周期素依赖性蛋白激酶5及其激动剂在神经系统发育中的作用 被引量：1

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作者 李红丽 蔡文琴 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期825-827,共3页

周期素依赖性蛋白激酶5（cyclin dependent kinase5，CDK5）是CDKs家族的成员之一，属于丝氨酸／苏氨酸激酶家族，具有与其他的CDKs成员同源的序列。CDK5最早是从Hela细胞中分离并克隆，并且发现是一种PSSALRE激酶与cdc2和CDK2的基因序... 周期素依赖性蛋白激酶5（cyclin dependent kinase5，CDK5）是CDKs家族的成员之一，属于丝氨酸／苏氨酸激酶家族，具有与其他的CDKs成员同源的序列。CDK5最早是从Hela细胞中分离并克隆，并且发现是一种PSSALRE激酶与cdc2和CDK2的基因序列有57％的同源性，故又称为edc2相关的蛋白激酶。近年的研究表明CDK5并不像其他家族成员（CDKs）主要参与细胞周期的调控， 展开更多

关键词 周期素依赖性蛋白激酶5 神经系统发育 激动剂 HELA细胞 家族成员 cdkS cdk5 基因序列

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CRNDE介导miR-33a-5p/CDK6轴影响细胞周期调控人体肝癌细胞增殖的实验研究

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作者 梅小平 姚明 +3 位作者 周清河 许浏 周鸿鲲 李彦 《浙江临床医学》 2023年第8期1117-1120,共4页

目的探讨CRNDE介导miR-33a-5p/CDK6轴影响细胞周期,调控人体肝癌细胞增殖的作用机制。方法运用细胞转染技术构建稳定干扰CRNDE/低表达CRNDE的人体肝癌细胞模型shRNA-CRNDE-HuH-7;RT-qPCR及Western blotting技术检测HL-7702人体肝细胞株... 目的探讨CRNDE介导miR-33a-5p/CDK6轴影响细胞周期,调控人体肝癌细胞增殖的作用机制。方法运用细胞转染技术构建稳定干扰CRNDE/低表达CRNDE的人体肝癌细胞模型shRNA-CRNDE-HuH-7;RT-qPCR及Western blotting技术检测HL-7702人体肝细胞株、HuH-7人体肝癌细胞株及shRNA-CRNDE-HuH-7细胞株中CRNDE、miR-33a-5p及CDK6的表达情况,评估其相关性及miR-33a-5p/CDK6轴随CRNDE表达量变化的相关程度;对上述三组细胞株进行细胞增殖实验(CCK8)、细胞凋亡检测、细胞侵袭测试及细胞周期检测,评估在不同CRNDE表达情况下三组细胞株的增殖、凋亡、侵袭能力及细胞周期的变化。结果RT-qPCR及Western blotting技术检测shRNA-CRNDE-HuH-7细胞株中CRNDE表达低于HuH-7人体肝癌细胞株(P<0.05);当控制位点为CDK6时,三组细胞株中CRNDE表达量与其呈正相关(r=0.856,P<0.05);当控制位点为miR-33a-5p时,三组细胞株中miR-33a-5p表达量与CDK6及CRNDE均呈负相关(r=-0.883,P<0.05;r=-0.937,P<0.05);在三组细胞株中,随CRNDE表达下调,细胞增殖、侵袭能力及细胞周期均受到抑制(P<0.05),shRNA-CRNDE-HuH-7细胞株中肿瘤细胞凋亡高于HuH-7细胞株(P<0.05)。结论CRNDE与miR-33a-5p存在靶向关系,CRNDE以靶向调节作用抑制miR-33a-5p的表达,进而介导CDK6的升高,通过miR-33a-5p/CDK6轴促进肝细胞肝癌的增殖,其可能成为肝细胞肝癌的新肿瘤标志物和分子生物治疗靶点。 展开更多

关键词 CRNDE miR-33a-5p 肝细胞肝癌 细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶6

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氧化应激通过激活Cdk5抑制FOXO1的神经元损伤及其机制 被引量：8

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作者 杨慧丽 陈星宇 郑维红 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期399-405,共7页

目的探究氧化应激通过激活细胞周期蛋白依赖性激酶5(cyclin-dependent kinase 5, Cdk5)抑制叉头框转录因子O亚家族蛋白1(forkhead box O1, FOXO1)的神经元损伤的具体机制。方法在HEK细胞中,共同转染过表达P39/Cdk5和FOXO1-WT或者FOXO1-S... 目的探究氧化应激通过激活细胞周期蛋白依赖性激酶5(cyclin-dependent kinase 5, Cdk5)抑制叉头框转录因子O亚家族蛋白1(forkhead box O1, FOXO1)的神经元损伤的具体机制。方法在HEK细胞中,共同转染过表达P39/Cdk5和FOXO1-WT或者FOXO1-S249A突变体,利用特异性磷酸化抗体pS249-FOXO1能够特异识别FOXO1的Ser249位点磷酸化特点,通过Western blot检测Cdk5/p39对FOXO1的磷酸化。通过体外培养HEK细胞中过表达Cdk5、p39和FOXO1,免疫共沉淀探究Cdk5和FOXO1以及Cdk5和p39的相互作用。在原代神经元过表达不同的Cdk5激活因子(p25、p35、p39)以及Cdk5激酶复合物,使用双荧光素酶实验探究其不同组合对FOXO1转录活性的影响。用Cdk5抑制剂rocovitine干预,观察其对FOXO1出入的影响;同时通过核质分离的方法对比了Cdk5杂合小鼠和野生型大脑皮层组织的FOXO1核质定位。分别用H_2O_2、glutamate处理神经元,通过Western blot观察氧化应激对Cdk5的活性调节,同时用双荧光素酶实验探究其对FOXO1转录因子的影响;最后通过caspase-3染色观察H_2O_2、glutamate的不同时间梯度处理对神经元凋亡的影响。结果 Cdk5和p39能够直接与FOXO1相互作用,并磷酸化FOXO1的Ser249位点。激活Cdk5能够显著抑制FOXO1的转录活性,而用Cdk5抑制剂(roscovitine)能够显著提高FOXO1的转录活性并诱导FOXO1入核。与野生型对比,在Cdk5杂合子中,FOXO1蛋白在细胞核中定位显著提高。H_2O_2和glutamate处理诱导p35切割形成p25,同时抑制FOXO1的转录活性,而敲低Cdk5能够缓解H_2O_2和glutamate对FOXO1的转录活性的抑制。通过H_2O_2和glutamate处理的原代神经元,caspase3染色显著增加。结论 Cdk5/p39可以磷酸化FOXO1-ser249位点,并抑制FOXO1的转录活性;而氧化应激能够通过激活Cdk5,抑制FOXO1的转录活性,并诱导神经元凋亡。 展开更多

关键词 氧化应激 激活细胞周期蛋白依赖性激酶5(cdk5) 叉头框转录因子O亚家族蛋白1(FOXO1) caspase-3

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条件性恐惧大鼠边缘下区Cdk5激酶活性、caspase-3表达以及突触结构的变化 被引量：3

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作者 李培培 张丽丽 +1 位作者 韦美 李敏 《心理学报》 CSSCI CSCD 北大核心 2011年第5期544-552,共9页

探讨条件性恐惧大鼠内侧前额叶皮层边缘下区(IL区)Cdk5激酶活性、凋亡因子caspase-3表达和突触结构的变化。采用声音结合足底电击的方法对大鼠建立条件性恐惧模型后,在不同时间点测定IL区Cdk5激活剂P35和P25的蛋白表达水平、Cdk5激酶活... 探讨条件性恐惧大鼠内侧前额叶皮层边缘下区(IL区)Cdk5激酶活性、凋亡因子caspase-3表达和突触结构的变化。采用声音结合足底电击的方法对大鼠建立条件性恐惧模型后,在不同时间点测定IL区Cdk5激活剂P35和P25的蛋白表达水平、Cdk5激酶活性、caspase-3的阳性细胞数,并观察突触结构的变化。结果发现,大鼠在条件性恐惧建立后第2、4和8天,IL区的P25蛋白表达和Cdk5激酶活性均明显高于正常;caspase-3的免疫反应阳性细胞数在3个时间点也均多于正常;透射电镜下观察到:在恐惧建立后的第8天,IL区突触的突触后致密物质(PSD)厚度变薄,在恐惧建立后第22天突触数密度减少、PSD厚度仍小于正常。推测条件性恐惧的建立,使大鼠IL区的P25水平和Cdk5活性高于正常,引起IL区的突触结构发生改变,导致大鼠的恐惧反应持续存在。 展开更多

关键词 条件性恐惧 边缘下区 细胞周期素依赖性蛋白激酶5 突触结构

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lpa-miR-nov-66调控羊驼黑色素细胞CDK5磷酸化作用的研究

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作者 张俊珍 姬凯元 +3 位作者 石占全 刘彧 胡帅鹏 范瑞文 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期290-295,共6页

旨在研究lpa-miR-nov-66在调控羊驼黑色素细胞产生黑色素颗粒过程中对细胞周期依赖性激酶5(CDK5)磷酸化作用的影响。在体外培养的黑色素细胞中转染lpa-miR-nov-66后,采用实时定量PCR、免疫细胞化学、Western blotting、免疫共沉淀等方... 旨在研究lpa-miR-nov-66在调控羊驼黑色素细胞产生黑色素颗粒过程中对细胞周期依赖性激酶5(CDK5)磷酸化作用的影响。在体外培养的黑色素细胞中转染lpa-miR-nov-66后,采用实时定量PCR、免疫细胞化学、Western blotting、免疫共沉淀等方法检测功能性CDK5作用。结果显示:与阴性对照相比,黑色素细胞被转染lpa-miR-nov-66后,CDK5基因和蛋白表达量均下降,差异极显著(P<0.01);CDK5激活子是P35,CDK5磷酸化水平及其磷酸化底物——酪氨酸羟化酶(TH)的表达量均被上调,分别呈差异极显著(P<0.01)和差异显著(P<0.05)。结果表明:lpa-miR-nov-66过量表达可通过CDK5的激活子P35上调黑色素细胞CDK5发生磷酸化。该功能性CDK5激酶对底物TH发生磷酸化,是lpa-miR-nov-66调控黑色素生成分子机制的中间环节。 展开更多

关键词 lpa-miR-nov-66 细胞周期依赖性激酶5(cdk5) 酪氨酸羟化酶(TH) 黑色素细胞

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RNA干扰技术沉默星形胶质细胞Cdk5模型的建立 被引量：1

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作者 龙根 谢敏杰 +2 位作者 王伟 徐沙贝 刘晨辰 《生物医学工程与临床》 CAS 2018年第3期315-319,共5页

目的建立星形胶质细胞细胞周期蛋白依赖性激酶5(Cdk5)沉默模型。方法新生24 h内无特定病原(SPF)级SD雄性大鼠乳鼠240只。培养及鉴定SD雄性大鼠星形胶质细胞。设计合成针对星形胶质细胞Cdk5的小干扰RNA(siRNA)3种(Si-r-Cdk5-001、Si-r-Cd... 目的建立星形胶质细胞细胞周期蛋白依赖性激酶5(Cdk5)沉默模型。方法新生24 h内无特定病原(SPF)级SD雄性大鼠乳鼠240只。培养及鉴定SD雄性大鼠星形胶质细胞。设计合成针对星形胶质细胞Cdk5的小干扰RNA(siRNA)3种(Si-r-Cdk5-001、Si-r-Cdk5-002及Si-r-Cdk5-003),将3种siRNA分为SiT1组、SiT2组、SiT3组,在Lipofectamine 2000介导下转染星形胶质细胞;阴性对照组加入阴性对照si RNA。应用荧光染色观察转染效率,通过实时聚合酶链反应(PCR)和Western blot检测沉默效率。结果成功将Cdk5 siRNA转染入星形胶质细胞,转染效率为85%。与阴性对照组相比,SiT1组、SiT2组及SiT3组Cdk5 mRNA及蛋白表达均降低(P<0.01),其中SiT3组沉默效果最佳,分子水平沉默效率为68%,蛋白水平沉默效率为79%。结论成功通过RNA干扰技术建立星形胶质细胞Cdk5特异性沉默模型。 展开更多

关键词 星形胶质细胞 细胞周期蛋白依赖性激酶5(cdk5) RNA干扰 特异性模型 鼠

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转染ELF5基因的人卵巢癌干细胞增殖、周期、凋亡及成瘤能力变化 被引量：2

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作者 谢肖磊 闫洪超 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第3期32-35,共4页

目的观察转染ELF5基因的人卵巢癌干细胞增殖、周期、凋亡及成瘤能力变化。方法将人卵巢癌干细胞(具有CD133+、CD117+特征的人卵巢癌细胞株HO8910)分为重组质粒组、空质粒组和空白对照组,重组质粒组转染真核细胞表达载体pc DNA3.1-ELF5+E... 目的观察转染ELF5基因的人卵巢癌干细胞增殖、周期、凋亡及成瘤能力变化。方法将人卵巢癌干细胞(具有CD133+、CD117+特征的人卵巢癌细胞株HO8910)分为重组质粒组、空质粒组和空白对照组,重组质粒组转染真核细胞表达载体pc DNA3.1-ELF5+EGFP,空质粒组转染空载质粒pc DNA3.1-EGFP,空白对照组不做转染;分别于培养24、48、72、96 h后采用CCK-8法观察细胞增殖能力,于培养48 h后采用流式细胞仪观察细胞周期分布情况、测算细胞凋亡率,于培养48 h后采用Western blotting法检测各组细胞中的p21、Caspase-3蛋白。将重组质粒组、空质粒组和空白对照组细胞分别接种于雌性裸鼠右腋窝皮下制作卵巢癌移植瘤,每组接种5只;待移植瘤形成后取肿瘤组织,测量肿瘤最大直径及质量,测算细胞凋亡率,检测细胞中的p21、Caspase-3蛋白。结果重组质粒组培养24、48、72、96 h后细胞增殖能力较空质粒组和空白对照组明显下降(P均<0.05)。重组质粒组中阻滞于G0/G1期的细胞比例、细胞凋亡率及细胞中p21、Caspase-3蛋白相对表达量均高于空质粒组和空白对照组(P均<0.05)。重组质粒组移植瘤最大直径和肿瘤质量小于空质粒组、空白对照组(P均<0.05)。重组质粒组移植瘤组织中细胞凋亡率及p21、Caspase-3蛋白相对表达量高于空质粒组和空白对照组(P均<0.05)。结论转染ELF5基因的人卵巢癌干细胞增殖受抑制、细胞周期阻滞、细胞凋亡增多、成瘤能力减弱,机制可能与p21、Caspase-3蛋白表达上调有关。 展开更多

关键词 卵巢癌 肿瘤干细胞 细胞周期 细胞凋亡 ELF5基因 细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A 含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3

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CDK5、p35/p25在血管性认知损害患者血液中的表达 被引量：1

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作者 翁改志 刘强 +2 位作者 赵昭 吴道澄 倪宁 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期702-705,共4页

目的探讨细胞周期素依赖性蛋白激酶5(CDK5)、p35及p25在血管性认知损害(VCI)患者血液中的表达及可能作用。方法收集VCI病例91例,其中非痴呆性血管性认知损害(VCIND)49例,血管性痴呆(VAD)42例;同时收集脑卒中认知功能正常(NC)及健康人(N)... 目的探讨细胞周期素依赖性蛋白激酶5(CDK5)、p35及p25在血管性认知损害(VCI)患者血液中的表达及可能作用。方法收集VCI病例91例,其中非痴呆性血管性认知损害(VCIND)49例,血管性痴呆(VAD)42例;同时收集脑卒中认知功能正常(NC)及健康人(N)各30例;应用RT-qPCR检测血液中CDK5mRNA的相对表达,Western blot法检测各组血液中CDK5、p35及p25的蛋白表达。结果各组CDK5mRNA相对表达及CDK5、p35、p25蛋白表达从高到低分别为VAD组>VCIND组>NC组>N组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 CDK5、p35及p25可能参与了VCI的发生,血管性认知功能损害程度与其表达水平呈正相关关系。 展开更多

关键词 血管性认知损害 细胞周期素依赖性蛋白激酶5(cdk5) p25 P35

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Cdk5抑制剂Roscovitine对神经病理性疼痛大鼠痛行为学的影响及机制

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作者 钟妤 陈佳林 +1 位作者 谢玉波 陈静 《山东医药》 CAS 2018年第48期41-44,共4页

目的观察Cdk5抑制剂Roscovitine对神经病理性疼痛大鼠痛行为学的影响,并探讨其机制。方法选择SD大鼠64只,随机分为正常对照组(N组)8只、假手术组(S组)8只、坐骨神经结扎(CCI)组(I组)8只、CCI+溶剂组(D组)8只,剩余32只作为CCI+给药组(R组... 目的观察Cdk5抑制剂Roscovitine对神经病理性疼痛大鼠痛行为学的影响,并探讨其机制。方法选择SD大鼠64只,随机分为正常对照组(N组)8只、假手术组(S组)8只、坐骨神经结扎(CCI)组(I组)8只、CCI+溶剂组(D组)8只,剩余32只作为CCI+给药组(R组)。I组、D组和R组行鞘内置管7天后,采用CCI法建立神经病理性疼痛模型,N组不做任何处理,S组暴露坐骨神经但不予结扎。术后第7天,D组鞘内注射5%二甲基亚砜20μL,R组鞘内注射Cdk5抑制剂Roscovitine 100μg,N组、S组和I组不注射药物。分别于术前(T_0)、术后3天(T_1)、术后5天(T_2)、术后7天(T_3)以及给药后0.5(T_4)、2(T_5)、6(T_6)、12 h(T_7),检测各组机械性缩足阈值(PWMT)、热缩足潜伏期(PWTL)。腹腔注射麻醉后,取各组脊髓腰膨大处(L_4～L_6)组织,采用Western blotting法检测脊髓星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达。结果与N组、S组比较,I组、D组和R组术后各时间点PWMT、PWTL均明显降低(P均<0.05);与I组相比,R组给药后T_5～T_7时PWMT、PWTL均明显升高(P均<0.05)。与S组比较,I组、D组和R组T_4～T_7时脊髓星形胶质细胞GFAP表达均明显上调(P均<0.05);与D组比较,R组给药后T_5～T_7时脊髓星形胶质细胞GFAP表达均明显下调(P均<0.05)。结论Cdk5抑制剂Roscovitine可减轻大鼠神经病理性疼痛,其机制可能与抑制脊髓星形胶质细胞GFAP表达有关。 展开更多

关键词 神经病理性疼痛 星形胶质细胞 细胞周期依赖性蛋白激酶5 大鼠

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HR-HPV感染对宫颈阴道微生态、miR-21、CDK5表达的影响 被引量：2

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作者 马灵云 张汝倩 +2 位作者 赵君 张然 闫冰 《临床误诊误治》 CAS 2023年第10期112-116,共5页

目的分析高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染对宫颈阴道微生态与宫颈脱落细胞miR-21、细胞周期蛋白依赖性激酶5(CDK5)表达的影响。方法选取2020年1月—2022年12月250例宫颈炎为研究对象,根据HR-HPV感染情况分为HR-HPV阴性组(n=160)和HR-HP... 目的分析高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染对宫颈阴道微生态与宫颈脱落细胞miR-21、细胞周期蛋白依赖性激酶5(CDK5)表达的影响。方法选取2020年1月—2022年12月250例宫颈炎为研究对象,根据HR-HPV感染情况分为HR-HPV阴性组(n=160)和HR-HPV阳性组(n=90)。检测HR-HPV阳性组HPV感染亚型,比较2组宫颈阴道微生态情况。采用实时荧光定量PCR法检测2组宫颈脱落细胞miR-21、CDK5表达情况。采用Spearman法分析HR-HPV感染与miR-21、CDK5表达水平和阴道微生态的关系,以及宫颈细胞miR-21、CDK5水平与宫颈阴道微生态的关系。结果HR-HPV阳性组HR-HPV感染以HPV16亚型检出率最高,占53.33%。HR-HPV阳性组阴道微生态失衡率、解脲脲原体阳性率、衣原体阳性率、乳酸杆菌异常率、细菌性阴道炎发生率均高于HR-HPV阴性组(P<0.01)。HR-HPV阳性组宫颈脱落细胞miR-21、CDK5相对表达量均高于HR-HPV阴性组(P<0.01)。宫颈脱落细胞miR-21、CDK5表达水平与细菌性阴道炎发生率、解脲脲原体阳性率、乳酸杆菌异常率、衣原体阳性率均呈正相关(P<0.01)。结论HR-HPV感染可加重宫颈阴道微生态紊乱,增加宫颈病变严重程度,使宫颈脱落细胞miR-21、CDK5表达明显升高。 展开更多

关键词 人乳头瘤病毒 高危型 宫颈炎 宫颈阴道微生态 MIR-21 细胞周期蛋白依赖性激酶5 相关性 宫颈脱落细胞

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免疫介导脊髓前、后角损伤的对比

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作者 刘亚玲 郭艳苏 +3 位作者 白杰 陈霞 谷伟 李春岩 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期664-667,共4页

目的：探讨实验性自身免疫性灰质病作为肌萎缩侧索硬化（ALS）研究模型的可行性。方法：通过免疫组织化学方法，观察实验性自身免疫性脊髓灰质病过程中脊髓前、后角神经元损伤的特征。结果：神经丝轻链（NF-L）、细胞周期素依赖蛋白激酶... 目的：探讨实验性自身免疫性灰质病作为肌萎缩侧索硬化（ALS）研究模型的可行性。方法：通过免疫组织化学方法，观察实验性自身免疫性脊髓灰质病过程中脊髓前、后角神经元损伤的特征。结果：神经丝轻链（NF-L）、细胞周期素依赖蛋白激酶5（CDKS）及其激活因子P35／P25抗体阳性的脊髓前角运动神经元数量与对照组相比均明显减少，而脊髓后角阳性的神经元数量与对照组相比差异无统计学意义。结论：在实验性自身免疫性灰质病发病过程中，存在脊髓前角运动神经元相对易感性，实验性自身免疫性灰质病模型在某种程度上可以作为ALS研究模型。 展开更多

关键词 实验性自身免疫性灰质病 肌萎缩侧索硬化 神经丝轻链 细胞周期素依赖蛋白激酶5 激活因子P35/P25 免疫组织化学

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