次级淋巴组织趋化因子和甲胎蛋白共修饰的树突状细胞诱导特异性抗肝癌免疫作用的研究 被引量：4

1

作者 侯静 李明峰 +3 位作者 熊伟民 何新颖 邸立军 任军 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期502-507,共6页

背景与目的:树突状细胞(dendritic cell,DC)是迄今发现的抗原呈递功能最强的专职抗原呈递细胞,近年来以DC为基础的肿瘤基因免疫治疗研究倍受瞩目。病毒载体介导的基因转移以其高效和良好的靶向性已被广泛应用于肿瘤基因治疗。本实验拟... 背景与目的:树突状细胞(dendritic cell,DC)是迄今发现的抗原呈递功能最强的专职抗原呈递细胞,近年来以DC为基础的肿瘤基因免疫治疗研究倍受瞩目。病毒载体介导的基因转移以其高效和良好的靶向性已被广泛应用于肿瘤基因治疗。本实验拟制备携带人AFP和SLC基因的慢病毒表达载体,并于体外感染CD34+造血干细胞来源的DC,诱导DC产生特异性抗肝癌细胞免疫作用,观察其对肝癌细胞株的杀伤作用。方法:采用化疗和集落刺激因子动员的肝癌患者外周血造血干细胞,血细胞分离机采集CD34+造血干细胞,IL-4、GM-CSF联合TNF-α刺激CD34+细胞分化为DC。并检测经Lenti-AFP/Lenti-SLC转染致敏后的DC对CTL增殖的影响,并检测其对人肝癌细胞HepG2的作用。结果:经细胞因子刺激诱导培养的DC具有典型的分枝状突起,高表达CD1a、CD11c、CD80和CD86。MTT法检测Lenti-AFP/Lenti-SLC抗原冲击的DC能明显诱导CTL增殖。此CTL对表达AFP的肝癌细胞株HepG2的杀伤率显著性高于未转染DC组和无DC组(P<0.05和P<0.01),效靶比为50:1时杀伤效应达到最高峰(P<0.01)。结论:Lenti-AFP/Lenti-SLC抗原转染的DC在体外可诱导同种CTL产生和增殖,后者对AFP阳性肝癌细胞株具有特异性杀伤效应,该方法为肝癌免疫治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 次级淋巴组织趋化因子 甲胎蛋白 树突状细胞 细胞毒性T淋巴细胞 肝癌

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不同浓度的次级淋巴组织趋化因子对外周血单个核细胞生物学功能的影响 被引量：4

2

作者 吴砂 邢薇 +3 位作者 袁晓梅 雷萍 朱慧芬 沈关心 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期469-470,共2页

目的探讨人次级淋巴组织趋化因子(SLC)浓度梯度对外周血单个核细胞(PBMC)生物学功能的影响。方法根据SLC浓度,实验分为6组,通过趋化实验检测PBMC的趋化,并通过流式细胞术检测PBMC凋亡及增殖能力,ELISA检测PBMC培养上清中IL-10和IFN-γ... 目的探讨人次级淋巴组织趋化因子(SLC)浓度梯度对外周血单个核细胞(PBMC)生物学功能的影响。方法根据SLC浓度,实验分为6组,通过趋化实验检测PBMC的趋化,并通过流式细胞术检测PBMC凋亡及增殖能力,ELISA检测PBMC培养上清中IL-10和IFN-γ的表达。结果一定浓度范围内,SLC可增强PBMC的迁移、抗凋亡、增殖及IFN-γ表达能力。降低IL-10的表达水平,证明上述作用具有浓度依赖性。结论SLC可通过促进PBMC迁移,增强其增殖,诱导Th1类细胞分化,提高了机体的免疫应答。 展开更多

关键词 次级淋巴组织趋化因子 浓度梯度 PBMC

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人次级淋巴组织趋化因子的基因克隆及原核表达 被引量：2

3

作者 董忠军 赵跃然 +3 位作者 游力 高春义 魏海明 田志刚 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期1099-1102,共4页

目的 :获得人次级淋巴组织趋化因子 (SL C)基因 ,并通过大肠杆菌实现人 SL C的非融合表达。 方法 :提取淋巴结组织总 RNA,RT- PCR法扩增人 SL C成熟肽基因 ,克隆到 p MD18- T载体中 ,DNA测序。用限制性内切酶切下目的基因 ,与相应酶切... 目的 :获得人次级淋巴组织趋化因子 (SL C)基因 ,并通过大肠杆菌实现人 SL C的非融合表达。 方法 :提取淋巴结组织总 RNA,RT- PCR法扩增人 SL C成熟肽基因 ,克隆到 p MD18- T载体中 ,DNA测序。用限制性内切酶切下目的基因 ,与相应酶切的表达载体 p BV 2 2 0连接、筛选、鉴定。 4 2℃热诱导表达目的蛋白 ,SDS- PAGE和 Western印迹法鉴定重组蛋白 ,分子筛初步纯化目的蛋白。 结果 :表达蛋白占菌体 15 %以上 ,免疫印迹证实为特异性蛋白 ,分子筛纯化后纯度达 90 %以上。 结论 :成功获得人 SL 展开更多

关键词 次级淋巴组织趋化因子 基因克隆 原核表达 大肠杆菌 基因表达

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人次级淋巴组织趋化因子腺病毒载体的构建和鉴定 被引量：2

4

作者 薛刚 程莹 +3 位作者 曹永宽 刘然义 田伏洲 黄文林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第24期2338-2340,共3页

目的构建携带人次级淋巴组织趋化因子的重组腺病毒载体(Ad-6Ckine),并观察其在真核细胞中的表达,为进一步的肿瘤基因治疗研究奠定基础。方法 RT-PCR法从人淋巴结中扩增出人次级淋巴组织趋化因子cDNA,利用AdMax腺病毒包装系统在细胞内同... 目的构建携带人次级淋巴组织趋化因子的重组腺病毒载体(Ad-6Ckine),并观察其在真核细胞中的表达,为进一步的肿瘤基因治疗研究奠定基础。方法 RT-PCR法从人淋巴结中扩增出人次级淋巴组织趋化因子cDNA,利用AdMax腺病毒包装系统在细胞内同源重组出Ad-6Ckine,然后用Ad-6Ckine感染真核细胞,观察6Ckine蛋白在真核细胞中的表达。结果成功构建了重组Ad-6Ckine,PCR法鉴定无野生型腺病毒的污染,构建的Ad-6Ckine所携带的6Ckine基因能在真核细胞中得到表达。结论 AdMax腺病毒包装系统是一种简便高效的重组腺病毒构建方法,构建的重组Ad-6Ckine可用于肿瘤基因治疗的体内外研究。 展开更多

关键词 肿瘤 次级淋巴组织趋化因子 基因治疗 腺病毒载体

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重组人次级淋巴组织趋化因子(SLC)体外活性的研究

5

作者 刘明学 尹长城 +2 位作者 春雷 李琼芳 黄华樑 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1013-1015,共3页

目的:对原核表达系统E.coli中表达的SLC进行体外活性的研究,为进一步的体内实验和临床应用提供参考。方法:采用Boyden小室测定趋化活性。结果:对含有pALM-SLC质粒的E.coli菌株进行诱导表达,产物经SDS-PAGE鉴定,表达产物以可溶蛋白为主,... 目的:对原核表达系统E.coli中表达的SLC进行体外活性的研究,为进一步的体内实验和临床应用提供参考。方法:采用Boyden小室测定趋化活性。结果:对含有pALM-SLC质粒的E.coli菌株进行诱导表达,产物经SDS-PAGE鉴定,表达产物以可溶蛋白为主,相对分子质量(Mr)在20000左右。采用表达产物进行趋化性测定结果表明,此蛋白对新鲜分离的外周血淋巴细胞具有明显的趋化作用,其浓度为4～6μg/L时对淋巴细胞的趋化指数最高可达2.3,与国外报道相比,趋化作用有效浓度更低。结论:获得了具有生物学功能的重组SLC蛋白。 展开更多

关键词 次级淋巴组织趋化因子 体外活性 趋化作用

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重度子痫前期患者胎盘组织趋化因子及其受体的表达和意义 被引量：5

6

作者 金峰 乔宠 尚涛 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期565-566,共2页

妊娠免疫耐受是正常妊娠时母体形成的一种特殊类型的外周免疫耐受，保护作为半同种移植物的胎儿不被母体免疫系统排斥而成功妊娠，这有赖于免疫活性细胞的分化及功能调整。趋化因子（Chemokine，CK）及其受体不但直接参与了淋巴细胞的... 妊娠免疫耐受是正常妊娠时母体形成的一种特殊类型的外周免疫耐受，保护作为半同种移植物的胎儿不被母体免疫系统排斥而成功妊娠，这有赖于免疫活性细胞的分化及功能调整。趋化因子（Chemokine，CK）及其受体不但直接参与了淋巴细胞的增殖和活化，还促进母胎界面T淋巴细胞及NK细胞的游走和活化，可影响一系列的细胞活动，包括粘附、血管牛成和扩散[1]。 展开更多

关键词 趋化因子 重度子痫前期 胎盘组织 受体 T淋巴细胞 患者 外周免疫耐受 妊娠免疫耐受

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趋化因子SLC和免疫佐剂CpG-ODN联合应用对小鼠移植黑素瘤的疗效 被引量：1

7

作者 许相范 许振柱 +3 位作者 唐丽华 李安娜 徐显辉 柳春宝 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期25-29,共5页

目的:探讨次级淋巴组织趋化因子(seccondary lymphoid tissue chemokine,SLC)和CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG oligodeoxynucleotide,CpG-ODN)联合应用对小鼠移植黑素瘤的治疗效果及其可能机制。方法:制备SLC-Fc融合蛋白,体外检测SLC-Fc对小鼠... 目的:探讨次级淋巴组织趋化因子(seccondary lymphoid tissue chemokine,SLC)和CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG oligodeoxynucleotide,CpG-ODN)联合应用对小鼠移植黑素瘤的治疗效果及其可能机制。方法:制备SLC-Fc融合蛋白,体外检测SLC-Fc对小鼠淋巴细胞的趋化效应。建立小鼠黑素瘤移植模型,随机分生理盐水对照组、CpG-ODN组、SLC-Fc组以及SLC-Fc+CpG-ODN组共4组。观察治疗后各组小鼠肿瘤的生长情况,流式细胞术检测移植瘤组织中淋巴细胞的种类和浸润情况。结果:成功制备SLC-Fc蛋白,SLC-Fc对小鼠淋巴细胞具有剂量依赖性(0.03、0.3和3μg/L)趋化作用。瘤内注射SLC-Fc和(或)CpG-ODN明显抑制肿瘤的生长,联合治疗组瘤体明显小于对照组(P<0.01),并且小鼠存活时间也明显延长。联合治疗组瘤体内CD4+、CD8+T淋巴细胞和CD11c+树突状细胞较对照组显著增多(P<0.05,P<0.01),并且其肿瘤引流淋巴结也明显增大。结论:SLC和CpG-ODN联合应用对小鼠移植黑素瘤有抑制作用,其机制与趋化CD4+T、CD8+T细胞和促进DCs增殖有关。 展开更多

关键词 次级淋巴组织趋化因子 CPG寡聚脱氧核苷酸 黑素瘤 抗肿瘤免疫

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鼻相关淋巴组织IgA分泌B细胞“归巢”

8

作者 李涛 郑瑞茂 《生理科学进展》 CAS 北大核心 2024年第5期490-490,共1页

鼻相关淋巴组织(nasal-associated lymphoid tissue,NALT)位于鼻腔上皮固有层和黏膜下区,是无包膜的黏膜相关淋巴组织,是机体上呼吸道抵御外来病原体第一道防线的重要组成部分。在免疫学上,鼻相关淋巴组织是疫苗递送的重要场所;通过鼻... 鼻相关淋巴组织(nasal-associated lymphoid tissue,NALT)位于鼻腔上皮固有层和黏膜下区,是无包膜的黏膜相关淋巴组织,是机体上呼吸道抵御外来病原体第一道防线的重要组成部分。在免疫学上,鼻相关淋巴组织是疫苗递送的重要场所;通过鼻相关淋巴组织可引发有效的体液免疫反应,诱导机体产生免疫球蛋白A(IgA),从而提供对空气传播病原体的防御。然而,产生和分泌这些抗原特异性IgA的细胞的来源和去向,则并不清楚。最近,以色列魏茨曼科学研究所Ziv Shulman团队发现:分泌这些IgA的细胞首先在鼻相关淋巴组织内部增殖,然后,在T细胞辅助下,进入有病原体存在的黏膜免疫应答区;并在趋化因子引导下,回归鼻甲区的鼻相关淋巴组织,集中在该组织的腺泡周围。 展开更多

关键词 鼻相关淋巴组织 黏膜相关淋巴组织 体液免疫反应 空气传播 第一道防线 趋化因子 魏茨曼 免疫学

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SLC真核表达质粒的剂量-趋化效应及抑瘤效应研究

9

作者 贺宇飞 张桂梅 +4 位作者 王小红 张慧 袁野 李东 冯作化 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期435-439,共5页

目的:观察次级淋巴组织趋化因子(SLC)真核表达质粒剂量-趋化效应关系及不同剂量体内应用时对小鼠H22肝癌的治疗作用。方法:构建了小鼠SLC真核表达质粒(pSLC),体外转染检测pSLC在体外的剂量-趋化效应关系,体内不同剂量的pSLC质粒局部注... 目的:观察次级淋巴组织趋化因子(SLC)真核表达质粒剂量-趋化效应关系及不同剂量体内应用时对小鼠H22肝癌的治疗作用。方法:构建了小鼠SLC真核表达质粒(pSLC),体外转染检测pSLC在体外的剂量-趋化效应关系,体内不同剂量的pSLC质粒局部注射检测其表达情况及体内的剂量-趋化效应关系,并观察不同剂量的pSLC对小鼠H22肝癌治疗的剂效关系。结果:当剂量在0·5μg以下时,pSLC在体外转染的趋化效应与转染剂量呈正相关,但在0·75μg时明显下降;pSLC体内局部注射时,在所检测的200μg剂量以内,随注射质粒剂量的增加,其表达的mRNA水平逐渐增加,相应地,对淋巴细胞的趋化作用亦逐渐增强,pSLC对肿瘤的抑制作用亦随其剂量的增加而明显增强(P<0·001)。结论:体内局部转染表达pSLC,能够有效趋化聚集免疫细胞,对肿瘤产生免疫治疗效应。通过提高转染表达效果,可增加SLC趋化作用,增强肿瘤免疫治疗效应。 展开更多

关键词 次级淋巴组织趋化因子 质粒 剂量-趋化效应关系 H22肝癌 基因治疗 疗效

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小鼠SLC基因真核表达载体的构建及其趋化活性鉴定 被引量：1

10

作者 马飞 张叔人 +5 位作者 宁力 孙文欣 梁肖 张雪艳 付明 林晨 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期528-530,共3页

目的:克隆小鼠次级淋巴样组织趋化因子(secondary lymph-oid-tissue chemokine,SLC)基因,并构建真核表达载体。在体 内外检测该表达载体表达产物的免疫趋化功能。方法:用RT-PCR从C57BL/6小鼠胸腺组织中克隆小鼠SLC基因,构建真核表达载体... 目的:克隆小鼠次级淋巴样组织趋化因子(secondary lymph-oid-tissue chemokine,SLC)基因,并构建真核表达载体。在体 内外检测该表达载体表达产物的免疫趋化功能。方法:用RT-PCR从C57BL/6小鼠胸腺组织中克隆小鼠SLC基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-mSLC。在体外,用基因枪转染小鼠黑色素瘤B16F10细胞;RT-PCR检测转染细胞有SLC的表达;利用趋化小室法,检测表达产物针对淋巴细胞的趋化活性。在体内,用基因枪通过小鼠皮肤局部转染SLC基因,观察转染局部淋巴细胞的浸润。结果:克隆的基因经测序证实,为小鼠SLC基因Scya21b型。转染SLC基因的B16F10细胞体外培养48 h后,RT-PCR检测到SLC的表达,同时培养基上清具有针对淋巴细胞的趋化活性。通过基因枪局部转染小鼠皮肤,24 h后皮肤病理检查显示,局部皮内有明显的淋巴细胞浸润。结论:从小鼠胸腺组织中克隆到小鼠SLC基因,构建的真核表达载体pcDNA3.1-mSLC在体内外均可以表达,并具有针对淋巴细胞的趋化活性。 展开更多

关键词 趋化因子 次级淋巴样组织趋化因子 基因枪

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组织定居记忆性T细胞的免疫学特征研究进展 被引量：14

11

作者 余思菲 吴长有 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期1093-1100,共8页

记忆性T细胞通过表达或不表达趋化因子受体CCR7和血管L-选择素CD62（CD62L）来实现在机体外周血和淋巴组织间的循环,分为中央型记忆性T细胞（Central memory T cells,TCM）和效应型记忆性T细胞（Effector memory T cells,TEM）。

关键词 记忆性 细胞分化 选择素 抗原刺激 趋化因子受体 外周组织 抗原特异性 淋巴组织 免疫学特征 表型特征

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调节性T细胞从移植物局部迁移至引流淋巴结抑制同种异体排斥反应的发生

12

作者 吴聪 陈国友 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期226-226,共1页

关键词 调节性T细胞 异体排斥反应 引流淋巴结 迁移 移植物 同种 淋巴组织 趋化因子受体

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SLC基因修饰树突状细胞及不同免疫方式抗肿瘤作用探讨 被引量：3

13

作者 梁春敏 钟翠平 +5 位作者 郑宁 刘彬彬 孙瑞霞 吴欣 刘银坤 叶胜龙 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期721-726,共6页

目的:应用次级淋巴组织趋化因子(SLC)成熟肽基因/重组腺相关病毒(rAAVSLC)转染树突状细胞(DC),探讨一种基因修饰DC的新方法及其抗肿瘤的生物学活性。方法:体外构建rAAVSLC,按MOI为10、50、100与腺病毒(Ad2)协同转染小鼠骨髓来源成熟和... 目的:应用次级淋巴组织趋化因子(SLC)成熟肽基因/重组腺相关病毒(rAAVSLC)转染树突状细胞(DC),探讨一种基因修饰DC的新方法及其抗肿瘤的生物学活性。方法:体外构建rAAVSLC,按MOI为10、50、100与腺病毒(Ad2)协同转染小鼠骨髓来源成熟和未成熟DC,GFP作为成功转染的示踪蛋白。RTPCR在mRNA水平、ELISA在蛋白水平检测SLC表达,Transwell检测转染DC的培养上清对T细胞的趋化作用。瘤苗的在体效应通过C57BL/6J小鼠肿瘤模型验证。皮下接种Hepal6肿瘤细胞后成瘤小鼠分成3组:①生理盐水对照组,瘤内或足垫注射NS;②单纯DC对照组,瘤内或足垫注射未修饰DC;③SLC基因修饰DC组,瘤内或足垫注射SLC基因修饰的DC。每隔7天注射1次,观察各组小鼠肿瘤的生长情况。4周后分离瘤体,用荧光免疫组化检测瘤体内CD4+T细胞、CD8+T细胞浸润情况。结果:rAAVSLC在MOI为100时能成功转染DC,未成熟DC的转染效率显著高于成熟DC,并产生对T细胞有明显趋化生物学活性的SLC。动物实验表明,瘤内注射SLC修饰后DC,肿瘤大小与对照组有明显差异,免疫组化显示瘤体内有较多的CD4+T细胞、CD8+T细胞浸润。足垫注射SLC修饰的DC与对照组相比,抗肿瘤作用无显著差异。结论:rAAVSLC在Ad2的辅助下能有效转染未成熟DC并能表达具有趋化生物学活性的SLC。SLC基因修饰的树突状细胞瘤内注射以其对CD4+T细胞、CD8+T细胞的吸引作用而发挥了明显的抗肿瘤作用,同时也进一步证实用树突状细胞进行肿瘤生物免疫治疗时,不同免疫方式对疗效有明显影响。 展开更多

关键词 重组腺相关病毒 骨髓来源树突状细胞 次级淋巴组织趋化因子

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抗TfR scFv-SLC融合蛋白的构建、表达与鉴定

14

作者 潘兴飞 刘静 +7 位作者 沈昕 许海霞 姚欣欣 陈广生 胡军 朱慧芬 雷萍 沈关心 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期832-834,843,共4页

目的:构建、表达和鉴定抗转铁蛋白受体(TfR)单链抗体(scFv)-次级淋巴组织趋化因子(SLC)融合蛋白。方法:以pDsRed2-N1-CCL21为模板,设计引物,采用PCR扩增得到两端有EcoRⅠ、NotⅠ酶切位点的SLC基因。以EcoRⅠ、NotⅠ双酶切pET28a+scFv载... 目的:构建、表达和鉴定抗转铁蛋白受体(TfR)单链抗体(scFv)-次级淋巴组织趋化因子(SLC)融合蛋白。方法:以pDsRed2-N1-CCL21为模板,设计引物,采用PCR扩增得到两端有EcoRⅠ、NotⅠ酶切位点的SLC基因。以EcoRⅠ、NotⅠ双酶切pET28a+scFv载体和PCR产物,连接后转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导TfRscFv-SLC融合蛋白的表达。SDS-PAGE、Western blot分析TfR scFv-SLC的表达特性。FCM测定scFv-SLC与肿瘤细胞结合活性。结果:EcoRⅠ和NotⅠ双酶切鉴定可见约350bp的小片段,与SLC的理论值相符,DNA测序结果表明含有TfRscFv-Linker-SLC序列,表明pET28a+scFv-SLC融合基因表达载体构建成功。IPTG诱导产物经SDS-PAGE分析可见约41kD的条带,符合scFv-SLC理论值。FCM结果显示TfR scFv-SLC可与MCF-7、HepG2细胞结合,且结合的阳性率较TfRscFv有所提高。结论:成功构建与表达scFv-SLC融合蛋白,且能与MCF7、HepG2等细胞特异性结合。 展开更多

关键词 转铁蛋白受体 单链抗体 次级淋巴组织趋化因子 融合蛋白

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小鼠SLC基因真核表达载体的构建及表达 被引量：1

15

作者 侯丽 赵跃然 +4 位作者 王来城 焦玉莲 张捷 马春燕 崔彬 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2005年第1期79-79,共1页

次级淋巴组织趋化因子(secondary lymphoid tissue chemokine,SLC)是重要的CC趋化因子,对多种免疫细胞特别是T淋巴细胞、树突状细胞(dendritic cell,DC)及NK细胞具有趋化作用.研究证实,SLC通过募集T淋巴细胞、DC和NK等免疫效应细胞到肿... 次级淋巴组织趋化因子(secondary lymphoid tissue chemokine,SLC)是重要的CC趋化因子,对多种免疫细胞特别是T淋巴细胞、树突状细胞(dendritic cell,DC)及NK细胞具有趋化作用.研究证实,SLC通过募集T淋巴细胞、DC和NK等免疫效应细胞到肿瘤组织、促进细胞因子的释放以增强肿瘤局部非特异性免疫以及抑制肿瘤血管生成等作用,达到其显著的抗肿瘤效果,是目前肿瘤免疫治疗的理想效应分子.为了进一步探索SLC在肿瘤基因治疗中的应用,我们构建了小鼠SLC基因的真核表达载体pVAX1-mSLC,为今后开展体内基因治疗肿瘤奠定基础. 展开更多

关键词 基因真核表达载体 SLC 次级淋巴组织趋化因子 抑制肿瘤血管生成 T淋巴细胞 小鼠 CC趋化因子 免疫效应细胞 非特异性免疫 肿瘤免疫治疗 树突状细胞 抗肿瘤效果 免疫细胞 cell 趋化作用 NK细胞 肿瘤组织 细胞因子 效应分子

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C端截短突变体mCCL21-a(1-57)可拮抗CCL21介导的ERK磷酸化及细胞迁移 被引量：1

16

作者 张淑 张革 +4 位作者 王红胜 张帆 谭毅 马伟峰 杜军 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期161-167,共7页

趋化因子CCL21(CC-chemokine ligand 21,CCL21)与其受体CCR7(CC-chemokine receptor7,CCR7)的结合可以促进肿瘤的侵袭和转移.本研究旨在构建人趋化因子CCL21的截短突变体,竞争性抑制CCL21与CCR7的结合,从而抑制肿瘤的转移.本研究构建了C... 趋化因子CCL21(CC-chemokine ligand 21,CCL21)与其受体CCR7(CC-chemokine receptor7,CCR7)的结合可以促进肿瘤的侵袭和转移.本研究旨在构建人趋化因子CCL21的截短突变体,竞争性抑制CCL21与CCR7的结合,从而抑制肿瘤的转移.本研究构建了CCL21的10个截短突变体,通过Transewell细胞迁移实验,筛选出具有良好趋化抑制活性的C端截短体mCCL21-a(1-57).Western印迹和体外细胞迁移实验表明,经原核表达的mCCL21-a(1-57)多肽能够阻断CCL21介导的细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)的磷酸化,抑制CCL21对人结肠癌细胞SW480的趋化作用.本研究成功制备了趋化因子CCL21的拮抗性多肽mCCL21-a(1-57),并初步鉴定其体外生物活性,为下一步体内功能研究奠定了良好基础. 展开更多

关键词 次级淋巴组织趋化因子(SLC/CCL21) CC类趋化因子受体CCR7 拮抗剂 肿瘤转移

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携带SLC基因的Birc5-siRNA质粒载体的构建及鉴定

17

作者 舒榕 王强 +3 位作者 朱慧芬 孙媛丽 贺琪 万京华 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期74-77,共4页

目的构建携带SLC基因的Birc5-siRNA质粒载体,为肿瘤靶向治疗研究提供基础。方法使用Ambion公司siRNATarget Finder设计的Birc5mRNA干扰序列,将Birc5-siRNA插入载体PEGFP6-1后转化大肠埃希菌扩增培养,提取质粒;将SLC插入质粒pGenesil-8... 目的构建携带SLC基因的Birc5-siRNA质粒载体,为肿瘤靶向治疗研究提供基础。方法使用Ambion公司siRNATarget Finder设计的Birc5mRNA干扰序列,将Birc5-siRNA插入载体PEGFP6-1后转化大肠埃希菌扩增培养,提取质粒;将SLC插入质粒pGenesil-8后转化细菌扩增培养,提取质粒;挑取酶切鉴定正确的质粒转化菌液测序鉴定;采用分子克隆技术构建特异性沉默Birc5且携带SLC基因的质粒,命名为pgsiRNA-Birc5+SLC。结果质粒Birc5能被EcoRⅠ酶切出1条约400bp的DNA条带,说明Birc5-siRNA已插入质粒载体PEGFP6-1;pGenesil-8-SLC能被BglⅡ+XbaⅠ酶切出1条约430bp的DNA条带,说明SLC插入正确;酶切鉴定正确的质粒转化菌液Birc5-siRNA和SLC测序结果显示均为插入正确的克隆质粒;经酶切鉴定分析显示pgsiRNA-Birc5+SLC符合酶切鉴定结果,表明携带SLC基因的Birc5-siRNA质粒载体构建成功。结论成功构建了携带SLC基因的Birc5-siRNA质粒,为进一步研究靶向沉默肿瘤Birc5基因并趋化淋巴细胞抗肿瘤研究提供了工具和基础。 展开更多

关键词 次级淋巴组织趋化因子 Birc5 SIRNA 肿瘤

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