引量：5
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作者 陈思源 高攀 +1 位作者 常征 宣鸣 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期524-528,共5页
目的研究口腔癌相关成纤维细胞(CAFs)在口腔鳞状细胞癌淋巴管生成过程中的作用。方法通过组织块法分离、培养口腔鳞状细胞癌患者的CAFs和正常成纤维细胞(NFs),免疫组织化学染色鉴定CAFs和NFs。利用24孔的transwell细胞培养室分别将CAFs... 目的研究口腔癌相关成纤维细胞(CAFs)在口腔鳞状细胞癌淋巴管生成过程中的作用。方法通过组织块法分离、培养口腔鳞状细胞癌患者的CAFs和正常成纤维细胞(NFs),免疫组织化学染色鉴定CAFs和NFs。利用24孔的transwell细胞培养室分别将CAFs(实验A组)、NFs(实验B组)与人淋巴管内皮细胞(HLEC)共培养,以DMEM高糖培养基作为空白对照组,在倒置相差显微镜下观察各组HLEC的增殖、迁移、侵袭、成管能力。结果培养96、144、192 h,实验A组HLEC的数目均多于实验B组和空白对照组,实验B组多于空白对照组(P<0.01)。培养96 h后,实验A组HLEC的迁移和侵袭数目均多于实验B组和空白对照组,实验B组多于空白对照组(P<0.01)。培养24 h后,实验A组HLEC的成管数目多于实验B组和空白对照组,实验B组多于空白对照组(P<0.01)。结论口腔CAFs促进了HLEC的增殖、迁移、侵袭和成管作用,并且CAFs的促进作用大于NFs。 展开更多
关键词 口腔鳞状细胞癌 癌相关成纤维细胞 正常成纤维细胞 人淋巴管内皮细胞
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肿瘤相关成纤维细胞对胆囊癌细胞生长和侵袭的影响 被引量：4
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作者 陈晨 慎浩鑫 +4 位作者 陶杰 宋虎伟 马丽 王林 耿智敏 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1149-1154,共6页
目的研究人胆囊癌相关成纤维细胞(CAFs)的培养方法及其对胆囊癌细胞生物学行为的影响,探讨CAFs在胆囊癌发生发展中的作用。方法采用酶消化法及组织块法进行人胆囊癌CAFs的原代培养,采用差速贴壁法进行纯化,免疫细胞化学及细胞免疫荧光... 目的研究人胆囊癌相关成纤维细胞(CAFs)的培养方法及其对胆囊癌细胞生物学行为的影响,探讨CAFs在胆囊癌发生发展中的作用。方法采用酶消化法及组织块法进行人胆囊癌CAFs的原代培养,采用差速贴壁法进行纯化,免疫细胞化学及细胞免疫荧光进行鉴定;噻唑蓝(MTT)法检测CAFs对胆囊癌细胞增殖能力的影响,Transwell小室法检测CAFs对癌细胞侵袭能力的影响。结果酶消化法及组织块法均可获得人胆囊癌CAFs,以酶消化法更为简便、高效;MTT及Transwell侵袭实验证实CAFs可促进胆囊癌细胞的增殖、侵袭能力(P<0.05),差距具有统计学意义。结论通过酶消化法可较为简便地获得人胆囊癌CAFs,CAFs可显著增强胆囊癌细胞增殖、侵袭能力,表明其在胆囊癌发生、发展中起重要作用。 展开更多
关键词 胆囊癌 原代培养 肿瘤相关成纤维细胞 增殖 侵袭
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癌相关成纤维细胞对结肠癌细胞增殖侵袭能力的影响 被引量：4
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作者 王甜甜 陆建波 +3 位作者 普苹 王春艳 习杨彦彬 付红梅 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期511-516,共6页
目的观察结肠癌相关成纤维细胞(cancer associated fibroblast,CAF)对结肠癌HCT-116细胞增殖及侵袭能力的影响,探讨癌细胞微环境在结直肠癌发生、发展过程中的作用。方法采集结肠癌手术标本CAF及结肠正常成纤维细胞进行原代及纯化培养... 目的观察结肠癌相关成纤维细胞(cancer associated fibroblast,CAF)对结肠癌HCT-116细胞增殖及侵袭能力的影响,探讨癌细胞微环境在结直肠癌发生、发展过程中的作用。方法采集结肠癌手术标本CAF及结肠正常成纤维细胞进行原代及纯化培养。观察HCT-116细胞被CAF及成纤维细胞作用后其形态学、增殖能力及侵袭能力的变化。结果结肠CAF较成纤维细胞异型性明显,接触抑制和密度抑制丧失。结肠CAF及成纤维细胞免疫组化标记CK(AE1/AE3)均(-),Fibronectin和CAFα-SMA均(+),成纤维细胞α-SMA(-);CAF条件培养基组HCT-116增殖活性增高,CAF间接共培养HCT-116细胞G2期和S期所占比例明显增加,CAF作用下HCT-116细胞侵袭能力明显增强(P<0.05)。结论 CAF促进结肠癌HCT-116细胞增殖、侵袭及迁移;CAF条件培养基中可能存在可溶性活性物质,具有促进HCT-116细胞增殖侵袭能力的作用。 展开更多
关键词 结肠肿瘤 癌相关成纤维细胞 微环境 增殖 侵袭
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miR-181c靶向己糖激酶2抑制癌相关成纤维细胞的糖酵解 被引量：4
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作者 蓝海兵 罗亮 +2 位作者 齐协飞 龚园其 陈玉 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1619-1623,共5页
目的探讨mi R-181c在癌相关成纤维细胞(CAFs)糖酵解中的作用和机制。方法用组织贴壁法分离原代肺腺癌病人肺组织CAF及肺正常成纤维细胞(NFs)。用LipofectamineTM2000转染mi R-181c mimics,mi R-181c inhibitor,si RNA-HK2和HK2-vecto等;... 目的探讨mi R-181c在癌相关成纤维细胞(CAFs)糖酵解中的作用和机制。方法用组织贴壁法分离原代肺腺癌病人肺组织CAF及肺正常成纤维细胞(NFs)。用LipofectamineTM2000转染mi R-181c mimics,mi R-181c inhibitor,si RNA-HK2和HK2-vecto等;Q-PCR检测mi R-181家族表达水平;Western blotting检测己糖激酶2(HK2)蛋白表达;2-NBDG法检测细胞葡萄糖摄取率;DRY-CHEM FCD3500仪器检测细胞上清中乳酸生成;双荧光素酶报告基因系统检测HK2 m RNA表达。结果在细胞形态上CAFs与NFs无明显区别。与NFs组相比,CAFs组葡萄糖摄取、乳酸生成和HK2蛋白表达明显增加,而mi R-181家族表达明显减少(P<0.05)。在NFs转染inhibitor-181c后,其HK2蛋白表达、葡萄糖摄取和乳酸生成明显增加(P<0.05);相反,CAFs转染了mimics-181c后,其HK2蛋白表达、葡萄糖摄取和乳酸生成明显减少(P<0.05)。并且在敲低HK2细胞的CAFs中,mimics-181c不能减少葡萄糖摄取和乳酸生成;而mimics-181c可以减少过表达HK2对NFs葡萄糖摄取和乳酸生成的增强作用。结论 mir-181c可以通过抑制HK2的蛋白表达来抑制CAFs的糖酵解。 展开更多
关键词 癌相关成纤维细胞 miR-181 己糖激酶2 糖酵解
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TGF-β1对口腔癌相关成纤维细胞迁移特性的影响 被引量：6
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作者 孟文霞 刘传霞 +3 位作者 高庆红 李小玉 刘豫荣 周红梅 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2013年第8期707-709,共3页
目的:采用细胞划痕实验,研究外源性TGF-β1(transforming growth factor beta)细胞因子对体外分离培养的原代癌相关成纤维细胞(CAFs)迁移特性的影响,探讨TGF-β1细胞因子对CAFs生物学性能的影响。方法:以口腔正常成纤维细胞(NFs)和未经... 目的:采用细胞划痕实验,研究外源性TGF-β1(transforming growth factor beta)细胞因子对体外分离培养的原代癌相关成纤维细胞(CAFs)迁移特性的影响,探讨TGF-β1细胞因子对CAFs生物学性能的影响。方法:以口腔正常成纤维细胞(NFs)和未经处理的CAFs细胞为对照组,采用细胞划痕实验观察一定浓度的TGF-β1在不同时间作用后对CAFs迁移特性的影响。结果:与NFs组和未处理组CAFs相比,10μg/L的TGF-β1在不同时间点能够明显促进CAFs的迁移。结论:TGF-β1细胞因子能够明显促进CAFs的迁移,对CAFs的生物学性能具有重要影响。 展开更多
关键词 癌相关成纤维细胞 细胞划痕实验 迁移 TGF-β1细胞因子
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TGF-β1对口腔鳞癌相关成纤维细胞FAP表达的影响 被引量：4
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作者 唐婉容 李丽华 +2 位作者 喻洁 马莹 刘英 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2017年第9期1293-1297,共5页
目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对癌相关成纤维细胞(CAFs)中成纤维细胞活化蛋白(FAP)表达的影响。方法应用10 ng/ml的TGF-β1作用于CAFs细胞,设置正常成纤维细胞(NFs)和未经处理的CAFs细胞作为对照组,采用RT-PCR和Western blot法检... 目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对癌相关成纤维细胞(CAFs)中成纤维细胞活化蛋白(FAP)表达的影响。方法应用10 ng/ml的TGF-β1作用于CAFs细胞,设置正常成纤维细胞(NFs)和未经处理的CAFs细胞作为对照组,采用RT-PCR和Western blot法检测细胞中FAP的蛋白和mRNA表达情况。结果 FAP在NFs中几乎不表达,而在CAFs中FAP的mRNA和蛋白表达均增加。与NFs组和CAFs组相比,10 ng/ml的TGF-β1能够明显促进CAFs细胞分泌FAP,作用12、24 h后FAP mRNA和蛋白的相对表达量差异有统计学意义(P<0.05)。且随着作用时间的延长,FAP的表达持续升高,24 h较12 h表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TGF-β1能够促进CAFs中FAP的表达,在肿瘤上皮-间质交互作用中扮演着重要角色。 展开更多
关键词 转化生长因子-Β1 癌相关成纤维细胞 成纤维细胞活化蛋白
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癌相关成纤维细胞与肿瘤细胞相互作用对肿瘤发生发展的影响 被引量：7
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作者 武剑 邓红 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2008年第2期212-217,共6页
间质细胞与细胞外基质成分构成的肿瘤微环境对肿瘤细胞的生长、浸润和转移具有重要作用。特征性间质改变通常伴随甚至先于上皮细胞的恶变。这一过程中的关键成分——活化的成纤维细胞,又称为肌成纤维细胞或者癌相关成纤维细胞,是肿瘤间... 间质细胞与细胞外基质成分构成的肿瘤微环境对肿瘤细胞的生长、浸润和转移具有重要作用。特征性间质改变通常伴随甚至先于上皮细胞的恶变。这一过程中的关键成分——活化的成纤维细胞,又称为肌成纤维细胞或者癌相关成纤维细胞,是肿瘤间质中数量最丰富的细胞类型,它们通过细胞与细胞间相互接触,在各种可溶性因子的媒介作用下,促进上皮细胞恶性转化。文中主要介绍癌相关成纤维细胞及其在肿瘤发生发展中的作用。 展开更多
关键词 成纤维细胞 肿瘤 癌相关成纤维细胞 肌成纤维细胞 细胞间相互作用 生长因子 综述
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低氧诱导乳腺癌癌相关成纤维细胞能量代谢重塑细胞模型的构建 被引量：2
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作者 唐石伏 周明莉 +13 位作者 孙一帆 王林春 刘春明 杨丽 唐曦 张海龙 高超 黄光明 渠海洋 杜燕娥 徐丽云 文思阳 郎磊 柳满然 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1084-1089,共6页
目的:构建低氧诱导的乳腺癌癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAF)能量代谢重塑(energy metabolism reprogramming,EMR)细胞模型,为其后续分子机制和生物学功能研究奠定基础。方法:以成对的永生化的乳腺癌癌旁组织来源... 目的:构建低氧诱导的乳腺癌癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAF)能量代谢重塑(energy metabolism reprogramming,EMR)细胞模型,为其后续分子机制和生物学功能研究奠定基础。方法:以成对的永生化的乳腺癌癌旁组织来源正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NF)和CAF为处理对象,根据[O2]不同,NF和CAF细胞各分为常氧处理组和低氧处理组。不同氧浓度分别处理NF和CAF细胞0、1、3、6、12 h和24 h。葡萄糖消耗实验和乳酸生成实验检测细胞糖酵解水平;线粒体活性检测实验评估细胞氧化磷酸化(oxidative phosphorylation,OP)活性;Western blot实验检测细胞能量代谢相关蛋白包括单羧酸转运子4(monocarboxylate transporters 4,MCT4)、细胞色素氧化酶Ⅳ亚基(cytochrome oxidaseⅣsubunit,COXⅣ)和低氧诱导因子1α亚基(hypoxia inducible factor 1αsubunit,HIF1α)的蛋白表达量。结果:低氧与CAF细胞EMR呈剂量效应和时间效应关系,1%[O2]作用24 h为最佳低氧处理条件。与NF常氧组相比,低氧处理(1%[O2]作用24 h)使CAF葡萄糖吸收和乳酸产生能力分别增强2倍和3.1倍,明显抑制其氧化磷酸化活性,使CAF细胞中MCT4和HIF1α蛋白表达量分别上升3.1倍和3.9倍及COXⅣ下调90%。结论:低氧(1%[O2]作用24 h)使CAF具有典型的EMR表型。本研究成功构建低氧诱导的乳腺癌CAF细胞EMR模型。 展开更多
关键词 乳腺癌 癌相关成纤维细胞 低氧 能量代谢重塑 细胞模型
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