建立了定量肽段串联体蛋白质(concatamers of Q peptides,QconCATs)结合18O同位素标记-多反应监测质谱的蛋白质绝对定量新方法。首先对QconCAT重组蛋白质进行了纯度表征,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)表征结果表明重组...建立了定量肽段串联体蛋白质(concatamers of Q peptides,QconCATs)结合18O同位素标记-多反应监测质谱的蛋白质绝对定量新方法。首先对QconCAT重组蛋白质进行了纯度表征,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)表征结果表明重组蛋白质的纯度在99%以上,相对分子质量约为63.4 kDa。对QconCAT重组蛋白质酶切后的肽段混合物进行质谱分析,并经pFind和pLabel软件处理,验证了目标肽段。还考察了QconCAT重组蛋白质的酶切效率和18O标记效率,并对QconCAT蛋白质结合18O标记-同位素稀释-多反应监测质谱方法进行了评价。实验结果表明,采用该方法对腾冲嗜热厌氧菌(Thermoanaerobacter tengcongensis,TTE)中选定蛋白质的肽段进行绝对含量测定时,相对标准偏差小于20%,准确度较高,说明该方法可用于复杂生物样本中蛋白质的绝对定量。更重要的是所建方法不仅解决了细胞培养氨基酸稳定同位素标记(SILAC)技术的重标试剂价格昂贵的问题,也为定量蛋白质组学提供了一种新的方法。展开更多
目的筛查神经管畸形相关血清标记物,为阐明神经管畸形的发病机制提供理论依据。方法应用维甲酸在大鼠神经管闭合的关键期(孕10 d,E10)给药,建立脊柱裂大鼠模型,选取致畸早期孕11、13 d (E11、E13)显性脊柱裂胚胎孕鼠和正常胚胎孕鼠血清...目的筛查神经管畸形相关血清标记物,为阐明神经管畸形的发病机制提供理论依据。方法应用维甲酸在大鼠神经管闭合的关键期(孕10 d,E10)给药,建立脊柱裂大鼠模型,选取致畸早期孕11、13 d (E11、E13)显性脊柱裂胚胎孕鼠和正常胚胎孕鼠血清各5例,应用同位素标记相对和绝对定量技术(iTRAQ)和液相色谱质谱鉴定技术分析2组蛋白质,定量信息以蛋白的丰度比差异倍数1.5倍以上(P <0.05)为差异蛋白质。结果质谱共得到谱图157 422张,鉴定出390种蛋白质,发现E11维甲酸致畸组与正常对照组差异蛋白40种,E13维甲酸致畸组与正常对照组差异蛋白26种。结论筛选出致畸早期大量神经管畸形和正常孕鼠血清差异蛋白,差异蛋白通过直接或间接相互作用,促进或抑制神经管畸形的发生与发展。展开更多
目的检测首发未用药抑郁症患者血浆氨基酸浓度并分析其与健康对照者之间的差异以及可能的临床价值。方法使用同位素内标结合串联质谱鉴定的方法测定26例首发未用药抑郁症患者和25例健康对照者血浆氨基酸浓度,同时使用17项汉密尔顿抑郁量...目的检测首发未用药抑郁症患者血浆氨基酸浓度并分析其与健康对照者之间的差异以及可能的临床价值。方法使用同位素内标结合串联质谱鉴定的方法测定26例首发未用药抑郁症患者和25例健康对照者血浆氨基酸浓度,同时使用17项汉密尔顿抑郁量表(Hamilton rating scale-17 for depression,HAMD-17)评定患者病情严重程度并进行统计分析。结果与健康对照组相比,抑郁症组中9种氨基酸(色氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、γ-氨基丁酸、α-氨基己二酸、谷氨酰胺、乙醇胺和亮氨酸)存在异常改变(P<0.05);抑郁症组中天冬氨酸和β-氨基异丁酸浓度与汉密尔顿抑郁量表得分呈显著的负性相关(P值分别为0.045、0.006,r值分别为-0.397、-0.521);回归分析提示色氨酸、半胱氨酸和谷氨酰胺组成的预测模型对抑郁组和健康对照组人群具有较好的预测效果。结论抑郁症患者病程早期存在血浆氨基酸代谢紊乱;循环氨基酸或可用于抑郁症病情严重程度评价以及抑郁症初步诊断。展开更多
同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)技术—利用多种同位素试剂标记蛋白多肽N末端或赖氨酸侧链基团,经高精度质谱仪串联分析,可同时比较多达8种样品之间的蛋白表达量,是近年来定量...同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)技术—利用多种同位素试剂标记蛋白多肽N末端或赖氨酸侧链基团,经高精度质谱仪串联分析,可同时比较多达8种样品之间的蛋白表达量,是近年来定量蛋白质组学常用的高通量筛选技术,正迅速被广大学者所接受。主要从iTRAQ实验技术概要、iTRAQ多重化学标记串联质谱技术在生命科学领域中的应用、问题与展望等三个方面进行简要总结。展开更多
文摘目的检测首发未用药抑郁症患者血浆氨基酸浓度并分析其与健康对照者之间的差异以及可能的临床价值。方法使用同位素内标结合串联质谱鉴定的方法测定26例首发未用药抑郁症患者和25例健康对照者血浆氨基酸浓度,同时使用17项汉密尔顿抑郁量表(Hamilton rating scale-17 for depression,HAMD-17)评定患者病情严重程度并进行统计分析。结果与健康对照组相比,抑郁症组中9种氨基酸(色氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、γ-氨基丁酸、α-氨基己二酸、谷氨酰胺、乙醇胺和亮氨酸)存在异常改变(P<0.05);抑郁症组中天冬氨酸和β-氨基异丁酸浓度与汉密尔顿抑郁量表得分呈显著的负性相关(P值分别为0.045、0.006,r值分别为-0.397、-0.521);回归分析提示色氨酸、半胱氨酸和谷氨酰胺组成的预测模型对抑郁组和健康对照组人群具有较好的预测效果。结论抑郁症患者病程早期存在血浆氨基酸代谢紊乱;循环氨基酸或可用于抑郁症病情严重程度评价以及抑郁症初步诊断。
文摘同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)技术—利用多种同位素试剂标记蛋白多肽N末端或赖氨酸侧链基团,经高精度质谱仪串联分析,可同时比较多达8种样品之间的蛋白表达量,是近年来定量蛋白质组学常用的高通量筛选技术,正迅速被广大学者所接受。主要从iTRAQ实验技术概要、iTRAQ多重化学标记串联质谱技术在生命科学领域中的应用、问题与展望等三个方面进行简要总结。
