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制样方法对菊花花蕾激光显微切割样品RNA提取质量的影响
1
作者 马月花 丁莲 +2 位作者 张雪 赵坤坤 陈素梅 《安徽农业科学》 CAS 2024年第18期1-5,9,共6页
[目的]研究不同固定剂及切片制样方式对菊花花蕾激光显微切割样品RNA提取质量的影响。[方法]以丙酮和乙醇冰醋酸2种试剂固定菊花花蕾,采用石蜡和冰冻切片2种方式制作样本,显微切割并收集最外两轮小花原基,提取RNA后比较提取质量。[结果... [目的]研究不同固定剂及切片制样方式对菊花花蕾激光显微切割样品RNA提取质量的影响。[方法]以丙酮和乙醇冰醋酸2种试剂固定菊花花蕾,采用石蜡和冰冻切片2种方式制作样本,显微切割并收集最外两轮小花原基,提取RNA后比较提取质量。[结果]石蜡和经梯度蔗糖保护的冰冻切片均能很好地保存花蕾组织形态,就石蜡切片而言,乙醇冰醋酸固定组织切割样品的RNA降解明显低于丙酮固定样品;而2种固定剂的冰冻切片切割样品RNA提取质量无明显差异。与石蜡切片相比,冰冻切片显微切割样品RNA质量更高。切割时收集管盖加入RNA提取缓冲液可明显缓解RNA降解。显微切割的不同品种菊花花原基与花发育有关的基因表达水平存在差异,表明切割获得的材料可用于下一步研究。[结论]植物组织经乙醇冰醋酸固定、梯度蔗糖保护后冰冻切片进行显微切割效果较佳,可富集特异组织或细胞并从中获得较高质量的RNA。 展开更多
关键词 固定剂 石蜡切片 冰冻切片 激光显微切割 RNA 提取质量
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常规染色联合激光显微切割技术在子宫内膜癌MSI检测中的应用 被引量：1
2
作者 寇玉玲 王梅 +3 位作者 况薇 梁冬妮 冯敏 王诚 《临床与实验病理学杂志》 CAS 北大核心 2024年第10期1113-1116,共4页
近年随着对肿瘤分子机制深入研究,研究者们已逐步从传统的组织病理学转向探索子宫内膜癌更为精准的分子分型特征,而通过对子宫内膜癌患者进行错配修复(mismatch repair,MMR)蛋白及微卫星不稳定性(microsatellite instability,MSI)状态检... 近年随着对肿瘤分子机制深入研究,研究者们已逐步从传统的组织病理学转向探索子宫内膜癌更为精准的分子分型特征,而通过对子宫内膜癌患者进行错配修复(mismatch repair,MMR)蛋白及微卫星不稳定性(microsatellite instability,MSI)状态检测,有利于Lynch综合征的筛查和免疫治疗的选择[1-2]。目前,PCR+毛细管电泳法(PCR capillary electrophoresis,PCR-CE)是国内公认的MSI检测金标准,也是MSI检测方法中灵敏度最高的方法[3]。然而,在临床工作中经常遇到肿瘤样本不足以进行PCR-CE检测,以及MMR与MSI检测结果不一致等问题,其原因复杂多样,技术层面考虑可能是肿瘤细胞含量不足、样本质量欠佳、肿瘤组织的异质性及结果判读的主观性等因素。激光显微切割(laser microdissection,LMD)技术是在显微镜直视下从组织切片中获得单一类型细胞群,并通过结合不同染色技术精准识别目的细胞或组织的形态或功能,通过提取目的DNA进一步研究肿瘤基因组学[4]。 展开更多
关键词 子宫内膜癌 激光显微切割 微卫星不稳定性 免疫组织化学
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激光捕获显微切割技术结合^(18)O标记定量蛋白质组技术在胃癌标志物筛查中的应用研究 被引量：9
3
作者 张志强 李茂玉 +5 位作者 张桂英 彭芳 姚慧欣 李美香 肖志强 陈主初 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第3期311-322,共12页
建立一种更加精确地分离鉴定胃癌特异肿瘤标志物的定量蛋白质组学技术.首先采用激光捕获显微切割技术(LCM)纯化胃腺癌细胞及胃黏膜良性上皮细胞,将裂解的样本总蛋白经过1DSDS-PAGE预分离,然后采用18O/16O分别标记两种样本酶切后的多肽... 建立一种更加精确地分离鉴定胃癌特异肿瘤标志物的定量蛋白质组学技术.首先采用激光捕获显微切割技术(LCM)纯化胃腺癌细胞及胃黏膜良性上皮细胞,将裂解的样本总蛋白经过1DSDS-PAGE预分离,然后采用18O/16O分别标记两种样本酶切后的多肽混合物.结合纳升级液相色谱(Nano-HPLC-MS/MS)定量地鉴定胃癌细胞和胃黏膜良性上皮细胞的差异表达蛋白.共筛选出78个差异表达蛋白,其中42个蛋白质在胃癌组织中表达上调,36个蛋白质下调.Western blot技术验证了其中几个差异蛋白(moesin,periostin,annexin A2,annexin A4)的表达,与蛋白质组学研究的结果一致.LCM技术结合18O稳定同位素标记的定量蛋白质组学技术,为研究胃癌发生机制、筛选胃癌的分子标志物提供了新的思路,亦为诸如胃癌等复杂体系蛋白质的分离鉴定提供了新的技术选择. 展开更多
关键词 胃癌 激光捕获显微切割 定量蛋白质组学 18O标记
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激光捕获显微切割技术在植物基因组研究中的应用 被引量：6
4
作者 蔡民华 胡英考 +1 位作者 李雅轩 晏月明 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1325-1329,共5页
植物的生长和发育在很大程度上取决于组织和(或)器官特异表达的基因,但要获取某一发育阶段的特异细胞类群来进行基因表达分析又是相当困难的。近年发展起来的激光捕获显微切割技术可以在显微镜下快速准确地获取单一的细胞类群,甚至单个... 植物的生长和发育在很大程度上取决于组织和(或)器官特异表达的基因,但要获取某一发育阶段的特异细胞类群来进行基因表达分析又是相当困难的。近年发展起来的激光捕获显微切割技术可以在显微镜下快速准确地获取单一的细胞类群,甚至单个细胞,成功地解决了组织中细胞的异质性问题。介绍了该技术的原理,并对其在植物中的应用进展情况做了综述,同时指出了该技术在植物中应用的可能发展方向。 展开更多
关键词 激光捕获显微切割 基因表达分析 蛋白组 植物-微生物互作
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激光捕获显微切割技术用于分离混合斑中精子细胞 被引量：6
5
作者 刘芳 王静 +5 位作者 俞丽娟 郭剑章 高俊薇 焦章平 唐晖 刘雅诚 《法医学杂志》 CAS CSCD 2011年第1期33-35,42,共4页
目的评估激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)技术在分离混合斑中少量精子细胞的应用价值。方法配制不同比例的精液-阴道上皮细胞混合液,分别用差异裂解法和LCM法分离精子细胞,用磁珠法提取精子细胞DNA,并用Identifile... 目的评估激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)技术在分离混合斑中少量精子细胞的应用价值。方法配制不同比例的精液-阴道上皮细胞混合液,分别用差异裂解法和LCM法分离精子细胞,用磁珠法提取精子细胞DNA,并用IdentifilerTM试剂盒进行STR基因型检测。结果 LCM法分离精子细胞的STR成功率为92.86%(13/14),采用差异裂解法检测的成功率为7.14%(1/14),二者差异有统计学意义(P<0.05)。结论 LCM法可有效排除女性细胞成分的干扰,并捕获少量精子细胞得到单一的男性STR分型,显著优于差异裂解法。 展开更多
关键词 法医遗传学 精子细胞 混合斑 激光捕获显微切割技术
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激光捕获显微切割-单细胞PCR技术的应用研究 被引量：5
6
作者 匡晓燕 陈芳 +4 位作者 郭家林 陈倩 李龙萍 王全义 邓飞 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期464-466,共3页
目的建立一套优化的激光捕获显微切割一单细胞聚合酶链反应（Polymerase chain reaction，PCR）技术，应用于分子组织学研究中单细胞基因的检测。方法从淋巴结反应性增生冷冻组织切片中，应用激光捕获显微切割获取1～10个淋巴细胞，采... 目的建立一套优化的激光捕获显微切割一单细胞聚合酶链反应（Polymerase chain reaction，PCR）技术，应用于分子组织学研究中单细胞基因的检测。方法从淋巴结反应性增生冷冻组织切片中，应用激光捕获显微切割获取1～10个淋巴细胞，采用优化的单细胞PCR反应体系和条件进行β-珠蛋白基因检测。结果单轮常规PCR各组多细胞的扩增阳性率比较无显著性差异（P〉0．05），而单细胞的扩增阳性率低于各组多细胞，有显著性差异（P〈0．01）；半巢式降落式PCR的单细胞扩增阳性率高于单轮常规PCR，有显著性差异（P〈0．01）。结论联合应用优化的激光捕获显微切割及半巢式降落式PCR技术，显著提高了单细胞PCR的敏感性、特异性和稳定性。 展开更多
关键词 激光捕获显微切割 单细胞 半巢式降落式PCR
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运用激光捕获显微切割对肝细胞癌与肝内胆管癌蛋白质组的分析 被引量：4
7
作者 周福平 胡和平 +3 位作者 艾建华 陆豪杰 王红阳 吴孟超 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期1111-1114,共4页
目的:分析肝细胞癌和肝内胆管癌蛋白质的表达差异,获取鉴别两者的分子标志物。方法:通过激光捕获显微切割技术分离肝细胞癌和肝内胆管癌的纯细胞,通过双向电泳和质谱的方法检测两者表达的差异蛋白,再通过免疫组化染色的方法证实差异蛋... 目的:分析肝细胞癌和肝内胆管癌蛋白质的表达差异,获取鉴别两者的分子标志物。方法:通过激光捕获显微切割技术分离肝细胞癌和肝内胆管癌的纯细胞,通过双向电泳和质谱的方法检测两者表达的差异蛋白,再通过免疫组化染色的方法证实差异蛋白表达的情况。结果:肝细胞癌和肝内胆管癌图谱分别检测到(1124±110)、(938±90)个蛋白点。分析发现78个差异蛋白点,通过质谱鉴定出28个有意义的蛋白,20个蛋白仅在肝细胞癌表达或表达明显增高,8个蛋白仅在肝内胆管癌中表达或者高表达。同时免疫组化证实BK125H2.1在肝细胞癌中表达强阳性,而肝内胆管癌中缺失表达。结论:激光捕获显微切割是蛋白质组研究中的一个突破性的技术,可以有效地解决组织异质性的问题;本实验检测到的差异蛋白例如BK125H2.1可能成为鉴别肝细胞癌与肝内胆管癌特异性的分子标记物。 展开更多
关键词 癌 肝细胞 胆管肿瘤 蛋白质组 激光捕获显微切割
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导向激光捕获显微切割技术在贲门腺癌差异蛋白质组学的应用研究 被引量：4
8
作者 程妍 张军 +4 位作者 张蓉 刘冬 陈晓黎 谢丹红 龚均 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期557-561,564,共6页
目的建立一套适用于贲门腺癌差异蛋白质组学研究的导向激光捕获显微切割技术(navigated laser capture microdissection,NLCM)方法,并探讨其可行性。方法比较染色剂和固定剂对蛋白质影响的差异,探讨不同处理条件下贲门腺癌和癌旁组织切... 目的建立一套适用于贲门腺癌差异蛋白质组学研究的导向激光捕获显微切割技术(navigated laser capture microdissection,NLCM)方法,并探讨其可行性。方法比较染色剂和固定剂对蛋白质影响的差异,探讨不同处理条件下贲门腺癌和癌旁组织切片的镜下组织学特点,改进常规LCM,建立在染色切片指引下分离细胞的NLCM技术,并通过双向凝胶电泳分析对该技术进行评价。结果染色剂对蛋白质的影响大于700mL/L乙醇固定剂;光镜下在不染色的组织切片上,贲门腺癌细胞、肠化生细胞和正常柱状上皮细胞都有其各自的形态特异性,易于辨认;NLCM可以准确纯化贲门腺癌细胞、肠化生细胞和正常柱状细胞;LCM的苏木素染色贲门腺癌细胞(A组)、NLCM的无染色贲门腺癌细胞(B组)和未切割的新鲜贲门腺癌组织(C组)的双向电泳表达图谱非常相似。各组蛋白质点的数量之间差异无统计学意义(P>0.05)。A组碱性端蛋白等点聚焦较差,部分蛋白质点的表达量减低或消失,B组双向电泳表达图谱蛋白质点分离较好。结论 NLCM不但可以快速、准确地将贲门腺癌及其癌前病变细胞进行分离,而且有效避免了染色剂对蛋白质提取质量的影响,是一项适用于贲门腺癌蛋白质组学研究的样品制备方法。 展开更多
关键词 贲门腺癌 激光捕获显微切割 蛋白质组 双向凝胶电泳
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激光捕获显微切割技术纯化的鼻咽癌和正常鼻咽上皮细胞的比较蛋白质组学研究 被引量：6
9
作者 程爱兰 黄卫国 +8 位作者 张鹏飞 李茂玉 彭芳 李峰 李萃 易红 李美香 陈主初 肖志强 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第5期521-530,共10页
为筛选鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的分子标志物,采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)分别从NPC组织和正常鼻咽上皮组织(normal nasopharyngal epithelial tissue,NNET)中切割纯化NPC细胞和正常鼻... 为筛选鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的分子标志物,采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)分别从NPC组织和正常鼻咽上皮组织(normal nasopharyngal epithelial tissue,NNET)中切割纯化NPC细胞和正常鼻咽上皮细胞(normal nasopharyngal epithelial cells,NNEC),应用二维凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)分离LCM纯化细胞的蛋白质,图像分析识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和电喷雾电离串联质谱(ESI-Q-TOF-MS)鉴定差异蛋白质点,Western blot检测差异蛋白cytokeratin8(CK8)在LCM纯化的NPC细胞和NNEC以及具有不同分化程度或转移潜能的4株NPC细胞中的表达,免疫组织化学检测CK8在63例NPC、28例NNET及20例颈淋巴结转移NPC组织中的表达水平.建立了LCM纯化的NPC细胞和NNEC的2-DE图谱,质谱鉴定了29个差异蛋白质,其中15个蛋白质只在NPC表达或表达明显增高,14个蛋白质在NPC中表达下调或缺失;Western blot结果显示,CK8的表达水平在NPC中较NNET明显下调,并与NPC细胞株的分化程度和转移潜能有关;免疫组织化学结果显示,CK8在NPC组织中的表达较NNET明显下调,在颈淋巴结转移NPC中的表达较原发NPC明显上调.研究结果提示,CK8与NPC分化及淋巴结转移相关,有望成为预测NPC转移和区别NPC分化程度的分子标志物. 展开更多
关键词 激光捕获显微切割 鼻咽癌 蛋白质组学 二维凝胶电泳 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 电喷雾电离串联质谱 Western blot 免疫组织化学
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应用激光捕获显微切割技术纯化的鼻咽癌蛋白质表达谱的建立 被引量：4
10
作者 彭芳 汤参娥 +7 位作者 李茂玉 李萃 程爱兰 李峰 张鹏飞 李美香 肖志强 陈主初 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期481-486,共6页
目的:建立鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)蛋白质表达谱,为NPC蛋白质组学研究奠定基础。方法:应用激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)技术从NPC组织纯化NPC细胞,应用二维凝胶电泳(2-DE)分离LCM纯化NPC细胞的蛋... 目的:建立鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)蛋白质表达谱,为NPC蛋白质组学研究奠定基础。方法:应用激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)技术从NPC组织纯化NPC细胞,应用二维凝胶电泳(2-DE)分离LCM纯化NPC细胞的蛋白质,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定蛋白质,利用生物信息学资源构建NPC的2-DE蛋白质组数据库。结果:建立了NPC蛋白质2-DE参考图谱,2-DE图谱共显示(1312±30)个蛋白质点,共鉴定了427个蛋白质点,包括241个非冗余蛋白质,并构建了NPC的2-DE蛋白质组数据库,这些数据可从本实验室网站(http://www.xyproteomics.org)上进行查询。结论:首次建立了LCM纯化NPC细胞2-DE蛋白质表达谱,为NPC蛋白质组学研究提供了重要的信息和资料。 展开更多
关键词 鼻咽癌 蛋白质表达谱 蛋白质组数据库 激光捕获显微切割 二维凝胶电泳 质谱
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应用激光捕获显微切割和蛋白质组学技术筛选鼻咽癌的差异表达蛋白质 被引量：5
11
作者 易红 程爱兰 +7 位作者 黄卫国 张鹏飞 李茂玉 彭芳 李峰 李萃 陈主初 肖志强 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期375-383,共9页
目的:筛选鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的差异表达蛋白质,为寻找NPC的分子标志物提供科学依据。方法:采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)分别从NPC组织和正常鼻咽上皮组织(normal nasopharyngeal ep... 目的:筛选鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的差异表达蛋白质,为寻找NPC的分子标志物提供科学依据。方法:采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)分别从NPC组织和正常鼻咽上皮组织(normal nasopharyngeal epithelial tissue,NNET)中纯化NPC细胞和正常鼻咽上皮细胞(normal nasopharyngeal epithelial cells,NNEC),应用二维凝胶电泳(2-DE)分离LCM纯化细胞的蛋白质,图像分析识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和电喷雾电离串联质谱(ESI-Q-TOF-MS)鉴定差异蛋白质点,Western印迹和组织芯片(tissue microarray,TMA)免疫组织化学验证差异蛋白鳞状细胞癌抗原1(SCCA1)在两种组织中的表达水平。结果:建立了LCM纯化的NPC细胞和NNEC的2-DE图谱,质谱鉴定了36个差异蛋白质,其中20个蛋白只在NPC表达或表达上调,16个蛋白在NPC中表达下调或缺失。Western印迹和组织芯片免疫组织化学结果显示:SCCA1在NPC中的表达水平较NNET明显下调,与比较蛋白质组学结果一致。结论:36个差异蛋白可能与NPC的发病有关,为筛选NPC分子标志物奠定了基础。 展开更多
关键词 鼻咽癌 激光捕获显微切割技术 蛋白质组学 二维凝胶电泳 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 电喷雾电离串联质谱 免疫印迹 组织芯片
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激光捕获显微切割技术在石蜡切片中的应用 被引量：2
12
作者 王文勇 王娟红 +3 位作者 李袁飞 黄高昇 马福成 张志培 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期676-677,共2页
关键词 激光捕获显微切割 石蜡切片 福尔马林
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运用激光捕获显微切割对食管鳞状上皮癌蛋白质组的分析 被引量：2
13
作者 汪斌 李俊材 +1 位作者 傅仲学 董蒲江 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第19期1869-1872,共4页
目的分析食管鳞癌与正常食管上皮细胞蛋白质的表达差异,获取鉴别两者的分子标志物。方法激光捕获显微切割技术分离食管鳞癌和正常食管上皮细胞的纯细胞,双向电泳和质谱的方法检测两者表达的差异蛋白。结果48个差异蛋白点,通过质谱鉴定... 目的分析食管鳞癌与正常食管上皮细胞蛋白质的表达差异,获取鉴别两者的分子标志物。方法激光捕获显微切割技术分离食管鳞癌和正常食管上皮细胞的纯细胞,双向电泳和质谱的方法检测两者表达的差异蛋白。结果48个差异蛋白点,通过质谱鉴定出20种有意义的蛋白,其中11种蛋白如galectin7、14-3-3proteinε等在食管鳞癌细胞表达明显增高,9种蛋白如MTCBP-1等表达下调。结论激光捕获显微切割可以有效地解决组织异质性的问题;食管鳞癌和正常食管上皮细胞的2-DE蛋白质图谱具有明显的差异表达,提示食管鳞癌的发生是多种蛋白质功能共同作用的结果。 展开更多
关键词 食管鳞癌 蛋白质组 激光捕获显微切割
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激光捕获显微切割技术检测卵巢癌组织中EphA2受体的表达 被引量：2
14
作者 韩丽萍 乔玉环 +2 位作者 董子明 Jahn M.Nesland 索振河 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2009年第2期368-371,共4页
目的:检测卵巢癌组织中EphA2受体mRNA及蛋白的表达水平。方法:应用激光捕获显微切割技术(LCM)辅助的一步RT-PCR及Western blot方法检测30例卵巢癌组织中EphA2受体mRNA及蛋白的表达水平。结果:LCM成功地将卵巢癌细胞从卵巢癌冰冻组织切... 目的:检测卵巢癌组织中EphA2受体mRNA及蛋白的表达水平。方法:应用激光捕获显微切割技术(LCM)辅助的一步RT-PCR及Western blot方法检测30例卵巢癌组织中EphA2受体mRNA及蛋白的表达水平。结果:LCM成功地将卵巢癌细胞从卵巢癌冰冻组织切片中分离。RT-PCR结果显示,卵巢癌组织中有不同级别的EphA2受体mRNA表达,mRNA表达与卵巢癌患者的年龄、FIGO分期、组织学类型、组织分化程度以及残余肿瘤大小均无关(P>0.05)。Western blot结果显示EphA2受体表达与mRNA表达水平一致。结论:LCM能够精确分离少量卵巢癌细胞;卵巢癌组织中有不同级别的EphA2受体mRNA及蛋白质表达。 展开更多
关键词 EPHA2 激光捕获显微切割 卵巢肿瘤
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激光捕获显微切割技术纯化的肺鳞癌原发灶与淋巴结转移灶肿瘤细胞的比较蛋白质组学 被引量：2
15
作者 邓瑰 李丹娟 +6 位作者 肖志强 李萃 姚慧欣 彭芳 李茂玉 张鹏飞 陈主初 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1182-1188,共7页
目的:筛选肺鳞癌淋巴结转移相关的蛋白质。方法:采用激光捕获显微切割技术(lasercapture microdissection,LCM)分别从肺鳞癌原发灶组织和匹配的淋巴结转移灶癌组织中切割纯化鳞癌细胞;应用二维凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis... 目的:筛选肺鳞癌淋巴结转移相关的蛋白质。方法:采用激光捕获显微切割技术(lasercapture microdissection,LCM)分别从肺鳞癌原发灶组织和匹配的淋巴结转移灶癌组织中切割纯化鳞癌细胞;应用二维凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)分离LCM纯化细胞的蛋白质;图像分析识别差异表达的蛋白质点;基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定差异蛋白质点,Western印迹验证差异蛋白Rho-GDIα在LCM纯化的肺鳞癌原发灶肿瘤细胞(lung primary tumor cells,LPTC)和匹配的淋巴结转移灶肿瘤细胞(lymph node metastatic tumor cells,LNMTC)中的表达。结果:建立了LCM纯化的LPTC和匹配的LNMTC的2-DE图谱,质谱鉴定了22个差异蛋白质,与LPTC相比,8个蛋白质在LNMTC中表达明显增高。结论:22个差异蛋白可能与肺鳞癌淋巴结转移有关,为筛选肺鳞癌转移标志物奠定了基础。 展开更多
关键词 肺鳞癌 肿瘤转移 蛋白质组学 激光捕获显微切割 二维凝胶电泳 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
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应用激光捕获显微切割技术制备肺癌蛋白质组学研究样品 被引量：2
16
作者 田应选 南岩东 杨拴盈 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期598-600,F0004,共4页
目的探讨应用激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)技术获取高同质性肺癌组织细胞及正常对照肺泡上皮细胞的方法及可行性。方法将新鲜肺癌组织标本及其配对正常组织常规制备8μm冰冻切片,采用改良的HE方法染色;应用LCM... 目的探讨应用激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)技术获取高同质性肺癌组织细胞及正常对照肺泡上皮细胞的方法及可行性。方法将新鲜肺癌组织标本及其配对正常组织常规制备8μm冰冻切片,采用改良的HE方法染色;应用LCM技术大宗切割肺鳞癌、腺癌及正常对照肺泡上皮细胞;选择性获取同质肺癌细胞和配对正常细胞。结果通过LCM技术可以准确、快速地分离癌细胞、间质及其他坏死组织,得到同质性不低于95%的肿瘤细胞和正常细胞。按照Duration 15.5 s的激光脉冲频率和平均8 000 shots条件,既可保证每个帽子的细胞收集数量,也能够有效地缩短实验时间,提高实验可控性,从而使操作过程标准化。结论应用LCM技术可以成功获取同质肺癌细胞和正常细胞。其所需标本量少、组织同质性高、操作过程稳定、可控性好,是肺癌分子生物学及蛋白质组学研究有价值的样品制备方法。 展开更多
关键词 激光捕获显微切割 肺癌组织 蛋白质组学
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一种简易可行的激光捕获显微切割样本RNA质控方法 被引量：1
17
作者 田英芳 魏朝明 +7 位作者 陈新林 邱芬 肖新莉 康前雁 朱波峰 田玉梅 张军峰 刘勇 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1782-1785,共4页
目的建立一种简易可行的激光捕获显微切割样本RNA质控方法。方法分别提取捕获样本和染色前、染色后1和2h、持续捕获1和2h切片及残余组织的RNA,琼脂糖电泳检测;激光捕获显微切割(LCM)样本RNA的产率可通过理论值初步估计。结果当染色前后... 目的建立一种简易可行的激光捕获显微切割样本RNA质控方法。方法分别提取捕获样本和染色前、染色后1和2h、持续捕获1和2h切片及残余组织的RNA,琼脂糖电泳检测;激光捕获显微切割(LCM)样本RNA的产率可通过理论值初步估计。结果当染色前后、捕获后的切片或切片残余组织RNA质量完好时,捕获样本的RNA质量完好,实时定量PCR亦获得了良好的扩增结果。结论使用琼脂糖凝胶电泳分别检测染色前后、捕获后的切片或切片残余组织RNA的质量,可以从不同的环节和过程对捕获样本RNA进行间接检测,该方法简单方便有效,并可进一步用于LCM样本蛋白质及DNA等大分子的质控。 展开更多
关键词 激光捕获显微切割 RNA质控 琼脂糖凝胶电泳
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激光捕获显微切割技术在食管鳞癌蛋白质组学研究中的应用 被引量：1
18
作者 李俊材 傅仲学 +4 位作者 汪斌 周建荣 白晓苏 董蒲江 黄开顺 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第2期121-124,共4页
目的:探讨激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection system,LCM)在获得较单一食管鳞癌细胞中的价值,为食管癌组织蛋白质组学的研究奠定基础。方法:通过激光捕获显微切割技术获取食管鳞癌和正常食管上皮细胞,采用双向凝胶电... 目的:探讨激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection system,LCM)在获得较单一食管鳞癌细胞中的价值,为食管癌组织蛋白质组学的研究奠定基础。方法:通过激光捕获显微切割技术获取食管鳞癌和正常食管上皮细胞,采用双向凝胶电泳方法分离蛋白质,采用计算机辅助的图像分析技术比较分析凝胶图像。结果:激光捕获了较纯的目的细胞,获得到了分辨率和重复性较好的双向凝胶电泳图谱,比较分析发现38个蛋白点的表达量存在明显差异,其中新增蛋白点3个,缺失5个,20个蛋白点明显上调,10个蛋白点发生明显下调。结论:本研究结果提示LCM技术能较好地获取较为均一的目的细胞,并发现食管鳞癌与正常食管上皮细胞蛋白质表达存在明显差异,可能与食管鳞癌发生机制有关。 展开更多
关键词 癌 食管癌 蛋白质组 激光捕获显微切割
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激光捕获显微切割技术纯化的人支气管上皮癌变各阶段组织的定量蛋白质组学研究 被引量：1
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作者 曾谷清 程爱兰 +4 位作者 易红 李茂玉 李国庆 李建玲 廖力 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2013年第6期538-547,共10页
为分析支气管上皮癌变进程中的差异表达蛋白质,筛选肺鳞癌早期诊断标志物,以人支气管上皮癌变各阶段组织为研究对象,先采用激光捕获显微切割技术(LCM)纯化人正常支气管上皮组织、鳞状化生、不典型增生、原位癌、浸润性肺鳞癌组织,再用... 为分析支气管上皮癌变进程中的差异表达蛋白质,筛选肺鳞癌早期诊断标志物,以人支气管上皮癌变各阶段组织为研究对象,先采用激光捕获显微切割技术(LCM)纯化人正常支气管上皮组织、鳞状化生、不典型增生、原位癌、浸润性肺鳞癌组织,再用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术结合二维液相色谱串联质谱(2D LC-MS/MS)鉴定支气管上皮癌变进程中各阶段的差异表达蛋白质.结果共鉴定了1 036个蛋白质,筛选出102个与人支气管上皮癌变相关的差异蛋白质,在这些差异蛋白质中,有的在支气管上皮癌变过程中进行性上调,有的在支气管上皮癌变过程中进行性下调,有的呈阶段特异性改变.功能分析表明,这些差异蛋白质涉及代谢、细胞凋亡、增殖、分化、信号传导、转录、翻译、细胞黏附、免疫反应与发育等.Western blotting及免疫组织化学技术验证了其中2个差异蛋白(S100A9和CKB)的表达,证实了定量蛋白质组学结果的可靠性.研究结果提示:这些差异表达蛋白质与支气管上皮癌变相关,并可成为肺鳞癌的早期诊断标志物,进一步研究差异蛋白质的生物学功能,将有助于阐明支气管上皮的癌变机制,从而为肺鳞癌的早期诊断与发病机制研究提供新思路. 展开更多
关键词 人支气管上皮癌变 肺鳞癌 生物标志物 激光捕获显微切割技术 同位素标记相对和绝对定量
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基因芯片联合激光捕获显微切割技术在脊髓背根神经节基因表达研究中的应用 被引量：1
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作者 徐敏 贾建平 +5 位作者 耿志伟 宋珏娴 吴忧 李浩 刘璐 刘芳艳 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2009年第4期516-520,共5页
目的探索联合激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)与基因芯片技术在大鼠脊髓背根神经节的感觉神经元基因表达研究中的可行性。方法取大鼠L4、L5、L6节段脊髓背根神经节,用LCM技术获取神经细胞,提取总RNA,甲醛变性凝胶... 目的探索联合激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)与基因芯片技术在大鼠脊髓背根神经节的感觉神经元基因表达研究中的可行性。方法取大鼠L4、L5、L6节段脊髓背根神经节,用LCM技术获取神经细胞,提取总RNA,甲醛变性凝胶电泳鉴定RNA质量,检测纯度和产量,并以实时RT-PCR方法进行验证。结果总RNA的完整性较好,经单轮T7线性扩增后得到足量的aRNA,可用于实时RT-PCR研究和进一步基因芯片杂交实验。结论结合有效的RNA保护方法和线性扩增,LCM可以分离出纯净的背根神经节的感觉神经元,满足下游基因芯片研究的要求。 展开更多
关键词 基因表达 激光捕获显微切割 背根神经节
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