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三种ELISA试剂盒检测猪流行性乙型脑炎病毒血清IgG抗体比较 被引量：7
1
作者 马淑娟 熊益权 +7 位作者 张琼花 周军华 李杏 郑雪燕 蒋丽娜 钟雪珊 陈少威 陈清 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期423-426,共4页
目的比较国内常用商品化ELISA试剂盒检测猪流行性乙型脑炎病毒血清IgG抗体的诊断效果。方法选用3种猪乙脑病毒血清IgG抗体ELISA检测试剂盒(Keqian,Lvshiyuan,Tianchen),以微量中和试验为金标准,对90份猪血清进行检测分析。结果中和试验... 目的比较国内常用商品化ELISA试剂盒检测猪流行性乙型脑炎病毒血清IgG抗体的诊断效果。方法选用3种猪乙脑病毒血清IgG抗体ELISA检测试剂盒(Keqian,Lvshiyuan,Tianchen),以微量中和试验为金标准,对90份猪血清进行检测分析。结果中和试验的阳性检出率为34.4%(31/90),Keqian,Lvshiyuan和Tianchen阳性检出率分别为50.0%(45/90),47.8%(43/90)和38.9%(35/90)。灵敏度最高的是Keqian,为90.32%,但其特异度只有71.19%;Tianchen的灵敏度和特异度分别为83.87%和79.66%;Lvshiyuan的灵敏度和特异度分别仅为41.94%和16.95%。与中和试验比较,Tianchen试剂盒的κ系数最高为0.63,其次是Keqian为0.57,Lvshiyuan仅为0.04。显示3种试剂盒具稳定性。结论目前国内商品化猪乙脑病毒血清IgG抗体ELISA检测试剂盒诊断结果差异较大,与中和试验相比存在较高的假阴性,质量有待提高。 展开更多
关键词 猪 血清 流行性乙型脑炎病毒抗体 酶联免疫吸附试验 试剂盒
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猪流行性乙型脑炎的诊断与防治
2
作者 杨晓静 《吉林畜牧兽医》 2025年第5期10-12,共3页
猪乙型脑炎病是由流行性乙型脑炎病毒引起的人畜共患病,是导致母猪繁殖障碍和公猪睾丸炎等较高发病率的主要原因之一,本文从该病的发病原因、病原、流行病学、临床症状、病理变化和实验室诊断方法进行论述,并提出了治疗方案和防控措施。
关键词 猪流行性乙型脑炎 诊断 防治
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猪流行性乙型脑炎诊断与防治
3
作者 陈大邦 《今日畜牧兽医》 2025年第3期86-88,共3页
流行性乙型脑炎作为一种人兽共患的自然疫源性疾病,对公共卫生安全构成威胁。本文旨在探讨猪流行性乙型脑炎的诊断与防治方法。通过病原学特点分析、流行病学特征调查、发病机制研究及监测预警系统建立,提出了基于生物安全管理的防控策... 流行性乙型脑炎作为一种人兽共患的自然疫源性疾病,对公共卫生安全构成威胁。本文旨在探讨猪流行性乙型脑炎的诊断与防治方法。通过病原学特点分析、流行病学特征调查、发病机制研究及监测预警系统建立,提出了基于生物安全管理的防控策略。研究发现,严格的入场检疫和猪场内部生物安全防护网能有效降低疫病风险。结论表明,猪流行性乙型脑炎的防控关键在于阻断病毒传播途径。 展开更多
关键词 猪流行性乙型脑炎 生物安全管理 病毒传播阻断
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猪流行性乙型脑炎的诊断与防治
4
作者 田玉娇 《畜禽业》 2025年第3期81-84,共4页
猪流行性乙型脑炎是一种人畜共患的自然疫源性疾病,蚊子是该病病毒传播的主要媒介,猪是主要储存宿主与扩散宿主,一旦出现疫情,将引发较大的养殖风险。在此背景下,详细探讨了猪流行性乙型脑炎病的病原、流行病学、致病机理、临床症状与... 猪流行性乙型脑炎是一种人畜共患的自然疫源性疾病,蚊子是该病病毒传播的主要媒介,猪是主要储存宿主与扩散宿主,一旦出现疫情,将引发较大的养殖风险。在此背景下,详细探讨了猪流行性乙型脑炎病的病原、流行病学、致病机理、临床症状与病理变化,并总结了该病的科学诊断方法。最后,提出了猪流行性乙型脑炎病的防治建议。以期为有关人士提供参考,推动我国猪流行性乙型脑炎病的规范化、科学化防治。 展开更多
关键词 猪流行性乙型脑炎 诊断 防治技术
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流行性乙型脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒和寨卡病毒四重LuminexxTAG检测方法的建立与应用 被引量：1
5
作者 孙俊颖 伍绮文 +4 位作者 李吉初 李春红 郭鹏举 黄艺 尹飞飞 《广东农业科学》 CAS 2024年第10期78-87,共10页
【目的】黄病毒科虫媒病毒引起的人畜共患传染病对我国畜牧业及公共卫生造成严重影响。虫媒病毒种类多且感染症状相似,临床监测工作繁重,建立4种危害严重的黄病毒科虫媒病毒快速、高通量检测技术为其诊断和流行病学监测提供技术支撑。... 【目的】黄病毒科虫媒病毒引起的人畜共患传染病对我国畜牧业及公共卫生造成严重影响。虫媒病毒种类多且感染症状相似,临床监测工作繁重,建立4种危害严重的黄病毒科虫媒病毒快速、高通量检测技术为其诊断和流行病学监测提供技术支撑。【方法】利用Luminex xTAG技术,针对流行性乙型脑炎病毒(JEV)5'UTR、西尼罗病毒(WNV)5'UTR及部分C基因、黄热病毒(YFV)5'UTR和寨卡病毒(ZIKV)NS5基因保守区,设计4对特异性引物并对引物进行TAG和Biotin修饰,以标准毒株为模板,进行多重PCR扩增;将扩增产物与带有反向TAG序列的不同编号荧光MagTAG磁珠、链霉亲和素R-藻红蛋白进行核酸杂交反应,利用Luminex 200系统检测磁珠荧光信号和藻红蛋白荧光信号,对病原进行分类和定量检测。【结果】建立了能特异性检测JEV、WNV、YFV和ZIKV的四重Luminex xTAG方法,其最优引物工作浓度为0.5、0.5、0.75、0.5µmol/L;杂交工作体系为磁珠工作液20μL、PCR扩增产物5μL、SAPE报告缓冲液75μL;杂交温度为37℃,杂交时间为30 min,pH值为8.0;该检测方法特异性好且不与登革病毒等其他虫媒病毒发生交叉反应。重复性试验结果表明,Luminex xTAG方法的批内变异系数为2.50%~5.63%,批间变异系数为3.61%~12.50%。四重Luminex xTAG方法对JEV和ZIKV的检测限为1×10^(4) copies/μL,对WNV和YFV的检测限为1×10^(3)copies/μL,其检测WNV、YFV和ZIKV的灵敏度较常规PCR高10~100倍。用Luminex xTAG方法和RT-qPCR方法检测209份临床样品和模拟样品,JEV、WNV、YFV、ZIKV符合率为100%。【结论】建立的四重Luminex xTAG方法具有高通量、高特异性和灵敏度、成本效益高的优点,可为虫媒病毒临床诊断和流行病学监测提供一种高通量技术手段。 展开更多
关键词 虫媒病毒 流行性乙型脑炎病毒 西尼罗病毒 黄热病毒 寨卡病毒 液相芯片 LuminexxTAG技术
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流行性乙型脑炎患者血清IgG抗体对乙脑病毒蛋白的识别 被引量：8
6
作者 余福勋 吴振溢 +7 位作者 曾贵金 李林村 李林红 郭万申 张彦平 王文周 杨家强 高金城 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1998年第1期27-29,共3页
目的：了解流行性乙型脑炎病毒各蛋白成分在刺激机体免疫应答方面所起的作用，给亚单位疫苗研制提供理论依据，进行该项研究。方法：建立乙脑病毒免疫转印方法，应用该法检查乙脑病人血清IgG抗体对乙脑病毒蛋白的反应情况，分析正常人... 目的：了解流行性乙型脑炎病毒各蛋白成分在刺激机体免疫应答方面所起的作用，给亚单位疫苗研制提供理论依据，进行该项研究。方法：建立乙脑病毒免疫转印方法，应用该法检查乙脑病人血清IgG抗体对乙脑病毒蛋白的反应情况，分析正常人群中筛选出的乙脑病毒隐性感染者血清IgG对乙脑病毒蛋白的反应性，并比较二者的差异。结果：经检测，绝大部分病人血清IgG可识别E蛋白，部分病人尚可识别NS5，NS3，NS1蛋白，而隐性感染者血清IgG对98kd（NS5）乙脑病毒蛋白的反应性显著低于乙脑患者。结论：研究结果显示，E蛋白是乙脑病人血清IgG识别的主要蛋白，在免疫保护方面起着主要作用。隐性感染者对NS5蛋白的反应机率明显低于显性感染者，提示NS5蛋白在乙脑病毒的致病过程中起重要作用。 展开更多
关键词 流行性乙型脑炎 IGG抗体 免疫转印
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抗流行性乙型脑炎病毒药物的研究进展 被引量：13
7
作者 蔡雨函 朱玲 +2 位作者 周远成 杨文宇 徐志文 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期77-82,共6页
流行性乙型脑炎(Japanese Encephalitis,JE)是由黄病毒科(Flaviridae)黄病毒属(Flavivirus)流行性乙型脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus,JEV)引起的,在自然界中主要以猪为宿主,经蚊传播的一种蚊媒性人兽共患传染病。该病主要流行... 流行性乙型脑炎(Japanese Encephalitis,JE)是由黄病毒科(Flaviridae)黄病毒属(Flavivirus)流行性乙型脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus,JEV)引起的,在自然界中主要以猪为宿主,经蚊传播的一种蚊媒性人兽共患传染病。该病主要流行于亚洲及西太平洋地区,严重威胁着人类健康,已成为人类脑炎疾病最主要的病因之一,并影响养猪业的发展,引起了世界性的广泛关注,因此,流行性乙型脑炎的防治研究有着重要的实际应用意义。到目前为止,尚无治疗流行性乙型脑炎特效药面市,但对抗流行性乙型脑炎病毒药物的研究已有一定的进展,而我国在这方面的系统介绍较少,本文就近10年来抗流行性乙型脑炎药物及其作用机制的研究进展做一综述,旨在为流行性乙型脑炎的预防和治疗提供参考。 展开更多
关键词 流行性乙型脑炎 抗病毒 药物
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猪伪狂犬病、猪细小病毒病和猪流行性乙型脑炎检测基因芯片的制备及检测方法研究 被引量：16
8
作者 张焕容 曹三杰 +1 位作者 文心田 肖驰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期796-801,共6页
对猪伪狂犬病(Pseudorabies virus,PRV)、猪细小病毒病(Porcine parvovirus,PPV)和猪流行性乙型脑炎(Japanese encephalitis virus,JEV)检测基因芯片的制备及该芯片的检测方法进行了研究。试验克隆和鉴定了16个芯片靶基因,经筛选,取其... 对猪伪狂犬病(Pseudorabies virus,PRV)、猪细小病毒病(Porcine parvovirus,PPV)和猪流行性乙型脑炎(Japanese encephalitis virus,JEV)检测基因芯片的制备及该芯片的检测方法进行了研究。试验克隆和鉴定了16个芯片靶基因,经筛选,取其中13个靶基因PRV gB、gG、TK和gE;PPV NS2、NS3、VP1和VP2以及JEV C、PrM/M、E、NS1和NS5制备PRV、PPV和JEV检测基因芯片,基因芯片点样系统SpotArrayTM 24将靶基因点样于氨基化玻片表面,靶基因最佳点样浓度为200 ng/μL,探针扩增标记反应体系中,Cy3-dCTP使用终浓度为2.5μmol/L,芯片杂交温度可在44℃～60℃之间任意选择。以PRRSV、CSFV、PCV1、PCV2、TGEV、HPS、PAP、E.coli和S.pp菌毒株DNA或CDNA为模板标记制备的探针均不与PRV、PPV、和JEV检测基因芯片杂交,芯片检测的灵敏度为3 pg/μL,芯片批间重复性好,同一张芯片可进行至少10次的重复杂交。该方法对8株PRV、5株PPV和JEV SA14-14-2单独或混合样品检测均为阳性,可区分伪狂犬病病毒野毒和基因缺失疫苗毒,对20份临床样品单独或混合感染的检出率分别为:单独感染PRV检出率15%(3/20),PPV 5%(1/20),JEV 0%(0/20);PRV和PPV混合感染检出率15%(3/20),PRV和JEV混合感染检出率5%(1/20),JEV和PPV混合感染检出率5%(1/20),三者混合感染的检出率5%(1/20)。与PRV、PPV和JEV多重PCR检测方法比较,芯片检测的灵敏度大大提高,同时可区分PRV野毒和基因缺失疫苗毒,对20份临床样品的检出率一致。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病 猪细小病毒病 猪流行性乙型脑炎 基因芯片 制备 检测方法
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蝙蝠作为流行性乙型脑炎病毒宿主的研究 被引量：16
9
作者 张海林 张云智 +11 位作者 黄文丽 米竹青 龚鹤琴 杨卫红 施华芳 自登云 李兆祥 王静林 章域震 龚正达 袁庆虹 冯锡光 《动物医学进展》 CSCD 2002年第5期58-61,共4页
于 1 98 6、1 988、1 990和 1 997年的 7-8月 ,在云南省共捕获 653只蝙蝠 ,其中棕果蝠( Rousettus leschenaulti) 593只 ,金管鼻蝠( Murina aurata) 60只 ,采集血清及剖取脑组织作病毒分离和抗体检查。用细胞法和乳鼠法分离到 6株病毒 ... 于 1 98 6、1 988、1 990和 1 997年的 7-8月 ,在云南省共捕获 653只蝙蝠 ,其中棕果蝠( Rousettus leschenaulti) 593只 ,金管鼻蝠( Murina aurata) 60只 ,采集血清及剖取脑组织作病毒分离和抗体检查。用细胞法和乳鼠法分离到 6株病毒 ,带毒率为 0 .96% ,其中从捕自景洪的棕果蝠脑组织中分离到 3株 ,从河口的棕果蝠血清中分离到 2株 ,从捕自耿马的金管鼻蝠脑组织中分离出 1株。棕果蝠和金管鼻蝠的带毒率分别为 0 .84%和 1 .67%。这 6株病毒能引起 C6/ 3 6和 BHK2 1细胞病变和导致乳小白鼠或 3～ 4周龄小白鼠发病和死亡 ,并具有典型的嗜神经病毒感染症状。经血凝抑制、补体结合、免疫荧光和中和试验鉴定 ,新分离的 6株病毒均为乙脑病毒 ( JE virus)。同期用血凝抑制试验对采获的 42 5份棕果蝠血清作乙脑病毒抗体检查 ,阳性 1 53份 ,阳性率为 3 6% ,具有较高的感染率。本次从棕果蝠和金管鼻蝠体内分离出乙脑病毒属具有重要流行病学意义。 展开更多
关键词 蝙蝠 流行性乙型脑炎病毒 宿主
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猪流行性乙型脑炎病毒种猪精液分离株的鉴定及进化分析 被引量：10
10
作者 王兴涛 罗俊 +5 位作者 滕蔓 樊剑鸣 鄂巍 禹斌 刘力 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2011年第5期152-157,共6页
利用RT-PCR技术对河南省某规模化猪场乙脑疑似病例的种猪精液进行分析,从部分样本中扩增出与流行性乙型脑炎病毒(JEV)M基因和E基因具有高度同源性的预期产物。在3日龄乳鼠脑内接种种猪精液上清,10 d左右即出现典型神经症状,并且病死鼠... 利用RT-PCR技术对河南省某规模化猪场乙脑疑似病例的种猪精液进行分析,从部分样本中扩增出与流行性乙型脑炎病毒(JEV)M基因和E基因具有高度同源性的预期产物。在3日龄乳鼠脑内接种种猪精液上清,10 d左右即出现典型神经症状,并且病死鼠脑组织RT-PCR结果均为阳性。用病死鼠脑组织研磨上清接种BHK-21细胞,感染60 h后用JEV单抗进行间接免疫荧光鉴定均为阳性,这表明分离毒株均为JEV流行毒株,分别命名为BSF.ZZ-1和BSF.ZZ-3。对新分离毒株进行体外细胞培养,BSF.ZZ-1和BSF.ZZ-3连续传代3次后病毒量均获得明显增加,最高分别可达104.5±0.1TCID50/mL和104.2±0.2TCID50/mL。用生物学软件MEGA 4.0分别构建JEV基因的系统进化树,发现BSF.ZZ-1和BSF.ZZ-3处于同一进化分支,均属于基因Ⅲ型。 展开更多
关键词 流行性乙型脑炎病毒 分离鉴定 M基因 E基因 系统进化树 基因Ⅲ型
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中国首次分离的二株基因Ⅰ型流行性乙型脑炎病毒全基因组序列分析（英文） 被引量：5
11
作者 冯云 李灿委 +2 位作者 章域震 杨卫红 张海林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期829-835,共7页
目的分析中国首次分离的基因Ⅰ型流行性乙型脑炎病毒(JEV)全基因组的基因组特征。方法设计JEV全基因组扩增引物,RT-PCR扩增片断,PCR产物直接测序,拼接后获得全基因组序列。采用生物学软件进行同源性和系统进化分析。结果 1977和1982年... 目的分析中国首次分离的基因Ⅰ型流行性乙型脑炎病毒(JEV)全基因组的基因组特征。方法设计JEV全基因组扩增引物,RT-PCR扩增片断,PCR产物直接测序,拼接后获得全基因组序列。采用生物学软件进行同源性和系统进化分析。结果 1977和1982年分离自云南蚊虫的M28和BN82215病毒株基因组全长分别为10 969bp和10 970bp,5′非编码区均含有96个核苷酸,3′非编码区含有573和574个核苷酸。它们的开放阅读框(ORF)都从97到10 396位,共10 299个核苷酸,编码3 433个氨基酸。M28和BN82215株与来自GenBank的5个基因型JEV株的全基因组核苷酸和氨基酸同源性分别为78.4%~96.3%和91.4%~99.6%,与近几年国内外基因Ⅰ型流行株的同源性最高,进化关系最接近,都属于基因Ⅰ型。这两株病毒与JEV疫苗株SA14-14-2相比,有56个氨基酸差异,其中E基因有11个氨基酸差异,但都不属抗原关键位点。结论本研究阐明了中国首次分离的基因Ⅰ型JEV的全基因组分子特征,决定病毒抗原和毒力的E蛋白关键位点无明显变化。证实20世纪70和80年代云南省就有基因Ⅰ型JEV流行。 展开更多
关键词 流行性乙型脑炎病毒 基因Ⅰ型 全基因组 同源性分析 系统进化分析
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上海市猪感染流行性乙型脑炎病毒的血清学监测 被引量：13
12
作者 沈冰 丁玎 +4 位作者 沈蕊华 朱小珍 柳炜 徐大麟 徐志一 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第4期115-116,共2页
关键词 猪 流行性乙型脑炎 血清学监测
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儿童流行性乙型脑炎血清和脑脊液抗体检测的研究 被引量：6
13
作者 黄延风 朱朝敏 +1 位作者 赵瑞秋 张爱华 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2002年第4期456-457,共2页
目的：探讨流行性乙型脑炎时血清和脑脊液乙脑抗体IgM（抗JEV-IgM）检测的诊断价值。方法：采用抗体捕获法测定182例乙脑住院病人血清和脑脊液抗JEV-IgM，并分析它与病程、年龄、病型的关系。结果：乙脑病人血清和脑脊液抗JEV-IgM检出... 目的：探讨流行性乙型脑炎时血清和脑脊液乙脑抗体IgM（抗JEV-IgM）检测的诊断价值。方法：采用抗体捕获法测定182例乙脑住院病人血清和脑脊液抗JEV-IgM，并分析它与病程、年龄、病型的关系。结果：乙脑病人血清和脑脊液抗JEV-IgM检出的阳性率分别为61.87%、86.67%，且后者明显高于前者（P<0.005）；不同病程、年龄、病型血清和脑脊液抗JEV-IgM的阳性率无显著差异（P>0.05）。结论：用抗体捕获法检测血清和脑脊液抗JEV-IgM对流行性乙型脑炎有早期诊断的价值，且该方法特异性高、敏感性强。 展开更多
关键词 儿童 流行性乙型脑炎 血清 脑脊液 抗体 检测
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流行性乙型脑炎病毒SA14-14-2株E蛋白基因在原核细胞中的高效表达及其表达产物的抗原性分析 被引量：6
14
作者 杨耀武 齐香荣 +3 位作者 陈德胜 何孔旺 陈溥言 沈国顺 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第5期31-35,共5页
目的　获得JEVE蛋白基因并使其在E coli中高效表达 ,以研究其抗原活性 ,为进一步研制ELISA早期诊断试剂盒奠定基础。方法　根据已发表的JEVSA - 14 - 14 - 2减毒株序列 ,设计一对特异性引物 ,通过RT -PCR扩增出E蛋白基因的cDNA片段 ,并... 目的　获得JEVE蛋白基因并使其在E coli中高效表达 ,以研究其抗原活性 ,为进一步研制ELISA早期诊断试剂盒奠定基础。方法　根据已发表的JEVSA - 14 - 14 - 2减毒株序列 ,设计一对特异性引物 ,通过RT -PCR扩增出E蛋白基因的cDNA片段 ,并将其克隆入 pET - 32a(+)表达载体中 ,构建重组融合表达载体pET -E ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3)后 ,利用IPTG诱导获得高效表达。结果　扩增的E蛋白基因片段长 1113bp ,编码 371个氨基酸残基 ,该基因片段与国内发表的减毒株SA14 - 14 - 2碱基序列同源性为 10 0 %。表达产物分子量约为 6 2kD ,经Westernblotting分析表明表达产物具有较好的抗原性。结论　通过序列分析表明 ,我国的JEVSA - 14 - 14 - 2减毒株未发生基因突变。表达产物的稳定高效表达及其抗原特异性分析为今后ELISA早期诊断试剂盒的研制提供了依据。 展开更多
关键词 流行性乙型脑炎病毒 SA14-14-2株 E蛋白 基因表达 原核细胞 抗原性 基因克隆
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流行性乙型脑炎病毒E蛋白结构域Ⅲ的抗原表位鉴定与功能研究 被引量：8
15
作者 闫丽萍 华荣虹 +1 位作者 亓文宝 童光志 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第3期341-348,共8页
流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒.表面囊膜蛋白(E蛋白)是该病毒的主要结构蛋白.E蛋白在介导病毒与宿主细胞的吸附、融合,决定病毒的血凝活性、细胞嗜性以及决定病毒毒力和诱导宿... 流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒.表面囊膜蛋白(E蛋白)是该病毒的主要结构蛋白.E蛋白在介导病毒与宿主细胞的吸附、融合,决定病毒的血凝活性、细胞嗜性以及决定病毒毒力和诱导宿主产生保护性免疫反应中起重要作用.E蛋白结构域Ⅲ(EⅢ)是诱导中和抗体的重要区域.为确定乙型脑炎EⅢ的抗原表位,实验首先克隆了JEV疫苗株SA14-14-2的EⅢ区域,并用pGEX-6P-1载体进行融合表达,免疫印迹分析表明,该融合蛋白能被抗JEV血清识别.为了进一步对该结构域进行抗原表位作图,设计了14个覆盖该区域且部分重叠的短肽.将各短肽与GST进行融合表达与纯化.短肽融合蛋白经JEV阳性血清免疫印迹和ELISA免疫反应性扫描分析,结果鉴定出,E39(305TEKFSFAKNPVDTGHG320)、E45-1(355VTVNPFVATSSA366)、E48-1(377PFGDSYIV384)和E49(385VGRGDKQINHHWHKAG400)4个线性抗原表位.分别将4个抗原表位融合蛋白免疫小鼠,制备各抗原表位单因子血清,结果经体外病毒中和试验表明,E39为具有病毒中和活性的抗原表位.试验结果为进一步分析JEVE蛋白结构与功能以及诊断试剂和表位疫苗的研究提供了重要工作基础. 展开更多
关键词 流行性乙型脑炎 表面囊膜蛋白(E蛋白) 抗原表位
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流行性乙型脑炎病毒一步法RT-LAMP检测方法的建立 被引量：8
16
作者 杜鹃 宋永 +1 位作者 刘立科 华荣虹 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期773-776,共4页
为建立一种简便、快速、灵敏、特异的乙型脑炎病毒(JEV)检测方法,本研究根据GenBank中登录的25株流行性JEV基因组序列,设计3对特异性的环介导等温扩增(LAMP)引物,优化反应体系,建立了一步法反转录-LAMP(RT-LAMP)检测方法。该方法检测时... 为建立一种简便、快速、灵敏、特异的乙型脑炎病毒(JEV)检测方法,本研究根据GenBank中登录的25株流行性JEV基因组序列,设计3对特异性的环介导等温扩增(LAMP)引物,优化反应体系,建立了一步法反转录-LAMP(RT-LAMP)检测方法。该方法检测时间短,灵敏度比常规RT-PCR方法高,可检测出103TCID50/0.2mL JEV;特异性强,对猪细小病毒、猪圆环病毒、伪狂犬病毒、猪瘟病毒等常见猪病毒均无交叉反应。结果判定时只需要在扩增产物中加入SYBR GreenⅠ染料,就可以直接在可见光或紫外光下观察颜色变化。该方法简便快捷,省时省力,是一种适用于基层实验室快速、准确检测流行性JEV的方法。 展开更多
关键词 流行性乙型脑炎病毒 反转录环介导等温扩增技术
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流行性乙型脑炎病毒E蛋白多表位肽在毕赤酵母中分泌表达及其免疫原性研究 被引量：3
17
作者 钟登科 黄艺珠 +4 位作者 魏建超 康乐 曹瑞兵 周斌 陈溥言 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期296-300,507,共5页
为构建流行性乙型脑炎病毒（JEV） E蛋白多表位疫苗，本研究将人工合成的优化后E蛋白多表位肽（MP）序列克隆于酵母表达载体pPICZα-A中，构建分泌型重组酵母表达质粒pPICZ-MP后电转化导于毕赤酵母X-33中，重组酵母菌组子经甲醇诱导表... 为构建流行性乙型脑炎病毒（JEV） E蛋白多表位疫苗，本研究将人工合成的优化后E蛋白多表位肽（MP）序列克隆于酵母表达载体pPICZα-A中，构建分泌型重组酵母表达质粒pPICZ-MP后电转化导于毕赤酵母X-33中，重组酵母菌组子经甲醇诱导表达重组蛋白（rMP）。将其免疫小鼠后，通过测定rMP免疫小鼠的抗体水平、抗体亚型、中和抗体和CTL，以评价该多表位疫苗在小鼠模型的免疫原性。结果显示正确构建了表达JEV E蛋白多表位抗原的重组酵母菌株X33 （pPICZ -MP），并分泌表达多表位肽rMP ；纯化后的rMP免疫小鼠产生了较强的体液免疫和细胞免疫反应，其中和抗体水平、CTL活性均与活病毒疫苗组无显著差异（p〉0.05），而且能保护小鼠免受致死量JEV的攻击。上述结果表明本研究以酵母菌表达的JEV E蛋白多表位疫苗具有良好的的免疫原性，能够刺激小鼠产生特异性的细胞免疫和体液免疫应答反应，为流行性乙型脑炎多表位疫苗研制提供了新的思路。 展开更多
关键词 流行性乙型脑炎病毒 多表位疫苗 毕赤酵母 免疫原性
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流行性乙型脑炎病毒GI型毒株SD12在C57BL/6小鼠体内的动态分布研究 被引量：3
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作者 王欣 郭爽 +9 位作者 张俊杰 庞琳琳 李蓓蓓 刘珂 邵东华 邱亚峰 马志永 钟登科 李鹏 魏建超 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第1期150-156,共7页
为了解流行性乙型脑炎病毒基因I型毒株SD12在感染C57BL/6小鼠体内的病毒分布,应用qRT-PCR方法检测该毒株在小鼠体内各组织的动态分布情况。结果显示腹腔感染组中2 dpi仅能在心脏和脾脏检测出病毒核酸,5~7 dpi能够在心脏、肝脏、脑部、... 为了解流行性乙型脑炎病毒基因I型毒株SD12在感染C57BL/6小鼠体内的病毒分布,应用qRT-PCR方法检测该毒株在小鼠体内各组织的动态分布情况。结果显示腹腔感染组中2 dpi仅能在心脏和脾脏检测出病毒核酸,5~7 dpi能够在心脏、肝脏、脑部、盲肠和扁桃体检测到病毒核酸。血脑屏障受损的腹腔感染组中最早2 dpi在肠系膜淋巴结中检测到病毒核酸,3 dpi基本能在各组织中检测到病毒核酸,5~7 dpi在大脑中检测到大量病毒核酸。所有对照组没有检测到病毒阳性核酸。本研究表明基因I型流行性乙型脑炎病毒感染血脑屏障受损的C57BL/6小鼠后能迅速入侵各组织脏器,主要浸染肝脏、肺脏、肾脏、盲肠和大脑。拥有完整血脑屏障的小鼠对病毒具有一定抵抗能力,病毒在各组织中的含量相对比较低。 展开更多
关键词 流行性乙型脑炎病毒 血脑屏障 QRT-PCR 动态分布
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流行性乙型脑炎病毒E蛋白多表位肽在毕赤酵母中分泌表达及其免疫原性研究 被引量：2
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作者 钟登科 黄艺珠 +4 位作者 魏建超 康乐 曹瑞兵 周斌 陈溥言 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期485-489,507,共6页
为构建流行性乙型脑炎病毒(JEV)E蛋白多表位疫苗,本研究将人工合成的优化后的E蛋白多表位肽(MP)序列克隆入酵母表达载体p PICZα-A,构建分泌型重组酵母表达质粒p PICZ-MP,经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母X-33,阳性重组子经甲醇... 为构建流行性乙型脑炎病毒(JEV)E蛋白多表位疫苗,本研究将人工合成的优化后的E蛋白多表位肽(MP)序列克隆入酵母表达载体p PICZα-A,构建分泌型重组酵母表达质粒p PICZ-MP,经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母X-33,阳性重组子经甲醇诱导表达,亲和层析纯化重组蛋白(rMP)。通过测定rMP免疫小鼠的抗体水平、抗体亚型、中和抗体和CTL,以评价该多表位疫苗在小鼠模型上的免疫原性。结果表明:成功构建了表达JEV E蛋白多表位抗原的重组酵母菌株X33(pPICZ-MP),能分泌表达多表位肽r MP。纯化后的r MP免疫小鼠产生了较强的体液免疫和细胞免疫反应,其中和抗体水平、CTL活性均与活病毒疫苗组差异不显著(p>0.05),且能保护小鼠免受致死量JEV的攻击。构建的JEV E蛋白多表位疫苗具有良好的免疫原性,能够刺激小鼠产生特异性的细胞免疫和体液免疫应答反应,为流行性乙型脑炎多表位疫苗研制提供新的思路。 展开更多
关键词 流行性乙型脑炎病毒 多表位疫苗 毕赤酵母 免疫原性
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流行性乙型脑炎病毒NS1基因克隆及其蛋白表达纯化 被引量：7
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作者 张孝忠 刘一凡 +3 位作者 谷思颖 余娜 段彦祥 李有文 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第8期2320-2326,共7页
为了表达流行性乙型脑炎(epidemic encephalitis type B)非结构蛋白NS1,本研究通过PCR扩增了日本乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)P3株NS1基因,并分别构建了其融合表达His和GST标签的原核表达载体,经PCR、酶切和测序鉴定正确... 为了表达流行性乙型脑炎(epidemic encephalitis type B)非结构蛋白NS1,本研究通过PCR扩增了日本乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)P3株NS1基因,并分别构建了其融合表达His和GST标签的原核表达载体,经PCR、酶切和测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21感受态细胞,用IPTG诱导表达了NS1融合蛋白,通过SDS-PAGE电泳和Western blotting进行鉴定,并用尿素变性复性和镍亲合层析法纯化目的蛋白。结果显示,试验成功构建了NS1的两个原核表达载体pET-42b-NS1和pGEX-KG-NS1,P3株NS1基因全长1 056bp,以包涵体的形式表达约40ku的蛋白,尿素变性复性效果较好,镍亲合层析纯化得到纯度和浓度均较高的NS1蛋白。JEV NS1基因可以通过原核表达系统高效表达蛋白并纯化得到高纯度产物,为后期生物学功能研究奠定基础。 展开更多
关键词 流行性乙型脑炎病毒(JEV) NS1基因 克隆 蛋白表达 蛋白纯化
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