基于智能化控制的高效活细胞成像技术

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作者 缴莉 边鑫 +1 位作者 龙加福 刘如明 《实验室研究与探索》 CAS 北大核心 2024年第10期36-39,共4页

为提升活细胞功能研究的效率与准确性,显微成像平台研发了1款智能化控制精准加样系统。自主研发的加样系统具备远程自动化控制功能,能实现精准的药物定时定点添加。经研究和测试,该系统展现出卓越的通用性,能与常见的光学成像设备搭载使... 为提升活细胞功能研究的效率与准确性,显微成像平台研发了1款智能化控制精准加样系统。自主研发的加样系统具备远程自动化控制功能,能实现精准的药物定时定点添加。经研究和测试,该系统展现出卓越的通用性,能与常见的光学成像设备搭载使用,并能满足从短期到长期活细胞功能研究的各种实验要求。在活细胞连续成像的过程中,采用智能化与精准化的控制方法,可显著提升实验的准确性、稳定性和效率,尤其是能确保关键数据的完整性。该研究工作有效促进了细胞功能等关键科研领域的深入探索,成功增强了多台光学成像仪器的测试能力和应用价值,同时也推动了创新人才的成长和高标准科研平台的搭建。 展开更多

关键词 活细胞成像 仪器设备研发 自动化精准加样 仪器平台建设

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脉冲电磁场对大鼠成骨细胞增殖影响的活细胞成像观察研究 被引量：6

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作者 俞索静 李春雯 +1 位作者 潘礼庆 吴承亮 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2010年第6期391-396,400,共7页

目的应用活细胞成像技术观察脉冲电磁场作用下大鼠成骨细胞的生长、增殖过程,探讨不同脉冲电磁场强度对大鼠成骨细胞生长、增殖的影响。方法首先采用MTT法检测在15Hz,0.1、0.3、0.5、1.0mT脉冲电磁场连续刺激下,4种脉冲电磁场强度组与... 目的应用活细胞成像技术观察脉冲电磁场作用下大鼠成骨细胞的生长、增殖过程,探讨不同脉冲电磁场强度对大鼠成骨细胞生长、增殖的影响。方法首先采用MTT法检测在15Hz,0.1、0.3、0.5、1.0mT脉冲电磁场连续刺激下,4种脉冲电磁场强度组与对照组的成骨细胞存活与增殖能力,筛选出最佳的脉冲电磁场刺激强度。根据筛选结果,选用频率15Hz、强度0.1mT的脉冲电磁场,应用活细胞成像技术,以Time-Lapse方式,对脉冲电磁场刺激组与对照组成骨细胞的生长、增殖过程,作多点平行对照记录,动态观察两组成骨细胞的贴壁速率与分裂速率。并采用MTT法同步检测两组细胞的增殖情况。结果原代培养3d的成骨细胞,在15Hz脉冲电磁场中连续刺激3d,经MTT法检测,1.0mT组细胞几乎全部死亡,0.5mT组与对照组比较细胞增殖能力无明显差别,0.3、0.1mT组与对照组比较细胞增殖能力增强(P<0.05、P<0.01)。活细胞成像Time-Lapse平行对照记录,动态观察分析表明,15Hz、0.1mT脉冲电磁场组观察野的细胞贴壁速率与对照组比较无明显差别,分裂速率较对照组观察野增快(P<0.05),MTT法同步检测也证明0.1mT脉冲电磁场刺激组的细胞增殖能力较对照组增强。结论 15Hz、0.1mT脉冲电磁场对体外培养的大鼠成骨细胞增殖具有促进作用,但强度超过0.5mT的脉冲电磁场对成骨细胞增殖无明显促进作用,如果强度≥1mT反而会导致成骨细胞的死亡。 展开更多

关键词 脉冲电磁场 成骨细胞 活细胞成像

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超分辨显微成像技术在活细胞成像中的应用与发展 被引量：7

3

作者 张娇 何勤 +3 位作者 武泽凯 于斌 屈军乐 林丹樱 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1301-1315,共15页

超分辨显微成像技术(super-resolution microscopy,SRM)可以绕过光学衍射极限对成像分辨率的限制,让以前观察不到的纳米级结构实现可视化,这一重大研究进展推动了现代生命科学和生物医学研究的进步与发展.细胞是生物体的基本组成单位,... 超分辨显微成像技术(super-resolution microscopy,SRM)可以绕过光学衍射极限对成像分辨率的限制,让以前观察不到的纳米级结构实现可视化,这一重大研究进展推动了现代生命科学和生物医学研究的进步与发展.细胞是生物体的基本组成单位,对活细胞内部的细微结构和动力学过程进行研究是掌握生命本质必不可少的途径.但由于成像原理或条件的限制,早期的SRM技术在活细胞成像应用方面受到了不同程度的限制.近几年来,随着SRM和相关技术的发展,SRM在活细胞成像研究中的应用也越来越多.本文简要介绍目前常见的几种SRM技术的基本原理和特点,并在此基础上着重阐述它们在活细胞成像应用中所取得的最新研究进展和发展方向. 展开更多

关键词 随机光学重构显微术 受激发射损耗显微术 结构光照明显微术 超分辨成像 活细胞成像

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活细胞成像技术实时追踪荧光蛋白标记的分枝杆菌的胞内增殖 被引量：1

4

作者 乔可 王晴岚 +1 位作者 李紫煜 牛辰 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期384-388,共5页

目的 利用绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）标记和活细胞显微成像的方法,实时追踪分枝杆菌在巨噬细胞内的增殖过程。方法 用经GFP标记的野生型海分枝杆菌（Mycobacterium marinum,Mm）分别侵染未激活和γ-干扰素激活的巨... 目的 利用绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）标记和活细胞显微成像的方法,实时追踪分枝杆菌在巨噬细胞内的增殖过程。方法 用经GFP标记的野生型海分枝杆菌（Mycobacterium marinum,Mm）分别侵染未激活和γ-干扰素激活的巨噬细胞,使用活细胞显微成像系统连续记录胞内分枝杆菌的增殖动态,同时优化不同细胞接种浓度和感染复数（multiplicity of infection,MOI）对胞内菌增殖动态的追踪效果。结果 使用GFP标记和活细胞成像的方法可以实时追踪胞内分枝杆菌的增殖过程和形态学变化。γ干扰素对Mm在巨噬细胞中的增殖有抑制作用。当接种巨噬细胞浓度为1×105/孔,MOI为1时,可直观清晰地分析实时追踪图像中胞内菌的增殖过程。结论 通过活细胞成像技术分析荧光蛋白标记的分枝杆菌,可实时追踪巨噬细胞内分枝杆菌增殖过程和形态学变化,是一种体外分析胞内分枝杆菌增殖的理想方法,可应用于其他相关病原菌和宿主相互作用及影响因素的研究。 展开更多

关键词 海分枝杆菌(Mm) 巨噬细胞 活细胞成像 细菌增殖 感染复数(MOI)

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苯乙烯类菁染料pH探针的合成与活细胞成像 被引量：6

5

作者 王炳帅 王丽 +2 位作者 吴彤 杨志刚 彭孝军 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2010年第6期1148-1151,共4页

合成了一个以苯乙烯类菁染料为母体的含胺类基团的pH荧光探针,合成方法简单,产物收率高,提纯方便.在乙醇-水体系中的性能测试结果表明,随着pH值的降低,其非质子化形态的吸收峰强度逐渐降低,而质子化形式的长波长吸收峰强度逐渐升高,长... 合成了一个以苯乙烯类菁染料为母体的含胺类基团的pH荧光探针,合成方法简单,产物收率高,提纯方便.在乙醇-水体系中的性能测试结果表明,随着pH值的降低,其非质子化形态的吸收峰强度逐渐降低,而质子化形式的长波长吸收峰强度逐渐升高,长、短波长相差(Δλ)130 nm,颜色由黄色变成粉红色,利于可视观察;探针在氨基呈非质子化形式时没有荧光,氨基质子化后探针的荧光强度显著增强.活细胞实验表明,探针可以穿透细胞膜,在细胞质内pH值偏低区域显示红色荧光,可以用来定性探测酸性细胞器. 展开更多

关键词 苯乙烯类菁染料 pH探针 活体细胞莹光成像 酸性细胞器

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顺铂联合长春新碱对HCT-8/V肿瘤细胞耐药逆转的实时动态活细胞成像研究 被引量：2

6

作者 孙丽娜 张婷 +3 位作者 郭锦锦 余运运 姚新生 孙万邦 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1085-1090,共6页

目的:探讨顺铂(DDP)联合长春新碱(VCR)对人结直肠腺癌耐长春新碱细胞(HCT-8/V)增殖、凋亡与自噬的影响。方法:以RT-LCI高内涵技术平台,连续观察120 HCT-8/V细胞的生长规律及连续70 h观察细胞凋亡与自噬。结果:DDP对HCT-8/V有抑制作用,... 目的:探讨顺铂(DDP)联合长春新碱(VCR)对人结直肠腺癌耐长春新碱细胞(HCT-8/V)增殖、凋亡与自噬的影响。方法:以RT-LCI高内涵技术平台,连续观察120 HCT-8/V细胞的生长规律及连续70 h观察细胞凋亡与自噬。结果:DDP对HCT-8/V有抑制作用,但无剂量依赖关系; VCR对HCT-8/V抑制作用与药物浓度梯度呈正比; DDP、VCR对细胞凋亡的影响没有差异; DDP、VCR单独及联合应用可抑制HCT-8/V自噬。结论:DDP联合VCR应用通过抑制HCT-8/V细胞的增殖与自噬实现耐药性逆转。 展开更多

关键词 顺铂 长春新碱 结直肠癌细胞 耐药性 实时动态活细胞成像技术

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CRISPR/Cas9系统活细胞成像技术进展(特邀)

7

作者 康玥 廖雪瑶 +2 位作者 谭向宇 郭萍 田训 《红外与激光工程》 EI CSCD 北大核心 2022年第11期133-140,共8页

CRISPR/Cas9系统因其高效、操作简便、物种适应性广等优势被广泛应用于基因编辑领域,该系统是由靶向目标DNA序列的引导RNA(sgRNA)和具有切割酶活性的Cas9蛋白组成。近年来,通过将核酸酶失活的Cas9突变体dCas9(dead Cas9)或sgRNA与荧光蛋... CRISPR/Cas9系统因其高效、操作简便、物种适应性广等优势被广泛应用于基因编辑领域,该系统是由靶向目标DNA序列的引导RNA(sgRNA)和具有切割酶活性的Cas9蛋白组成。近年来,通过将核酸酶失活的Cas9突变体dCas9(dead Cas9)或sgRNA与荧光蛋白(FPs)、有机染料、量子点(QDs)结合开发出一系列超分辨活细胞成像技术,该技术有助于在更高分辨率下研究不同基因、染色体以及基因与染色体之间的时空关系,对促进遗传学、细胞生物学和生物医学等领域的快速发展具有重要意义。文中主要总结基于CRISPR/Cas9系统的活细胞成像技术的最新进展,有望进一步扩大活细胞成像技术在生物医学领域的广泛应用。 展开更多

关键词 活细胞成像 CRISPR/Cas9 荧光分子 超分辨

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活细胞成像

8

《生物产业技术》 2008年第6期56-58,共3页

活细胞成像又叫作生物成像或者录像显微镜。其特征在于研究手段和测定对象。手段是显微镜或者照相机等成像器材，对象是活细胞的活动。根据测定对象的不同，或者是器官中（in vivo），或者是培养细胞，或者是细胞中部分的细胞器、蛋白... 活细胞成像又叫作生物成像或者录像显微镜。其特征在于研究手段和测定对象。手段是显微镜或者照相机等成像器材，对象是活细胞的活动。根据测定对象的不同，或者是器官中（in vivo），或者是培养细胞，或者是细胞中部分的细胞器、蛋白质．分别叫作生物体水平、细胞水平、分子水平。 展开更多

关键词 活细胞成像 细胞水平 生物成像 培养细胞 分子水平 显微镜 照相机 细胞器

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一种用于活细胞中检测Zn^(2+)的萘酚席夫碱类荧光探针（英文） 被引量：7

9

作者 陈邦 王少静 +1 位作者 宋战科 郭媛 《无机化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1722-1730,共9页

设计合成了1种基于C=N异构化和螯合荧光增强机理(CHEF)的Zn^(2+)荧光探针BMO和NBMO,其结构经~1H NMR,^(13)C NMR,~1H-~1H COSY,HSQC,IR和HRMS进行了表征。光谱分析实验结果显示,探针对Zn^(2+)均具有较好的选择性和灵敏度,检出限分别为30... 设计合成了1种基于C=N异构化和螯合荧光增强机理(CHEF)的Zn^(2+)荧光探针BMO和NBMO,其结构经~1H NMR,^(13)C NMR,~1H-~1H COSY,HSQC,IR和HRMS进行了表征。光谱分析实验结果显示,探针对Zn^(2+)均具有较好的选择性和灵敏度,检出限分别为30和21 nmol·L^(-1)。在0~20μmol·L^(-1)浓度的范围内,BMO和NBMO的荧光强度与Zn^(2+)浓度可呈良好的线性关系。NBMOZn^(2+)配合物单晶结构和Job曲线证实该探针与Zn^(2+)以1∶1配位。NBMO被成功应用于活细胞中Zn^(2+)的检测。 展开更多

关键词 荧光探针 C=N异构化 螯合荧光增强 锌离子 活细胞成像

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活细胞RNA成像技术及其在生物医学中应用研究进展

10

作者 孙萍萍 邹炜 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期362-372,共11页

RNA可与各种核酸及蛋白质相互作用,在多种生理和病理过程中发挥重要的调控作用,其生物学过程高度动态。追踪活细胞中的RNA动态对理解基因表达的时空调控以及RNA的调控功能至关重要。基于荧光蛋白的RNA标记系统包括MS2/MCP系统、PP7/PCP... RNA可与各种核酸及蛋白质相互作用,在多种生理和病理过程中发挥重要的调控作用,其生物学过程高度动态。追踪活细胞中的RNA动态对理解基因表达的时空调控以及RNA的调控功能至关重要。基于荧光蛋白的RNA标记系统包括MS2/MCP系统、PP7/PCP系统、boxB/λN22和CRISPR-Cas系统等,其中MS2/MCP系统目前应用最为广泛,其具有结合稳定、信噪比高等优点,局限性是RNA成像的实现需要对靶RNA进行基因编辑,这可能导致靶RNA特性的潜在改变。近期开发的CRISPR-dCas13系统不需要对RNA进行改造,但其局限性在于CRISPR RNA效率的不确定性,且信噪比较低。基于荧光染料的RNA标记系统包括分子信标和荧光基团-适体对,其中分子信标具有高特异性和较高信噪比,而荧光基团-适体对Pepper系统和Mango系统在RNA成像的信噪比上更具有优势,但也需要对靶RNA进行基因编辑。活细胞RNA成像技术可应用于观察并研究RNA转录、剪接、转运、翻译(特指信使RNA)和亚细胞定位,有助于研究细胞分化等生物学过程以及细胞适应外界环境时的转录调控机制,有利于理解RNA行为异常导致的各种疾病的致病机制以及寻找潜在的治疗靶点。本文综述了活细胞RNA成像技术的发展和运用,并比较了各种方法的优势和不足。 展开更多

关键词 活细胞RNA成像 基因表达 转录调控 信使RNA 非编码RNA 综述

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破骨细胞微管正端蛋白动态成像观察

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作者 遆云帆 徐海栋 +1 位作者 王瑞 赵建宁 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1165-1168,1173,共5页

目的采用活细胞成像技术观察破骨细胞微管正端蛋白EB1在细胞内的分布及运动,初步研究微管在破骨细胞功能中的作用。方法 1用脂质体转染方法(阳离子脂质体Lip2000)转染EB1-GFP基因至Raw264.7细胞系,G418筛选转染成功的Raw264.7细胞,荧光... 目的采用活细胞成像技术观察破骨细胞微管正端蛋白EB1在细胞内的分布及运动,初步研究微管在破骨细胞功能中的作用。方法 1用脂质体转染方法(阳离子脂质体Lip2000)转染EB1-GFP基因至Raw264.7细胞系,G418筛选转染成功的Raw264.7细胞,荧光显微镜下观察后GFP蛋白免疫荧光染色确定稳定转染EB1-GFP的Raw264.7细胞系建立;2活细胞工作站下观察转染EB1-GFP的Raw264.7细胞中EB1蛋白的运动;3用含100ng/m LRANKL和30ng/m L M-CSF的培养基分别诱导稳定转染EB1-GFP的Raw264.7细胞与正常Raw264.7细胞为破骨细胞,进行TRAP染色鉴定,比较两组细胞形态有无差别;4Raw264.7细胞系诱导出破骨细胞后,用细胞免疫荧光染色方法观察破骨细胞EB1蛋白的形态及分布;5活细胞工作站下观察稳转EB1-GFP的Raw264.7细胞诱导出的破骨细胞内EB1蛋白的运动状态。结果 1脂质体转染方法建立了稳定转染EB1-GFP基因的Raw264.7细胞系;2观察到破骨前体细胞Raw264.7的微管正端蛋白(EB1)的运动轨迹;3转染EB1-GFP基因的Raw264.7细胞与正常Raw264.7细胞诱导的破骨细胞TRAP染色无明显差别;4活细胞工作站观察破骨细胞微管正端蛋白EB1的运动状态,结果表明破骨细胞微管活动性较破骨前体细胞Raw264.7活动性低。结论 1EB1-GFP基因对破骨前体细胞系Raw264.7诱导破骨细胞无明显影响;2微管活动性降低可能与破骨细胞骨吸收活性相关。 展开更多

关键词 破骨细胞 绿色荧光蛋白 活细胞成像 细胞骨架 微管正端蛋白

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一锅法高效制备橙色荧光氧化石墨烯量子点及其在细胞pH成像中的应用 被引量：4

12

作者 王鸿锦 尹桂 《无机化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2023年第7期1338-1348,共11页

以价廉、易得的石墨片为原料,采用改进的Hummers法,简单、快速、高效地制备了具有良好生物相容性的橙色荧光氧化石墨烯量子点(GOQDs)。所制备的GOQDs尺寸约7.2 nm,具有尺寸均匀、晶格间距为0.20 nm的高度结晶的核心和氧化的外围结构。... 以价廉、易得的石墨片为原料,采用改进的Hummers法,简单、快速、高效地制备了具有良好生物相容性的橙色荧光氧化石墨烯量子点(GOQDs)。所制备的GOQDs尺寸约7.2 nm,具有尺寸均匀、晶格间距为0.20 nm的高度结晶的核心和氧化的外围结构。与大多数报道的碳点(CDs)、包裹掺杂碳点(掺杂CDs)、石墨烯量子点(QDS)和GOQDs不同,我们的方法制备的GOQDs显示出橙红色并具有激发波长独立的荧光发射。此外,GOQDs具有pH依赖性荧光发射、强的光漂白抗性、低细胞毒性、良好的水溶性(ρ=10 mg·mL^(-1))和优异的生物相容性。这些特性使其成功应用于细胞pH成像。 展开更多

关键词 氧化石墨烯量子点 橙色荧光 PH传感器 活细胞成像

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缺氧响应荧光探针的成像及治疗应用 被引量：2

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作者 谌委菊 陈诗雅 +2 位作者 薛曹叶 刘波 郑晶 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2021年第11期3433-3444,共12页

由于肿瘤内部细胞远离血管,其氧气消耗量远远超出血液供应量,因此容易导致肿瘤缺氧.肿瘤缺氧会引发肿瘤扩散加速、诱导某些基因过表达及产生药物抗药性等问题.基于此,发展性能优异的缺氧响应荧光探针对肿瘤的诊断和治疗具有重要意义.本... 由于肿瘤内部细胞远离血管,其氧气消耗量远远超出血液供应量,因此容易导致肿瘤缺氧.肿瘤缺氧会引发肿瘤扩散加速、诱导某些基因过表达及产生药物抗药性等问题.基于此,发展性能优异的缺氧响应荧光探针对肿瘤的诊断和治疗具有重要意义.本文对缺氧响应荧光探针在成像及治疗方面的应用进展进行了综合评述,介绍了硝基、偶氮键和醌3种常用的缺氧响应基团,并探讨了它们在缺氧微环境下的识别机理;介绍了缺氧响应荧光探针的构建及其在生物成像方面的最新研究成果;总结了缺氧响应荧光探针在基因治疗、光动力学治疗、化学治疗及协同治疗方面的研究进展;展望了缺氧响应荧光探针在临床诊断和治疗方面的应用前景. 展开更多

关键词 缺氧 荧光探针 活细胞成像 肿瘤治疗

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mRNA单分子动态成像技术研究进展 被引量：1

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作者 赵艳霞 何丽娜 +2 位作者 崔亚宁 李晓娟 林金星 《电子显微学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期201-207,共7页

转录后成熟的mRNA与RNA结合蛋白结合,形成信使核糖核蛋白复合物,之后在胞质内沿细胞骨架转运并定位到亚细胞特定区域。在此过程中,mRNA的转运及调控对于mRNA的功能、蛋白质的定位和细胞极性生长的维持发挥着重要的作用。近年来,活细胞... 转录后成熟的mRNA与RNA结合蛋白结合,形成信使核糖核蛋白复合物,之后在胞质内沿细胞骨架转运并定位到亚细胞特定区域。在此过程中,mRNA的转运及调控对于mRNA的功能、蛋白质的定位和细胞极性生长的维持发挥着重要的作用。近年来,活细胞单分子成像技术的发展,为人们深入了解mRNA的动态调控提供了新的契机。通过对活细胞中mRNA和RNA结合蛋白的标记,我们不仅可以检测mRNA的动力学特征,还可以原位检测新合成的蛋白质。本文主要介绍mRNA的定位和翻译过程,重点叙述单分子动态成像技术在分析mRNA动态调控中的应用。活细胞单分子成像技术可以揭示mRNA翻译的动力学特性,并促进我们对mRNA命运的理解,为后续研究mRNA的动态调控提供参考。 展开更多

关键词 MRNA 活细胞单分子成像技术 动态调控

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转录因子及其动态成像分析技术的研究进展

15

作者 何丽娜 赵艳霞 +3 位作者 崔亚宁 玉猛 李晓娟 林金星 《电子显微学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期87-94,共8页

转录因子是通过直接或间接的方式与顺式作用元件相互作用,从而对靶基因进行调控的一组蛋白。由于转录因子在植物生长发育、响应外界刺激等方面发挥着重要作用,其结构和动态特征一直作为研究的重点。转录因子的基本特征被逐渐揭示,然而... 转录因子是通过直接或间接的方式与顺式作用元件相互作用,从而对靶基因进行调控的一组蛋白。由于转录因子在植物生长发育、响应外界刺激等方面发挥着重要作用,其结构和动态特征一直作为研究的重点。转录因子的基本特征被逐渐揭示,然而关于它们之间是如何响应特定的信号而表现出不同的动态特征,在很大程度上仍是未知的。近年来,随着活细胞单分子成像技术的发展,为学者深入了解转录因子间的动态调控提供了新的契机。本文主要介绍了转录因子的结构特征和研究方法,重点叙述了单分子动态成像技术在分析转录因子动态调控中的应用,以期为后续研究转录因子的动态调控过程提供参考。 展开更多

关键词 转录因子 活细胞单分子成像技术 动态调控

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利用荧光蛋白示踪脑微血管内皮细胞微丝的动态变化

16

作者 杜书嵩 赵伟东 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期673-678,共6页

目的利用活细胞显微成像术对脑微血管内皮细胞内肌动蛋白的动态变化实现实时观察。方法构建绿色荧光蛋白(GFP)标记Lifeact的真核表达载体即Lifeact-pEGFP,利用脂质体转染法将Lifeact-pEGFP质粒转染至脑微血管内皮细胞中,利用共聚焦激光... 目的利用活细胞显微成像术对脑微血管内皮细胞内肌动蛋白的动态变化实现实时观察。方法构建绿色荧光蛋白(GFP)标记Lifeact的真核表达载体即Lifeact-pEGFP,利用脂质体转染法将Lifeact-pEGFP质粒转染至脑微血管内皮细胞中,利用共聚焦激光扫描显微镜对Lifeact-pEGFP在细胞内的分布进行分析,并检测其在细胞伸展和迁移过程中的动态变化。结果成功将Lifeact-p EGFP质粒转染至人脑微血管内皮细胞,细胞存活未受到影响。Lifeact-pEGFP能将活细胞中的肌动蛋白丝标记为绿色荧光,并能够有效监测细胞伸展和迁移过程中肌动蛋白丝的动态变化。结论 Lifeact-p EGFP转染结合活细胞显微成像术可以用于实时记录和分析脑微血管内皮细胞内肌动蛋白丝的动态变化。 展开更多

关键词 Lifeact 肌动蛋白 脑微血管内皮细胞 活细胞显微成像术

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一种新型咔唑类菁染料黏度荧光探针 被引量：4

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作者 刘飞 吴彤 +2 位作者 胡明明 彭孝军 樊江莉 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2012年第10期2239-2243,共5页

合成了一种带有醛基的咔唑类菁染料KQ,其自身的荧光量子产率较低,对极性的敏感性小,且荧光信号不受核酸等生物分子的干扰.KQ对环境黏度有很好的荧光响应,相对荧光强度随着环境黏度的增大而增强,并且在1×10-3～1.3216 Pa·s黏... 合成了一种带有醛基的咔唑类菁染料KQ,其自身的荧光量子产率较低,对极性的敏感性小,且荧光信号不受核酸等生物分子的干扰.KQ对环境黏度有很好的荧光响应,相对荧光强度随着环境黏度的增大而增强,并且在1×10-3～1.3216 Pa·s黏度范围内,染料的荧光强度与溶液的黏度呈良好的线性关系.活细胞荧光成像实验结果表明,染料KQ具有良好的细胞膜通透性,并可对细胞内不同位置的黏度检测成像. 展开更多

关键词 咔唑类菁染料 黏度 荧光探针 活细胞成像

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一种高效灵敏的DNA荧光探针的合成及应用 被引量：3

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作者 吴彤 彭孝军 +2 位作者 胡明明 刘飞 樊江莉 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1407-1412,共6页

设计合成了一种新型噻唑橙二聚体荧光染料Bi-TO3,采用荧光发射光谱、圆二色光谱及活细胞荧光成像等方法研究了其与DNA的相互作用.在10 mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH=7.4)中,Bi-TO3的固有荧光极弱,量子产率小于0.001%;与小牛胸腺DNA结合后,... 设计合成了一种新型噻唑橙二聚体荧光染料Bi-TO3,采用荧光发射光谱、圆二色光谱及活细胞荧光成像等方法研究了其与DNA的相互作用.在10 mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH=7.4)中,Bi-TO3的固有荧光极弱,量子产率小于0.001%;与小牛胸腺DNA结合后,其荧光可显著增强约950倍,但对RNA和蛋白等生物大分子及黏度等环境因素则无明显响应.紫外吸收光谱及圆二色光谱滴定实验表明,Bi-TO3以小沟结合模式与DNA作用,且对AT序列有选择性.实验结果表明,在缓冲溶液中Bi-TO3的荧光增强信号与低浓度范围的poly(dA-dT)2仍呈良好的线性关系,检出限为13.3 ng/mL,灵敏较度高;且Bi-TO3可在较低浓度范围(6～12μmol/L)内应用于活细胞荧光成像. 展开更多

关键词 噻唑橙二聚体 荧光探针 DNA定量检测 活细胞荧光成像

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扫描离子电导显微镜的研制与实现 被引量：3

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作者 李鹏 张常麟 +1 位作者 王文学 刘连庆 《红外与激光工程》 EI CSCD 北大核心 2014年第6期1894-1898,共5页

在微纳米尺度上对活细胞高分辨率成像对生命科学研究具有重要的意义,其将有助于再现正在发生的生命过程、检测细胞对外界刺激做出的响应,甚至观测某些蛋白簇在细胞膜表面的运动。然而直到今天,仍然没有很好的实现上述目标。扫描离子电... 在微纳米尺度上对活细胞高分辨率成像对生命科学研究具有重要的意义,其将有助于再现正在发生的生命过程、检测细胞对外界刺激做出的响应,甚至观测某些蛋白簇在细胞膜表面的运动。然而直到今天,仍然没有很好的实现上述目标。扫描离子电导显微镜(SICM)由于其真正的非接触、高分辨、无损独特成像方式,规避了扫描过程中探针与样品表面发生力的接触,得到越来越多的关注和广泛的应用。从系统的角度阐述自制SICM系统的设计、硬件集成及跳跃模式扫描算法的实现,并通过对聚二甲基硅氧烷(PDMS)栅格成像以及与原子力显微镜(AFM)成像结果的对比,验证了系统功能的正确性和有效性;最后开展了生理环境下活体细胞的原位扫描成像实验,初步获取了活体神经细胞轴突结构的三维形貌图像。SICM的成功搭建,将为人们深入了解生理条件下活体生物样品表面微观结构与功能机理等提供有效的研究方法与手段。 展开更多

关键词 扫描离子电导显微镜 活细胞无损成像 跳跃模式

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红色荧光示踪狂犬病病毒ERA株病毒粒子方法的建立

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作者 单博文 王金良 +6 位作者 刘仁强 帅磊 王喜军 葛金英 温志远 夏咸柱 步志高 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期112-116,共5页

为建立一种狂犬病病毒(RABV)荧光标记方法,便于有效地观察研究RABV侵入细胞及脱壳的过程,本研究采用CY5-NHS酯红色荧光染料标记氨基的方法将纯化的RABV ERA株进行CY5-NHS酯荧光染料标记;采用亲脂性羰花青荧光染料将细胞膜染成绿色;采用... 为建立一种狂犬病病毒(RABV)荧光标记方法,便于有效地观察研究RABV侵入细胞及脱壳的过程,本研究采用CY5-NHS酯红色荧光染料标记氨基的方法将纯化的RABV ERA株进行CY5-NHS酯荧光染料标记;采用亲脂性羰花青荧光染料将细胞膜染成绿色;采用DNA荧光染料将细胞核染成亮蓝色;在3D活细胞激光共聚焦分析成像系统下成像,动态观察病毒吸附细胞并内吞的过程。与传统的染色方法相比,本研究建立的病毒标记方法更适合在3D活细胞激光共聚焦分析成像系统下观察和拍摄RABV感染细胞的过程,为RABV感染机制的研究提供了一种有效研究方法,对于其它弹状病毒科病毒标记方法的建立也具有一定的参考意义。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 ERA株 标记 活细胞成像

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