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日本囊对虾核因子κB抑制蛋白激酶ε2基因克隆及表达 被引量：1
1
作者 范嗣刚 刘勇 +2 位作者 赵超 侯思禹 邱丽华 《广东海洋大学学报》 CAS 北大核心 2022年第2期13-19,共7页
【目的】了解核因子κB抑制蛋白激酶ε2(IKKε2)基因在日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)受细菌刺激后的应答情况,以阐释IKKε2在对虾先天免疫中所起的作用。【方法】从日本囊对虾转录组数据中获得日本囊对虾IKKε2(命名为PjIKKε2)的... 【目的】了解核因子κB抑制蛋白激酶ε2(IKKε2)基因在日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)受细菌刺激后的应答情况,以阐释IKKε2在对虾先天免疫中所起的作用。【方法】从日本囊对虾转录组数据中获得日本囊对虾IKKε2(命名为PjIKKε2)的cDNA序列,并进行生物信息学分析,采用荧光定量PCR分析PjIKKε2的组织表达以及受哈维弧菌(Vibrio harveyi)刺激后在肝胰腺组织的表达情况。【结果】PjIKKε2全长为4009 bp,其中开放阅读框长2337 bp,编码778个氨基酸,5′UTR(Untranslated region)174 bp,3′UTR 1498 bp。PjIKKε蛋白含有一个激酶结构域、一个类泛素结构域和一个TANK结合激酶卷曲螺旋结构域。多重序列比对结果显示,PjIKKε2蛋白序列与其他甲壳类IKKε的相似性高,在激酶结构域保守性高。系统进化树结果显示,PjIKKε2与其他对虾属的IKKε聚集在一支。PjIKKε2在日本囊对虾9个组织中均有表达,在淋巴组织中表达量最高(P<0.05)。在哈维弧菌刺激6 h后,PjIKKε2在肝胰腺中表达量显著上调,达到最大值(P<0.05)。【结论】PjIKKε2参与了日本囊对虾的先天免疫。 展开更多
关键词 日本囊对虾 核因子κB抑制蛋白激酶ε2 基因表达 先天免疫
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蛋白激酶C抑制剂在防治家兔脑血管痉挛中对核因子-κB的影响
2
作者 刘力强 张庆俊 《中国脑血管病杂志》 CAS 2004年第4期170-174,共5页
目的探讨蛋白激酶C抑制剂对核因子-кB在实验性家兔脑血管痉挛中表达变化的影响机制及对脑血管痉挛的防治作用.方法中国白兔60只,体重1.5～2 kg,其中45只经枕大池2次(间隔72 h)注入自体动脉血(1 ml/kg)制成脑血管痉挛模型,再随机分为4组... 目的探讨蛋白激酶C抑制剂对核因子-кB在实验性家兔脑血管痉挛中表达变化的影响机制及对脑血管痉挛的防治作用.方法中国白兔60只,体重1.5～2 kg,其中45只经枕大池2次(间隔72 h)注入自体动脉血(1 ml/kg)制成脑血管痉挛模型,再随机分为4组:(1)单纯2次注血组(15只);(2)给药组(15只),动物每次经枕大池注血前注射蛋白激酶抑制剂等渗盐水稀释液0.1 ml,剂量为100 μg/kg;(3)等渗盐水组(15只),每次经枕大池注血前注射等量等渗盐水代替蛋白激酶抑制剂;(4)假穿刺组(15只).于第4、7、10天将动物分批处死,取基底动脉进行形态学观察,应用免疫组化、蛋白印迹及电泳迁移率改变分析等方法检测核因子-кB、кB抑制蛋白活性表达变化,评价不同剂量蛋白激酶抑制剂对其影响程度.结果单纯2次注血组家兔较假穿刺组在4～10 d基底动脉出现明显管腔狭窄、炎性浸润等改变,7 d时最明显;核因子-кB的活性于4～10 d也明显增高,与炎性变化一致;抑制蛋白кB表达下降,与核因子-кB呈负相关.给药组家兔与单纯注血组相比,基底动脉痉挛程度和炎性浸润明显减轻,抑制蛋白кB表达明显上升,核因子-кB活性下降,而等渗盐水组较单纯注血组则无明显差异.结论蛋白激酶抑制剂不仅能够显著减轻脑血管痉挛的程度,而且可减轻其管壁炎性浸润程度,其作用可能是通过抑制кB抑制蛋白的磷酸化作用减弱核因子-кB的表达来实现的. 展开更多
关键词 蛋白激酶C抑制剂 家兔 脑血管痉挛 核因子-ΚB 预防 治疗
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羊栖菜多酚通过核转录因子-κB/丝裂原活化蛋白激酶通路缓解脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症反应 被引量：7
3
作者 黄平 洪静霞 +3 位作者 米杰 张攀学 李超 杨文鸽 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第23期141-148,共8页
目的:研究羊栖菜多酚对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7细胞炎症反应的影响。方法:噻唑蓝法测定细胞活力;Griess法测定一氧化氮(NO)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应测定白细胞介素(interleukin,... 目的:研究羊栖菜多酚对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7细胞炎症反应的影响。方法:噻唑蓝法测定细胞活力;Griess法测定一氧化氮(NO)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应测定白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的基因相对表达量;流式细胞术测定细胞吞噬能力;蛋白免疫印迹法测定信号通路丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)和核转录因子(nuclearfactor,NF)-κB信号通路关键蛋白表达水平。结果:羊栖菜多酚对RAW264.7细胞的安全质量浓度范围为0~160μg/mL。与LPS组相比,羊栖菜多酚剂量依赖性降低巨噬细胞吞噬能力并抑制NO的生成。同时,羊栖菜多酚下调促炎细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)和炎症诱导酶(iNOS、COX-2)的mRNA水平,且作用效果与给药剂量及LPS刺激时间相关。这些炎性介质的表达与羊栖菜多酚抑制p38 MAPK和NF-κB p65的激活有关。结论:羊栖菜多酚可通过减弱p38 MAPK和NF-κB p65信号通路的激活水平,抑制下游炎症介质的转录表达,从而缓解LPS诱导的巨噬细胞炎症反应。 展开更多
关键词 羊栖菜多酚 RAW264.7细胞 抗炎 核转录因子-κB信号通路 丝裂原活化蛋白激酶信号通路
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地塞米松对人晶状体上皮细胞核转录因子κB及其抑制蛋白α的表达和细胞凋亡的影响 被引量：3
4
作者 王钧蔚 王林 +1 位作者 葛红岩 刘平 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期145-150,共6页
背景长期全身或眼局部应用糖皮质激素可诱导皮质类固醇性白内障，但其作用机制尚不明确。目的研究地塞米松作用于人晶状体上皮细胞（LECs）后对LECs中核转录因子κB（NF—κB）／NF—κB抑制蛋白κ（IκBκ）表达的影响及LECs凋亡的发... 背景长期全身或眼局部应用糖皮质激素可诱导皮质类固醇性白内障，但其作用机制尚不明确。目的研究地塞米松作用于人晶状体上皮细胞（LECs）后对LECs中核转录因子κB（NF—κB）／NF—κB抑制蛋白κ（IκBκ）表达的影响及LECs凋亡的发生情况，了解皮质类固醇性白内障的发病机制。方法取人LECs系（HLE283）在含质量分数20％胎牛血清的DMEM中进行培养和传代。将不同浓度的地塞米松（0．01、0．1、1、10、100μmol／L）分别加入DMSO无血清DMEM培养液中作为不同浓度地塞米松组，不含地塞米松的DMSO无血清DMEM培养液培养的LECs作为空白对照组。采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）、Western blot、流式细胞术等方法，分别在基因水平、蛋白水平检测LECs中NF—κB／IκB α浓度的改变及LECs凋亡率的变化。结果扩增的基因片段与所设计片段大小一致。地塞米松作用后NF—α核蛋白在LECs中的表达量随着地塞米松浓度的增加而下降，差异有统计学意义（F=36．077，P=0．004）；IκBα蛋白的表达随着地塞米松浓度的增加而上升，差异有统计学意义（F=35．741，P=0．002）。在同浓度地塞米松组，NF—κB核蛋白在LECs中的表达量随作用时间的不同差异有统计学意义（F=16．606，P=0．01），与地塞米松作用24h时的表达量比较，36h和48h时的NF—κB核蛋白表达量明显下降，差异有统计学意义（P=0．002；P=0．01）。与地塞米松作用24h时的表达量比较，36h和48hIκBα蛋白在LECs中的表达量明显增加，差异均有统计学意义（P=0．014；P=0．002）。流式细胞仪检测显示LECs的凋亡率随着地塞米松浓度的增加明显上升，与空白对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论地塞米松通过上调IκBα的表达而过度抑制了NF—κB的活性，并导致LECs凋亡，其作用呈浓度依赖性，这可能是皮质类固醇性白内障发生发展的细胞学和分子生物学机制之一。 展开更多
关键词 皮质类固醇性白内障 地塞米松 核转录因子ΚB 核转录因子κB抑制蛋白α 凋亡 人晶状体上皮细胞
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核转录因子κBp65蛋白及其抑制蛋白IκBα表达与食管鳞癌浸润转移的关系 被引量：3
5
作者 李道明 李珊珊 +5 位作者 赵志华 任秀花 高冬玲 曹静 李海梅 闫爱华 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期497-500,512,共5页
目的:探讨核转录因子κB(NF-κB)p65蛋白及其抑制蛋白IκBα表达与食管鳞癌浸润转移的关系。方法:用免疫组化SP法检测了61例食管鳞癌中NF-κBp65、IκBα蛋白的表达。结果:p65、IκBα蛋白的胞浆表达与食管鳞癌的组织学分级、浸润深度... 目的:探讨核转录因子κB(NF-κB)p65蛋白及其抑制蛋白IκBα表达与食管鳞癌浸润转移的关系。方法:用免疫组化SP法检测了61例食管鳞癌中NF-κBp65、IκBα蛋白的表达。结果:p65、IκBα蛋白的胞浆表达与食管鳞癌的组织学分级、浸润深度和淋巴结转移无关,但p65蛋白的胞核表达与食管鳞癌的组织学分级、浸润深度和淋巴结转移均呈正相关(P值均<0.01),IκBα蛋白的胞核表达与食管鳞癌的淋巴结转移有关(P<0.05)。在食管鳞癌中IκBα蛋白的胞浆和胞核阳性率均高于p65蛋白,但差异均无统计学意义,也无相关关系。结论:NF-κBp65蛋白的胞核表达与食管鳞癌的分级、浸润和淋巴结转移有关,IκBα蛋白的胞核表达与食管鳞癌的淋巴结转移有关。 展开更多
关键词 癌浸润转移 核转录因子 抑制蛋白 白及 IκBα蛋白 淋巴结转移 NF-κBp65 P65蛋白 食管鳞癌 免疫组化SP法 组织学分级 浸润深度 核表达 相关关系 正相关 阳性率 统计学 胞浆
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核转录因子-κB及抑制蛋白IκBa在视网膜脱离后黄斑前膜中的表达及意义 被引量：1
6
作者 李静 贾亚丁 周国宏 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2008年第12期920-923,共4页
目的研究核转录因子-κB(NF-κB)P65及抑制蛋白IκBa在视网膜脱离(RD)后继发黄斑前膜中的表达及临床意义。方法用免疫荧光组织化学方法从蛋白水平研究NF-κBP65亚基及抑制蛋白IκBa在RD后继发黄斑前膜的表达,电镜观察其病理特征。结果NF... 目的研究核转录因子-κB(NF-κB)P65及抑制蛋白IκBa在视网膜脱离(RD)后继发黄斑前膜中的表达及临床意义。方法用免疫荧光组织化学方法从蛋白水平研究NF-κBP65亚基及抑制蛋白IκBa在RD后继发黄斑前膜的表达,电镜观察其病理特征。结果NF-κBP65和IκBa在RD后黄斑前膜组织中的阳性表达明显高于正常黄斑区视网膜组织(P<0.05),且复发性RD黄斑前膜组织中NF-κBP65的表达明显高于裂孔源性视网膜脱离(RRD)黄斑前膜组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论NF-κBP65和IκBa高表达与RD后黄斑前膜的发生关系密切,NF-κBp65的高表达还可能与复发性RD的黄斑前膜相关,NF-κB可望成为治疗黄斑前膜的新靶点。 展开更多
关键词 视网膜脱离 黄斑前膜 核转录因子-ΚB P65 抑制蛋白IκBa
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硫辛酰胺对高糖条件下肾小管上皮细胞氧化应激及转化生长因子β激活酶1和核转录共抑制因子蛋白表达的影响 被引量：6
7
作者 毛彦稳 张小欢 +3 位作者 刘慧铭 王圆圆 汤磊 郭兵 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第19期2993-2997,3003,共6页
目的通过观察高糖环境下给予硫辛酰胺(dl alpha lipoamide,ALM)干预后对细胞氧化应激水平、转化生长因子β激活激酶1(TAK1)及核转录共抑制因子(SnoN)蛋白表达的影响,探讨ALM减轻高糖诱导诱导的肾小管纤维化病变的可能机制。方法将体外... 目的通过观察高糖环境下给予硫辛酰胺(dl alpha lipoamide,ALM)干预后对细胞氧化应激水平、转化生长因子β激活激酶1(TAK1)及核转录共抑制因子(SnoN)蛋白表达的影响,探讨ALM减轻高糖诱导诱导的肾小管纤维化病变的可能机制。方法将体外培养的肾小管上皮细胞(NRK 52E)分为3组:正常糖培养组(NG)、高糖组培养组(HG)、高糖培养条件下加入ALM刺激组(ALM);采用细胞免疫荧光及Western Blot技术,进行细胞鉴定;氧化应激试剂盒检测体外培养的各组肾小管上皮细胞(NRK 52E cells)氧化应激水平;Western Blot技术检测高糖环境下NRK 52E细胞中,硫辛酰胺对TAK1、SnoN蛋白表达的影响;流式细胞技术和Western Blot技术检测ALM对大鼠肾小管上皮细胞纤维化过程的抑制作用。结果所培养细胞为肾小管上皮细胞并对高糖刺激敏感;高糖条件下给予ALM干预后,T SOD活性增强,MDA水平减少,且TAK1、p TAK1(Thr184/187)及CollagenⅢ蛋白表达水平减少,SnoN及钙黏蛋白(E cadherin)蛋白水平的表达上调。结论高糖环境下给予ALM干预后,肾小管上皮细胞的氧化应激水平降低,伴随TAK1的表达减少和SnoN蛋白表达增加,从而抑制肾小管上皮细胞向间质细胞转分化的发生及细胞外基质沉积,最终延缓肾小管上皮细胞纤维化的发生发展。 展开更多
关键词 硫辛酰胺 氧化应激 转化生长因子β激活激酶1 核转录共抑制因子 肾脏纤维化
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mTEL-cFms激酶结构域融合蛋白真核表达载体的构建及其对信号转导和转录激活因子核转位的影响
8
作者 杨胜乾 龙隆 +1 位作者 李微 王莉莉 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期456-462,共7页
目的构建激酶盘真核表达载体,观察豆蔻酰化的TEL转录调节因子HLH结构域与c-Fms激酶结构域融合蛋白(mTEL-cFmskd)的表达对信号转导和转录激活因子1(STAT1)和STAT3核转位的影响。方法利用DNA重组技术,将人的c-Src豆蔻酰化多肽、TEL转录调... 目的构建激酶盘真核表达载体,观察豆蔻酰化的TEL转录调节因子HLH结构域与c-Fms激酶结构域融合蛋白(mTEL-cFmskd)的表达对信号转导和转录激活因子1(STAT1)和STAT3核转位的影响。方法利用DNA重组技术,将人的c-Src豆蔻酰化多肽、TEL转录调节因子HLH结构域、c-Fms激酶结构域以及c-Myc标签的DNA序列克隆在pCORON/neo载体上,构建pCORON/neo-HcSrc-Tel-cfmskd-Myc真核表达载体。将载体转染至稳定表达GFP-STAT1的人骨肉瘤细胞(U2OS)和稳定表达EGFP-STAT3的幼仓鼠肾细胞24 h后,采用IN Cell Analyzer1000获取细胞图像,分析细胞内GFP-STAT1或EGFP-STAT3融合蛋白的核转位程度。结果质粒酶切和测序鉴定表明,构建的pCORON/neo-HcSrc-Tel-cfmskd-Myc真核表达载体序列正确。载体转染细胞24 h后,绿色荧光蛋白标记的STAT1和STAT3均进入细胞核,发生核转位现象。c-Fms激酶抑制剂GW2580和Sutent能抑制mTEL-cFmskd诱导EGFP-STAT3核转位的发生。结论成功构建激酶盘真核表达载体pCORON/neo-HcSrc-Tel-cfmskd-Myc。载体在细胞中表达的mTEL-cFmskd豆蔻酰化融合蛋白具有M-CSF/c-Fms配体受体复合物激活下游信号分子的生物学功能。 展开更多
关键词 巨噬细胞集落刺激因子受体 真核表达载体 TEL 豆蔻酰化 信号转导和转录激活因子 核转位 激酶抑制剂
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核转录共抑制因子、转化生长因子β1、Smad4在重度宫腔粘连内膜组织中表达及临床意义 被引量：8
9
作者 杨博萍 郭建新 +3 位作者 王昊 袁艺萍 池余刚 李力 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第17期1667-1672,共6页
目的探讨核转录共抑制因子(ski-related novel protein N,SnoN)在宫腔粘连(intrauterine adhesions,IUA)发病中的作用,及其与转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad4关系。方法收集重度宫腔粘连(sIUA组)和宫... 目的探讨核转录共抑制因子(ski-related novel protein N,SnoN)在宫腔粘连(intrauterine adhesions,IUA)发病中的作用,及其与转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad4关系。方法收集重度宫腔粘连(sIUA组)和宫腔无病变的子宫纵隔患者(对照组)宫内膜组织各20例,通过免疫组化、Western blot、RT-qPCR检测子宫内膜组织中SnoN、TGF-β1、Smad4的表达水平,并应用Spearman等级相关分析SnoN、TGF-β1、Smad4之间的相关性,探讨其与宫腔粘连发病的关系。结果sIUA组患者宫内膜组织中TGF-β1、Smad4表达水平明显高于对照组(P<0.01),而SnoN表达水平明显低于对照组(P<0.01)。在重度宫腔粘连宫内膜组织中,TGF-β1与Smad4的蛋白表达水平呈正相关(r=0.4689,P<0.05),而TGF-β1与SnoN的蛋白水平呈负相关(r=-0.4835,P<0.05)。结论SnoN可能通过TGF-β1/Smad4信号通路参与宫腔粘连的发病。 展开更多
关键词 核转录共抑制因子 转化生长因子β1/Smad4 重度宫腔粘连
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抑制心内直视术中核转录因子激活保护心肌 被引量：2
10
作者 王云 易定华 +2 位作者 万荣华 顾绩伟 李军朋 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期43-46,共4页
目的在人类体外循环(CPB)心内直视手术中研究核转录因子-kB(NF-kB)的激活与心肌白细胞浸润及损伤的关系,并观察氧自由基清除剂辅酶Q10对NF-kB激活的抑制作用及其对心肌的保护作用。方法选取47例接受CPB心内直视手术的成年患者,随机分为... 目的在人类体外循环(CPB)心内直视手术中研究核转录因子-kB(NF-kB)的激活与心肌白细胞浸润及损伤的关系,并观察氧自由基清除剂辅酶Q10对NF-kB激活的抑制作用及其对心肌的保护作用。方法选取47例接受CPB心内直视手术的成年患者,随机分为对照组30例,治疗组17例。治疗组手术前5 d口服辅酶Q10片剂。在体外循环转机前、心脏缺血45 min和再灌注45 min时取右心房肌组织,做心肌组织病理学、超微结构及NF-kB活性观察。术后观察血流动力学指标、血管活性药物剂量和临床指标。结果在缺血45 min及再灌注45 min后,对照组心肌毛细血管腔内可见嗜中性白细胞聚集并黏附于内皮细胞,超微结构损害,细胞胞核和胞浆内均可见NF-kB阳性表达;而治疗组心肌可见少数嗜中性细胞浸润,超微结构损害轻微,细胞胞核和胞浆内有微弱的NF-kB阳性表达。术后两组血流动力学指标、血管活性药物剂量和临床指标间无显著差异。结论NF-kB在心内直视术中的心肌缺血和再灌注病理过程中起重要作用,辅酶Q10对NF-kB激活有明显抑制作用,并对心肌有保护作用。 展开更多
关键词 心内直视手术 核转录因子 抑制 心肌
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饲粮蛋白质水平对肥育猪背最长肌嫩度及骨骼肌特异性蛋白-核转录因子κB信号途径的影响 被引量：4
11
作者 张勇 崔岩 +4 位作者 陶亮 朱宇旌 邓科 孙璀 邵彩梅 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1342-1350,共9页
本试验旨在研究饲粮理想蛋白质水平对背最长肌嫩度及骨骼肌特异性蛋白-核转录因子κB(P94-NFκB)信号途径相关蛋白和钙蛋白酶抑制蛋白(CAST)mRNA表达量的影响。选择初始重约50 kg的杜洛克×长白×大白三元杂交猪90头,随机分配到... 本试验旨在研究饲粮理想蛋白质水平对背最长肌嫩度及骨骼肌特异性蛋白-核转录因子κB(P94-NFκB)信号途径相关蛋白和钙蛋白酶抑制蛋白(CAST)mRNA表达量的影响。选择初始重约50 kg的杜洛克×长白×大白三元杂交猪90头,随机分配到3个处理,每个处理3个重复,每个重复10头,公母各占1/2。3个处理分别采用12%、16%、20%理想蛋白质水平的饲粮,饲粮能量水平相同。正试期58 d,结束后屠宰取样,测定肌肉剪切力并利用实时定量PCR法测定猪背最长肌P94、NFκB、核转录因子抑制物(IκB)和CAST mRNA表达量。结果表明:1)饲粮蛋白质水平对背最长肌剪切力、P94、NFκB、IκB和CAST mRNA表达量有显著影响(P<0.05);随饲粮蛋白质水平升高,背最长肌剪切力、IκB和CAST mRNA表达量升高、P94和NFκB mRNA表达量降低。2)背最长肌剪切力与IκB(相关系数为0.513,P<0.05)、CASTmRNA表达量(相关系数为0.816,P<0.01)呈正相关。3)CAST与P94 mRNA表达量呈负相关(相关系数为-0.496,P<0.05),与IκB mRNA表达量呈正相关(相关系数为0.710,P<0.01)。4)P94与NFκB mRNA表达量呈正相关(相关系数为0.550,P<0.05),与IκB mRNA表达量呈负相关(相关系数为-0.518,P<0.05);IκB与NFκB mRNA表达量呈负相关(相关系数为-0.539,P<0.05)。结果提示:饲粮高蛋白质水平提高了猪背最长肌剪切力、CAST和IκBmRNA表达量,降低了肌肉嫩度和P94 mRNA表达量;猪背最长肌P94-NFκB信号途径在肌肉嫩度调控过程中发挥一定作用,但不是主要途径。 展开更多
关键词 蛋白质水平 钙蛋白酶抑制蛋白 骨骼肌特异性蛋白 核转录因子 κB 肌肉嫩度
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核转录因子κB抑制子α、β和ε共同稳定下调的HepG2细胞系的建立
12
作者 付静 陈瑶 +2 位作者 任一彬 钱尤雯 王红阳 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期998-1003,共6页
目的:利用RNA干扰的方法,构建针对人核转录因子κB抑制子(IκB)α、β和ε的共同干扰载体,转染人肝细胞癌HepG2细胞,建立稳定、共同下调IκBα、IκBβ和IκBε的HepG2细胞系,为后续研究奠定基础。方法:构建3个针对人IκBα基因的干扰载... 目的:利用RNA干扰的方法,构建针对人核转录因子κB抑制子(IκB)α、β和ε的共同干扰载体,转染人肝细胞癌HepG2细胞,建立稳定、共同下调IκBα、IκBβ和IκBε的HepG2细胞系,为后续研究奠定基础。方法:构建3个针对人IκBα基因的干扰载体pcDNATM6.2-miR-IκBα(1,2,3),转染HepG2细胞,在mRNA和蛋白水平检测3个干扰载体对IκBα表达的抑制作用,筛选出抑制效果最好的干扰载体。以同样的方法构建并筛选出分别针对人IκBβ和IκBε基因的最佳干扰载体,通过酶切连接反应将分别针对IκBα、IκBβ和IκBε基因的3个最佳干扰片段串联连入pcDNATM6.2-miR干扰载体中,构建可同时干扰IκBα、IκBβ和IκBε的共同干扰载体pcDNATM6.2-miR-IκBα-IκBβ-IκBε。将共同干扰载体转染HepG2细胞,通过G418筛选,建立IκBα、IκBβ和IκBε的表达共同稳定下调的HepG2细胞系,并以蛋白质印迹法检测IκBα、IκBβ和IκBε的蛋白表达。结果:成功构建共同干扰载体pcDNATM6.2-miR-IκBα-IκBβ-IκBε;Western印迹结果显示,与正常及对照载体pcDNATM6.2-miR-Neg转染的HepG2细胞相比,在稳定转染pcDNATM6.2-miR-IκBα-IκBβ-IκBε的HepG2细胞系中,IκBα、IκBβ和IκBε的表达均稳定下调。结论:成功建立了IκBα、IκBβ和IκBε共同稳定下调的人肝细胞癌HepG2细胞系,为后续研究奠定了基础。 展开更多
关键词 核转录因子κB抑制子 RNA干扰 HEPG2细胞 干扰载体
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高脂食物诱导豚鼠主动脉核转录因子кB的激活和白细胞分化抗原CD68的高表达及天然抗炎植物南蛇藤的抑制作用
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作者 张颖 杨娜娜 +2 位作者 姚树桐 王家富 秦树存 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第A10期1983-1983,共1页
关键词 白细胞分化抗原 核转录因子 CD68 高脂食物 南蛇藤 抑制作用 高脂模型组 过氧化物歧化酶 饲料组 肿瘤坏死因子α
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运动训练对核转录因子kappaB信号通路及炎性基因影响的研究进展 被引量：4
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作者 陈艳梅 郝选明 《体育学刊》 CAS CSSCI 北大核心 2011年第3期140-144,共5页
NF-κB(核转录因子-kappaB)信号通路在机体的免疫应答、细胞增殖、凋亡和生长发育中发挥重要作用。运动训练过程中机体产生的活性氧以及运动性肌肉损伤激活了NF-κB信号通路,对NF-κB活性的影响与运动训练的持续时间、频率和强度有关。... NF-κB(核转录因子-kappaB)信号通路在机体的免疫应答、细胞增殖、凋亡和生长发育中发挥重要作用。运动训练过程中机体产生的活性氧以及运动性肌肉损伤激活了NF-κB信号通路,对NF-κB活性的影响与运动训练的持续时间、频率和强度有关。急性剧烈运动导致了NF-κB活性一过性提高;长期有规律的运动训练能够降低由于衰老和慢性炎症反应而上调的NF-κB的活性;长期剧烈的运动训练导致了NF-κB的慢性持续激活,使通路上各指标的表达发生变化,细胞核中聚集NF-κB的亚基p65浓度增多,转录靶基因,从而使炎性基因的表达大幅度升高,一方面放大机体固有免疫系统对抗运动性应激,另一方面参与了骨骼肌运动性慢性炎症的形成。 展开更多
关键词 运动生物化学 核转录因子-kappab 核转录因子-kappab抑制蛋白激酶 氧化应激 运动训练 综述
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隔日限食减轻脊髓损伤大鼠炎症反应的芳香烃受体/细胞因子信号传导抑制因子2/核转录因子-κB信号通路机制 被引量：2
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作者 周小珏 冯婧 +2 位作者 庞日朝 刘捷 张安仁 《中国康复理论与实践》 CSCD 北大核心 2022年第5期544-551,共8页
目的探讨芳香烃受体/细胞因子信号传导抑制因子2/核转录因子-κB(AHR/SOCS2/NF-κB)信号通路在隔日限食(EODF)疗法减轻脊髓损伤炎症反应中的作用。方法36只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、模型组和EODF组,每组12只。后两组复... 目的探讨芳香烃受体/细胞因子信号传导抑制因子2/核转录因子-κB(AHR/SOCS2/NF-κB)信号通路在隔日限食(EODF)疗法减轻脊髓损伤炎症反应中的作用。方法36只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、模型组和EODF组,每组12只。后两组复制C5脊髓半侧钳夹模型。术后EODF组予24 h禁食和摄食交替,不限水,共2周。术前和术后1 d、7 d、14 d行梳理试验。术后14 d取各组脊髓组织,每组4只行HE染色观察病理损伤,4只采用Western blotting检测AHR、SOCS2和NF-κB水平,4只采用逆转录实时定量聚合酶链反应检测AHR、SOCS2、核因子κB抑制因子α(IκBα)、NF-κB、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的mRNA水平。结果与假手术组相比,另两组各时间点梳理试验评分降低(P<0.05),出现空腔、水肿、结构紊乱等病理改变;与模型组相比,EODF组术后14 d梳理试验评分增加(P<0.05),损伤减轻。与模型组相比,EODF组AHR、SOCS2 mRNA和蛋白表达增高(P<0.05),NF-κB mRNA和蛋白表达降低(P<0.05),IκBαmRNA表达增高(P<0.05),TNF-α、IL-6 mRNA表达降低(P<0.05)。结论EODF可促进脊髓损伤大鼠患侧前肢运动功能恢复,减轻损伤和炎症反应,可能与激活AHR/SOCS2/NFκB信号通路有关。 展开更多
关键词 脊髓损伤 炎症 隔日限食 芳香烃受体 细胞因子信号传导抑制因子2 核转录因子-ΚB 大鼠
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胃癌及癌前病变中核因子-kappa B和端粒酶逆转录酶的表达与意义 被引量：16
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作者 王维 罗和生 余保平 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2002年第4期289-292,共4页
目的 :探讨胃癌及癌前病变中核因子 kappaB(NF κB)和端粒酶逆转录酶 (hTERT)的表达及相互关系。方法 :以 4 1例原发性胃癌和 38例相应非癌组织及 10例正常对照为研究对象 ,采用免疫组化和原位杂交法检测NF κB亚单位 p6 5蛋白、hTERT... 目的 :探讨胃癌及癌前病变中核因子 kappaB(NF κB)和端粒酶逆转录酶 (hTERT)的表达及相互关系。方法 :以 4 1例原发性胃癌和 38例相应非癌组织及 10例正常对照为研究对象 ,采用免疫组化和原位杂交法检测NF κB亚单位 p6 5蛋白、hTERT蛋白和hTERTmRNA。 结果 :①正常胃粘膜、肠型化生、异型增生、胃癌中 ,p6 5的阳性率分别为 0、34 18%、5 3 33%、6 0 98% ;hTERTmRNA为 10 0 0 %、39 13%、6 6 6 7%、85 37% ;hTERT蛋白为 0、30 4 3%、6 0 0 0 %、78 0 5 %。三者在异型增生、胃癌中与正常组相比差异分别有显著性 ,而且肠化与胃癌组比较也分别具有显著性 (P <0 0 5 )。②胃癌中 ,p6 5和hTERT蛋白的表达在低、未分化、进展期、有淋巴结转移和浸润至浆膜层的肿瘤中显著增高 (P <0 0 1～ 0 0 5 )。而hTERTmRNA的表达仅与肿瘤分期相关。③肠化、异型增生和胃癌三组中 ,p6 5和hTERTmRNA ,及hTERT蛋白和mRNA间分别具有中到强正相关 (rs=0 6 0 9～ 0 75 2 ,P <0 0 1)。结论 :NF κBp6 5蛋白和hTERT的过表达是胃癌发生中的早期事件 ,其表达水平随着胃癌恶性程度的增加而增加 ;p6 5在转录水平上激活hTERT可能是胃癌发生发展的重要阶段。 展开更多
关键词 核因子-kappab 胃癌 癌前病变 端粒酶逆转录酶 P65蛋白
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薯蓣皂苷片对RSC-364细胞核转录因子-κBp65表达的影响 被引量：3
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作者 段一娜 王明娟 +3 位作者 孔素红 高玉峰 赵秀荣 宋鸿儒 《世界科学技术-中医药现代化》 北大核心 2014年第7期1625-1628,共4页
目的:观察薯蓣皂苷片对类风湿性关节炎细胞模型核转录因子NF-κBp65及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响。方法:用白介素-17(IL-17)+TNF-α共同孵育大鼠RSC-364细胞,以不同浓度薯蓣... 目的:观察薯蓣皂苷片对类风湿性关节炎细胞模型核转录因子NF-κBp65及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响。方法:用白介素-17(IL-17)+TNF-α共同孵育大鼠RSC-364细胞,以不同浓度薯蓣皂苷片进行干预,MTT法检测不同药物浓度对细胞存活率影响,采用Western blot检测各组NF-κBp65及其抑制蛋白(IκB-α)的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养液上清中VEGF、MMP-9、TNF-α蛋白水平的变化。结果:薯蓣皂苷片可促进κB抑制蛋白的表达量,降低NF-κB蛋白水平的高表达,并降低细胞分泌VEGF、MMP-9、TNF-α水平。结论:薯蓣皂苷片对RSC-364细胞核因子κB有负向调节作用,提升IκB-α的表达并能降低炎性因子和血管新生因子分泌,提示其在类风湿发病中可能起到潜在的调节作用。 展开更多
关键词 类风湿性关节炎 薯蓣皂苷片 大鼠成纤维样滑膜细胞株 NF-κB抑制蛋白 核转录因子-ΚB
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核转录因子-κB与1型单纯疱疹病毒的免疫逃避机制 被引量：1
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作者 尹婕 黄振平 车敦发 《实用医学杂志》 CAS 2007年第9期1428-1430,共3页
1型单纯疱疹病毒（HSV-1）的成人感染率高达60%～90%,引起疱疹、特应性湿疹、致盲性的角膜基质炎,对免疫缺陷、免疫抑制等易感人群甚至造成致死性脑炎或肝炎。HSV-1最显著的生物学特性是能在原发感染后在体内潜伏，并持续存在。高热、... 1型单纯疱疹病毒（HSV-1）的成人感染率高达60%～90%,引起疱疹、特应性湿疹、致盲性的角膜基质炎,对免疫缺陷、免疫抑制等易感人群甚至造成致死性脑炎或肝炎。HSV-1最显著的生物学特性是能在原发感染后在体内潜伏，并持续存在。高热、免疫抑制、手术可激活潜伏的HSV-1，引起症状性发作，或无症状性的病毒播散，广泛地累及人群。 展开更多
关键词 1型单纯疱疹病毒 核转录因子-ΚB 免疫逃避机制 HSV-1 易感人群 免疫抑制 无症状性 成人感染率
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诺迪康胶囊对力竭性运动大鼠心肌p38丝裂原活化蛋白激酶和NF-κB及TNF-α的影响 被引量：4
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作者 郑妩媚 初海平 王福文 《医药导报》 CAS 2016年第10期1041-1045,共5页
目的探讨诺迪康胶囊对运动性心肌损伤的保护机制。方法通过大鼠负荷游泳建立力竭性心肌损伤模型,健康Wistar雄性大鼠70只,随机分为3组:正常对照组、模型对照组、诺迪康胶囊组。正常对照组(n=10),不进行任何运动;模型对照组(n=30),大鼠... 目的探讨诺迪康胶囊对运动性心肌损伤的保护机制。方法通过大鼠负荷游泳建立力竭性心肌损伤模型,健康Wistar雄性大鼠70只,随机分为3组:正常对照组、模型对照组、诺迪康胶囊组。正常对照组(n=10),不进行任何运动;模型对照组(n=30),大鼠尾束相当于体质量2%负荷,进行力竭游泳运动时间不少于3 h;诺迪康胶囊组(n=30):造模方法同模型对照组,运动前灌胃给予诺迪康胶囊0.45 g·kg-1(有效剂量),每日1次,连续10 d。模型对照组和诺迪康胶囊组大鼠分别于力竭运动后3,6,24 h腹腔注射20%乌拉坦0.2 m L·(100 g)-1。苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠心肌病理学变化,分别于力竭运动后3,6和24 h取心肌组织进行匀浆,取上清液,Western blotting法测定磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)、核转录因子κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达的变化。结果病理学检查结果显示,模型对照组大鼠心肌细胞排列紊乱,横纹消失,与模型对照组比较,诺迪康胶囊各组大鼠心肌损伤减轻。与正常对照组比较,模型对照组大鼠运动后不同时间心肌组织中p-p38MAPK、NF-κB、TNF-α蛋白表达均显著上调(P<0.01),而诺迪康胶囊可明显抑制其表达的上调(P<0.01)。结论诺迪康胶囊对大鼠力竭性运动诱发心肌损伤具有保护作用,其作用机制可能与下调p-p38MAPK、NF-κB和TNF-α的表达,抑制过度炎症反应有关。 展开更多
关键词 诺迪康胶囊 运动 力竭性 P38丝裂原活化蛋白激酶 核转录因子KB 肿瘤坏死因子-α
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核因子抑制剂对眼表碱烧伤后白内障形成的影响
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作者 李之喆 鲁建华 张文芳 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2009年第11期960-964,共5页
目的探讨大鼠眼表碱烧伤后应用核因子抑制剂对晶状体上皮细胞(LECs)核转录因子-κB(NF-κB)mRNA表达的影响。方法制造大鼠眼表碱烧伤模型。实验组每天给予PDTC球结膜下注射,对照组每天给予生理盐水球结膜下注射,分别于烧伤后1、3、5、7... 目的探讨大鼠眼表碱烧伤后应用核因子抑制剂对晶状体上皮细胞(LECs)核转录因子-κB(NF-κB)mRNA表达的影响。方法制造大鼠眼表碱烧伤模型。实验组每天给予PDTC球结膜下注射,对照组每天给予生理盐水球结膜下注射,分别于烧伤后1、3、5、7d处死大鼠,取晶状体行免疫组织化学染色及RT-PCR检测。结果碱烧伤后1d,对照组大鼠晶状体上皮脱落,但实验组大鼠LECs完整。碱烧伤后5～7d,2个组的晶状体上皮和皮质变得致密浓缩。碱烧伤后1～3d,对照组LECs中NF-κB表达的灰度值明显低于核因子抑制剂组(t=2.836,P=0.036;t=4.932,P=0.004),但对照组NF-κBmRNA的表达(NF-κB/β-actin)明显高于核因子抑制剂组(t=31.563,P=0.000;t=17.837,P=0.000)。碱烧伤5d后,2组间NF-κB及其mRNA表达量的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论眼表碱烧伤可以导致白内障的发生,在碱烧伤后早期使用核因子抑制剂对白内障的形成有一定的抑制作用。 展开更多
关键词 核因子抑制剂 白内障 碱烧伤 免疫组织化学 逆转录聚合酶链式反应
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