抵当汤对高速泳动族蛋白B1/Toll样受体4/核因子κB通路的调控作用 被引量：2

1

作者 王思婷 张玥 +5 位作者 程志新 刘效敏 张玉冬 刘明 刘政 范国帅 《世界中医药》 CAS 北大核心 2024年第16期2404-2412,共9页

目的:探讨抵当汤及其拆方对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)炎症反应的影响及作用机制。方法:将体外培养的HUVECs随机分为空白血清组、LPS组、LPS+抵当汤组、LPS+植物药组、LPS+动物药组;抑制Toll样受体4(TLR4)后分为TAK-24... 目的:探讨抵当汤及其拆方对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)炎症反应的影响及作用机制。方法:将体外培养的HUVECs随机分为空白血清组、LPS组、LPS+抵当汤组、LPS+植物药组、LPS+动物药组;抑制Toll样受体4(TLR4)后分为TAK-242组、抵当汤TAK-242组、植物药TAK-242组、动物药TAK-242组,给予相应处理后,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清中高速泳动族蛋白B1(HMGB1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量;蛋白质免疫印迹法检测HUVECs中HMGB1、TLR4和核因子κB p65的蛋白表达水平,实时定量PCR(RT-qPCR)法检测HMGB1、TLR4和核因子κB p65的基因表达情况,免疫荧光法测定HMGB1、TLR4和核因子κBp65的荧光强度。结果:与A组比较,LPS组细胞上清液及HUVECs中HMGB1、IL-6、TNF-α、TLR4和核因子κB p65表达均增强(均P<0.01)。与LPS组比较,LPS+抵当汤组细胞上清液及HUVECs中的HMGB1、IL-6、TNF-α、TLR4和核因子κBp65的表达均减弱(P<0.05,P<0.01)。与LPS+抵当汤组比较,LPS+植物药组和LPS+动物药组细胞上清液及HUVECs中的HMGB1、IL-6、TNF-α、TLR4和核因子κBp65表达显著增强(P<0.05,P<0.01)。LPS+植物药组中的HMGB1、IL-6和TNF-α表达低于LPS+动物药组(P<0.05,P<0.01),TLR4和核因子κBp65表达高于LPS+动物药组(P<0.05)。抑制TLR4后,与LPS组比较,TAK-242组的HMGB1、TLR4、核因子κBp65表达减弱(P<0.05,P<0.01)。与TAK-242组比较,抵当汤TAK-242组各指标表达低于TAK-242组(P<0.05,P<0.01)。与抵当汤TAK-242组比较,植物药TAK-242组和动物药TAK-242组各指标表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论:抵当汤及其拆方可通过抑制细胞炎症反应对HUVECs发挥保护和改善作用,其作用机制可能与抑制HMGB1/TLR4/核因子κB信号通路活化有关。 展开更多

关键词 抵当汤 拆方 高速泳动族蛋白b1/Toll样受体4/核因子κb信号通路 人脐静脉内皮细胞 炎症反应 深静脉血栓形成 机制研究

在线阅读 下载PDF 职称材料

PKC／Raf-1／NF-κB信号通路在低氧诱导大鼠单核细胞表达TNF-α中的作用 被引量：3

2

作者 徐智 吴国明 +4 位作者 钱桂生 王兴胜 陈维中 薛桥 王士雯 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期2224-2229,共6页

目的:研究PKC/Raf-1/NF-κB信号通路在低氧诱导大鼠外周血单核细胞(PBMCs)肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达中的作用,探讨低氧与全身炎症反应综合征(SIRS)的关系,为进一步研究老年多器官功能障碍综合征(MODSE)的肺启动机制奠定基础。方法:采... 目的:研究PKC/Raf-1/NF-κB信号通路在低氧诱导大鼠外周血单核细胞(PBMCs)肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达中的作用,探讨低氧与全身炎症反应综合征(SIRS)的关系,为进一步研究老年多器官功能障碍综合征(MODSE)的肺启动机制奠定基础。方法:采用明胶法分离大鼠外周血单核细胞,分为chelerythrine+低氧组、forskolin+低氧组和单纯低氧组。Chelerythrine+低氧组和forskolin+低氧组细胞在低氧前分别予10μmol/L chelerythrine和50μmol/L forskolin预处理。然后各组均于低氧条件下(3%O2,5%CO2,92%N2)培养0、1、3、6、9、12、24h后,收集细胞及培养液上清,分别采用PKC、Raf活性检测试剂盒、电泳迁移分析法(EMSA)、逆转录PCR(RT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测PKC、Raf-1、NF-κB活性及TNF-α表达量。结果:低氧1-9h,PKC、Raf-1活性、NF-κB结合活性及TNF-α表达量显著高于正常对照组(P<0.01)。低氧后1-24h,PKC、Raf-1活性、NF-κB结合活性与TNF-α mRNA和蛋白表达水平间呈显著正相关(P<0.01,P<0.05)。10μmol/L chelerythrine可显著抑制低氧诱导的PKC、Raf-1、NF-κB活性升高和TNF-α表达。50μmol/L forskolin可显著抑制低氧诱导的Raf-1、NF-κB活性升高及TNF-α表达。结论:低氧可显著增强大鼠外周血单核细胞的PKC、Raf-1活性及NF-κB结合活性,并可诱导其产生大量的促炎症因子TNF-α,这些变化可能与急性呼吸窘迫综合征(ARDS)时血浆中大量促炎症因子持续存在密切相关。 展开更多

关键词 低氧 NF-κb 肿瘤坏死因子 PKC/Raf-1/NF-κb信号通路

在线阅读 下载PDF 职称材料

“标本配穴”电针调控IRAK1/NF-κB信号通路改善糖尿病大鼠肠损伤及糖脂代谢

3

作者 王从成 孙霞 +2 位作者 盛越 张校宁 平凡 《世界科学技术-中医药现代化》 北大核心 2025年第1期211-219,共9页

目的探讨“标本配穴”电针调控白细胞介素1受体相关激酶(Interleukin-1 receptor associated kinase,IRAK1)/核因子κB(Nuclear factorκB,NF-κB)信号通路改善糖尿病大鼠肠损伤及糖脂代谢。方法将SD大鼠随机分为对照组、糖尿病组、糖尿... 目的探讨“标本配穴”电针调控白细胞介素1受体相关激酶(Interleukin-1 receptor associated kinase,IRAK1)/核因子κB(Nuclear factorκB,NF-κB)信号通路改善糖尿病大鼠肠损伤及糖脂代谢。方法将SD大鼠随机分为对照组、糖尿病组、糖尿病+电针组、糖尿病+pcDNA组、糖尿病+pcDNA-IRAK1组、糖尿病+电针+pcDNA组、糖尿病+电针+pcDNA-IRAK1组,每组18只。除对照组外,其它组大鼠均需通过高糖高脂饲喂联合腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)的方式构建糖尿病大鼠模型,建模成功后,各组大鼠隔日处理1次,连续处理8周。检测大鼠体重、空腹血糖及血清中甘油三酯、总胆固醇水平;16S rRNA扩增子测序检测大鼠肠道菌群相对丰度;检测大鼠肠道通透性及含水量;免疫组化检测小肠组织中occludin、闭锁小带蛋白-1(Zonula occludens-1,ZO-1)蛋白平均光密度;Western blot检测大鼠小肠组织中IRAK1、磷酸化核因子抑制蛋白(Phosphorylated nuclear factor inhibitory protein,p-IκBα)、磷酸化核因子κB p65(Phosphorylated nuclear factor B p65,p-NF-κB p65)蛋白表达。结果与对照组相比,糖尿病组大鼠空腹血糖、甘油三酯、总胆固醇水平、厚壁菌门、变形菌门、放线菌门、异杆菌属相对丰度、硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC)-葡聚糖浓度、肠道含水量及IRAK1、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达显著升高(P<0.05),体重、拟杆菌门、乳酸杆菌属、罗姆布茨菌属、毛螺菌属、瘤胃球菌属相对丰度、occludin、ZO-1蛋白平均光密度显著降低(P<0.05);与糖尿病组相比,糖尿病+电针组大鼠空腹血糖、甘油三酯、总胆固醇水平、厚壁菌门、变形菌门、放线菌门、异杆菌属相对丰度、FITC-葡聚糖浓度、肠道含水量及IRAK1、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达显著降低(P<0.05),体重、拟杆菌门、乳酸杆菌属、罗姆布茨菌属、毛螺菌属、瘤胃球菌属相对丰度、occludin、ZO-1蛋白平均光密度显著升高(P<0.05),糖尿病+pcDNA-IRAK1组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05);与糖尿病+电针组、糖尿病+电针+pcDNA组相比,糖尿病+电针+pcDNA-IRAK1组大鼠空腹血糖、甘油三酯、总胆固醇水平、厚壁菌门、变形菌门、放线菌门、异杆菌属相对丰度、FITC-葡聚糖浓度、肠道含水量及IRAK1、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达显著升高(P<0.05),体重、拟杆菌门、乳酸杆菌属、罗姆布茨菌属、毛螺菌属、瘤胃球菌属相对丰度、occludin、ZO-1蛋白平均光密度显著降低(P<0.05)。结论“标本配穴”电针可能通过抑制IRAK1/NF-κB信号通路改善糖尿病大鼠肠道菌群失调及肠屏障损伤,进而改善糖尿病糖脂代谢。 展开更多

关键词 标本配穴 电针 糖尿病 肠屏障 白细胞介素1受体相关激酶/核因子κb信号通路 肠道菌群

在线阅读 下载PDF 职称材料

丝胶通过Akt1调控PI3K/Akt/NF-κB信号通路对链脲佐菌素引起INS-1细胞损伤的保护作用及其机制

4

作者 陈程 李警耀 +2 位作者 胡万祥 刘东慧 陈志宏 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第3期590-598,共9页

目的:探讨丝胶对链脲佐菌素(STZ)致损伤INS-1细胞磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B (Akt)/核因子κB (NF-κB)信号通路和细胞凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法:采用含0、0.1、0.3、1.0、3.0和10.0μmol·L^(-1)Akt1抑制剂A-674563... 目的:探讨丝胶对链脲佐菌素(STZ)致损伤INS-1细胞磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B (Akt)/核因子κB (NF-κB)信号通路和细胞凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法:采用含0、0.1、0.3、1.0、3.0和10.0μmol·L^(-1)Akt1抑制剂A-674563及10 mmol·L^(-1)STZ及600 mg·L^(-1)丝胶的完全培养基培养INS-1细胞,分为0、0.1、0.3、1.0、3.0和10.0μmol·L^(-1)A-674563组,另设置对照组(不含药物的完全培养基),采用细胞计数试剂盒8 (CCK-8)法检测INS-1细胞存活率,并计算半数抑制浓度(IC50)值,筛选A-674563最佳抑制浓度,并采用Western blotting法验证。将INS-1细胞分为正常对照组(完全培养基)、模型组(10 mmol·L^(-1)STZ+完全培养基)、低、中和高剂量丝胶组(10 mmol·L^(-1)STZ+150 mg·L^(-1)丝胶+完全培养基、10 mmol·L^(-1)STZ+300 mg·L^(-1)丝胶+完全培养基和10mmol·L^(-1)STZ+600mg·L^(-1)丝胶+完全培养基),采用CCK-8法检测各组INS-1细胞存活率,筛选丝胶最佳作用浓度。另将INS-1细胞分为正常对照组(完全培养基)、模型组(10 mmol·L^(-1)STZ+完全培养基)、丝胶组(10 mmol·L^(-1)STZ+600 mg·L^(-1)丝胶+完全培养基)和A-674563组(10 mmol·L^(-1)STZ+600 mg·L^(-1)丝胶+0.3μmol·L^(-1)A-674563+完全培养基),采用流式细胞术检测各组INS-1细胞凋亡率,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组INS-1细胞中Akt1、NF-κB、肿瘤坏死因子α (TNF-α)和白细胞介素6 (IL-6) mRNA表达水平,Western blotting法检测各组INS-1细胞磷酸化Akt1 (p-Akt1)和NF-κB蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组INS-1细胞中TNF-α和IL-6水平。结果:对照组INS-1细胞存活率为100.00%±0.00%,0、0.1、0.3、1.0、3.0和10.0μmol·L^(-1)A-674563+10 mmol·L^(-1)STZ+600 mg·L^(-1)丝胶+完全培养基共同作用后INS-1细胞存活率分别为82.50%±2.28%、69.47%±1.94%、51.51%±1.74%、38.94%±1.57%、24.79%±1.14%和19.85%±1.03%。A-674563对INS-1细胞的IC50值为0.3μmol·L^(-1),选择0.3μmol·L^(-1)A-674563作用INS-1细胞。与0μmol·L^(-1)A-674563比较,0.3μmol·L^(-1)A-674563+10 mmol·L^(-1)STZ+600 mg·L^(-1)丝胶+完全培养基共同作用下,INS-1细胞中p-Akt1蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。CCK-8法检测,与正常对照组比较,模型组INS-1细胞存活率明显降低(P<0.05);与模型组比较,低、中和高剂量丝胶组INS-1细胞存活率均明显升高(P<0.05);与低和中剂量丝胶组比较,高剂量丝胶组INS-1细胞存活率明显升高(P<0.05),因此选择600 mg·L^(-1)丝胶作用细胞。与正常对照组比较,模型组INS-1细胞存活率明显降低(P<0.05);与模型组比较,丝胶组INS-1细胞存活率明显升高(P<0.05);与丝胶组比较,A-674563组INS-1细胞存活率明显降低(P<0.05)。流式细胞术检测,与正常对照组比较,模型组INS-1细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与模型组比较,丝胶组INS-1细胞凋亡率明显降低(P<0.05);与丝胶组比较,A-674563组INS-1细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。RT-qPCR法检测,与正常对照组比较,模型组INS-1细胞中Akt1mRNA表达水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,低、中和高剂量丝胶组INS-1细胞中Akt1mRNA表达水平均明显升高(P<0.05);与低和中剂量丝胶组比较,高剂量丝胶组INS-1细胞中Akt1 mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。与正常对照组比较,模型组INS-1细胞中NF-κB、TNF-α和IL-6 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05);与模型组比较,丝胶组INS-1细胞中NF-κB、TNF-α和IL-6 mRNA表达水平均明显降低(P<0.05);与丝胶组比较,A-674563组INS-1细胞中NF-κB mRNA表达水平均明显升高(P<0.05)。Western blotting法检测,与正常对照组比较,模型组INS-1细胞中p-Akt1蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,低、中和高剂量丝胶组INS-1细胞中p-Akt1蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与低和中剂量丝胶组比较,高剂量丝胶组INS-1细胞中p-Akt1蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与正常对照组比较,模型组INS-1细胞中NF-κB蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,丝胶组INS-1细胞中NF-κB蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与丝胶组比较,A-674563组INS-1细胞中NF-κB蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。ELISA法检测,与正常对照组比较,模型组INS-1细胞中TNF-α和IL-6水平均明显升高(P<0.05);与模型组比较,丝胶组INS-1细胞中TNF-α和IL-6水平均明显降低(P<0.05);与丝胶组比较,A-674563组INS-1细胞中TNF-α和IL-6水平均明显升高(P<0.05)。结论:丝胶通过靶向Akt1减轻PI3K/Akt/NF-κB信号通路介导的炎症反应和细胞凋亡,对STZ引起的INS-1细胞损伤具有保护作用。 展开更多

关键词 丝胶 INS-1细胞 磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶b/核因子κb信号通路 炎症反应 细胞凋亡

在线阅读 下载PDF 职称材料

缺氧诱导因子1α调控wnt/β-catenin信号通路对常氧条件下大鼠髓核细胞衰老的作用及机制

5

作者 雷淼 邹略滔 +3 位作者 蔡伟业 董伟 江维 胡侦明 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期815-822,共8页

目的:探究缺氧诱导因子1α(HIF-1α)调控wnt/β-catenin信号通路对常氧培养下大鼠髓核细胞衰老的影响及作用机制.方法:取5只4周龄雌性SD大鼠,提取鼠尾髓核原代细胞进行研究.(1)将髓核细胞分为5组:转染对照组[用磷酸盐缓冲盐水(PBS)处理... 目的:探究缺氧诱导因子1α(HIF-1α)调控wnt/β-catenin信号通路对常氧培养下大鼠髓核细胞衰老的影响及作用机制.方法:取5只4周龄雌性SD大鼠,提取鼠尾髓核原代细胞进行研究.(1)将髓核细胞分为5组:转染对照组[用磷酸盐缓冲盐水(PBS)处理髓核细胞]、空载腺病毒组(用空载腺病毒处理髓核细胞)、过表达HIF-1α组(用载过表达HIF-1α质粒的腺病毒处理髓核细胞)、空载siRNA组(用空载siRNA处理髓核细胞)、敲减HIF-1α组(用siRNA敲减HIF-1α处理髓核细胞),在常氧下培养48h后,免疫蛋白印迹(western blot,WB)检测HIF-1α和衰老相关基因p53、p21、p16,β-gal染色检测细胞衰老,评估常氧条件下HIF-1α对于髓核细胞衰老的影响.(2)取髓核细胞,分为空载腺病毒组、过表达HIF-1α组、空载siRNA组、敲减HIF-1α组,处理方式同前,在常氧下培养48h后,WB检测HIF-1α、GSK-3β和β-catenin通路的表达.取髓核细胞,分为对照组(用PBS处理髓核细胞)、过表达HIF-1α组(用载过表达HIF-1α质粒的腺病毒处理髓核细胞)、XAV-939组(用XAV-939处理髓核细胞)、XAV-939+过表达HIF-1α组(用XAV-939+载过表达HIF-1α质粒的腺病毒处理髓核细胞),WB检测HIF-1α、p53、p21、p16和wnt/β-catenin的表达,β-gal染色检测细胞衰老,以检测HIF-1α与wnt/β-catenin信号通路的关系以及对髓核细胞衰老的影响.结果:(1)腺病毒转染HIF-1α后,与转染对照组和空载腺病毒组相比,过表达HIF-1α组HIF-1α表达增加(P<0.05).小干扰RNA转染HIF-1α后,与转染对照组和空载siRNA组相比敲减HIF-1α组HIF-1α表达降低(P<0.05).WB结果显示,与空载腺病毒组相比过表达HIF-1α组HIF-1α表达增加(P<0.05),而p53、p21和p16表达降低(P<0.05),与空载siRNA组相比敲减HIF-1α组HIF-1α表达降低(P<0.05),而p53和p16表达增加(P<0.05).β-gal染色显示,在常氧条件下培养48h,与空载腺病毒组相比,过表达HIF-1α组衰老细胞降低(P<0.05),与空载siRNA组相比,敲减HIF-1α组衰老细胞数量则增加(P<0.001).(2)与空载腺病毒组相比,过表达HIF-1α组β-catenin表达升高(P<0.01),同时GSK-3β表达降低(P<0.05).与空载siRNA组相比敲减HIF-1α组β-catenin表达降低(P<0.0001),同时GSK-3β表达升高(P<0.05).与对照组相比,XAV-939组β-catenin表达降低(P<0.001),p53、p21和p16的表达升高,XAV-939+过表达HIF-1α组β-catenin表达降低(P<0.05),p21表达升高(P<0.05).与过表达HIF-1α组相比XAV-939+过表达HIF-1α组衰老细胞数增加(P<0.001),与对照组相比过表达HIF-1α组的细胞核内β-catenin表达更多,而XAV-939组和XAV-939+过表达HIF-1α组则相对较少(P<0.05).结论:HIF-1α通过激活wnt/β-catenin信号通路抑制常氧条件培养下大鼠髓核细胞的衰老. 展开更多

关键词 缺氧诱导因子1α WNT/Β-CATENIN信号通路 氧气浓度 髓核细胞衰老

在线阅读 下载PDF 职称材料

氯化镧通过低氧诱导因子1信号通路抑制高磷诱导的人血管平滑肌细胞钙化 被引量：1

6

作者 王琪雯 赵璐璐 +5 位作者 元晓荣 高原 王鲁豫 张春生 谷超 李刚 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2022年第10期729-738,共10页

目的研究氯化镧(LaCl_(3))对高磷诱导的人血管平滑肌细胞(hVSMC)钙化的抑制作用及其机制。方法采用高磷诱导hVSMC钙化模型。将对数生长期的hVSMC随机分为细胞对照组、LaCl_(3)60μmol·L^(-1)组、高磷模型组(磷酸盐缓冲液3 mmol... 目的研究氯化镧(LaCl_(3))对高磷诱导的人血管平滑肌细胞(hVSMC)钙化的抑制作用及其机制。方法采用高磷诱导hVSMC钙化模型。将对数生长期的hVSMC随机分为细胞对照组、LaCl_(3)60μmol·L^(-1)组、高磷模型组(磷酸盐缓冲液3 mmol·L-1)、模型+氯化钠(NaCl)180μmol·L^(-1)组、模型+LaCl_(3)15,30和60μmol·L^(-1)组、模型+二甲基乙二酰氨基乙酸(DMOG)100μmol·L^(-1)+LaCl_(3)60μmol·L^(-1)组、模型+焦磷酸盐(PPI)100μmol·L^(-1)组。hVSMC给予磷酸盐缓冲液3 mmol·L-1孵育6 d造模,第4天,按分组给予相应药物孵育2 d。茜素红染色法及Von Kossa染色法检测细胞钙沉积;试剂盒检测细胞内钙含量和碱性磷酸酶(ALP)活性;荧光染色法检测细胞内活性氧(ROS)含量;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞平滑肌蛋白22α(sm22α)、骨形态发生蛋白2(bmp-2)、成骨相关转录因子2(runx2)和血管内皮生长因子(vegf)mRNA表达水平;Western印迹法检测细胞质低氧诱导因子1α(HIF-1α)、VEGF、SM22α和BMP-2及细胞核Runx2和HIF-1α蛋白表达水平。结果茜素红染色结果显示,与细胞对照组相比,高磷模型组细胞钙沉积明显升高(P<0.01);与高磷模型组相比,模型+LaCl_(3)15,30和60μmol·L^(-1)组细胞钙沉积明显降低(P<0.05,P<0.01)。Von Kossa染色结果显示,高磷模型组细胞黑色沉积物呈现大量聚集并广泛分布;模型+LaCl_(3)15,30和60μmol·L^(-1)组黑色沉积物有所减少。与细胞对照组相比,高磷模型组细胞内钙含量和ALP活性均明显升高(P<0.01);与高磷模型组相比,模型+LaCl_(3)15,30和60μmol·L^(-1)组细胞内钙含量和ALP活性均显著降低(P<0.05,P<0.01);与模型+LaCl_(3)60μmol·L^(-1)组相比,模型+DMOG+LaCl_(3)60μmol·L^(-1)组细胞钙含量及ALP活性均显著升高(P<0.01)。ROS检测结果显示,与细胞对照组相比,高磷模型组ROS含量显著增加(P<0.01);与高磷模型组相比,模型+LaCl_(3)15,30和60μmol·L^(-1)组ROS含量显著减少(P<0.05,P<0.01),而与模型+LaCl_(3)60μmol·L^(-1)组相比,模型+DMOG+LaCl_(3)60μmol·L^(-1)组ROS含量显著增加(P<0.05)。RT-qPCR结果显示,与细胞对照组相比,高磷模型组sm22αmRNA表达水平显著下降(P<0.01),bmp-2,runx2和vegf mRNA表达水平显著升高(P<0.01);与高磷模型组相比,模型+LaCl_(3)15,30和60μmol·L^(-1)组sm22αmRNA表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01),bmp-2,runx2和vegf mRNA表达水平显著下降(P<0.05,P<0.01)。Western印迹结果显示,与细胞对照组相比,高磷模型组细胞胞质内VEGF和BMP-2蛋白表达水平明显升高(P<0.01),HIF-1α及SM22α蛋白表达水平明显降低(P<0.01);细胞核内HIF-1α和Runx2蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与高磷模型组相比,模型+LaCl_(3)30和60μmol·L^(-1)组细胞质内VEGF和BMP-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01),HIF-1α和SM22α蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01);细胞核HIF-1α和Runx2蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论LaCl_(3)可抑制高磷诱导的hVSMC中ROS生成,并可通过阻断HIF-1信号通路发挥抑制高磷诱导的hVSMC钙化的作用。 展开更多

关键词 氯化镧 高磷血症 低氧诱导因子1α 信号通路 血管钙化

在线阅读 下载PDF 职称材料

丹参多酚酸对心房颤动大鼠心肌组织中VCAM-1和ICAM-1水平及ERK1/2-NF-κB信号通路的影响 被引量：14

7

作者 李小兵 王旭 +5 位作者 吕瑛 黄建成 李红英 王军 张会军 苏振宇 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期1004-1010,I0004,I0005,共9页

目的:研究丹参多酚酸对心房颤动(房颤)大鼠心肌组织中血管细胞黏附分子1(VCAM-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)水平及细胞外信号调节酶1/2-核转录因子-κB(ERK1/2-NF-κB)信号通路的影响,探讨丹参多酚酸防治房颤的可能机制。方法:48只SD大... 目的:研究丹参多酚酸对心房颤动(房颤)大鼠心肌组织中血管细胞黏附分子1(VCAM-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)水平及细胞外信号调节酶1/2-核转录因子-κB(ERK1/2-NF-κB)信号通路的影响,探讨丹参多酚酸防治房颤的可能机制。方法:48只SD大鼠随机分为对照组、房颤组和丹参多酚酸组,每组16只。舌下静脉注射氯化钙-乙酰胆碱混合液建立房颤大鼠模型。丹参多酚酸组大鼠用丹参多酚酸(4 mg·kg^-1·d^-1)灌胃,对照组和房颤组大鼠用等量生理盐水灌胃,每天1次,共4周。采用苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠心肌组织病理形态表现,Masson染色观察心肌纤维化情况,免疫组织化学染色检测各组大鼠心肌组织中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平,Western blotting法检测各组大鼠心肌组织中VCAM-1、ICAM-1、ERK1/2、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)、NF-κB和磷酸化核转录因子κB(p-NF-κB)蛋白表达水平。结果:HE染色,对照组大鼠心肌细胞未见明显异常;房颤组大鼠心肌组织间质增多,可见炎性细胞浸润;与房颤组比较,丹参多酚酸组大鼠心肌组织间质稍多,炎性细胞浸润不明显。Masson染色,对照组大鼠心肌间质胶原纤维正常;房颤组大鼠心肌间质胶原纤维明显增多;与房颤组比较,丹参多酚酸组大鼠心肌间质胶原纤维较房颤组明显减少。与对照组比较,房颤组和丹参多酚酸组大鼠心肌组织中MMP-2、MMP-9、VCAM-1、ICAM-1、p-ERK1/2和p-NF-κB蛋白表达水平升高(P<0.05);与房颤组比较,丹参多酚酸组大鼠心肌组织中MMP-2、MMP-9、VCAM-1、ICAM-1、p-ERK1/2和p-NF-κB蛋白表达水平降低(P<0.05)。房颤组大鼠心肌组织中MMP-2和MMP-9蛋白表达水平与VCAM-1(r=0.435,P<0.01;r=0.512,P<0.01)和ICAM-1(r=0.486,P<0.01;r=0.579,P<0.01)蛋白表达水平呈正相关关系。结论:丹参多酚酸可通过抑制房颤大鼠心房组织ERK1/2-NF-κB信号通路激活,降低VCAM-1和ICAM-1水平,抑制心肌纤维化,从而发挥对房颤的治疗作用。 展开更多

关键词 丹参多酚酸 心房颤动 血管细胞黏附分子1 细胞间黏附分子1 细胞外信号调节酶1/2-核转录因子-κb信号通路 基质金属蛋白酶

在线阅读 下载PDF 职称材料

KCMF1促进结直肠癌细胞增殖和NF-κB信号转导的机制研究

8

作者 吴志柏 许桂琴 +9 位作者 张力 杨兆娟 刘昀 焦琨 陈泽宏 许晨 左佑 郑宁倩 叶志谦 刘永忠 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期987-997,共11页

背景与目的:结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是危害全球人类生命健康的主要恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率长期居高不下。钾离子通道调节因子1(potassium channel modulatory factor 1,KCMF1)属于E3泛素连接酶家族的一员,通过RING结构... 背景与目的:结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是危害全球人类生命健康的主要恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率长期居高不下。钾离子通道调节因子1(potassium channel modulatory factor 1,KCMF1)属于E3泛素连接酶家族的一员,通过RING结构域与靶蛋白结合,参与调节体内多种生物学过程。然而,KCMF1在CRC中的作用尚不清楚。本研究旨在探索KCMF1在CRC中的表达情况,并探讨其对CRC细胞增殖的影响及可能的分子机制。方法:利用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)和基因型-组织表达(Genotype-Tissue Expression,GTEx)数据库,分析CRC组织中KCMF1的表达水平及其与CRC患者预后的相关性。通过免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)检测90例配对的人CRC组织样本中KCMF1的蛋白表达水平。通过慢病毒感染肠癌HCT116和HCT15细胞,转导针对KCMF1基因的短发夹RNA(shKCMF1),分别采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazoyl terazolium,MTT)实验和克隆形成实验检测敲降KCMF1对细胞增殖的影响;采用蛋白质印迹法(Western blot)和流式细胞学实验检测敲降KCMF1对细胞凋亡和细胞周期的影响;利用转录组测序(RNA sequencing,RNA-Seq)检测敲降KCMF1对HCT116细胞的转录谱的影响,运用生物信息学分析受KCMF1调控的信号通路;利用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQPCR)、Western blot、荧光素酶报告基因实验及细胞免疫荧光实验等验证相关信号通路的改变。结果:TCGA和GTEx数据库分析以及IHC结果显示,与癌旁组织相比,CRC组织中KCMF1 mRNA的表达及蛋白水平均显著升高(P<0.01),其表达水平与患者的生存时间呈负相关(P<0.01),并与CRC临床分期呈正相关(P<0.05)。与对照细胞相比,敲降KCMF1的HCT116和HCT15细胞的增殖能力显著降低(P<0.001),细胞凋亡水平显著增高(P<0.001),细胞周期停滞在G1期(P<0.01)。RNA-Seq分析发现,KCMF1参与调控核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)等多个信号通路。敲降KCMF1后,NF-κB信号通路下游靶基因BCL-XL、XIAP和CIAP的转录水平降低(P<0.05),p65的磷酸化水平下降,同时p65的核转移受抑制(P<0.01),NF-κB信号报告基因活性降低(P<0.01)。结论:KCMF1在人CRC组织中呈高表达,并与患者的高临床分期和不良预后呈正相关;KCMF1可能通过激活NF-κB信号通路促进CRC细胞增殖。KCMF1可能是CRC的一个潜在治疗新靶点。 展开更多

关键词 结直肠癌 钾离子通道调节因子1 细胞凋亡 核因子-κb信号通路

在线阅读 下载PDF 职称材料

mTOR/P70S6K/HIF-1α信号通路在脂多糖诱导Caco-2细胞屏障损伤中的作用及机制 被引量：9

9

作者 姚刘旭 滕文彬 +2 位作者 黄素琴 李玉红 蒋宗明 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期122-129,共8页

目的:探讨缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的Caco-2细胞屏障损伤中的作用,并探究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian rapamycin target protein,mTOR)/P70核糖体蛋白S6激酶(... 目的:探讨缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的Caco-2细胞屏障损伤中的作用,并探究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian rapamycin target protein,mTOR)/P70核糖体蛋白S6激酶(P70 ribosomal protein S6 kinase,P70S6K)信号通路的调控机制。方法:实验分成两部分,第一部分通过使用HIF-1α激活剂、抑制剂分别处理LPS作用的Caco-2细胞,探讨HIF-1α在LPS诱导的Caco-2细胞屏障损伤中的作用;第二部分则分别采用mTOR抑制剂、激活剂与HIF-1α激活剂、抑制剂联合处理LPS作用的Caco-2细胞,探讨HIF-1α影响LPS诱导的Caco-2细胞屏障损伤的分子机制。分别采用ERS-2电阻仪测量跨膜电阻,荧光法测量荧光右旋糖苷(FD4)浓度,Western blot检测HIF-1α、p-mTOR、p-P70S6K和紧密连接结构蛋白(ZO-1、occludin及claudin-1)的表达。结果:LPS诱导Caco-2细胞损伤,表现为跨上皮细胞电阻值(transepithelial cell resistance,TEER)降低,FD4浓度上升;HIF-1α激活剂DMOG可增加LPS作用的Caco-2细胞TEER、降低FD4浓度,同时上调HIF-1α和紧密连接结构蛋白的表达(P<0.05),而HIF-1α抑制剂BAY87-2243的作用则与DMOG作用相反;mTOR抑制剂雷帕霉素可降低LPS作用的Caco-2细胞TEER、增加FD4浓度,同时下调p-mTOR、p-P70S6K、HIF-1α及紧密连接结构蛋白的表达(P<0.05),而mTOR激活剂MHY1485则可增加LPS作用的Caco-2细胞TEER、降低FD4浓度,上调Caco-2细胞中p-mTOR和p-P70S6K表达水平(P<0.05),但不影响HIF-1α和紧密连接结构蛋白的表达水平。在雷帕霉素基础上加入DMOG,雷帕霉素对LPS处理的Caco-2细胞的效应被逆转;而在MHY1487基础上加入BAY87-2243,MHY1487对LPS处理的Caco-2细胞的效应被逆转。结论:HIF-1α可减轻LPS诱导的Caco-2细胞屏障损伤,其作用受mTOR/P70S6K信号通路调节。 展开更多

关键词 脓毒症 肠道上皮损伤 低氧诱导因子1α mTOR/P70S6K信号通路

在线阅读 下载PDF 职称材料

发育期大鼠癫痫持续状态后海马内HIF-1α表达对Notch信号通路的影响 被引量：2

10

作者 张林 庄亚飞 +2 位作者 李腾腾 白连琴 袁宝强 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期339-344,共6页

目的:探究发育期大鼠癫痫持续状态(SE)后海马内低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达对Notch信号通路的影响。方法:出生后21 d SD大鼠168只按随机数字表法分为对照组(NS,n=56)、模型组(SE,n=56)和干预组(2ME2,n=56)。其中SE组腹腔注射10 mg/m... 目的:探究发育期大鼠癫痫持续状态(SE)后海马内低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达对Notch信号通路的影响。方法:出生后21 d SD大鼠168只按随机数字表法分为对照组(NS,n=56)、模型组(SE,n=56)和干预组(2ME2,n=56)。其中SE组腹腔注射10 mg/ml戊四氮(PTZ,80 mg/kg)溶液制作癫痫持续状态模型,NS组腹腔注射等剂量生理盐水,2ME2组在癫痫持续状态模型建立后立即腹腔注射2-甲氧基雌二醇(2ME2,15 mg/kg)溶液。分别于造模成功后1、4、6、8、12 h和24 h处死大鼠取出海马组织,应用Western Blot方法检测HIF-1α、Notch-1蛋白含量;另外将各组造模成功后6 h的大鼠进行灌注并取脑,应用免疫组化染色法检测海马齿状回(DG)区HIF-1α和Notch-1的阳性细胞数。结果:HIF-1α、Notch-1蛋白在NS组均平稳表达;在SE组存在明显的表达时程和表达高峰,1 h时表达即开始增多,8 h达高峰,然后逐渐减少,且各个时间点的表达均明显高于NS组,差异有统计学意义(P<0.05);HIF-1α被特异性抑制剂2ME2干预后,HIF-1α、Notch-1的表达均较SE组明显减少,差异有统计学意义(P<0.05),其中6 h时达最低值。在此时间点,SE组HIF-1α、Notch-1的阳性细胞数均明显高于NS组和2ME2组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:发育期大鼠癫痫持续状态后HIF-1α可能部分参与了Notch信号通路的激活与调控。 展开更多

关键词 癫痫持续状态 海马 NOTCH信号通路 低氧诱导因子-1α 大鼠

在线阅读 下载PDF 职称材料

APE1通过NF-κB通路调节PD-L1在喉鳞状细胞癌中的表达 被引量：1

11

作者 杜国强 王立银 +3 位作者 王晓凤 李君 张明明 王瑾 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期865-870,共6页

目的检测脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1 (APE1)和程序性死亡蛋白配体1 (PD-L1)在喉鳞状细胞癌中的表达,探讨两者的相关性。方法采用实时定量荧光PCR检测60例喉癌标本及30例癌旁黏膜组织中PD-L1、APE1基因的表达,并分析其与临床病理因素的关... 目的检测脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1 (APE1)和程序性死亡蛋白配体1 (PD-L1)在喉鳞状细胞癌中的表达,探讨两者的相关性。方法采用实时定量荧光PCR检测60例喉癌标本及30例癌旁黏膜组织中PD-L1、APE1基因的表达,并分析其与临床病理因素的关系;利用siRNA脂质体转染、脂多糖[LPS,核因子κB (NF-κB)信号通路激动剂]和PDTC (NF-κB信号通路抑制剂)干预Hep-2细胞系,采用Western blotting检测APE1、PD-L1、NF-κB、pNF-κB蛋白的表达。结果喉癌组织中APE1、PD-L1基因的表达显著高于癌旁组织(P <0.05),两者表达呈正相关(r=0.37,P <0.01)。PD-L1表达与喉癌发生部位有关,声门型喉癌组织中PD-L1mRNA表达水平显著高于声门上型和声门下型(P <0.05)。同时,喉癌组织中APE1 m RNA的表达与淋巴结转移与否具有相关性(P <0.05)。APE1-siRNA转染Hep-2细胞后,显著抑制细胞APE1、NF-κB、pNF-κB、PD-L1蛋白的表达水平(P <0.05)。在一定浓度范围内,LPS和PDTC干预Hep-2细胞后,PD-L1、NF-κB蛋白表达分别逐渐增高和逐渐降低(P <0.05)。而沉默Hep-2细胞中APE1基因表达后进行LPS干预,细胞NF-κB、PD-L1表达较未干预组和LPS干预组降低(P <0.05)。结论相对于声门下型和声门上型喉癌,声门型喉癌可能对PD1/PD-L1免疫检查点相关的免疫治疗相对敏感。APE1可能通过NF-κB信号通路调节PD-L1的表达。PD-L1和APE1表达的联合检测对抑制喉癌生长具有潜在的临床价值。 展开更多

关键词 喉鳞状细胞癌 脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1 程序性死亡蛋白配体1 核因子κb信号通路 HEP-2细胞

在线阅读 下载PDF 职称材料

野生蒙古口蘑多糖通过STAT3和HIF-1α通路对LPS诱导的巨噬细胞发挥抗炎调节作用 被引量：3

12

作者 于传宗 张凤兰 +3 位作者 慕宗杰 李子钦 孙峰成 郝丽珍 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期93-98,共6页

研究蒙古口蘑多糖提取物对脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7细胞)炎症保护作用的机理。用不同预量质量浓度的蒙古口蘑多糖处理RAW264.7细胞,通过CCK-8法检测细胞活性;Griess法测定NO的产生量;酶联免疫吸附测定肿瘤坏死因子-α(... 研究蒙古口蘑多糖提取物对脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7细胞)炎症保护作用的机理。用不同预量质量浓度的蒙古口蘑多糖处理RAW264.7细胞,通过CCK-8法检测细胞活性;Griess法测定NO的产生量;酶联免疫吸附测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素1β(IL-1β);实时定量检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、诱导型一氧化氮和酶(iNOS)、核因子κB(NF-κB)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)和环氧化酶2(COX-2)的mRNA表达量;免疫印迹检测HIF-1α、NF-κB、STAT3和COX-2蛋白质的表达量。结果表明,蒙古口蘑多糖提取物作用RAW264.7细胞的最大剂量为100μg/mL;与LPS模型组相比,蒙古口蘑多糖提取物质量浓度0.01、0.1、1、10μg/mL均能有效抑制NO(抑制率分别是38.21%、64.17%、58.16%和79.42%)、TNF-α(抑制率分别为27.91%、36.31%、36.14%、45.09%)和IL-1β(抑制率分别为47.75%、58.47%、60.21%、64.55%)的产生;在质量浓度为10μg/mL的蒙古口蘑多糖提取物作用下,除NF-κB外,HIF-1α、STAT3、COX-2和iNOS的mRNA的表达量均降低;免疫印迹的结果也显示,除NF-κB外,HIF-1α、NF-κB、STAT3及COX-2的蛋白质的表达量均有不同程度的降低。蒙古口蘑多糖提取物对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞具有保护作用,其抗炎的机制主要通过JAK-STAT3及HIF-1α信号通路,而不主要通过NF-κB信号通路发挥作用。 展开更多

关键词 蒙古口蘑多糖提取物 RAW264.7细胞 脂多糖 缺氧诱导因子1α 诱导型一氧化氮和酶 核因子κb 信号转导和转录激活因子3 环氧化酶2

在线阅读 下载PDF 职称材料

活性维生素D3调控NF-κB信号通路对糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用机制研究 被引量：11

13

作者 樊效菊 韩睿 吴阳 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期343-349,共7页

目的:探讨活性维生素D3调控NF-κB炎症信号通路对2型糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用及机制;寻找维生素D在治疗糖尿病肾病中的最佳浓度。方法:将SD大鼠70只随机分成正常对照组(10只)、DN模型组(60只),且DN模型组进一步分为花生油组、厄贝... 目的:探讨活性维生素D3调控NF-κB炎症信号通路对2型糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用及机制;寻找维生素D在治疗糖尿病肾病中的最佳浓度。方法:将SD大鼠70只随机分成正常对照组(10只)、DN模型组(60只),且DN模型组进一步分为花生油组、厄贝沙坦组、维生素D低剂量组、维生素D中剂量组、维生素D高剂量组(每组各10只)。正常组以普通饲料喂养,模型组分别以上述处理方式进行灌胃。6周后处死大鼠称取体质量,采血检测空腹血糖(fasting blood glucose,FBG),收集24 h尿液计算尿量、测24 h尿蛋白定量;留取肾脏组织,HE染色观察肾组织病理学变化;实时荧光定量PCR检测肾脏组织中NF-κB及其下游单核细胞趋化因子-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)的mRNA表达;Western blot检测炎症因子NF-κB及MCP-1蛋白表达。结果:①在血糖、24 h尿蛋白,维生素D低剂量组较花生油组明显下降[分别为18.20(16.25,21.25)、32.24(26.09,37.68)与23.55(22.75,24.60)、72.52(50.38,84.93),均P<0.05]。②正常组大鼠HE染色可见肾小球形态完整,系膜区无明显增生,毛细血管腔规则,毛细血管袢形态规则;花生油组肾小球体积缩小,系膜区明显增宽,肾小球系膜细胞增生,毛细血管壁增厚;厄贝沙坦组较花生油组增生减轻;维生素D高剂量组、中剂量组、低剂量组肾小球系膜区均有增宽,但维生素D低剂量组增宽程度最轻。③维生素D低剂量组的NF-κB及MCP-1的mRNA水平较正常组花生油组明显下降[分别为1.72±0.002、0.67±0.01;3.57±0.40、3.57±0.37,均P<0.05];但厄贝沙坦组与维生素D低剂量组比较无统计学差异。④NF-κB的蛋白表达水平在各组间均无统计学差异,维生素D低剂量组的MCP-1蛋白表达水平较花生油组、维生素D中剂量组下降最为明显[分别为0.47±0.17与0.91±0.30、1.22±0.18、0.93±0.43,均P<0.05]。结论:维生素D能通过下调NF-кB炎症信号通路,有效地缓解糖尿病肾病的肾脏损伤;维生素D低剂量[0.03μg/(kg·d)]在糖尿病肾病的保护作用中为最佳浓度。 展开更多

关键词 活性维生素D3 糖尿病肾病 核因子-κb MCP-1 信号通路

在线阅读 下载PDF 职称材料

白术内酯Ⅰ对IL-1β诱导的关节软骨细胞炎性损伤的影响 被引量：2

14

作者 张应鹏 王世金 亓峰 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1152-1156,共5页

目的探讨白术内酯I(Atractylenolide I,AT-I)对白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的关节软骨细胞炎性损伤的影响。方法人关节软骨细胞来自武汉普诺赛生命科技有限公司。实验分6组:对照组(未处理)、模型组(10 ng/mL IL-1β)、A... 目的探讨白术内酯I(Atractylenolide I,AT-I)对白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的关节软骨细胞炎性损伤的影响。方法人关节软骨细胞来自武汉普诺赛生命科技有限公司。实验分6组:对照组(未处理)、模型组(10 ng/mL IL-1β)、AT-I-L组(25μmol/L)、AT-I-M组(50μmol/L)、AT-I-H组(100μmol/L)、AT-I-H+740 Y-P组[100μmol/L AT-I与50μg/mL 740 Y-P磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)激活剂]。CCK-8法和流式细胞术分别测定增殖及凋亡;ELISA法测定上清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;Western blot检测PI3K/蛋白激酶B(AKT)/核因子-κB(NF-κB)相关蛋白表达。结果与对照组相比,模型组OD450值(24、48 h)降低(P<0.05),TNF-α、IL-6表达、凋亡率、PI3K/AKT/NF-κB蛋白表达均升高(P<0.05)。与模型组对比,AT-I-L组OD450值(24、48 h)、TNF-α、IL-6表达、凋亡率、PI3K/AKT/NF-κB通路蛋白表达差异不显著(P>0.05),AT-I-M组、AT-I-H组OD450值(24 h、48 h)升高(P<0.05),TNF-α、IL-6表达、细胞凋亡率、PI3K/AKT/NF-κB通路蛋白表达均降低(P<0.05)。与AT-I-H组对比,AT-I-H+740 Y-P组OD450值(24、48 h)降低(P<0.05),TNF-α、IL-6表达、凋亡率、PI3K/AKT/NF-κB通路蛋白表达均升高(P<0.05)。结论白术内酯Ⅰ改善IL-1β诱导的关节软骨细胞炎性损伤,其可能机制是促进软骨细胞增殖并抑制炎症反应、细胞凋亡和PI3K/AKT/NF-κB通路实现。 展开更多

关键词 白术内酯Ⅰ 关节软骨细胞 炎性损伤 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶b/核因子-κb信号通路 白细胞介素-1Β

在线阅读 下载PDF 职称材料

人参皂苷Rg1对脓毒症所致心肌损伤大鼠HMGB1/NF-κB通路的影响 被引量：8

15

作者 陈思聪 张雁斌 马扬杰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1671-1677,共7页

目的:探讨人参皂苷Rg1(Rg1)对脓毒症所致心肌损伤大鼠的保护作用及其对高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/核因子-κB(NF-κB)通路的调节机制。方法:腹腔注射20 mg/kg脂多糖(LPS)构建脓毒症大鼠模型,并分为5组,每组10只,假手术组(Sham组)大鼠造... 目的:探讨人参皂苷Rg1(Rg1)对脓毒症所致心肌损伤大鼠的保护作用及其对高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/核因子-κB(NF-κB)通路的调节机制。方法:腹腔注射20 mg/kg脂多糖(LPS)构建脓毒症大鼠模型,并分为5组,每组10只,假手术组(Sham组)大鼠造模过程中腹腔注射等量生理盐水;造模前2 h,LPS+Rg1组大鼠灌胃15 mg/kg Rg1,心脏冠脉注射NF-κB-mimic-NC;LPS+Rg1+NF-κB-mimic组大鼠灌胃15 mg/kg Rg1,心脏冠脉注射NF-κB-mimic;LPS+NF-κB-mimic组大鼠灌胃等量生理盐水,心脏冠脉注射NF-κB-mimic;Sham组和LPS组大鼠灌胃等量生理盐水,心脏冠脉注射NF-κB-mimic-NC。心脏彩超检测大鼠左室收缩末内径(LVDs)、左室舒张末内径(LVDd)、左室射血分数(LVEF)、短轴缩短率(FS),TUNEL染色检测大鼠心肌细胞凋亡率;试剂盒检测大鼠血清TNF-α、IL-1β、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)含量;免疫荧光染色观察大鼠心肌组织caspase-3表达;免疫组化染色观察大鼠心肌组织HMGB1表达;Western blot心肌组织HMGB1、NF-κB表达。结果:与Sham组相比,LPS组、LPS+Rg1组、LPS+Rg1+NF-κB-mimic组、LPS+NF-κB-mimic组大鼠LVDs、LVDd、心肌细胞凋亡率、血清TNF-α、IL-1β、CK-MB和LDH含量、心肌组织HMGB1、NF-κB表达明显升高,LVEF、FS明显降低(均P<0.05);与LPS组相比,LPS+Rg1组、LPS+Rg1+NF-κB-mimic组大鼠LVDs、LVDd、血清TNF-α、IL-1β、CK-MB和LDH含量、心肌组织HMGB1、NF-κB表达明显降低,LVEF、FS明显升高,LPS+NF-κB-mimic组大鼠LVDs、LVDd、心肌细胞凋亡率、血清TNF-α、IL-1β、CK-MB和LDH含量、心肌组织HMGB1、NF-κB表达明显升高,LVEF、FS明显降低(均P<0.05);与LPS+Rg1组相比,LPS+Rg1+NF-κB-mimic组、LPS+NF-κB-mimic组大鼠LVDs、LVDd、心肌细胞凋亡率、血清TNF-α、IL-1β、CK-MB和LDH含量、心肌组织HMGB1、NF-κB表达明显升高,LVEF、FS明显降低(均P<0.05)。结论:Rg1可明显抑制脓毒症诱导的心肌组织炎症应激,降低心肌细胞凋亡率,改善心功能,可能与抑制HMGB1/NF-κB信号有关。 展开更多

关键词 人参皂苷RG1 脓毒症 心肌损伤 心功能 高迁移率族蛋白b1/核因子-κb信号通路

在线阅读 下载PDF 职称材料

低氧对兔关节软骨细胞发育的作用及调控机制研究

16

作者 许玲珑 高恩玉 +4 位作者 郭桢雅 胡钟珏 白卓玛 杨琨 魏锁成 《江西农业大学学报》 北大核心 2025年第4期1062-1077,共16页

【目的】骨关节炎是马和犬等动物常见的慢性退行性疾病,然而其发病机制尚不清晰且现有治疗方法的疗效欠佳。本研究旨在探讨低氧培养对关节软骨细胞形态学和发育的作用与机制以及其信号通路,为研发治疗动物关节疾病的新型生物材料提供试... 【目的】骨关节炎是马和犬等动物常见的慢性退行性疾病,然而其发病机制尚不清晰且现有治疗方法的疗效欠佳。本研究旨在探讨低氧培养对关节软骨细胞形态学和发育的作用与机制以及其信号通路,为研发治疗动物关节疾病的新型生物材料提供试验依据。【方法】以12只6周龄健康日本大白兔关节软骨作为试验材料,无菌采集和分离髋关节软骨细胞(HJCs)、膝关节软骨细胞(KJCs)和肩关节软骨细胞(SJCs)。将细胞分别置于21%、10%、2%O_(2)的低氧培养箱(5%CO_(2)和37℃)内培养48 h和96 h,试验分组对应为21%O_(2)-48 h组、10%O_(2)-48 h组、2%O_(2)-48 h组、21%O_(2)-96 h组、10%O_(2)-96 h组和2%O_(2)-96 h组。采用显微镜观察和ImageJ软件测量软骨细胞形态、最大横径(MTDs)和纵径(MLDs);分别运用CCK-8、qPCR和Western Blotting技术检测分析关节软骨细胞的活力和相关基因与蛋白表达水平。【结果】(1)关节软骨细胞在培养24 h后开始贴壁,早期呈现多边形,随后逐渐演变为长梭形,至96 h时,细胞融合形成“铺路石”样外观。2%O_(2)-96 h组细胞MTDs和MLDs均显著大于21%O_(2)-48 h组(P<0.01)。(2)HIF-1α、Bcl-2、COL-Ⅱ、Notch1、NF-κB和VEGF基因与蛋白表达水平随时间逐渐升高。其中,2%O_(2)-96 h组表达水平显著高于21%O_(2)-48 h组和21%O_(2)-96 h组(P<0.05或P<0.01)。HJCs 2%O_(2)-96 h组HIF-1α水平比21%O_(2)-96 h组和21%O_(2)-48 h组分别增加56.32%和122.95%;而Caspase-3和p62表达水平则呈逐渐下降趋势。(3)HIF-1α、COL-Ⅱ、VEGF、NF-κB和Notch1基因转录水平随O₂含量降低和培养时间延长逐渐升高。HJCs 2%O_(2)-96 h组的VEGF水平较21%O_(2)-48 h组和21%O_(2)-96 h组分别增高157.94%和70.37%;2%O_(2)-96 h组Caspase-3转录水平低于21%O_(2)-48 h组和10%O_(2)-48 h组(P<0.01)。(4)O₂含量降低与MTDs、MLDs、HIF-1α、COL-Ⅱ、Bcl-2、Notch1、NF-κB和VEGF水平呈负相关关系。【结论】低氧环境能增强软骨细胞产生COL-Ⅱ能力,提升HIF-1α、COL-Ⅱ、Notch1、NF-κB和VEGF基因和蛋白水平,抑制Caspase-3和p62水平,促进软骨细胞增殖与生长。本研究首次揭示低氧增强软骨细胞活力的作用主要是通过激活HIF-1α-Notch1-VEGF信号通路而实现的。 展开更多

关键词 软骨细胞 低氧培养 胶原蛋白-Ⅱ 低氧诱导因子 HIF-1α-Notch1-VEGF信号通路

在线阅读 下载PDF 职称材料

丁苯酞通过下调NF-κB信号通路抑制细胞焦亡减轻大鼠肾缺血-再灌注损伤 被引量：4

17

作者 张瑞波 申开文 +2 位作者 王强 袁强 沈俊 《器官移植》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期539-546,共8页

目的探讨丁苯酞对大鼠肾缺血-再灌注损伤(IRI)的作用机制。方法将40只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(IRI组)、NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)组、丁苯酞低剂量组(NBP-L组)及丁苯酞高剂量组(NBP-H组),每组8只。检... 目的探讨丁苯酞对大鼠肾缺血-再灌注损伤(IRI)的作用机制。方法将40只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(IRI组)、NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)组、丁苯酞低剂量组(NBP-L组)及丁苯酞高剂量组(NBP-H组),每组8只。检测各组大鼠血清肌酐(Scr)、血清胱抑素C(Cys-C)、血尿素氮(BUN)和血清白细胞介素(IL)-1β、IL-18水平,苏木素-伊红(HE)染色观察各组肾组织病理损伤情况,采用蛋白质印迹法和免疫组织化学法检测肾组织中炎症因子、核因子(NF)-κB信号通路及细胞焦亡相关蛋白表达水平。结果与Sham组比较,IRI组肾组织损伤较为严重,Scr、Cys-C、BUN和血清IL-1β、IL-18水平均升高,蛋白质印迹法结果显示NOD样受体蛋白(NLRP3)、Gasdermin D(GSDMD)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-1、IL-18、IL-1β、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白相对表达量均增加,免疫组织化学染色结果显示NF-κB p65、p-NF-κB p65、IL-1β、IL-18和NLRP3蛋白表达均增多。与IRI组比较,PDTC组、NBP-L组和NBP-H组肾组织的损伤程度均减轻,Scr、Cys-C、BUN和血清IL-18、IL-1β水平均下降,蛋白质印迹法结果显示NLRP3、GSDMD、Caspase-1、IL-1β、IL-18、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达均减少,免疫组织化学染色结果显示NF-κB p65、p-NF-κB p65、IL-1β、IL-18和NLRP3蛋白表达均下降。与NBP-L组比较,NBP-H组肾组织的损伤程度减轻,Scr、Cys-C、BUN和血清IL-18、IL-1β水平均下降,蛋白质印迹法结果显示NLRP3、GSDMD、Caspase-1、IL-1β、IL-18、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达均减少,免疫组织化学染色结果显示NF-κB p65、p-NF-κB p65、IL-1β、IL-18和NLRP3蛋白表达均下降。结论丁苯酞可下调NF-κB/NLRP3信号通路的活性,降低肾IRI后焦亡相关蛋白的表达水平及炎症因子水平,进而抑制细胞焦亡,减轻肾IRI。 展开更多

关键词 丁苯酞 缺血-再灌注损伤 急性肾损伤 细胞焦亡 炎症 NOD样受体蛋白3(NLRP3) 血清肌酐 血尿素氮 核因子(NF)-κb信号通路 血清胱抑素C(Cys-C) 白细胞介素-1β 白细胞介素-18

在线阅读 下载PDF 职称材料

丹参素对缺氧诱导成纤维样滑膜细胞损伤的影响及作用机制研究

18

作者 杨帆 曹姗 +1 位作者 吕章明 李云海 《世界中医药》 北大核心 2024年第23期3625-3631,共7页

目的:探讨丹参素对缺氧诱导的成纤维样滑膜细胞损伤的作用机制。方法:将大鼠成纤维样滑膜细胞按照简单随机法分为对照组、缺氧组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,检测丹参素对成纤维样滑膜细胞的影响。另取同代大鼠细胞按照简单随机法... 目的:探讨丹参素对缺氧诱导的成纤维样滑膜细胞损伤的作用机制。方法:将大鼠成纤维样滑膜细胞按照简单随机法分为对照组、缺氧组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,检测丹参素对成纤维样滑膜细胞的影响。另取同代大鼠细胞按照简单随机法分为对照组、缺氧组、高剂量组、BAY11-7082组,检测核因子κB p65(NF-κB p65)抑制剂BAY11-7082对成纤维样滑膜细胞损伤的影响。以5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(Edu)法检测各组细胞增殖,蛋白质印迹法检测细胞蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组细胞细胞基质金属蛋白酶(MMP)及血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达。结果:缺氧组细胞Edu阳性细胞率、增殖细胞核抗原(Ki67)、细胞周期素蛋白D1(CyclinD1)蛋白表达和MMP-1、MMP-9、MMP-3、VEGF mRNA及磷酸化(p)-NF-κB p65、低氧诱导因子1α(HIF-1α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-8蛋白表达高于对照组;与缺氧组比较,低、中、高剂量组细胞Edu阳性细胞率及Ki67、PCNA、CyclinD1蛋白表达及MMP-1、MMP-9、MMP-3、VEGF mRNA、p-NF-κB p65、HIF-1α、IL-6、IL-8蛋白表达低(P<0.05);与高剂量组比较,BAY11-7082组细胞p-NF-κB p65、HIF-1α、IL-6、IL-8蛋白表达、Edu阳性细胞率及MMP、VEGF mRNA低(P<0.05)。结论:丹参素可能通过抑制NF-κB/HIF-1α信号通路改善缺氧诱导的大鼠成纤维样滑膜细胞损伤。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 丹参素 缺氧 成纤维样滑膜细胞 核因子κb/低氧诱导因子1α信号通路 细胞增殖 细胞损伤 大鼠

在线阅读 下载PDF 职称材料

NALP6信号转导通路在痛风性关节炎发病过程中的作用机制 被引量：11

19

作者 隋方宇 姜德友 +3 位作者 韩洁茹 周雪明 赵铭宇 解颖 《世界中医药》 CAS 2019年第9期2276-2279,共4页

目的:探讨NALP6信号转导通路在痛风性关节炎(GA)发病过程中的作用机制。方法:选取慢病毒转染技术干扰NALP6蛋白的基因表达,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、蛋白质印迹法(Western blotting)、逆转录聚合酶链反应(RTPCR)等技术检测细胞中NA... 目的:探讨NALP6信号转导通路在痛风性关节炎(GA)发病过程中的作用机制。方法:选取慢病毒转染技术干扰NALP6蛋白的基因表达,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、蛋白质印迹法(Western blotting)、逆转录聚合酶链反应(RTPCR)等技术检测细胞中NALP6蛋白、caspase-1、IL-1β、核因子-κB的表达情况;结果:干扰成纤维滑膜细胞中NALP6基因的表达,能减低痛风性关节炎成纤维样滑膜细胞中NALP6蛋白的表达、降低caspase-1和核因子-κB的活性,降低IL-1β含量;结论:NALP6炎性反应信号转导通路参与了大鼠痛风性关节炎的发病过程,通过能够干扰NALP6基因表达的慢病毒转染技术能保护痛风性关节炎成纤维样滑膜细胞的炎性损伤。 展开更多

关键词 痛风性关节炎 NALP6信号转导通路 CASPASE-1 白细胞介素-1β 核因子-κb 慢病毒转染 成纤维样滑膜细胞 靶点

在线阅读 下载PDF 职称材料

HIF-1—低氧与固有免疫的联系者 被引量：2

20

作者 沙继斌 《生物学杂志》 CAS CSCD 2013年第3期77-80,共4页

近年来研究发现在低氧与固有免疫这两个古老、保守的应激反应之间存在密切联系。尤其是低氧应答的核心元件低氧诱导因子1(hypoxia inducible factor 1,HIF1)与机体固有免疫的重要调节者核转录因子κB(nuclear tran-scription factor,NF-... 近年来研究发现在低氧与固有免疫这两个古老、保守的应激反应之间存在密切联系。尤其是低氧应答的核心元件低氧诱导因子1(hypoxia inducible factor 1,HIF1)与机体固有免疫的重要调节者核转录因子κB(nuclear tran-scription factor,NF-κB)之间存在相互调节,并可影响彼此下游产物的表达。就该方面研究进展做一综述,以期为运动性免疫抑制的机理研究提供新的依据。 展开更多

关键词 固有免疫 低氧诱导因子1 核转录因子κb

在线阅读 下载PDF 职称材料