取长江江豚(Neophocaena phocaenoids asiaeorientalis)产后胎盘脐静脉,经组织块培养,差异贴壁法纯化,构建长江江豚的原代细胞系;经外源癌基因SV40 T antigens(猿猴病毒T抗原)转染构建稳定脐带细胞系,并对长江江豚的永生化后的成纤维细...取长江江豚(Neophocaena phocaenoids asiaeorientalis)产后胎盘脐静脉,经组织块培养,差异贴壁法纯化,构建长江江豚的原代细胞系;经外源癌基因SV40 T antigens(猿猴病毒T抗原)转染构建稳定脐带细胞系,并对长江江豚的永生化后的成纤维细胞的细胞形态、转染效率、生长曲线和活率等进行探究。结果表明:(1)原代脐静脉细胞大约14d从组织边缘分离,20d形成单层,细胞呈现典型的成纤维细胞状,梭形、不规则星行或多边形。原代细胞传代14代后出现老化和凋亡。(2)通过SV40 T antigens转染构建的细胞系可传代40—50次,证实转染SV40 T antigens后可增加细胞的增殖能力。(3)不同世代永生化的成纤维细胞复苏前后细胞活性并无明显差异,复苏细胞活性在90%以上,表明永生化后的细胞可以稳定保存。利用CCK-8法测得细胞的生长曲线呈现“S”型。(4)对永生化的细胞系进行后续基因表达尝试,通过转染外源基因绿色和红色荧光蛋白,转染外来质粒效率约为15%,说明外源基因可以表达,并能被成功检测。研究构建长江江豚的脐静脉来源的永生化后细胞系,为江豚的其他组织细胞系建立以及江豚细胞库的建立提供基础,成功对永生化后的细胞系进行外源基因的转染,为以后深入长江江豚相关基因和分子机制研究打下基础。展开更多
文摘取长江江豚(Neophocaena phocaenoids asiaeorientalis)产后胎盘脐静脉,经组织块培养,差异贴壁法纯化,构建长江江豚的原代细胞系;经外源癌基因SV40 T antigens(猿猴病毒T抗原)转染构建稳定脐带细胞系,并对长江江豚的永生化后的成纤维细胞的细胞形态、转染效率、生长曲线和活率等进行探究。结果表明:(1)原代脐静脉细胞大约14d从组织边缘分离,20d形成单层,细胞呈现典型的成纤维细胞状,梭形、不规则星行或多边形。原代细胞传代14代后出现老化和凋亡。(2)通过SV40 T antigens转染构建的细胞系可传代40—50次,证实转染SV40 T antigens后可增加细胞的增殖能力。(3)不同世代永生化的成纤维细胞复苏前后细胞活性并无明显差异,复苏细胞活性在90%以上,表明永生化后的细胞可以稳定保存。利用CCK-8法测得细胞的生长曲线呈现“S”型。(4)对永生化的细胞系进行后续基因表达尝试,通过转染外源基因绿色和红色荧光蛋白,转染外来质粒效率约为15%,说明外源基因可以表达,并能被成功检测。研究构建长江江豚的脐静脉来源的永生化后细胞系,为江豚的其他组织细胞系建立以及江豚细胞库的建立提供基础,成功对永生化后的细胞系进行外源基因的转染,为以后深入长江江豚相关基因和分子机制研究打下基础。
