STAT3入核的核定位序列研究 被引量：2

1

作者 叶中德 沈倍奋 黎燕 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第1期32-35,共4页

STAT3(signaltransducersandactivatorsoftranscription)是胞浆中的潜在转录因子 ,在细胞因子、生长因子等外界信号分子的刺激下发生磷酸化和二聚化进入细胞核 ,结合在基因特定的启动子上调控转录 .目前对STAT3的磷酸化和二聚化都相当清... STAT3(signaltransducersandactivatorsoftranscription)是胞浆中的潜在转录因子 ,在细胞因子、生长因子等外界信号分子的刺激下发生磷酸化和二聚化进入细胞核 ,结合在基因特定的启动子上调控转录 .目前对STAT3的磷酸化和二聚化都相当清楚 ,但对其怎样进入细胞核还知之甚少 .入核分子一般都有一段碱性氨基酸的核定位序列(NLS) ,但通过比较STAT家族没有发现经典的核定位序列 (NLS) .以IL 6为外界信号分子 ,2 93T为细胞模型 ,绿色荧光蛋白GFP为标签分子 ,研究发现STAT 3分子在IL 6刺激前呈胞浆分布 ,刺激后聚集胞核中是由于构象的改变暴露了核定位序列 .通过同源比较和缺失突变发现 ,位于STAT 3DNA结合域 4 0 3～ 4 2 6位氨基酸之间的一段富含赖氨酸和精氨酸的碱性氨基酸对STAT 3入核起重要作用 ,具有核定位序列 (NLS) 展开更多

关键词 STAT3 入核 核定位序列 转录因子

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肾癌转移相关CXCR4基因核定位序列的初步研究 被引量：1

2

作者 刘骞 王林辉 +2 位作者 杨庆 徐斌 孙颖浩 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期990-993,共4页

目的：探讨基质细胞衍生因子1（SDF-1）及其受体CXC趋化因子受体4（CXCR4）在肾癌细胞转移中的作用机制,观察不同区段CXCR4在肾癌细胞内的定位。方法：应用核定位分析软件结合实验,构建不同长度的CXCR4与绿色荧光蛋白pEGFP-N1重组表达载... 目的：探讨基质细胞衍生因子1（SDF-1）及其受体CXC趋化因子受体4（CXCR4）在肾癌细胞转移中的作用机制,观察不同区段CXCR4在肾癌细胞内的定位。方法：应用核定位分析软件结合实验,构建不同长度的CXCR4与绿色荧光蛋白pEGFP-N1重组表达载体,转染肾透明细胞癌A498细胞株后用共聚焦显微镜观察重组表达载体在细胞内的定位。结果：生物信息学分析软件PSORTⅡPrediction发现第146～149位氨基酸残基RPRK可能是CXCR4的核定位序列,我们构建的重组质粒EGFP-CXCR4（1～510bp）、EGFP-CXCR4（1～765bp）、野生型全长EGFP-CXCR4分别加SDF-1刺激因子后其表达产物主要呈细胞核分布,而加入SDF-1刺激因子后重组质粒EGFP-CXCR4（1～267bp）的表达产物呈细胞质分布,未经SDF-1刺激野生型全长EGFP-CXCR4其表达产物呈细胞质分布,与生物信息学分析软件预测结果基本吻合。结论：CXCR4的第90～170位氨基酸残基含有核定位序列,为进一步精确定位CXCR4在肾癌细胞内的核定位序列以及寻找抑制肾癌转移的可能靶标奠定了实验和理论基础。 展开更多

关键词 肾肿瘤 趋化因子 核定位序列 亚细胞定位

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甲状旁腺素相关肽核定位序列与C末端缺失致小鼠少突胶质细胞发育障碍

3

作者 杨永昆 刘雅红 +2 位作者 王群 刘牧 张永杰 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1337-1344,共8页

目的:研究甲状旁腺素相关肽(parathyroid hormone related peptide,PTHrP)核定位序列(nuclear localization sequence,NLS)与C末端缺失对小鼠少突胶质细胞发育及髓鞘生成的影响。方法:采用6日龄PTHrP Knock In(PTHrP KI)小鼠及同窝野生... 目的:研究甲状旁腺素相关肽(parathyroid hormone related peptide,PTHrP)核定位序列(nuclear localization sequence,NLS)与C末端缺失对小鼠少突胶质细胞发育及髓鞘生成的影响。方法:采用6日龄PTHrP Knock In(PTHrP KI)小鼠及同窝野生型(wild type,WT)小鼠行5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU)标记,次日取材经免疫荧光染色检测海马区少突胶质前体细胞(oligodendrocyte progenitor cells,OPCs)的增殖能力,通过髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)免疫组化染色及电镜技术观察中枢神经系统(central nervous system,CNS)的髓鞘发生;体外培养5日龄PTHrP KI小鼠及同窝WT小鼠大脑皮层的O4阳性OPCs,运用免疫荧光染色观察Ki67阳性细胞数,流式分析检测凋亡细胞比例,Western blot检测与增殖凋亡相关蛋白的表达变化。继而行分化培养7 d后,通过2′,3′-环腺苷酸-3′-磷酸二酯酶(2′,3′-cyclic-nucleotide 3′-phosphodiesterase,CNPase)免疫荧光染色检测细胞分化能力。结果:与同窝WT小鼠相比,PTHrP KI小鼠脑内MBP阳性纤维面积减少,轴突髓鞘稀薄,海马区BrdU与少突胶质细胞转录因子2(oligodendrocyte transcription factor 2,Oligo-2)双阳性细胞数减少。体外培养PTHrP KI小鼠OPCs的Ki67阳性细胞百分率降低,AV+/PI-凋亡细胞百分率升高;增殖相关B细胞淋巴瘤滤过性病毒插入位点1(B cell-specific MLV integration site-1,Bmi-1)蛋白、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白表达降低,凋亡相关Caspase-3蛋白、p16蛋白表达升高。分化培养后,PTHrP KI小鼠来源OPCs的CNPase荧光染色强度降低。结论:PTHrP的NLS与C末端缺失可致小鼠OPCs增殖减少、凋亡增加、分化延缓,进而导致CNS轴突髓鞘形成障碍。 展开更多

关键词 甲状旁腺素相关肽 核定位序列 少突胶质细胞 髓鞘

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甲状旁腺素相关肽核定位序列和C-末端缺失对小鼠下颌骨发育的影响 被引量：3

4

作者 刘洪 颜成东 蒋尚飞 《口腔医学研究》 CAS 北大核心 2017年第10期1044-1047,共4页

目的:研究甲状旁腺素相关肽(parathyroid hormone relative peptide,PTHrP)核定位序列和C-末端缺失对小鼠下颌骨发育的影响。方法:使用CT扫描三维重建、HE染色、总胶原染色、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色、抗酒石酸酸性磷... 目的:研究甲状旁腺素相关肽(parathyroid hormone relative peptide,PTHrP)核定位序列和C-末端缺失对小鼠下颌骨发育的影响。方法:使用CT扫描三维重建、HE染色、总胶原染色、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色、免疫组织化学染色和western-blot等方法对PTHrP敲入(PTHrP knock in,PTHrP KI)小鼠(PTHrP KI组,n=10)和野生型(wild type,WT)小鼠的下颌第一磨牙的差异。结果:WT小鼠成骨细胞密度、下颌骨相对骨量、ALP阳性面积、一型胶原(collagen-I)阳性面积均明显高于PTHrP KI小鼠,并且差异均具有统计学意义(P<0.05);而PTHrP KI小鼠下颌骨p16,p21和p27蛋白表达水平明显高于WT小鼠,Ki-67蛋白表达水平低于WT小鼠,并且差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:PTHrP核定位序列和C-末端缺失导致了成骨细胞减少,抑制了胞外基质的合成和矿化,从而导致了小鼠下颌骨的发育障碍。 展开更多

关键词 甲状旁腺素相关肽 核定位序列 C末端 下颌骨 发育

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甲状旁腺素相关蛋白核定位序列及C-末端缺失对幼年小鼠下颌切牙发育影响及机制研究

5

作者 刘洪 颜成东 蒋尚飞 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期30-34,共5页

目的:研究甲状旁腺素相关蛋白(PTHrP)对2周龄小鼠下颌切牙发育的影响及作用机制。方法:分别选取2周龄PTHrP KI小鼠及同窝WT小鼠各20只,对下颌切牙行影像学、组织学、细胞凋亡、RT-PCR检测。结果:PTHrP KI组小鼠下颌切牙长度、切缘厚度... 目的:研究甲状旁腺素相关蛋白(PTHrP)对2周龄小鼠下颌切牙发育的影响及作用机制。方法:分别选取2周龄PTHrP KI小鼠及同窝WT小鼠各20只,对下颌切牙行影像学、组织学、细胞凋亡、RT-PCR检测。结果:PTHrP KI组小鼠下颌切牙长度、切缘厚度、髓腔壁牙本质厚度、I型胶原阳性面积、ALP、OCN、SOD1、SOD2、CAT、GSH-Px的mRNA表达水平均明显低于WT组小鼠(P<0.01),前期牙本质比例、凋亡细胞比例均明显高于WT小鼠(P<0.01)。结论:PTHrP核定位序列和C-末端的缺失导致幼年小鼠下颌切牙细胞凋亡增加、胞外基质生成和矿化减少,导致了小鼠下颌切牙的发育异常。 展开更多

关键词 甲状旁腺素相关蛋白 核定位序列 C-末端 切牙 发育 氧化应激

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猪圆环病毒I型ORF2蛋白序列与其核定位功能的相关性 被引量：2

6

作者 陈美玲 陈焕春 +1 位作者 宋云峰 黄红亮 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期459-461,共3页

软件分析PCV1-ORF2的核苷酸序列发现其N端的氨基酸序列中包含一段核定位序列,将具有核定位序列特征的区域删除,构建缺失核定位序列的PCV1-ORF2基因与绿色荧光蛋白的真核融合表达载体,同时构建PCV1-ORF2全基因与绿色荧光蛋白的真核融合... 软件分析PCV1-ORF2的核苷酸序列发现其N端的氨基酸序列中包含一段核定位序列,将具有核定位序列特征的区域删除,构建缺失核定位序列的PCV1-ORF2基因与绿色荧光蛋白的真核融合表达载体,同时构建PCV1-ORF2全基因与绿色荧光蛋白的真核融合表达载体,分别转染Hela细胞,可观察到后者绿色荧光聚集在细胞核区域;而前者转染Hela细胞结果显示核定位现象消失,从而可以推断这一区域是CPV1-ORF2蛋白核定位的功能区。 展开更多

关键词 猪圆环病毒Ⅰ型 ORF2蛋白 HELA细胞 绿荧光蛋白 核定位序列

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ZNF219基因核定位信号序列的确定

7

作者 余少文 胡萍 《深圳大学学报（理工版）》 EI CAS 2002年第2期19-21,共3页

ZNF2 19是新发现定位在人 14号染色体 q11带上的特异性锌指基因 .本实验对其核定位信号的识别说明其中有两组核定位序列存在 ,因此通过将ZNF2 19的核定位序列(NLS)与N -端增强绿色荧光蛋白载体 (pEGFP N1)构建成质粒 (pEGFP ZNF2 19NLS... ZNF2 19是新发现定位在人 14号染色体 q11带上的特异性锌指基因 .本实验对其核定位信号的识别说明其中有两组核定位序列存在 ,因此通过将ZNF2 19的核定位序列(NLS)与N -端增强绿色荧光蛋白载体 (pEGFP N1)构建成质粒 (pEGFP ZNF2 19NLS) ,然后瞬时转染到COS靶细胞 ,实验结果表明 :绿色荧光蛋白 (GFP) 展开更多

关键词 核定位信号 ZNF219 核定位序列 绿色荧光蛋白 人 睾丸 染色体 特异性锌指基因 细胞核

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鸡贫血病毒VP3蛋白序列与其核定位功能的相关性 被引量：3

8

作者 陶冶 张靖溥 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第1期100-104,共5页

鸡贫血病毒 (chickenanemiavirus ,CAV)编码一种小蛋白VP3.通过构建vp3基因与绿色荧光蛋白基因的真核融合表达载体 ,转染 5种肿瘤 /转化细胞株 ,观察绿色荧光在亚细胞区域的定位 ,证实VP3具有核定位的功能 ;分析VP3的氨基酸序列 ,将其... 鸡贫血病毒 (chickenanemiavirus ,CAV)编码一种小蛋白VP3.通过构建vp3基因与绿色荧光蛋白基因的真核融合表达载体 ,转染 5种肿瘤 /转化细胞株 ,观察绿色荧光在亚细胞区域的定位 ,证实VP3具有核定位的功能 ;分析VP3的氨基酸序列 ,将其具核定位序列 (nuclearlocalizationsequence ,NLS)特征的区域删除 ,再构建此缺失的VP3的基因与绿色荧光蛋白基因的真核融合表达载体、转染实验显示核定位现象消失 ;进一步将具核定位序列特征的区域亚克隆到绿色荧光蛋白真核表达载体上 ,核定位功能再现 .从而推断这一区域是VP3蛋白核定位的功能区 .此区域位于VP3的C端 ,且富含碱性氨基酸 ,二级结构预测发现这一区域形成特定的 β折叠结构 .用碘丙锭 (propidiumiodide,PI)染色的方法还得到了VP3促进肿瘤细胞凋亡的初步证据 . 展开更多

关键词 VP3蛋白 肝癌细胞系 绿色荧光蛋白 脂质体转染 核定位序列 细胞凋亡 鸡贫血病毒 相关性

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PNRC1核定位信号序列的鉴定 被引量：2

9

作者 王元忠 李渝萍 +3 位作者 陈敏 陈彬 陈健 周度金 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期35-39,共5页

为鉴定富含脯氨酸核受体辅调节蛋白1(PNRC1)分子的核定位信号序列(nuclear localization signal sequence ,NLS) ,在生物信息学方法预测的基础上,先构建野生型PNRC1及删除预测NLS的PNRC1突变体的绿色荧光蛋白(GFP)重组表达载体,转染细... 为鉴定富含脯氨酸核受体辅调节蛋白1(PNRC1)分子的核定位信号序列(nuclear localization signal sequence ,NLS) ,在生物信息学方法预测的基础上,先构建野生型PNRC1及删除预测NLS的PNRC1突变体的绿色荧光蛋白(GFP)重组表达载体,转染细胞后通过激光共聚焦显微镜观察PNRC1分子在删除预测NLS后细胞内的定位变化.然后,将预测的NLS编码序列直接连到GFP表达载体上,以及将预测的NLS加到胞浆蛋白上构建其GFP重组表达载体,转染细胞,观察预测的NLS能否把构建的重组体都带到细胞核内.结果显示,删除PNRC1中预测的NLS后,其定位从细胞核中变为主要定位在细胞浆中,而预测的NLS能把GFP或胞浆中的蛋白带到细胞核中.研究表明,预测的NLS为PNRC1分子真正的NLS. 展开更多

关键词 富含脯氨酸核受体辅调节蛋白1 核定位信号序列 辅活化子 绿色荧光蛋白

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野生型p27和核定位信号缺失型p27真核表达载体的构建及表达

10

作者 焦鑫艳 张英 +6 位作者 盛秋 张妙 杨泽健 高小倩 赵谦 王博 刘培军 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期516-521,共6页

目的构建人野生型p27(p27WT)和核定位信号缺失型p27(p27△NLS)的真核表达载体,并在HEK293T细胞中进行表达,为细胞中p27核浆定位的变化及其不同的生物学功能研究提供细胞基础。方法提取人乳腺癌细胞系MCF7总RNA,反转录cDNA后,分别进行p2... 目的构建人野生型p27(p27WT)和核定位信号缺失型p27(p27△NLS)的真核表达载体,并在HEK293T细胞中进行表达,为细胞中p27核浆定位的变化及其不同的生物学功能研究提供细胞基础。方法提取人乳腺癌细胞系MCF7总RNA,反转录cDNA后,分别进行p27全长和非NLS区片段的PCR扩增,获得p27WT全长(CDKN1B,NM_004064.5)和p27△NLS编码区序列,分别将其克隆至真核表达载体pCMV-Blank,经菌液PCR、双酶切和测序鉴定。电穿孔法转染HEK293T细胞,48 h时分别提取胞核蛋白和胞质蛋白,Western blotting检测p27在细胞质和细胞核中的蛋白表达。结果测序结果显示,真核表达载体pCMV-Blank中插入的p27WT序列和p27△NLS序列均与NM_004064.5序列相一致。pCMV-p27WT转染HEK293T细胞后,细胞总p27蛋白表达显著增加,核浆分离检测发现其在细胞质和细胞核中均表达;而pCMV-p27△NLS转染HEK293T细胞的总p27蛋白表达也显著增加,核浆分离检测发现其主要在细胞质中表达。结论成功构建人p27WT和p27△NLS的真核表达载体,并在HEK293T细胞中成功表达,为p27蛋白在肿瘤细胞周期中的功能研究提供了细胞基础。 展开更多

关键词 P27 CDKN1B 核定位信号序列 真核表达

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不同亚细胞定位的alpha-突触核蛋白对SK-N-SH细胞的毒性影响 被引量：2

11

作者 赵云 韩玉坤 +2 位作者 郑焱 杨慧 张建亮 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期164-170,共7页

在帕金森病中,alpha-突触核蛋白(α-synuclein)累积与聚集所产生的细胞毒性是发病的重要原因。本文目的是探求不同亚细胞定位的α-突触核蛋白对于细胞的毒性影响。分别在α-突触核蛋白前插入核输出序列(nuclear export sequence,NES)或... 在帕金森病中,alpha-突触核蛋白(α-synuclein)累积与聚集所产生的细胞毒性是发病的重要原因。本文目的是探求不同亚细胞定位的α-突触核蛋白对于细胞的毒性影响。分别在α-突触核蛋白前插入核输出序列(nuclear export sequence,NES)或核定位序列(nuclear localization sequence,NLS),使其特定地表达在细胞质或细胞核中。构建成功的质粒分别在神经母细胞瘤SK-N-SH细胞中表达,通过免疫荧光与Western印迹法检测蛋白质的表达情况。结果显示,NES-α-synuclein特异性地在细胞质中表达,NLS-α-synuclein特异性地在细胞核中表达。乳酸脱氢酶法检测结果表明,相较于WT-α-synuclein组,NES-α-synuclein组的乳酸脱氢酶的释放量减少26. 54%,NLS-α-synuclein组的乳酸脱氢酶释放量增加12. 85%。CCK8法检测细胞活性结果表明,相较于WT-α-synuclein组,NES-α-synuclein组的细胞活力提高35. 51%,NLS-α-synuclein组的细胞活力减少7. 93%。上述结果提示,胞质内表达α-synuclein对于细胞的毒性更小,而细胞核内表达的α-synuclein对细胞有更强的毒性作用。这些发现为研究帕金森病的分子机制提供了新的研究思路。 展开更多

关键词 alpha-突触核蛋白 核定位序列 核输出序列 细胞毒性

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进入细胞核之门:核移位机制研究进展

12

作者 罗湘建 曹亚 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第9期834-837,共4页

细胞中DNA复制和RNA生物形成发生在细胞核,而蛋白质的合成场所位于细胞质,这些生命活动的整合依赖于功能蛋白等在两个亚空间尺度的选择性穿梭.这是一个信号介导的过程,需要能量和可溶性因子如穿梭载体的参与.通过介绍功能蛋白受控核移... 细胞中DNA复制和RNA生物形成发生在细胞核,而蛋白质的合成场所位于细胞质,这些生命活动的整合依赖于功能蛋白等在两个亚空间尺度的选择性穿梭.这是一个信号介导的过程,需要能量和可溶性因子如穿梭载体的参与.通过介绍功能蛋白受控核移位机制研究进展,拓宽了其潜在的医学应用,该领域的深入研究,将有力推动抗病毒治疗和基因治疗载体的设计研究. 展开更多

关键词 核孔复合物(NPC) GTP酶Ran 核定位信号序列(NLS) 核移位

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核仁素在细胞增殖与细胞凋亡中的作用 被引量：8

13

作者 王慷慨 肖献忠 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期707-710,共4页

核仁素 (又称C2 3)是真核细胞核仁中最主要的一种蛋白质 ,具有多种生物学功能 ,它不但直接参与核糖体的生物合成与成熟 ,还直接或间接参与细胞增殖、生长、胚胎发生、胞质分裂、染色质复制与核仁的发生等过程。最新研究表明 ,细胞凋亡... 核仁素 (又称C2 3)是真核细胞核仁中最主要的一种蛋白质 ,具有多种生物学功能 ,它不但直接参与核糖体的生物合成与成熟 ,还直接或间接参与细胞增殖、生长、胚胎发生、胞质分裂、染色质复制与核仁的发生等过程。最新研究表明 ,细胞凋亡的发生与核仁素蛋白的断裂和转位改变相关。 展开更多

关键词 细胞增殖 细胞凋亡 胞浆 细胞外 核仁 改变 转运 核定位序列 真核细胞 胚胎发生

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5-脂氧合酶的分子生物学研究 被引量：3

14

作者 刘宏 周斌 陈新生 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期1124-1126,共3页

5-脂氧合酶是合成白三烯的关键酶 ,白三烯是体内一种重要的炎症和过敏介质。采用同源重组方式敲除胚胎干细胞中的 5 -脂氧合酶基因 ,小鼠能正常生长和发育 ,但对某些炎症损伤的反应性与正常小鼠不同。5 -脂氧合酶在不同的细胞中表现出... 5-脂氧合酶是合成白三烯的关键酶 ,白三烯是体内一种重要的炎症和过敏介质。采用同源重组方式敲除胚胎干细胞中的 5 -脂氧合酶基因 ,小鼠能正常生长和发育 ,但对某些炎症损伤的反应性与正常小鼠不同。5 -脂氧合酶在不同的细胞中表现出不同的亚细胞定位 ,分布于胞质或胞核 ,或两者都有。在一定条件下 ,5 -脂氧合酶发生胞核内外的穿梭 ,提示 5 -脂氧合酶可能还具有传统酶催化作用以外的其他功能。 展开更多

关键词 白三烯 5-脂氧合酶 核定位序列 转位

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细胞因子和生长因子信号转导途径中信号蛋白分子的核转运机制

15

作者 宋伦 黎燕 沈倍奋 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第2期189-192,共4页

信号蛋白分子的入核及出核转运是细胞因子和生长因子信号转导途径中的重要环节 .核定位序列 (NLS)是信号蛋白分子上与入核转运相关的氨基酸序列 .核孔复合物 (NPC)、核转运蛋白importin和能量供应体Ran TC4在入核转运过程中也发挥了重... 信号蛋白分子的入核及出核转运是细胞因子和生长因子信号转导途径中的重要环节 .核定位序列 (NLS)是信号蛋白分子上与入核转运相关的氨基酸序列 .核孔复合物 (NPC)、核转运蛋白importin和能量供应体Ran TC4在入核转运过程中也发挥了重要作用 .另外 ,很多细胞因子和生长因子或其受体上所含有的NLS序列也具有核定位功能 ,并可能通过“伴侣机制”参与其他信号蛋白分子的入核转运 . 展开更多

关键词 细胞因子 生长因 信号转导 信号蛋白分子 核转运 核定位序列 核转运蛋白 Ran/TC4 伴侣机制

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高迁移率族蛋白B1迁移及释放的机制 被引量：2

16

作者 赵昕 吕奔 王二华 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1111-1115,共5页

高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1,HMGB1)是一种在哺乳动物中广泛存在、进化中高度保守的蛋白质。细胞核定位序列的存在使得生理状态下的HMGB1主要存在于细胞核内,但其在细胞内外的不同位置具有不同的生物学功能。细胞外的HM... 高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1,HMGB1)是一种在哺乳动物中广泛存在、进化中高度保守的蛋白质。细胞核定位序列的存在使得生理状态下的HMGB1主要存在于细胞核内,但其在细胞内外的不同位置具有不同的生物学功能。细胞外的HMGB1与脓毒症、肿瘤、风湿免疫、动脉粥样硬化及缺血再灌注损伤等多种疾病密切相关。HMGB1由细胞核内迁移至细胞质再释放到细胞外的过程,涉及核定位序列的翻译后修饰、主动分泌或被动释放等机制。 展开更多

关键词 高迁移率族蛋白B1 核定位序列 翻译后修饰 细胞程序性死亡 蛋白激酶R

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负性共刺激分子B7-H4赋予肾癌细胞对化疗药物的耐药性研究 被引量：1

17

作者 李金美 宋慧 +3 位作者 练启慧 陈敏吉 章良 谢炜 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期553-558,共6页

通过RT-PCR方法克隆出人野生型负性共刺激分子B7-H4基因,将目的片段双酶切(EcoRⅠ和BamHⅠ)后,与pIRES2-EGFP真核表达载体连接,构建重组真核表达载体pIRES2-EGFP-B7-H4-WT并进行鉴定;然后用定点突变法构建B7-H4核定位序列突变体基因,再... 通过RT-PCR方法克隆出人野生型负性共刺激分子B7-H4基因,将目的片段双酶切(EcoRⅠ和BamHⅠ)后,与pIRES2-EGFP真核表达载体连接,构建重组真核表达载体pIRES2-EGFP-B7-H4-WT并进行鉴定;然后用定点突变法构建B7-H4核定位序列突变体基因,再构建重组真核表达载体pIRES2-EGFP-B7-H4-NLS-MT;脂质体转染法将重组载体导入786-O细胞,CCK8法研究转基因细胞株的增殖率及对化疗药物5-氟尿嘧啶、阿霉素和顺铂的耐药性。结果显示:B7-H4野生型转基因细胞株相较于空白质粒组,可有效促进786-O细胞增殖,并赋予786-O细胞对3种化疗药物的耐药性。与空白质粒组相比,对5-氟尿嘧啶的耐药倍数为2.06,对阿霉素的耐药倍数为1.81,对顺铂的耐药倍数为1.72。机制研究显示B7-H4野生型可赋予肿瘤细胞抗凋亡作用,1.25μg/mL 5-氟尿嘧啶引起B7-H4 WT/786-O的细胞的凋亡率是20.2%,而Mock/786-O和B7-H4 NLS/MT/786-O细胞的凋亡率分别是41.1%和35.1%。说明B7-H4可能通过调控细胞凋亡赋予肿瘤细胞多药耐药性。当B7-H4核定位序列被突变后,这些功能都消失,说明B7-H4促肿瘤细胞增殖、赋予其多药耐药性的功能与其核定位序列密切相关。 展开更多

关键词 B7-H4 肾癌细胞 5-氟尿嘧啶 核定位序列 耐药性

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MAGE家族新成员Restin入核分子机制的初步探讨 被引量：1

18

作者 王颖 于芳 +3 位作者 付海燕 杨国栋 卢凡 卢兹凡 《科学技术与工程》 2006年第18期2817-2821,共5页

restin是该实验室于1999年从维甲酸诱导分化的白血病细胞HL-60中克隆得到的一种黑色素瘤相关抗原(MAGE)家族的新基因,初步验证其生物学功能为阻滞细胞周期进程。利用生物学软件预测该基因所编码蛋白的N端含有一非典型二分裂核定位信号序... restin是该实验室于1999年从维甲酸诱导分化的白血病细胞HL-60中克隆得到的一种黑色素瘤相关抗原(MAGE)家族的新基因,初步验证其生物学功能为阻滞细胞周期进程。利用生物学软件预测该基因所编码蛋白的N端含有一非典型二分裂核定位信号序列(nuclearlocalizationsignal,NLS),且预测结果显示Restin入核可能与核转运蛋白importinαII的作用密切相关。因此克隆并鉴定了针对NLS等结构域的一系列截短体以及pACT-impotinαII,利用细胞双杂交技术对其进行相互作用以及作用部位的检测。结果证明Restin的入核确实与核定位信号序列以及核转运蛋白的相互作用有关。 展开更多

关键词 RESTIN 核定位信号序列 IMPORTIN α Ⅱ

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半胱氨酰白三烯受体1调节APP/PS1小鼠原代神经元β淀粉样蛋白生成及机制

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作者 龙燕 柯璇 洪浩 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2022年第2期81-89,共9页

目的探究半胱氨酰白三烯受体1(CysLT_(1)R)对体外培养的APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠(APP/PSI小鼠)皮质原代神经元β淀粉样蛋白(Aβ)生成的影响及机制。方法①将携带CysLT_(1)R的慢病毒-绿色荧光蛋白载体(LV-CysLT_(1)R-EGFP)或空载体(LV... 目的探究半胱氨酰白三烯受体1(CysLT_(1)R)对体外培养的APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠(APP/PSI小鼠)皮质原代神经元β淀粉样蛋白(Aβ)生成的影响及机制。方法①将携带CysLT_(1)R的慢病毒-绿色荧光蛋白载体(LV-CysLT_(1)R-EGFP)或空载体(LV-EGFP)转染至APP/PS1小鼠皮质原代神经元,使神经元过表达CysLT_(1)R(CysLT_(1)R-OE),采用Western印迹法检测神经元CysLT_(1)R蛋白表达水平。②分别以CysLT_(1)R激动剂YM17690(1μmol·L^(-1))单用或与CysLT_(1)R拮抗剂普仑司特(Pran 1μmol·L^(-1))联用处理CysLT_(1)R-OE神经元12 h;采用ELISA检测细胞培养基内Aβ_(1-40)和Aβ_(1-42)水平;Western印迹法检测神经元中淀粉样前体蛋白(APP)、β淀粉样前体蛋白切割酶1(BACE1)、早老素(PS)1和PS2表达水平。以YM17690(1μmol·L^(-1))单用或与Pran(1μmol·L^(-1))联用处理CysLT_(1)R-OE神经元2 h后,采用Western印迹法检测CysLT_(1)R和NF-κB P65亚基在细胞内的分布。③采用渗透差法在CysLT_(1)R-OE神经元中导入核定位序列多肽(NLS-pep,10 g·L^(-1))竞争性抑制CysLT_(1)R核转位或阴性对照多肽(NON-pep,10 g·L^(-1)),随即以YM17690(1μmol·L^(-1))处理CysLT_(1)R-OE神经元12 h,采用Western印迹法检测CysLT_(1)R激活后细胞培养基内Aβ水平、胞质中APP和BACE1表达水平;以YM17690(1μmol·L^(-1))处理导入多肽后的CysLT_(1)R-OE神经元2 h,采用Western印迹法检测CysLT_(1)R和NF-κB P65亚基在细胞内的分布。结果①CysLT_(1)R-OE神经元CysLT_(1)R蛋白表达水平较对照组显著增加(P<0.01)。②与CysLT_(1)R-OE组相比,CysLT_(1)R-OE+YM17690组神经元分泌Aβ_(1-40)和Aβ_(1-42)显著增加(P<0.05),胞质中BACE1及细胞核中CysLT_(1)R和NF-κB P65亚基表达水平显著增加(P<0.05),而神经元中APP,PS1和PS2表达水平无明显改变。YM17690和Pran联用(CysLT_(1)R-OE+YM17690+Pran组)可消除上述改变。③与CysLT_(1)R-OE+YM17690组相比,CysLT_(1)R-OE+NLS-pep+YM17690组CysLT_(1)R和NF-κB P65亚基在细胞核内的表达水平显著下降(P<0.05),神经元分泌Aβ_(1-40)和Aβ_(1-42)显著下降(P<0.05),胞质中BACE1表达水平下调(P<0.05),APP未见显著改变。结论CysLT_(1)R被激活后,通过上调BACE1表达从而促进Aβ的生成,其机制可能是通过CysLT_(1)R发生核转位并激活NF-κB信号通路介导。 展开更多

关键词 半胱氨酰白三烯受体1 Β淀粉样蛋白 NF-κB P65 核定位序列 核转位

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