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黑莓1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶基因RuACO 1a和RuACO 1b的克隆及功能鉴定
1
作者 李洁 董金彦 +3 位作者 闾连飞 吴文龙 李维林 张春红 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期14-26,共13页
基于前期黑莓(Rubus spp.)品种‘Navaho’果实转录组测序结果,通过反转录PCR克隆获得2个1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶(ACO)基因,命名为RuACO 1a和RuACO 1b。结果表明:RuACO 1a和RuACO 1b的开放阅读框(ORF)长度分别为939和918 bp,分别含有4... 基于前期黑莓(Rubus spp.)品种‘Navaho’果实转录组测序结果,通过反转录PCR克隆获得2个1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶(ACO)基因,命名为RuACO 1a和RuACO 1b。结果表明:RuACO 1a和RuACO 1b的开放阅读框(ORF)长度分别为939和918 bp,分别含有4和3个外显子。系统进化分析结果显示RuACO1a和RuACO1b与月季(Rosa chinensis Jacq.)、蕨麻〔Argentina anserina(Linn.)Rydb.〕和野草莓(Fragaria vesca Linn.)ACO1蛋白的亲缘关系均较近,且分别属于蔷薇科(Rosaceae)植物中2类ACO1蛋白。RuACO 1a在果实着色后28 d响应乙烯利诱导,其相对表达量急剧升高,而RuACO 1b在果实着色后21 d响应乙烯利诱导,早于RuACO 1a。脱落酸处理后,RuACO 1a和RuACO 1b的相对表达量在果实着色后14和28 d较高。RuACO 1a和RuACO 1b具有组织表达特异性,RuACO 1a在幼果、花蕾和花中的相对表达量较高,RuACO 1b在幼果和幼根中的相对表达量较高。与野生型相比,RuACO 1a和RuACO 1b过量表达转基因拟南芥〔Arabidopsis thaliana(Linn.)Heynh.〕植株均表现为叶片中叶绿素相对含量和氮含量升高、开花和角果成熟提前、ACO含量升高。综上所述,黑莓RuACO 1a和RuACO 1b基因均促进拟南芥角果提前成熟。 展开更多
关键词 黑莓 1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶(ACO) 果实成熟 乙烯 脱落酸 克隆 功能鉴定
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金环蛇L-氨基酸氧化酶诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的研究 被引量：6
2
作者 魏继福 杨海伟 +2 位作者 乔丽雅 魏晓龙 何韶衡 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期251-256,共6页
目的:探讨金环蛇毒中L-氨基酸氧化酶对人脐静脉内皮细胞株(HUVCE)增殖和凋亡作用的影响。方法:通过阳离子交换层析和肝素亲和层析从金环蛇蛇毒中分离纯化到一个L-氨基酸氧化酶,SDS电泳鉴定其纯度。SDS电泳和HPLC凝胶过滤确定其分子量,... 目的:探讨金环蛇毒中L-氨基酸氧化酶对人脐静脉内皮细胞株(HUVCE)增殖和凋亡作用的影响。方法:通过阳离子交换层析和肝素亲和层析从金环蛇蛇毒中分离纯化到一个L-氨基酸氧化酶,SDS电泳鉴定其纯度。SDS电泳和HPLC凝胶过滤确定其分子量,并采用MTT法、流式细胞术、激光共聚焦显微镜检测L-氨基酸氧化酶对人脐静脉内皮细胞株生长情况、细胞周期以及细胞形态的影响。结果:通过两步层析法从金环蛇毒中分离得到L-氨基酸氧化酶,L-氨基酸氧化酶的表观分子量通过SDS-PAGE测定约为60kD,通过凝胶过滤测定分子量为70kD。L-氨基酸氧化酶作用于HUVCE细胞12h后,细胞的生长明显受到抑制,L-氨基酸氧化酶作用的半数抑制量为2·8mg/L。流式细胞仪直方图上可见明显的亚二倍体峰,随着L-氨基酸氧化酶作用浓度的增加,凋亡率增加(P<0·05),细胞分裂增殖指数降低(P<0·05);激光共聚焦显微镜观察0·03mg/L的L-氨基酸氧化酶作用12h细胞出现早期凋亡,3mg/L的L-氨基酸氧化酶作用12h细胞核浓缩,部分细胞碎裂。结论:通过两步层析法从金环蛇毒中分离得到L-氨基酸氧化酶,该氨基酸氧化酶是由单亚基组成的。L-氨基酸氧化酶能诱导HUVCE凋亡从而对其生长具有抑制作用。 展开更多
关键词 氨基酸氧化酶 内皮细胞 细胞周期 细胞凋亡
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D-氨基酸氧化酶/D-丙氨酸系统杀伤K562e细胞的作用机制探讨 被引量：6
3
作者 翟勇平 王健民 +1 位作者 张雨生 吕书晴 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期163-165,共3页
目的 :探讨 D-氨基酸氧化酶 (DAAO) / D-丙氨酸 (D - Ala)系统用作自杀基因治疗白血病的作用机制。方法 :以 D- Ala杀伤稳定表达 DAAO和绿荧光蛋白 (GFP)的高致瘤性 K 5 6 2 e单克隆细胞 KDf Gd、KDf GC,应用 MTT法检测细胞存活率 ,并... 目的 :探讨 D-氨基酸氧化酶 (DAAO) / D-丙氨酸 (D - Ala)系统用作自杀基因治疗白血病的作用机制。方法 :以 D- Ala杀伤稳定表达 DAAO和绿荧光蛋白 (GFP)的高致瘤性 K 5 6 2 e单克隆细胞 KDf Gd、KDf GC,应用 MTT法检测细胞存活率 ,并用酚红氧化法测定培养上清 H2 O2 和 L owry法测定细胞蛋白数量 ,流式细胞仪测定细胞 GFP的荧光强度。结果 :在 2 5 m mol/ L D-Ala作用下 2 4 h即可完全杀死 KDf Gd细胞 ,当 D- Ala为 2 0 mmol/ L 时延长作用时间至 4 8h,杀伤率由 6 4 %增加至 96 .8% ,而D- Ala≤ 15 mm ol/ L 时杀伤率增加不明显。低于 2 0 m mol/ L,D- Ala对 K5 6 2 e几乎无杀伤作用。培养上清的 H2 O2 变化与杀伤转基因细胞作用相一致。 结论 :DAAO/ D- Ala系统可能是通过产生 H2 O2 发挥杀伤转基因 K5 6 2 展开更多
关键词 D-氨基酸氧化酶 D-丙氨酸 过氧化氢 白血病 K562e细胞
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白眉蝮蛇蛇毒L-氨基酸氧化酶的纯化与表征 被引量：5
4
作者 孙明忠 丁兰 +1 位作者 赵大庆 倪嘉缵 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1999年第1期37-41,共5页
用离子交换和凝胶过滤层析技术从长白山白眉蝮蛇蛇毒（Ａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎｂｌｏｍｈｏｆｆｉｕｓｕｒｅｎｓｉｓ）中分离得到了Ｌ氨基酸氧化酶（Ｌａｍｉｎｏａｃｉｄｏｘｉｄａｓｅ），经ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ... 用离子交换和凝胶过滤层析技术从长白山白眉蝮蛇蛇毒（Ａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎｂｌｏｍｈｏｆｆｉｕｓｕｒｅｎｓｉｓ）中分离得到了Ｌ氨基酸氧化酶（Ｌａｍｉｎｏａｃｉｄｏｘｉｄａｓｅ），经ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳＰＡＧＥ）和基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱（ＭＡＬＤＩＴＯＦＭＳ）鉴定，发现Ｌ氨基酸氧化酶由两个不相等的亚基组成，一个亚基的分子量约为３６０００，另一个亚基分子量约为５７０００．以Ｌ亮氨酸作为底物进行Ｌ氨基酸氧化酶活力测定时发现，其反应的适宜ｐＨ值为４５５和８９。 展开更多
关键词 白眉蝮蛇蛇毒 氨基酸氧化酶 纯化 蛇毒
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眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶对人膀胱癌ECV304细胞增殖和细胞周期的影响及机制 被引量：4
5
作者 齐元麟 张明芳 +3 位作者 赵蓉 张旭 吴玲珊 林建银 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1660-1665,共6页
目的研究眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶(Naja atra L-a-mino acid oxidase,NA-LAAO)对人膀胱癌细胞株ECV304的生长抑制作用,探讨其作用机制。方法 CCK-8法测定NA-LAAO的细胞毒性及对细胞增殖抑制能力;流式细胞术分析NA-LAAO对ECV304细胞周期... 目的研究眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶(Naja atra L-a-mino acid oxidase,NA-LAAO)对人膀胱癌细胞株ECV304的生长抑制作用,探讨其作用机制。方法 CCK-8法测定NA-LAAO的细胞毒性及对细胞增殖抑制能力;流式细胞术分析NA-LAAO对ECV304细胞周期的影响;实时定量PCR和Western blot分析细胞周期相关基因mRNA和蛋白质表达。结果 NA-LAAO对ECV304细胞有强烈抑制作用,且呈剂量-效应和时间-效应关系。NA-LAAO处理6、12、24 h对ECV304的IC50分别为(1.54±0.23)、(1.09±0.15)和(0.48±0.14)mg.L-1;细胞生长曲线显示,0.156 mg.L-1的NA-LAAO作用4 d可明显抑制ECV304细胞增殖;0.313 mg.L-1从d 2起就有明显效果;0.625 mg.L-1处理后细胞多数死亡;流式细胞术分析提示NA-LAAO可使ECV304细胞阻滞在G1期,并呈量效关系;实时定量PCR结果显示,NA-LAAO可下调Cyclin A2、B1、D1、E1、CDK2、CDK6、Survivin、Skp2,上调p21、p16、p27的表达,Western blot结果显示NA-LAAO可下调Cyclin A、CDK2、CDK6,上调p21,与实时PCR结果一致。结论 NA-LAAO可通过调节细胞周期相关分子,使ECV304细胞阻滞在G1期,抑制细胞增殖。 展开更多
关键词 蛇毒 中华眼镜蛇 L-氨基酸氧化酶 细胞增殖 细胞周期 膀胱癌
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D-氨基酸氧化酶基因多态性与精神分裂症的关联研究 被引量：5
6
作者 李悦 陈元堂 +3 位作者 胡江 魏腊梅 高海玲 许昌泰 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期2142-2144,2147,共4页
目的探讨D-氨基酸氧化酶(DAAO)基因多态性与精神分裂症的相关性。方法运用聚合酶链反应扩增及单核苷酸多态性的分子生物学技术,收集符合美国DSM-Ⅳ精神分裂症诊断标准的112个先证者及其父母组成的核心家系,对DAAO基因的rs3741775、rs382... 目的探讨D-氨基酸氧化酶(DAAO)基因多态性与精神分裂症的相关性。方法运用聚合酶链反应扩增及单核苷酸多态性的分子生物学技术,收集符合美国DSM-Ⅳ精神分裂症诊断标准的112个先证者及其父母组成的核心家系,对DAAO基因的rs3741775、rs3825251、rs3918347、rs4964770多态性分型,进行精神分裂症的DAAO基因多态性的关联分析和单体型相对风险率分析。结果 rs3918347等位基因与精神分裂症相关联(P=0.014),其中等位基因A是保护因素(Z=-2.37),G为危险因素(Z=2.37),A等位基因频率为0.41,G为0.59;rs3741775、rs3825251、rs4964770与精神分裂症无关联。三种单体型rs3825251-rs3918347的C/G、rs3918347-rs4964770的G/T、rs3825251-rs3918347-rs4964770中的C/G/T与精神分裂症有关联(P值分别为0.021、0.036、0.028,基因型频率分别为0.33、0.28、0.15)。结论 DAAO基因与精神分裂症相关联。 展开更多
关键词 精神分裂症 D-氨基酸氧化酶 基因多态性 关联分析
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竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶的纯化、诱导细胞凋亡和抗菌作用 被引量：6
7
作者 张玉洁 陈克平 +1 位作者 李文辉 张云 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2006年第1期33-37,共5页
经过分子筛层析和离子交换层析,我们从竹叶青(Trimeresurus stejnegeri)蛇毒中纯化得到了竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶(TSV-LAO)。实验表明,TSV-LAO是一种糖蛋白,其分子由非共价连接的两个相同的亚基组成,SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳一个亚基... 经过分子筛层析和离子交换层析,我们从竹叶青(Trimeresurus stejnegeri)蛇毒中纯化得到了竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶(TSV-LAO)。实验表明,TSV-LAO是一种糖蛋白,其分子由非共价连接的两个相同的亚基组成,SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳一个亚基的表观分子量为58 kDa。TSV-LAO酶比活力为1100 U/mg,其分子脱掉糖基化成分后不影响酶活力。TSV-LAO在浓度为1.0μg/mL以上时可以诱导C8166细胞凋亡。TSV-LAO对实验病原微生物具有选择性抗生作用并具有明显的量效关系,对白色念珠菌(ATCC2002)、金黄色葡萄球菌(ATCC2592)和短小芽孢杆菌(CMCCB11207)的最小抑菌浓度分别是0.3,0.4和1.0μg/mL,即使在最高实验浓度10μg/mL,TSV-LAO对其它实验菌株也未显示抑菌作用。 展开更多
关键词 蛇毒 L-氨基酸氧化酶 纯化 生化性质 细胞凋亡 抗生作用
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眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶诱导人胃癌细胞MGC-803细胞凋亡的实验研究 被引量：4
8
作者 齐元麟 张明芳 +1 位作者 赵蓉 林建银 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2012年第2期121-125,共5页
目的:研究眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶(NA-LAAO)对人胃癌细胞MGC-803的细胞毒性、诱导凋亡作用及可能机制。方法:采用CCK-8法测定细胞毒性;采用DNA倍体分析和An-nexin V/碘化丙啶染色测定细胞凋亡;采用发色底物法测定Caspase-3酶活性;采用We... 目的:研究眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶(NA-LAAO)对人胃癌细胞MGC-803的细胞毒性、诱导凋亡作用及可能机制。方法:采用CCK-8法测定细胞毒性;采用DNA倍体分析和An-nexin V/碘化丙啶染色测定细胞凋亡;采用发色底物法测定Caspase-3酶活性;采用Western-blot方法测定聚二磷酸腺苷核糖多聚酸-1(PARP-1)切割。结果:NA-LAAO可抑制MGC-803细胞增殖,6、12、24h的IC50分别为(2.48±0.41)、(1.74±0.27)和(0.83±0.19)mg/L;NA-LAAO可使细胞DNA分布出现亚二倍体凋亡峰,并可促使细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻;NA-LAAO可激活Caspase-3并可促使其底物PARP-1降解。结论:NA-LAAO可能通过激活Caspase-3这一分子机制而诱导细胞凋亡,从而抑制肿瘤细胞增殖。 展开更多
关键词 蛇毒 中华眼镜蛇 L-氨基酸氧化酶 细胞增殖 细胞凋亡
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中国汉族男性人群D-氨基酸氧化酶激活剂基因多态性与精神分裂症的关联研究 被引量：3
9
作者 韩燕 宁启兰 +5 位作者 张欢 王淑红 张富军 马雪红 高成阁 马捷 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期600-602,共3页
目的研究中国男性群体中D-氨基酸氧化酶激活剂(DAOA)基因多态性与精神分裂症的相关性。方法采用等位基因特性PCR方法对272例男性精神分裂症患者和206例对照DAOA基因区域的3个单核苷酸多态性位点(SNP:rs778294,rs778293和rs3918342)进行... 目的研究中国男性群体中D-氨基酸氧化酶激活剂(DAOA)基因多态性与精神分裂症的相关性。方法采用等位基因特性PCR方法对272例男性精神分裂症患者和206例对照DAOA基因区域的3个单核苷酸多态性位点(SNP:rs778294,rs778293和rs3918342)进行基因分型和统计分析。结果 DAOA基因区域rs778294的一个等位基因(C)与精神分裂症显著相关(P=0.03)。由3个SNP构建的单倍型分析表明,单倍型CAT在病例-对照组中表现出显著的差异。结论在中国汉族男性群体中,DAOA基因可能是精神分裂症的一个易感基因,NMDA受体途径可能是发生精神分裂症的一个重要潜在因素。 展开更多
关键词 精神分裂症 D-氨基酸氧化酶激活剂 单核苷酸多态性 连锁不平衡 关联
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基因工程酵母菌来源的D-氨基酸氧化酶分离纯化 被引量：2
10
作者 史训龙 冯美卿 +2 位作者 贺佳音 袁中一 周珮 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期71-74,85,共5页
目的 以基因工程酵母表达的胞内D-氨基酸氧化酶(DAAO)为原料,通过破细胞,分离纯化DAAO。 方法 采用机械研磨,反复冻溶,超声波等多种方法破细胞,获得粗酶液,硫酸铵分段沉淀。沉淀透析后,经 DEAE Sephadex A-50,DEAE-DE52,Q-sepharose等... 目的 以基因工程酵母表达的胞内D-氨基酸氧化酶(DAAO)为原料,通过破细胞,分离纯化DAAO。 方法 采用机械研磨,反复冻溶,超声波等多种方法破细胞,获得粗酶液,硫酸铵分段沉淀。沉淀透析后,经 DEAE Sephadex A-50,DEAE-DE52,Q-sepharose等离子交换柱进行第一步分离,获得的含酶粗品,再经Sephaciyl S-100分子筛进一步纯化获得电泳纯的DAAO。结果 超声波破壁为最佳的破壁方法,得到的每毫升酶液所含 的酶活力是其他破壁方法的两倍以上,最高达到12 000 U／mi,。两步硫酸铵沉淀能粗分DAAO,50％硫酸铵沉 淀酶回收率可达85％以上。用Q-sepharose、Sephacryl S-100分子筛柱层析两步纯化,酶活力回收率最高可达 90％,SDS-PAGE显示单一蛋白条带。结论 本实验方法能得到电泳纯的DAAO,总回收率约为40％。 展开更多
关键词 S-100 细胞 法能 透析 分离纯化 电泳 表达 硫酸铵沉淀 基因工程酵母 D-氨基酸氧化酶
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D-氨基酸氧化酶在毕赤酵母中的表达及快速纯化 被引量：2
11
作者 冯美卿 史训龙 +2 位作者 孙传文 周伟 周珮 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期622-625,共4页
目的建立简便、快速纯化D-氨基酸氧化酶(DAAO)的新方法,以利用高纯度的DAAO转化头孢菌素C制备戊二酰-7-氨基头孢霉烷酸(GL-7ACA)。方法通过基因工程手段,构建N端和C端各镶嵌6个组氨酸的DAAO重组质粒,电转化Pichia pastoris GS115电感受... 目的建立简便、快速纯化D-氨基酸氧化酶(DAAO)的新方法,以利用高纯度的DAAO转化头孢菌素C制备戊二酰-7-氨基头孢霉烷酸(GL-7ACA)。方法通过基因工程手段,构建N端和C端各镶嵌6个组氨酸的DAAO重组质粒,电转化Pichia pastoris GS115电感受态细胞,利用PCR方法筛选阳性转化子,再经甲醇诱导筛选出高表达菌。结果高表达重组菌(PHD12)摇瓶发酵单位达到2 000 IU/L,发酵罐内达到22 500 IU/L。并利用Ni螯合型树脂对表达的DAAO经一步分离纯化,以60%的总收率获得纯化产物。纯化产物保持良好的转化CPC-Na活性。结论利用基因工程表达组氨酸标记蛋白,可简化基因工程的下游工序。 展开更多
关键词 D-氨基酸氧化酶 毕赤酵母 表达 快速纯化
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IRES序列连接的D-氨基酸氧化酶与绿色荧光蛋白基因导入K562e细胞的表达 被引量：2
12
作者 翟勇平 王健民 +2 位作者 张雨生 周虹 吕书晴 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2002年第3期209-211,共3页
内部核糖体进入位点 (IRES)序列来源于脑心肌炎病毒 ,它可翻译一条mRNA上的两个开放读框 ,由其连接的两个基因的表达率相同。本实验应用以IRES序列连接D 氨基酸氧化酶 (DAAO)和绿色荧光 (GFP)基因构建的逆转录病毒载体 ,转染K5 6 2e细... 内部核糖体进入位点 (IRES)序列来源于脑心肌炎病毒 ,它可翻译一条mRNA上的两个开放读框 ,由其连接的两个基因的表达率相同。本实验应用以IRES序列连接D 氨基酸氧化酶 (DAAO)和绿色荧光 (GFP)基因构建的逆转录病毒载体 ,转染K5 6 2e细胞获得稳定表达GFP的单克隆细胞KDfGC和KDfGd,测定转基因细胞的荧光阳性率以及荧光强度 ,用D 丙氨酸 (D Ala)作用DAAO+细胞 ,并用酚红氧化法测定培养上清H2 O2 。结果表明 ,KDfGC和KDfGd细胞的荧光阳性率分别为 94 .6 4 % ,96 .31% ;2× 10 4细胞的荧光强度分别为 2 0 2U和 174U。GFP荧光强度与H2 O2 的产量间呈指数相关。结论 :IRES序列调控的双基因可同时表达 ,GFP的荧光强度可以间接地反映DAAO基因的表达水平 ,为了解目的基因表达水平高低提供了新的方法。 展开更多
关键词 IRES序列 D-氨基酸氧化酶基因 绿色荧光蛋白基因 K562e细胞系 白血病 病理学 基因转移
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蛇毒L-氨基酸氧化酶的生物学作用 被引量：4
13
作者 郭春梅 刘淑清 孙明忠 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2012年第B12期205-212,共8页
蛇毒(snake venom,SV)是天然的最丰富的蛋白(酶)源之一,而L-氨基酸氧化酶(L-amino acid oxidase,LAAO)是SV的主要蛋白(酶)组成成份,也是SV重要的活性和毒性蛋白成份,其生物学活性多样。近年来的研究表明,SV-LAAOs具有明显的影响血小板... 蛇毒(snake venom,SV)是天然的最丰富的蛋白(酶)源之一,而L-氨基酸氧化酶(L-amino acid oxidase,LAAO)是SV的主要蛋白(酶)组成成份,也是SV重要的活性和毒性蛋白成份,其生物学活性多样。近年来的研究表明,SV-LAAOs具有明显的影响血小板聚集、诱导细胞凋亡、细胞毒性、抑菌活性及抗病毒/HIV活性等生物功能。本文简述了SV-LAAO的酶学和结构特性,综述了SV-LAAO以上生物学作用及其相关作用机制,以期为今后深入研究SV-LAAO提供参考。 展开更多
关键词 蛇毒 L-氨基酸氧化酶 生物学活性
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D型氨基酸氧化酶活性对于D-硝基精氨酸手性转化的影响 被引量：2
14
作者 辛艳飞 周向军 王永祥 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第2期135-139,共5页
D-硝基精氨酸(D-NNA)可在大鼠体内发生手性转化生成其L型异构体,即L-NNA,后者可抑制一氧化氮合酶活性,减少一氧化氮生成,升高动脉血压.研究了D型氨基酸氧化酶(DAAO)在D-NNA手性转化中的作用及DAAO对不同(包括已报道在体内可发生手型转化... D-硝基精氨酸(D-NNA)可在大鼠体内发生手性转化生成其L型异构体,即L-NNA,后者可抑制一氧化氮合酶活性,减少一氧化氮生成,升高动脉血压.研究了D型氨基酸氧化酶(DAAO)在D-NNA手性转化中的作用及DAAO对不同(包括已报道在体内可发生手型转化的)D型氨基酸的选择活性.体内实验显示,DAAO的选择性抑制剂苯甲酸钠(400mg/kg)或肌酐(400mg/kg)均可在不同程度上抑制D-NNA升压作用,进一步研究发现,肾脏或肝脏DAAO酶液在外加DAAO后可提高D-NNA的手性转化约2倍,表明DAAO对于D-NNA在体内的手性转化是必需的.DAAO酶液对可在体内发生手性转化且转化率相似(30%～50%)的D型氨基酸(D-Phe,D-Leu和D-NNA)的选择性表现出显著差异(Kcat/Km相差可达约15倍左右),这从另一方面表明体内D-硝基精氨酸氧化是其发生手性转化的前提条件但非决定因素. 展开更多
关键词 D-硝基精氨酸 D型氨基酸氧化酶 D型氨基酸 手性转化
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D-氨基酸氧化酶的研究进展 被引量：3
15
作者 孙兵兵 王筱兰 杨志平 《化学与生物工程》 CAS 2007年第2期8-11,共4页
D-氨基酸氧化酶(DAAO)是一种以黄素腺嘌呤(FAD)为辅基的典型的黄素蛋白酶类。DAAO可氧化D-氨基酸生成相应的酮酸和氨。介绍了D-氨基酸氧化酶的研究现状,包括在自然界的分布、生理功能、生物学特性、催化机理、基因克隆和序列分析以及基... D-氨基酸氧化酶(DAAO)是一种以黄素腺嘌呤(FAD)为辅基的典型的黄素蛋白酶类。DAAO可氧化D-氨基酸生成相应的酮酸和氨。介绍了D-氨基酸氧化酶的研究现状,包括在自然界的分布、生理功能、生物学特性、催化机理、基因克隆和序列分析以及基因表达。 展开更多
关键词 D-氨基酸氧化酶 生物学特性 分离 纯化 基因表达
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D-氨基酸氧化酶基因重组逆转录病毒载体的构建及表达 被引量：1
16
作者 翟勇平 王健民 +1 位作者 周虹 张雨生 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2001年第1期52-54,共3页
目的 :构建含D 氨基酸氧化酶 (DAAO)基因的重组逆转录病毒载体 ,初步观察DAAO基因的功能。方法 :利用重组DNA技术将DAAOcDNA亚克隆至逆转录病毒载体 (pLDAAOSN)中 ,以磷酸钙沉淀法介导转染包装细胞ΦXNA ,用NIH3T3细胞测定病毒滴度 ,将... 目的 :构建含D 氨基酸氧化酶 (DAAO)基因的重组逆转录病毒载体 ,初步观察DAAO基因的功能。方法 :利用重组DNA技术将DAAOcDNA亚克隆至逆转录病毒载体 (pLDAAOSN)中 ,以磷酸钙沉淀法介导转染包装细胞ΦXNA ,用NIH3T3细胞测定病毒滴度 ,将重组逆转录病毒感染K5 6 2白血病细胞 ,G418筛选出抗性克隆 ,命名为KDAAO。PCR、原位杂交分析外源基因整合和表达 ,观察 5 0mm/LD 丙氨酸对KDAAO杀伤作用。结果 :经酶切鉴定和DNA测序证明重组逆转录病毒载体中含有完整的DAAO基因。包装细胞产生了高滴度病毒 (5 .2× 10 6CFU/ml)。PCR、原位杂交分析证明DAAO基因已整合至KDAAO基因组中 ,并在mRNA水平表达。初步观察到D 丙氨酸能明显杀伤KDAAO。结论 展开更多
关键词 逆转录病毒载体 DAAO基因 白血病细胞系 D-氨基酸氧化酶
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中枢神经系统D-氨基酸氧化酶的研究进展 被引量：2
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作者 赵文娟 殷明 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期64-66,共3页
新近研究证实,哺乳动物神经系统中存在内源性D-氨基酸氧化酶,参与脑内D-氨基酸的代谢。遗传学研究发现,D-氨基酸氧化酶基因与精神分裂症的发生密切相关。分子生物学研究表明,在D-氨基酸氧化酶基因启动子区域存在一些转录因子的结合位点... 新近研究证实,哺乳动物神经系统中存在内源性D-氨基酸氧化酶,参与脑内D-氨基酸的代谢。遗传学研究发现,D-氨基酸氧化酶基因与精神分裂症的发生密切相关。分子生物学研究表明,在D-氨基酸氧化酶基因启动子区域存在一些转录因子的结合位点。这些研究结果提示,中枢神经系统的D-氨基酸氧化酶除了参与D-氨基酸的代谢以外,可能还具有其它的生理功能。本文就中枢神经系统D-氨基酸氧化酶的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 D-氨基酸氧化酶 D-氨基酸 中枢神经系统 疼痛 精神分裂症
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过氧化氢对D-氨基酸氧化酶转化头孢菌素C为戊二酰-7-氨基头孢烯酸反应的影响 被引量：1
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作者 于海军 陈立功 +3 位作者 李阳 闫喜龙 白国义 段学民 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第1期79-84,共6页
在D-氨基酸氧化酶D1AAO转化头孢菌素C(CPC)为戊二酰基-7-氨基头孢烯酸(Gl-7-ACA)的反应中,所生成的过氧化氢同时与CPC和Gl-7-ACA发生的氧化副反应是造成目标产物收率损失的关键因素之一。通过联用溶氧电极和过氧化氢电极,测定了DAAO转化... 在D-氨基酸氧化酶D1AAO转化头孢菌素C(CPC)为戊二酰基-7-氨基头孢烯酸(Gl-7-ACA)的反应中,所生成的过氧化氢同时与CPC和Gl-7-ACA发生的氧化副反应是造成目标产物收率损失的关键因素之一。通过联用溶氧电极和过氧化氢电极,测定了DAAO转化CPC为Gl-7-ACA的反应体系内溶氧浓度与相应的过氧化氢浓度的变化曲线,测知反应体系中过氧化氢浓度积累最高可达5mmol·L-1。模拟该反应条件下过氧化氢的氧化反应可知,在过氧化氢浓度较低时,溶液的酸性可加速该氧化反应。在中性条件下,过氧化氢浓度为5mmol·L-1时,反应1h后,CPC的氧化损失为2%,Gl-7-ACA的氧化损失为3%。通过改进氧气分布器、搅拌转速和并调控氧气流量以控制溶液中溶解氧的浓度,来适度地降低物系中过氧化氢积累浓度,使反应收率提高了2.2%。 展开更多
关键词 D-氨基酸氧化酶(DAAO) 头孢菌素C(CPC) 过氧化氢 戊二酰基-7-氨基头孢烯酸(G1-7-ACA)
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生长阶段及环境因子对东海原甲藻氨基酸氧化酶活性的影响 被引量：1
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作者 刘静雅 赖海燕 +1 位作者 徐宁 段舜山 《生态科学》 CSCD 北大核心 2013年第1期27-33,共7页
以中国沿海典型赤潮藻东海原甲藻为实验材料,研究了不同生长阶段以及温度、光照和氮源对其氨基酸氧化酶活性的影响。结果表明,在缺氮条件下东海原甲藻显示较高的氨基酸氧化酶活性。在15-30℃温度范围均检测出氨基酸氧化酶活性,较低温度... 以中国沿海典型赤潮藻东海原甲藻为实验材料,研究了不同生长阶段以及温度、光照和氮源对其氨基酸氧化酶活性的影响。结果表明,在缺氮条件下东海原甲藻显示较高的氨基酸氧化酶活性。在15-30℃温度范围均检测出氨基酸氧化酶活性,较低温度下(15-20℃)的氨基酸氧化酶活性显著高于高温处理组(25-30℃)(p<0.05),其中20℃时的酶活最高。在50-100μmol/(m2.s)的光强下,氨基酸氧化酶活性较高(0.38-0.47 fmol/(h.cell)),而在2μmol/(m2.s)的低光强下,虽然酶活受到显著抑制,但仍达到0.28 fmol/(h.cell)。氮源组成对氨基酸氧化酶活性具有显著影响,以丙氨酸为唯一氮源时的酶活最高(0.44fmol/(h.cell)),NH4++丙氨酸为氮源时的酶活最低(0.22 fmol/(h.cell))。研究显示,光照、温度和氮源是东海原甲藻氨基酸氧化酶活性的关键调控因子。东海原甲藻不仅能够有效利用游离氨基酸,而且适应较广的温度和较低的光照条件,这可能是东海原甲藻赤潮形成和持续的重要原因。 展开更多
关键词 东海原甲藻 溶解游离氨基酸 可溶性有机氮 氨基酸氧化酶 环境因子
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D-氨基酸氧化酶性质研究 被引量：1
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作者 韩北忠 周竞扬 《中国酿造》 CAS 北大核心 2006年第3期1-3,共3页
D-氨基酸氧化酶(DAAO)是一种以黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)为辅基的典型黄素酶。它催化D-氨基酸生成相应的-α酮酸和氨。该文介绍了D-氨基酸氧化酶的研究现状及其特性,包括它的生理功能、基本特性、结构特性、光学动力学特性。
关键词 D-氨基酸氧化酶 特性
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