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猪源分泌性白细胞蛋白酶抑制因子的原核表达及单克隆抗体制备 被引量:1
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作者 付明智 李新新 +1 位作者 刘雪威 李焕荣 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2556-2565,共10页
【目的】制备猪源分泌性白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)及其单克隆抗体,为建立猪源SLPI检测方法及其功能研究提供试验材料。【方法】将经串联的猪源SLPI基因克隆至pET-28a(+)、pGEX-6P-1载体构建重组表达载体;利用大肠杆菌表达系统表达重... 【目的】制备猪源分泌性白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)及其单克隆抗体,为建立猪源SLPI检测方法及其功能研究提供试验材料。【方法】将经串联的猪源SLPI基因克隆至pET-28a(+)、pGEX-6P-1载体构建重组表达载体;利用大肠杆菌表达系统表达重组蛋白,采用SDS-PAGE分析重组蛋白的诱导表达情况;重组菌经超声破碎以镍柱对重组蛋白进行纯化,并进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定。用纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合制备杂交瘤细胞,采用间接ELISA筛选和鉴定所制备单克隆抗体和亚类,利用Western blotting及间接免疫荧光(IFA)方法鉴定单克隆抗体的特异性。【结果】试验成功构建了pGEX-6P-1-SLPI、pET-28a-SLPI重组质粒,获得纯度较高的His-SLPI、GST-SLPI重组蛋白,分子质量分别为27和50 ku,前者为包涵体表达,后者为可溶性表达;获得3株可稳定分泌抗猪SLPI单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中,9D10为IgG3亚类,9G11、10E2为IgG2b亚类;3株单克隆抗体均可与猪肠上皮细胞内的SLPI结合,9D10在细胞核中显示较强的荧光信号,而9G11、10E2在细胞浆和细胞核中均有荧光信号。【结论】本研究成功制备了重组His-SLPI和GST-SLPI蛋白,获得3株稳定分泌抗猪源SLPI单克隆抗体,特异性良好,为进一步研究猪源SLPI特性及其在黏膜免疫中的作用搭建技术平台。 展开更多
关键词 分泌性白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI) 原核表达 单克隆抗体
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孕激素对子宫内膜异位症患者在位内膜T淋巴细胞分泌的受激活调节因子表达的影响 被引量:4
2
作者 邓姗 戴毅 +5 位作者 郎景和 冷金花 刘珠凤 孙大为 朱兰 谭先杰 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期257-261,共5页
目的探讨正常T淋巴细胞表达和分泌的受激活调节因子(RANTES)与子宫内膜异位症(EM)发病的关系以及孕激素治疗的可行性。方法采集子宫内膜异位症患者术前以及放置左炔诺孕酮宫内节育系统(LNG-IUS)、口服甲羟孕酮(MPA)或注射促性腺激素释... 目的探讨正常T淋巴细胞表达和分泌的受激活调节因子(RANTES)与子宫内膜异位症(EM)发病的关系以及孕激素治疗的可行性。方法采集子宫内膜异位症患者术前以及放置左炔诺孕酮宫内节育系统(LNG-IUS)、口服甲羟孕酮(MPA)或注射促性腺激素释放激素类似物(GnRHa)后以及对照组的在位内膜,以半定量RT-PCR方法检测内膜组织中RANTES mRNA的表达。以100U/ml肿瘤坏死因子-α(TNFα)和不同浓度的孕酮(Po)与内膜细胞共孵育24h,观察Po对TNFα刺激RANTES分泌效应的影响。以不同浓度Po预处理细胞48h后,加入TNFα(100U/ml,16h),观察Po对TNFα刺激细胞分泌RANTES的抑制作用。采用ELISA方法检测细胞培养上清中RANTES的分泌量。结果药物干预前,EM组RANTES mRNA的相对表达量显著高于对照组(28.0±9.0vs.22.0±5.6,P<0.05)。放置LNG-IUS(24.0±4.2vs.25.9±4.2,P>0.05)或注射GnRHa(23.0±12.9vs.26.9±5.2,P>0.05)后,子宫内膜RANTES mRNA的表达差异无显著性;MPA组RANTES mRNA表达较用药前显著升高(42.6±3.1vs.24.3±5.7,P<0.05)。单纯Po刺激,培养子宫内膜细胞RANTES的分泌量无明显变化;同时以Po和TNFα刺激细胞,RANTES的分泌显著增加;Po预处理48h后,RANTES的分泌对TNFα的反应性显著减弱。结论EM患者在位内膜本身具有高趋化活性,孕激素防治EM有一定可行性。 展开更多
关键词 子宫内膜异位症 在位内膜 孕激素 t淋巴细胞分泌的受激活调节因子
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自然流产母胎界面嗜酸粒细胞趋化因子、T淋巴细胞激活上调性表达分泌因子S及其受体的表达 被引量:1
3
作者 肖世金 董倩 赵爱民 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1170-1174,共5页
目的探讨嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)/CCR3、T淋巴细胞激活上调性表达分泌因子S(RANTES)/CCR5在正常妊娠免疫耐受及自然流产中的作用。方法采集20例自然流产患者(AP组)和20例正常早孕妇女(NP组)的蜕膜和绒毛组织;采用免疫组织化学方... 目的探讨嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)/CCR3、T淋巴细胞激活上调性表达分泌因子S(RANTES)/CCR5在正常妊娠免疫耐受及自然流产中的作用。方法采集20例自然流产患者(AP组)和20例正常早孕妇女(NP组)的蜕膜和绒毛组织;采用免疫组织化学方法检测蜕膜和绒毛组织Eotaxin/CCR3、RANTES/CCR5的表达,并进行线性相关分析。结果 NP组蜕膜、绒毛组织Eotaxin的表达阳性率分别为75%和80%,显著高于AP组的35%和30%(P=0.011,P=0.001);NP组阳性表达强度亦显著高于AP组(P=0.003,P=0.002)。NP组蜕膜、绒毛组织RANTES的表达阳性率分别为40%和45%,显著低于AP组的80%和85%(P=0.01,P=0.008),NP组阳性表达强度亦显著低于AP组(P=0.002,P=0.002)。两组蜕膜、绒毛组织CCR5的表达阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);但AP组阳性表达强度显著高于NP组(P=0.018,P=0.029)。两组CCR3的表达阳性率及阳性表达强度比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。在NP组中,蜕膜、绒毛RANTES的表达与CCR5的表达均呈正相关(r=0.679,P=0.001;r=0.478,P=0.033);在AP组中,蜕膜、绒毛RANTES的表达与CCR5的表达均为正相关(r=0.610,P=0.004;r=0.620,P=0.004);两组蜕膜、绒毛Eotaxin和CCR3的表达均不存在相关性(P>0.05)。结论趋化因子及其受体Eotaxin/CCR3、RANTES/CCR5在妊娠免疫耐受形成和自然流产的发病机制中可能发挥重要作用。 展开更多
关键词 趋化因子 嗜酸性粒细胞趋化因子 CCR3 t淋巴细胞激活上调性表达分泌因子S CCR5 自然流产
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人源分泌型血管内皮细胞生长因子受体flt-1(Ⅰ~Ⅳ/区)的基因克隆及其腺病毒载体的构建和表达 被引量:5
4
作者 张华 寿成超 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第4期625-630,共6页
肿瘤的生长、转移与血管形成密切相关 ,利用基因治疗的方法将抗血管形成的因子导入体内是目前肿瘤生物治疗研究的重要策略 .血管内皮细胞生长因子 (VEGF)在血管生成中起重要作用 ,因此阻断VEGF与相应受体的结合成为抗血管形成的重要靶... 肿瘤的生长、转移与血管形成密切相关 ,利用基因治疗的方法将抗血管形成的因子导入体内是目前肿瘤生物治疗研究的重要策略 .血管内皮细胞生长因子 (VEGF)在血管生成中起重要作用 ,因此阻断VEGF与相应受体的结合成为抗血管形成的重要靶点 .通过RT PCR从人脐静脉内皮细胞克隆了VEGF受体Flt 1的信号肽及胞外Ⅰ~Ⅳ区cDNA ,即可溶性sFlt 1的cDNA片段 .利用Ad Easy体系 ,在细菌BJ5 183中同源重组后 ,转染包装细胞 2 93,成功包装出重组flt 1腺病毒 ,利用它可有效地感染低分化胃黏液腺癌细胞株MGC80 3.经RT PCR ,免疫沉淀及免疫印迹等不同方法检测表明 ,被感染细胞能表达并分泌Flt 1的胞外区蛋白 ,为后续进行抗肿瘤血管形成的基因治疗研究奠定了基础 . 展开更多
关键词 人源分泌型血管内皮细胞生长因子受体 FLt-1 基因克隆 腺病毒载体 构建 表达 肿瘤
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白血病和正常血细胞的一些细胞因子及受体表达的比较研究 被引量:10
5
作者 陈元仲 吴勇 +1 位作者 梁敏 吕联煌 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第12期1482-1485,共4页
目的 :研究白血病细胞和正常血细胞的细胞因子及相应受体 (R)的表达及其意义。方法 :采用逆转录 -聚合酶链反应方法检测红白血病细胞系 (HEL、K562 )、髓系白血病细胞系 (HL - 60 )、单核细胞白血病细胞系(U937)、巨核细胞白血病细胞系 ... 目的 :研究白血病细胞和正常血细胞的细胞因子及相应受体 (R)的表达及其意义。方法 :采用逆转录 -聚合酶链反应方法检测红白血病细胞系 (HEL、K562 )、髓系白血病细胞系 (HL - 60 )、单核细胞白血病细胞系(U937)、巨核细胞白血病细胞系 (DAMI、MEG - 0 1 )、T淋巴瘤细胞系 (HUT78)及EB病毒感染的B细胞系 (CA)和正常血细胞 (CD34+ 造血干细胞、外周血单个核细胞、成熟粒细胞、巨核细胞及血小板 )的多种细胞因子及受体的表达。结果 :①CD34+ 造血干细胞同时表达IL - 1 (α、β)、IL - 3、IL - 6、GM -CSF、G -CSF及相应受体和干细胞因子受体(SCFR)、血小板生成素受体 (MPL)基因 ,在成熟粒细胞仅表达IL - 6、IL - 6R、G -CSFR、GM -CSF ,巨核细胞、血小板仅表达IL - 3R、IL - 6、IL - 6R、MPL。而TGFβ1 、TNFα及相应受体在上述正常血细胞均有持续表达。②HEL、K562、HL -60、U937、DAMI、MEG - 0 1、HUT78及CA可同时表达至少两种以上正调控因子及相应受体 ,而负调控因子TGFβ1 、TNFα及受体在上述各细胞系均有表达。结论 :白血病细胞株细胞存在正性多自泌环节 ,白血病细胞的正。 展开更多
关键词 受体表达 比较研究 白血病 细胞因子 分泌
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阻断CD40-CD40L共刺激途径对T细胞表型及细胞因子分泌的作用研究 被引量:4
6
作者 陈纯 黄绍良 +3 位作者 段连宁 李浩威 温冠媚 魏菁 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期534-537,共4页
目的 :探讨应用抗CD4 0L单克隆抗体阻断CD4 0 CD4 0L共刺激途径后对T细胞表型及其分泌的细胞因子的影响 ,为体外阻断该共刺激途径诱导T细胞对异体移植抗原的免疫耐受提供实验依据。方法 :供鼠 (C5 7BL 6 H 2b)脾T细胞作为反应细胞 ,受... 目的 :探讨应用抗CD4 0L单克隆抗体阻断CD4 0 CD4 0L共刺激途径后对T细胞表型及其分泌的细胞因子的影响 ,为体外阻断该共刺激途径诱导T细胞对异体移植抗原的免疫耐受提供实验依据。方法 :供鼠 (C5 7BL 6 H 2b)脾T细胞作为反应细胞 ,受鼠 (BALB CH 2d)脾细胞作为刺激细胞 ,设单抗组 (加抗CD4 0L单抗 )和对照组 (不加单抗 ) ,初次混合淋巴细胞培养(MLR) 7天 ,在不同时间点采用3H TdR掺入法检测细胞增殖率 ,以ELISA法测定培养上清液中IFN γ、IL 2、IL 4、IL 10等的水平 ,第 5天采用流式细胞仪检测CD4 + T和CD8+ T细胞上CD2 5、CD6 9、CD4 0L和CD4 5RA的表达。再次MLR 5天 ,第 1、3、5天采用3H TdR掺入法测定细胞的增殖情况和ELISA法测定培养上清液中的上述细胞因子的水平。结果 :初次和再次MLR结果均显示 ,单抗组细胞增殖反应率明显低于对照组。初次MLR单抗组中CD4 + T和CD8+ T细胞比例明显低于对照组 (P <0 0 5 ) ;单抗组中CD4 + CD2 5 + T、CD4 + CD6 9+ T、CD8+ CD2 5 + T、CD4 + CD4 0L+ T和CD8+ CD6 9+ T细胞比例明显低于对照组 (P <0 0 5 ) ,而CD8+ CD4 0L+ T和CD4 + CD4 5RA +T细胞的比例与对照组相比无明显差异 (P >0 0 5 )。初次MLR中单抗组和对照组培养上清中IL 4和IL 10几乎无法测出 。 展开更多
关键词 CD40-CD40L t细胞表型 细胞因子 分泌作用 免疫耐受
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T细胞相关细胞因子在移植排斥中的表达及其意义 被引量:4
7
作者 刘畅 邵悦 郑世民 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期477-480,共4页
根据分泌细胞因子的种类,辅助性T细胞分为Th1和Th2细胞两种[1]。其中Th1型细胞因子促进移植物抗原特异性的细胞毒性T细胞(CTL)活化、增殖和分化,诱发迟发型变态反应,从而启动或加速移植排斥反应[2];Th2细胞可抑制Th1细胞分化及其细胞... 根据分泌细胞因子的种类,辅助性T细胞分为Th1和Th2细胞两种[1]。其中Th1型细胞因子促进移植物抗原特异性的细胞毒性T细胞(CTL)活化、增殖和分化,诱发迟发型变态反应,从而启动或加速移植排斥反应[2];Th2细胞可抑制Th1细胞分化及其细胞因子表达,调控移植排斥反应, 展开更多
关键词 移植排斥反应 辅助性t细胞 相关细胞因子 tH1型细胞因子 细胞毒性t细胞 迟发型变态反应 tH2细胞 分泌细胞因子
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人肝细胞生长因子(hdHGF)基因在毕赤酵母中的分泌表达 被引量:4
8
作者 邓兵兵 方宏清 +2 位作者 薛冲 赵洪亮 刘志敏 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期590-594,共5页
研究了hdHGF基因在毕赤酵母中的表达 .以人胎盘mRNA为模板 ,经逆转录、重叠PCR获得hdHGF全长和成熟基因片段 .将该基因片段克隆到pPIC9载体上 ,将重组表达质粒转化巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)GS115,筛选mut+ 表型 ,经甲醇诱导可实... 研究了hdHGF基因在毕赤酵母中的表达 .以人胎盘mRNA为模板 ,经逆转录、重叠PCR获得hdHGF全长和成熟基因片段 .将该基因片段克隆到pPIC9载体上 ,将重组表达质粒转化巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)GS115,筛选mut+ 表型 ,经甲醇诱导可实现rhdHGF的分泌表达 .经摇瓶培养筛选出 4株表达水平较高的酵母工程菌株 ,SDS PAGE分析和Western印迹试验表明 ,产物分子量约为80kD ,5L发酵罐高密度培养已使生物量达 13 5g L(干重 ) ,发酵液上清总蛋白量为 8 0g L ,电泳结果表明rhdHGF表达水平为总蛋白的 12 3 % . 展开更多
关键词 人肝细胞生长因子 巴斯德毕赤酵母 分泌表达 hdHGF基因
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T细胞中IL-3基因表达调节的转录因子初探 被引量:1
9
作者 石统东 甘立霞 +1 位作者 曹廷兵 朱锡华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第1期38-41,共4页
主要利用凝胶迁移率试验和抗体超迁移试验,以hIL-3基因5′侧翼含κB位点的序列为探针,探究NF-κB是否参与了hIL-3基因的表达调节.结果表明,在Jurkat细胞和人外周血T淋巴细胞中,都存在与此序列特异结合的可... 主要利用凝胶迁移率试验和抗体超迁移试验,以hIL-3基因5′侧翼含κB位点的序列为探针,探究NF-κB是否参与了hIL-3基因的表达调节.结果表明,在Jurkat细胞和人外周血T淋巴细胞中,都存在与此序列特异结合的可诱导蛋白;NF-κBp65亚基的单抗对DNA-蛋白复合物的形成没有影响.这些结果揭示:正常细胞和肿瘤细胞中,确存在可特异识别hIL-3基因5′侧翼的κB顺序的蛋白因子,而且该蛋白因子的表达是可诱导的;但NF-κB并未参与IL-3基因的表达调节. 展开更多
关键词 基因表达 t细胞 细胞介素 转录因子
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T细胞特异转录因子GATA3在白血病中的表达 被引量:1
10
作者 李扬秋 C A Schmidt 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 1995年第4期376-379,共4页
应用聚合酶链反应(PCR)方法检测了ANLL,CML,T-ALL,c-ALL和CLL等共119例病人的白血病细胞和14例正常人外周血单个核细胞中T细胞特异转录因子GATA3的表达情况。在T-ALL,c-ALL,CLL及CML中,其表达率很高,分别为75%、85.71%、100%及76.47... 应用聚合酶链反应(PCR)方法检测了ANLL,CML,T-ALL,c-ALL和CLL等共119例病人的白血病细胞和14例正常人外周血单个核细胞中T细胞特异转录因子GATA3的表达情况。在T-ALL,c-ALL,CLL及CML中,其表达率很高,分别为75%、85.71%、100%及76.47%;在ANLL中的表达率则为42.68%;在正常外周血中为28.57%。同时,分析了ANLL各亚型GATA 3基因的表达情况,各型间的阳性率没有显著性差异(P=0.3118)。本结果提供了GATA 3基因在白血病中异常表达的情况,提示该转录因子在白血病细胞的分化过程中可能起到一定的调节作用。同时,由于该基因在白血病中的高表达现象,有应用于临床作为检测微小残留病变的价值。 展开更多
关键词 t细胞 转录因子 基因表达 白血病
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一种白血病小鼠自分泌T细胞抑制因子的部分纯化及性质研究
11
作者 王维新 吴克复 应红光 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1990年第5期268-271,共4页
我们前文报道在L7811腹水型白血病小鼠的腹水中存在一种白血病相关自身抑制因子(LAI—615),本文用Sephadex G—150凝胶层析,DEAE纤维素离子交换层析和FPLC快速蛋白液相层析三步纯化,将LAI—615纯化了1306倍。研究发现其分泌产生与Lyt2^... 我们前文报道在L7811腹水型白血病小鼠的腹水中存在一种白血病相关自身抑制因子(LAI—615),本文用Sephadex G—150凝胶层析,DEAE纤维素离子交换层析和FPLC快速蛋白液相层析三步纯化,将LAI—615纯化了1306倍。研究发现其分泌产生与Lyt2^+ T细胞的出现有关。LAI—615可能是T细胞抑制因子(TsF)一类的物质。 展开更多
关键词 白血病 t细胞 抑制因子 分泌
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小鼠B、T淋巴细胞衰减因子真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达
12
作者 夏丽坤 张胜男 +1 位作者 陈琳琳 周晶 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2010年第4期295-299,共5页
目的构建小鼠B、T淋巴细胞衰减因子(BTLA)的真核表达载体,并分析其在人胚肾HEK293细胞中的表达,为单纯疱疹性角膜基质炎的免疫治疗奠定基础。方法应用PCR法获得小鼠BTLA胞外功能区的cDNA片段,将其插入真核表达载体pcDNA3.1中,获得重组... 目的构建小鼠B、T淋巴细胞衰减因子(BTLA)的真核表达载体,并分析其在人胚肾HEK293细胞中的表达,为单纯疱疹性角膜基质炎的免疫治疗奠定基础。方法应用PCR法获得小鼠BTLA胞外功能区的cDNA片段,将其插入真核表达载体pcDNA3.1中,获得重组表达质粒pBTLA,经酶切鉴定和测序正确后转染HEK293细胞,并利用间接免疫荧光法、实时定量PCR(real-time PCR)、Western blot技术检测BTLA在细胞中的表达。结果重组质粒pBTLA经酶切鉴定和测序,确认插入序列正确,与基因文库中提供的基因序列同源性达98%~100%。Real-time PCR检测可见转染了重组质粒pBTLA的HEK293细胞内BTLA mRNA表达增强(P=0.00),3个组间HEK293细胞内BTLA mRNA表达差异有统计学意义(F=167.83,P=0.00);Western blot结果显示,转染重组质粒pBTLA的HEK293细胞内BTLA蛋白表达明显增强,转染后24~48 h表达最强。间接免疫荧光结果显示BTLA蛋白主要表达在HEK293细胞的细胞膜和细胞质中。结论成功构建了BTLA的真核表达载体,该重组质粒在HEK293细胞中能够表达BTLA,为后续研究BTLA在抗病毒免疫中的作用奠定基础。 展开更多
关键词 B、t淋巴细胞衰减因子 真核表达载体 基因转染
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辅助性T细胞亚群趋化性细胞因子受体的表达及其临床意义
13
作者 张涛 孙秉中 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第4期366-368,共3页
趋化因子与趋化因子受体的结合可介导免疫细胞向相应组织部位趋化 ,保证免疫应答反应的特异性和区域性 ,因而 ,研究不同细胞群和亚群趋化因子及受体的表达对于阐明免疫应答的调节有重要作用 ,也有助于寻找新的药物靶点以指导免疫调节治疗。
关键词 趋化因子受体 表达 辅助性t细胞亚群
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热打击诱导血管内皮细胞组织因子早期表达分泌的初步研究
14
作者 钱晶 王凡凡 +4 位作者 万露露 杨加乐 施学智 童华生 周伟梁 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1412-1419,共8页
目的探讨热打击诱导血管内皮细胞组织因子(TF)早期表达分泌的规律。方法将30只SPF级C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组与热打击后复温0、3、6、9h组(n=6)。热打击组小鼠暴露于动物孵箱热环境,核心温度达42.5℃时即为发生重症中暑。采用HE... 目的探讨热打击诱导血管内皮细胞组织因子(TF)早期表达分泌的规律。方法将30只SPF级C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组与热打击后复温0、3、6、9h组(n=6)。热打击组小鼠暴露于动物孵箱热环境,核心温度达42.5℃时即为发生重症中暑。采用HE染色观察小鼠肝脏、肺脏及肾脏组织病理学变化;RT-qPCR检测小鼠组织TFmRNA表达水平;ELISA法检测小鼠血浆TF浓度。体外建立人脐静脉内皮细胞(HUVECs)热打击模型,分为对照组与热打击后复温0、3、6、9 h组。采用RT-qPCR、Western blotting及细胞免疫荧光化学技术分别检测HUVECs中TF mRNA及蛋白表达水平;采用ELISA法检测HUVECs培养上清中TF水平。结果对照组小鼠各组织未见明显病理损伤,热打击复温小鼠存在不同程度组织细胞结构性损伤及出血性、炎症性损伤。与对照组小鼠比较,热打击复温0、3 h组肾脏(1.719±0.018、1.241±0.178 vs.1.000±0.063)、复温3 h组肺脏(2.444±0.511 vs.1.000±0.106)及复温6 h组肝脏(7.312±0.618 vs.1.000±0.147)中TF mRNA表达量均明显升高(P<0.05)。热打击小鼠复温0、3、6、9h组血浆TF水平均较对照组小鼠升高[(132.426±17.920)pg/ml、(119.400±10.267)pg/ml、(107.374±13.495)pg/ml、(163.767±22.810)pg/ml vs.(75.479±13.831)pg/ml,P<0.01]。与对照组比较,热打击后复温6、9h组HUVECs的TFmRNA表达水平明显升高(1.905±0.354、2.564±0.297vs.1.000±0.097,P<0.01);热打击复温0、3、6、9 h组HUVECs培养上清TF水平均明显高于对照组[(36.309±4.101)pg/ml、(38.425±5.484)pg/ml、(41.655±4.380)pg/ml、(43.586±4.718)pg/ml vs.(14.996±0.254)pg/ml,P<0.01]。结论热打击血管内皮细胞中TF的早期表达分泌增加,可能是重症中暑循环TF的主要来源之一。 展开更多
关键词 热打击 血管内皮细胞 组织因子 表达分泌
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PI3K在细胞外基质分泌细胞因子表达中的作用
15
《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期733-733,共1页
关键词 细胞外基质分泌 细胞因子表达 PI3K 磷脂酰肌醇-3激酶 人气道平滑肌细胞 纤维连接蛋白 被动致敏 哮喘患者
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子宫内膜异位症患者腹腔液中NF-κB和趋化因子MCP-1、RANTES的表达 被引量:16
16
作者 林敏 王溢 +2 位作者 董克 杨海虹 吕杰强 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2014年第4期577-579,共3页
目的:检测核转录因子(NF-кB)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、正常T细胞表达及分泌的激活调节细胞因子(RANTES)在子宫内膜异位症(EMs)患者腹腔液与对照组腹腔液表达的差异及相关性,探讨其在EMs发病中的作用。方法:研究分为EMs组(40例)和... 目的:检测核转录因子(NF-кB)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、正常T细胞表达及分泌的激活调节细胞因子(RANTES)在子宫内膜异位症(EMs)患者腹腔液与对照组腹腔液表达的差异及相关性,探讨其在EMs发病中的作用。方法:研究分为EMs组(40例)和对照组(40例),采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ABC-ELISA法)检测腹腔液中NF-кB、MCP-1和RANTES的水平。结果 :EMs组腹腔液中NF-кB和趋化因子MCP-1、RANTES水平均高于对照组(P<0.05);EMs组、对照组中NF-кB及MCP-1表达,NF-кB及RANTES表达均呈正相关,相关系数r依次为0.385、0.569(EMs组),0.474、0.388(对照组)(P均<0.05)。结论:NF-кB和MCP-1、RANTES水平升高,与EMs发生发展密切相关,是相互协同、促进而发挥作用的。 展开更多
关键词 子宫内膜异位症 核转录因子 单核细胞趋化蛋白-1 正常t细胞表达分泌的激活调节细胞因子
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人牙周膜细胞骨保护因子和破骨细胞分化因子蛋白的表达及1α,25(OH)_2维生素D_3的调节 被引量:9
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作者 张丁 杨雁琪 +1 位作者 李小彤 傅民魁 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期646-649,共4页
目的:研究人牙周膜细胞骨保护因子(osteoprotegerm,OPG)和破骨细胞分化因子(receptor activator nucle-ar factor kappa B ligand,RANKL)蛋白的表达,以及骨吸收促进因子1α,25(OH)_2维生素 D_3对 OPG 蛋白表达的影响。方法:用系... 目的:研究人牙周膜细胞骨保护因子(osteoprotegerm,OPG)和破骨细胞分化因子(receptor activator nucle-ar factor kappa B ligand,RANKL)蛋白的表达,以及骨吸收促进因子1α,25(OH)_2维生素 D_3对 OPG 蛋白表达的影响。方法:用系列酶消化法体外培养人牙周膜细胞,用免疫细胞化学检测细胞上表达的 RANKL 蛋白,以酶联免疫吸附实验检测无外源性刺激以及1α,25(OH)_2维生素 D_3诱导2、4、6 d 时细胞分泌到培养基中的 OPG 蛋白。结果:人牙周膜细胞胞膜和胞浆上表达 RANKL 蛋白,分泌 OPG 蛋白到培养基中。1α,25(OH)_2维生素 D_3降低 OPG蛋白的分泌。结论:人牙周膜细胞表达 OPG 和 RANKL,1α,25(OH)_2维生素 D_3影响 OPG 的表达,推测其通过OPG/RANKL 通路参与骨改建。这一结论为进一步研究牙周膜细胞参与骨改建的机制打下基础。 展开更多
关键词 OPG 人牙周膜细胞 表达 RANKL 蛋白 维生素D3 骨保护因子 细胞分泌 破骨细胞分化因子 酶消化法
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信号转导抑制剂对囊素刺激杂交瘤细胞抗体分泌及其mRNA表达的影响 被引量:5
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作者 缪德年 苏小运 +2 位作者 姚惠娟 樊生超 陈溥言 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期73-77,共5页
以杂交瘤细胞为模型 ,在培养液中加入不同的信号转导抑制剂和囊素 ,用间接ELISA法测定抗体分泌水平 ,用定量RT PCR法检测抗体mRNA的表达水平。结果表明 ,加入Gα 蛋白选择性抑制剂NF 0 2 3、蛋白激酶C抑制剂GF10 92 0 3X、磷脂酰肌醇 ... 以杂交瘤细胞为模型 ,在培养液中加入不同的信号转导抑制剂和囊素 ,用间接ELISA法测定抗体分泌水平 ,用定量RT PCR法检测抗体mRNA的表达水平。结果表明 ,加入Gα 蛋白选择性抑制剂NF 0 2 3、蛋白激酶C抑制剂GF10 92 0 3X、磷脂酰肌醇 3激酶抑制剂heparin、Ca2 + /calmodulin依赖蛋白激酶Ⅱ抑制剂KN 6 2、磷脂酶C抑制剂U 7312 2和蛋白激酶G抑制剂后 ,囊素对杂交瘤细胞抗体分泌速度的影响明显 (P <0 0 1)。而加入蛋白激酶A抑制剂 4 Cyano 3 M thylisoquinoline、酪氨酸蛋白激酶抑制剂 genistein和丝裂原活化的蛋白激酶抑制剂PD 980 5 9后 ,囊素对杂交瘤细胞抗体分泌速度的影响不明显 (P >0 0 5 ) ,这 3种抑制剂对杂交瘤细胞抗体分泌速度的抑制率分别为 74 5 5 % ,91 13%和80 6 9%。加入 4 Cyano 3 M thylisoquinoline、genistein和PD 980 5 9后 ,囊素处理组与对照组γ1mRNA的表达水平差异不显著 (P >0 0 5 ) ,说明这 3种抑制剂阻断了囊素刺激的杂交瘤细胞抗体mRNA的表达。以上结果表明 ,蛋白激酶A、酪氨酸蛋白激酶和丝裂原活化的蛋白激酶参与了囊素在杂交瘤细胞中的信号转导。 展开更多
关键词 信号转导抑制剂 杂交瘤细胞 囊素 间接ELISA法 抗体分泌 MRNA表达 生物活性因子
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雌激素通过调节转录因子STAT-1促进大鼠前列腺组织RANTES的表达及炎症反应 被引量:2
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作者 李茂生 徐敏 +2 位作者 张荣贵 徐光勇 张唯力 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期521-525,共5页
目的:观察雌激素(E2)诱导的大鼠慢性非细菌性前列腺炎(chronic nonbacterial prostatitis,CNP)中信号转导子及转录激活子1(signal transducer and activator of transcription 1,STAT-1)的激活和调节活化正常T细胞表达及分泌因子(regula... 目的:观察雌激素(E2)诱导的大鼠慢性非细菌性前列腺炎(chronic nonbacterial prostatitis,CNP)中信号转导子及转录激活子1(signal transducer and activator of transcription 1,STAT-1)的激活和调节活化正常T细胞表达及分泌因子(regulated on activation,normal T-cell expressed and secreted,RANTES)的表达,探讨雌激素诱导炎症形成的机制。方法:将80只老年雄性SD大鼠随机分为对照组、去势组、去势+E2组和去势+E2+AG490组,每组20只。苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠前列腺组织病理改变。Western blotting法测定STAT-1及p-STAT-1蛋白水平。RT-PCR和免疫组化SP法分别检测RANTES mRNA和蛋白表达水平,并分析p-STAT-1与RANTES表达水平的相关性。结果:去势+E2组前列腺组织呈明显炎症表现。去势+E2组中STAT-1及p-STAT-1蛋白表达明显高于对照组及去势组(P<0.01),RANTES mRNA和蛋白表达也显著增高(P<0.01)。去势+E2+AG490组中STAT-1及p-STAT-1蛋白、RANTES mRNA和蛋白表达水平较去势+E2组明显降低(P<0.01)。大鼠前列腺组织中p-STAT-1表达水平与RANTES mRNA转录水平呈正相关(r=0.735,P<0.05),RANTES表达水平与RANTESmRNA转录水平亦呈正相关(r=0.694,P<0.05)。结论:雌激素诱导CNP的形成可能与调节转录因子STAT-1、促进RANTES分子的表达及炎症反应有关。 展开更多
关键词 雌激素 信号转导子及转录激活子1 调节活化正常t细胞表达分泌因子 前列腺炎
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小鼠NGF基因真核表达载体的构建及其在NIH3T3细胞中的表达 被引量:7
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作者 宋玫 陈绍宗 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期124-126,129,共4页
目的 :构建小鼠 β NGF基因真核表达载体并观察其稳定转染的NIH 3T3细胞系中NGF的表达情况。方法 :用基因重组技术 ,将小鼠 β NGF的成熟cDNA序列及其前导序列 ,克隆到真核表达载体 pcDNA3.1+中 ,用限制性内切酶酶切鉴定重组体。利用脂... 目的 :构建小鼠 β NGF基因真核表达载体并观察其稳定转染的NIH 3T3细胞系中NGF的表达情况。方法 :用基因重组技术 ,将小鼠 β NGF的成熟cDNA序列及其前导序列 ,克隆到真核表达载体 pcDNA3.1+中 ,用限制性内切酶酶切鉴定重组体。利用脂质体FuGENETM6方法 ,转染NIH 3T3细胞。转染后 72h ,用G4 18筛选阳性克隆并培养至 2 0d。对阳性克隆培养上清中NGF的表达用Westernblot分析并观察该上清中NGF对PC12细胞突起生长的作用。结果 :β NGF基因在NIH 3T3细胞中获得表达。阳性克隆培养上清能促进PC12细胞突起生长。结论 :重组真核表达载体 pcDNA3.1+/NGF构建成功 ,NGF蛋白在NIH 3T3细胞中表达 ,并具有良好的生物学活性 。 展开更多
关键词 Β-神经生长因子 真核表达载体 NIH3t3细胞 基因转染 脂质体FuGENE^tM6
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