目的探讨沉默信息调节因子3（SIRT3）对肝癌细胞增殖的影响。方法 Western blotting检测SIRT3在正常肝组织、永生化肝细胞及肝癌细胞系中的蛋白表达水平;在肝癌细胞中过表达SIRT3,台盼蓝排斥实验检测过表达SIRT3对肝癌细胞增殖的影响,E...目的探讨沉默信息调节因子3（SIRT3）对肝癌细胞增殖的影响。方法 Western blotting检测SIRT3在正常肝组织、永生化肝细胞及肝癌细胞系中的蛋白表达水平;在肝癌细胞中过表达SIRT3,台盼蓝排斥实验检测过表达SIRT3对肝癌细胞增殖的影响,Ed U标记实验检测SIRT3对肝癌细胞DNA合成的影响;在肝癌细胞中过表达SIRT3,平板集落实验检测SIRT3对肝癌细胞集落形成能力的影响;q RT-PCR验证SIRT3的沉默效率,台盼蓝排斥实验检测SIRT3沉默对肝癌细胞增殖的影响,Ed U标记实验检测SIRT3沉默对肝癌细胞DNA合成的影响。结果 SIRT3在肝癌细胞系中的蛋白水平较永生化肝细胞、正常肝组织降低;SIRT3在肝癌细胞中成功过表达,过表达SIRT3使肝癌细胞增殖数目减少了约为51%~61%（P〈0.001）,使肝癌细胞DNA合成下降了约57%（P〈0.05）;过表达SIRT3抑制肝癌细胞的集落形成能力;SIRT3沉默有效,SIRT3沉默使肝癌细胞的增殖增加了约51%~61%（P〈0.01）,使肝癌细胞的DNA合成能力增强了137%~149%（P〈0.01）。结论 SIRT3可抑制肝癌细胞的增殖。展开更多
目的探讨沉默信息调节因子3(SIRT3)在高糖引起的人二倍体成纤维细胞(WI-38)衰老过程中的表达变化和意义。方法通过低糖(3.34mmol/L)、正常糖(5.56mmol/L)、高糖(25mmol/L)三种不同条件培养WI-38细胞,使之由20群体倍增水平(PDs)增至32PD...目的探讨沉默信息调节因子3(SIRT3)在高糖引起的人二倍体成纤维细胞(WI-38)衰老过程中的表达变化和意义。方法通过低糖(3.34mmol/L)、正常糖(5.56mmol/L)、高糖(25mmol/L)三种不同条件培养WI-38细胞,使之由20群体倍增水平(PDs)增至32PDs。采用Western blotting检测p21、p27、Catalase、SIRT3和MnSOD的蛋白表达;免疫荧光共染方法检测各组WI-38细胞中SIRT3和MnSOD和衰老相关核异染色质灶(SAHF)的表达和定位;用荧光探针检测活性氧(ROS)的表达。结果 Western blot-ting结果显示,高糖组SIRT3、Catalase和MnSOD的表达与低糖组及正常糖组比较明显降低(P<0.05);高糖组的p21p、27的蛋白表达与正常糖组比较明显增加(P<0.05);与低糖组比较,高糖组的p21表达上调,而p27表达差异无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光共染结果显示,高糖组中的SIRT3、Catalase和MnSOD表达较其他两组明显降低(P<0.05);SIRT3和MnSOD主要存在于胞质中。荧光探针显示,高糖组中的ROS水平与低糖组和正常糖组比较明显增加。结论高糖能加速WI-38细胞的衰老过程,SIRT3可能与高糖引起的细胞衰老有着密切联系。展开更多
文摘目的探讨沉默信息调节因子3(SIRT3)在高糖引起的人二倍体成纤维细胞(WI-38)衰老过程中的表达变化和意义。方法通过低糖(3.34mmol/L)、正常糖(5.56mmol/L)、高糖(25mmol/L)三种不同条件培养WI-38细胞,使之由20群体倍增水平(PDs)增至32PDs。采用Western blotting检测p21、p27、Catalase、SIRT3和MnSOD的蛋白表达;免疫荧光共染方法检测各组WI-38细胞中SIRT3和MnSOD和衰老相关核异染色质灶(SAHF)的表达和定位;用荧光探针检测活性氧(ROS)的表达。结果 Western blot-ting结果显示,高糖组SIRT3、Catalase和MnSOD的表达与低糖组及正常糖组比较明显降低(P<0.05);高糖组的p21p、27的蛋白表达与正常糖组比较明显增加(P<0.05);与低糖组比较,高糖组的p21表达上调,而p27表达差异无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光共染结果显示,高糖组中的SIRT3、Catalase和MnSOD表达较其他两组明显降低(P<0.05);SIRT3和MnSOD主要存在于胞质中。荧光探针显示,高糖组中的ROS水平与低糖组和正常糖组比较明显增加。结论高糖能加速WI-38细胞的衰老过程,SIRT3可能与高糖引起的细胞衰老有着密切联系。
