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抗欧亚活血丹凝集素特异性多克隆抗体的制备(英文)
1
作者
王卫芳
VAN DAMME Els
何朝族
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2006年第11期1113-1119,共7页
欧亚活血丹外源凝集素(Gleheda)是分离自欧亚活血丹 (Glechoma hederacea) 叶片中的一种糖基化植物新蛋白. 如同其他糖基化蛋白,通过免疫学方法探测 Gleheda 的过程中通常受到一些不相干糖蛋白的妨碍,为此制定了抗 Gleheda 特异性多克...
欧亚活血丹外源凝集素(Gleheda)是分离自欧亚活血丹 (Glechoma hederacea) 叶片中的一种糖基化植物新蛋白. 如同其他糖基化蛋白,通过免疫学方法探测 Gleheda 的过程中通常受到一些不相干糖蛋白的妨碍,为此制定了抗 Gleheda 特异性多克隆抗体的纯化方案. 免疫血清蛋白经硫酸铵选择性沉淀后,分别以 Gleheda 和刺槐外源凝集蛋白 (RPA) 结合在 Sepharose 4B作为亲和配体,采用亲和层析法连续纯化 2 次,然后进一步采用离子交换层析 Q Fast Flow 提纯. 经每一步骤提纯得到的抗体组分对 Gleheda 的特异性,均同时采用双向免疫扩散检验和 Western blot 分析. 结果表明,以 Gleheda 为配体,亲和纯化制备得到的抗体组分对叶片粗提物中的许多植物 (糖) 蛋白仍然表现交叉反应. 为除去由植物糖蛋白中的聚糖所引起这些非特异性交叉反应抗体,接着以 RPA 为配体再次进行亲和纯化,Western blot 分析显示,抗体的特异性得到提高但并非除去了所有非特异性交叉反应的抗体. 最后进一步采用离子交换层析制备得到仅抗 Gleheda 蛋白的特异性抗体组分,此抗体组分适用于免疫探测研究. 该抗体纯化制备程序简易而高效,而且不需要昂贵的设备.
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关键词
特异性多克隆抗体
抗体制备
欧亚
活
血
丹
外源
凝集
素
(
gleheda
)
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职称材料
题名
抗欧亚活血丹凝集素特异性多克隆抗体的制备(英文)
1
作者
王卫芳
VAN DAMME Els
何朝族
机构
清华大学深圳研究生院生命学部
Department of Molecular Biotechnology
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2006年第11期1113-1119,共7页
基金
比利时Flanders科学研究资助项目(G.0113.01)
广东省自然科学基资助项目(04010899)
+3 种基金
教育部留学归国人员科学基金资助项目(2004-6)
韶关市科技计划资助项目(2004-02)
中山大学生物防治国家重点实验室资助项目(2004-2006)
中国博士后科学基金资助项目(2005-2006).~~
文摘
欧亚活血丹外源凝集素(Gleheda)是分离自欧亚活血丹 (Glechoma hederacea) 叶片中的一种糖基化植物新蛋白. 如同其他糖基化蛋白,通过免疫学方法探测 Gleheda 的过程中通常受到一些不相干糖蛋白的妨碍,为此制定了抗 Gleheda 特异性多克隆抗体的纯化方案. 免疫血清蛋白经硫酸铵选择性沉淀后,分别以 Gleheda 和刺槐外源凝集蛋白 (RPA) 结合在 Sepharose 4B作为亲和配体,采用亲和层析法连续纯化 2 次,然后进一步采用离子交换层析 Q Fast Flow 提纯. 经每一步骤提纯得到的抗体组分对 Gleheda 的特异性,均同时采用双向免疫扩散检验和 Western blot 分析. 结果表明,以 Gleheda 为配体,亲和纯化制备得到的抗体组分对叶片粗提物中的许多植物 (糖) 蛋白仍然表现交叉反应. 为除去由植物糖蛋白中的聚糖所引起这些非特异性交叉反应抗体,接着以 RPA 为配体再次进行亲和纯化,Western blot 分析显示,抗体的特异性得到提高但并非除去了所有非特异性交叉反应的抗体. 最后进一步采用离子交换层析制备得到仅抗 Gleheda 蛋白的特异性抗体组分,此抗体组分适用于免疫探测研究. 该抗体纯化制备程序简易而高效,而且不需要昂贵的设备.
关键词
特异性多克隆抗体
抗体制备
欧亚
活
血
丹
外源
凝集
素
(
gleheda
)
Keywords
monospecific polyclonal antibodies, antibody purification, Glechoma hederacea agglutinin （
gleheda
）
分类号
Q5-3 [生物学—生物化学]
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题名
作者
出处
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1
抗欧亚活血丹凝集素特异性多克隆抗体的制备(英文)
王卫芳
VAN DAMME Els
何朝族
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2006
0
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