期刊文献+
共找到63篇文章
< 1 2 4 >
每页显示 20 50 100
庚型肝炎病毒NS3蛋白在杆状病毒载体中的表达及其抗原性研究 被引量:3
1
作者 朱分禄 任浩 +4 位作者 朱诗应 谢南 潘卫 董辉 戚中田 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第9期849-852,共4页
目的 :利用 Bac- to- Bac HT杆状病毒系统在 Sf9昆虫细胞中表达庚型肝炎病毒 (HGV) NS3蛋白 ,并对表达产物的免疫原性进行研究。 方法 :将 HGV NS3基因片段定向克隆至转座载体 p Fast Bac HTa,转化 DH10 Bac感受态细胞 ,37℃振荡培养 4... 目的 :利用 Bac- to- Bac HT杆状病毒系统在 Sf9昆虫细胞中表达庚型肝炎病毒 (HGV) NS3蛋白 ,并对表达产物的免疫原性进行研究。 方法 :将 HGV NS3基因片段定向克隆至转座载体 p Fast Bac HTa,转化 DH10 Bac感受态细胞 ,37℃振荡培养 4h使发生转座 ,用抗生素平皿筛选重组 bacmid。脂质体介导转染 Sf9昆虫细胞 ,待细胞形态明显改变后收获细胞和培养上清液 ,将上清液再次感染 Sf9细胞以大量表达 HGV NS3重组蛋白。利用 SDS- PAGE和 Western- blotting方法分析重组蛋白。结果 :SDS- PAGE分析发现表达产物在 Mr43810处有一条明显的蛋白带 ,占细胞总蛋白量的 30 %以上 ;应用 Ni- NTA亲和层析柱获得了纯化的重组蛋白 ;Western- blotting显示该抗原可与 HGV RNA阳性血清发生特异反应。 结论 :获得了昆虫细胞内表达的 HGV NS3重组蛋白 ,并证明该蛋白有可能用于 HGV感染的抗体检测。 展开更多
关键词 免疫原性 杆状病毒载体 庚型肝炎 NS3蛋白
在线阅读 下载PDF
杆状病毒载体介导的氯霉素乙酰转移酶基因在HepG2中的表达 被引量:1
2
作者 郭亚兵 戴琳 +2 位作者 冯筱榕 杨洁 周福元 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第9期648-649,共2页
目的 重组杆状病毒AcMNPV载体并观察其在人肝癌细胞株中的基因转移效率及表达。方法 用PCR方法获得氯霉素乙酰转移酶(CAT)报告基因及CMV与核因子(NFκB)启动子和增强子序列,并插入AcMNPV中,用同源重组方法获得CAT重组杆状病毒。... 目的 重组杆状病毒AcMNPV载体并观察其在人肝癌细胞株中的基因转移效率及表达。方法 用PCR方法获得氯霉素乙酰转移酶(CAT)报告基因及CMV与核因子(NFκB)启动子和增强子序列,并插入AcMNPV中,用同源重组方法获得CAT重组杆状病毒。分别感染昆虫细胞Sf5和人肝癌细胞株HepG2或HepG2.2.15细胞,测定CAT表达相对活性。结果 由CMV启动子驱动的CAT重组杆状病毒在HepG2或HepG2.2.15细胞均可表达CAT,而NFκB启动子驱动的CAT重组杆状病毒在HepG2细胞中CAT表达低,而在有HBV表达的HepG2.2.15细胞中有较高的CAT表达活性。结论 重组杆状病毒能在人肝癌细胞中表达外源基因,而且成功构建了HBV感染细胞特异性表达的杆状病毒载体。 展开更多
关键词 杆状病毒载体 HEPG2细胞系 乙型肝炎病毒 肝癌 氯霉素乙酰转移酶 基因表达
在线阅读 下载PDF
兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗临床免疫效力试验 被引量:1
3
作者 范志宇 王芳 +3 位作者 胡波 魏后军 薛家宾 姜平 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第7期30-33,I0003,I0004,共6页
为了评估兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗在临床使用中的保护效力,试验选择3批次中试产品,分别在6家临床试验兔场对不同品种、不同日龄家兔进行免疫效力评价。结果显示,6家临床试验兔场试验期间均没有发生兔出血症;免疫持续期攻毒试... 为了评估兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗在临床使用中的保护效力,试验选择3批次中试产品,分别在6家临床试验兔场对不同品种、不同日龄家兔进行免疫效力评价。结果显示,6家临床试验兔场试验期间均没有发生兔出血症;免疫持续期攻毒试验结果显示,疫苗对肉兔、獭兔、毛兔免疫期均可以达到7个月。结果表明,兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗(BAC-VP60株)临床效力检验合格,免疫期为7个月。 展开更多
关键词 兔出血症病毒杆状病毒载体灭活疫苗 效力检验 免疫期
在线阅读 下载PDF
家蚕杆状病毒载体构建及外源基因的表达 被引量:4
4
作者 崔红娟 鲁成 《蚕学通讯》 1999年第2期16-20,共5页
本文介绍了杆状病毒载体构建方法,分析了影响外源基因表达效率的因素,概述了近年来家蚕杆状病毒栽体在蚕体内表达外源基因产物所取得的成绩,并指出了这一系统存在的问题,提出了改进意见.
关键词 家蚕 杆状病毒载体 外源基因的表达
在线阅读 下载PDF
伪狂犬病病毒鄂A株囊膜蛋白gD基因在杆状病毒载体系统中的表达研究
5
作者 陈新华 杨林 +4 位作者 龙綮新 王章 陈曲侯 洪文洲 陈焕春 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第3期415-419,共5页
克隆了伪狂犬病病毒鄂A株囊膜蛋白gD基因并进行了序列分析 ,与国际标准毒株Rice株相比 ,两者之间核苷酸序列同源性为 98% ,推导氨基酸序列同源性为 97% .利用杆状病毒GST融合载体系统对其进行了高效表达 ,SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳及蛋白... 克隆了伪狂犬病病毒鄂A株囊膜蛋白gD基因并进行了序列分析 ,与国际标准毒株Rice株相比 ,两者之间核苷酸序列同源性为 98% ,推导氨基酸序列同源性为 97% .利用杆状病毒GST融合载体系统对其进行了高效表达 ,SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳及蛋白质印迹均证明了表达产物为 71ku的GST gD融合蛋白 ,其产量占细胞不溶蛋白量的 2 0 %左右 .以GST gD融合蛋白作为抗原进行小鼠免疫保护实验 ,结果表明表达的GST gD融合蛋白具有较好的免疫原性 ,不仅能诱导小鼠产生血清抗体 (1∶12 8) 。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 鄂A株 囊膜蛋白gD基因 杆状病毒载体系统 表达 免疫原性
在线阅读 下载PDF
禽流感(H5+H7)重组杆状病毒载体三价灭活疫苗对家禽的免疫效力研究 被引量:6
6
作者 潘舒心 刘艳晶 +6 位作者 麻琦 陈晓涵 邓国华 施建忠 田国彬 曾显营 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1293-1298,1317,共7页
为评估禽流感(H5+H7)重组杆状病毒载体三价灭活疫苗(rBH5-11株+rBH5-12株+rBH7-2株)对家禽的免疫保护效果,本研究将制备的3批疫苗接种21日龄SPF鸡,并进行疫苗的效力检测及H5和H7亚型禽流感病毒(AIV)流行株的攻毒试验;同时将该疫苗接种... 为评估禽流感(H5+H7)重组杆状病毒载体三价灭活疫苗(rBH5-11株+rBH5-12株+rBH7-2株)对家禽的免疫保护效果,本研究将制备的3批疫苗接种21日龄SPF鸡,并进行疫苗的效力检测及H5和H7亚型禽流感病毒(AIV)流行株的攻毒试验;同时将该疫苗接种商品蛋鸡和鸭,进行免疫抗体持续期研究。疫苗免疫效力试验结果显示,3批疫苗常规剂量(0.3 mL/只)分别接种SPF鸡后3周,免疫鸡血清中针对H5亚型Re-11株和Re-12株、H7亚型H7-Re2株AIV的平均HI抗体效价为7.9 log2~8.5 log2,对照组鸡血清中针对3种抗原的HI抗体均为阴性;用H5N6、H5N1和H7N9亚型AIV分别攻毒后10 d观察期内,对照鸡均全部发病死亡,所有免疫组鸡均不发病、不排毒、不死亡,获得100%的免疫保护。流行株的效力试验结果显示,免疫后3周,接种常规剂量(0.3mL/只)疫苗鸡血清中针对3种抗原的平均HI抗体效价均在7.9 log2以上,使用2株H5N6亚型AIV、2株H5N1亚型AIV及1株H7N9亚型AIV和1株H7N2亚型AIV流行株攻毒后,各免疫组鸡均获得100%的免疫保护。抗体持续期试验结果显示,80日龄商品蛋鸡在接种2次疫苗(0.5 mL/只)3周至16周,血清中针对3种抗原的平均HI抗体效价均在6.8 log2以上;2周龄鸭接种2次疫苗(0.5 mL/只),在首次免疫后3周至14周,血清中针对3种抗原的平均HI抗体效价均在6 log2以上。上述结果首次表明,禽流感杆状病毒载体三价灭活疫苗具有良好的免疫效力,能够预防H5亚型和H7亚型禽流感(AI),商品蛋鸡和鸭按照免疫程序接种2次疫苗后能够产生持久的HI抗体。本研究为禽流感疫苗的研制提供了新思路和科学依据。 展开更多
关键词 禽流感 杆状病毒载体 灭活疫苗 H5+H7 免疫效力
在线阅读 下载PDF
中博生物猪圆环病毒2型杆状病毒载体灭活疫苗(CP08株)隆重上市
7
作者 王亚辉 曹莉莉 《中国猪业》 2015年第1期24-24,共1页
2014年12月18—19日,由武汉中博生物股份有限公司(以下简称武汉中博)承办的“猪圆环病毒病防控国际学术研讨会暨中博生物猪圆环病毒2型杆状病毒载体灭活疫苗(CP08株)上市会”在武汉成功召开。来自国内外的专家以及全国各地的猪场... 2014年12月18—19日,由武汉中博生物股份有限公司(以下简称武汉中博)承办的“猪圆环病毒病防控国际学术研讨会暨中博生物猪圆环病毒2型杆状病毒载体灭活疫苗(CP08株)上市会”在武汉成功召开。来自国内外的专家以及全国各地的猪场代表和经销商近500人参加了本次会议。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 杆状病毒载体 灭活疫苗 生物 上市 国际学术研讨会 猪圆环病毒 经销商
在线阅读 下载PDF
猪繁殖与呼吸综合征病毒兰州分离株ORF3基因的克隆及杆状病毒载体的构建 被引量:1
8
作者 赵娜 田宏 +5 位作者 祁燕蓉 满自萍 吴锦艳 尚佑军 何生虎 刘湘涛 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期1-5,共5页
根据猪繁殖与呼吸综合症病毒已知序列(ch-1a,AY032626)设计包含完整ORF3序列的1对引物,采用RT-PCR方法扩增PRRSV甘肃Lanzhou株的ORF3基因,将其克隆到杆状病毒载体pFastBac HTA上,经酶切鉴定、PCR鉴定筛选出阳性重组转移载体pFastBac HTA... 根据猪繁殖与呼吸综合症病毒已知序列(ch-1a,AY032626)设计包含完整ORF3序列的1对引物,采用RT-PCR方法扩增PRRSV甘肃Lanzhou株的ORF3基因,将其克隆到杆状病毒载体pFastBac HTA上,经酶切鉴定、PCR鉴定筛选出阳性重组转移载体pFastBac HTA-ORF3,并对阳性质粒进行测序及序列分析;将pFastBac HTA-ORF3转化到DH10Bac感受态细胞中,与Bacmid发生位点特异性转座作用,获得重组转座子rBacmid-ORF3。成功构建了PRRSV Lanzhou株ORF3基因的杆状病毒载体,为基因工程疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF3基因 克隆 杆状病毒表达载体
在线阅读 下载PDF
猪圆环病毒2型Cap蛋白杆状病毒载体表达及免疫保护性分析
9
作者 张国军 任洪林 +6 位作者 杨延梅 畅丽芳 吴金 王殿永 高玉龙 柳增善 张媛媛 《动物医学进展》 北大核心 2022年第4期112-118,共7页
为了获得低成本高产量的抗原表达,开发新型、有效防控猪圆环病毒的亚单位疫苗,根据猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白序列,通过软件设计优化了密码子并合成cap基因,利用多角体病毒作为载体,构建了表达PCV2 Cap蛋白的重组病毒,命名为flashBAC-P... 为了获得低成本高产量的抗原表达,开发新型、有效防控猪圆环病毒的亚单位疫苗,根据猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白序列,通过软件设计优化了密码子并合成cap基因,利用多角体病毒作为载体,构建了表达PCV2 Cap蛋白的重组病毒,命名为flashBAC-PCV2-ORF2株。经过鉴定,证明该病毒株表达Cap蛋白的抗原量在150μg/mL以上,毒株纯净,没有细菌、支原体和其他病毒污染。经纯化后,通过猪免疫试验证明,构建的flashBAC-PCV2-ORF2株具有良好免疫原性,能够对病毒攻击起到很好的免疫保护作用,具有较高的潜在应用价值。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 杆状病毒载体 flashBAC-PCV2-ORF2株 Cap蛋白表达 免疫原性
在线阅读 下载PDF
杆状病毒载体灭活方法的研究进展
10
作者 伊立超 娄安钢 《山东畜牧兽医》 2022年第10期88-90,共3页
杆状病毒表达系统作为重要的真核表达系统,有其独特的优势。近些年,将重组杆状病毒灭活后制备疫苗的研究越来越多,本文综述了杆状病毒系统表达流程,以及利用甲醛和β-丙内酯(BPL)这两种常见的病毒灭活剂灭活杆状病毒,并对其安全性进行... 杆状病毒表达系统作为重要的真核表达系统,有其独特的优势。近些年,将重组杆状病毒灭活后制备疫苗的研究越来越多,本文综述了杆状病毒系统表达流程,以及利用甲醛和β-丙内酯(BPL)这两种常见的病毒灭活剂灭活杆状病毒,并对其安全性进行分析。 展开更多
关键词 杆状病毒载体 灭活效果 生物安全
在线阅读 下载PDF
蛇毒金属蛋白酶抑制剂基因的合成及杆状病毒表达载体的构建 被引量:7
11
作者 徐剑文 林建银 +2 位作者 林旭 齐元麟 张晓艳 《中国生物医学工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期755-764,共10页
研究蛇毒金属蛋白酶抑制剂(BJ46a)基因的合成及杆状病毒表达载体的构建。根据GenBank中查找的BJ46a基因序列(AF294836),将其分为20个片段,通过缓慢退火PCR法使之拼接为完整的BJ46a基因,经SacⅠ及XhoⅠ双酶切后定向克隆到载体pET-42a(+)... 研究蛇毒金属蛋白酶抑制剂(BJ46a)基因的合成及杆状病毒表达载体的构建。根据GenBank中查找的BJ46a基因序列(AF294836),将其分为20个片段,通过缓慢退火PCR法使之拼接为完整的BJ46a基因,经SacⅠ及XhoⅠ双酶切后定向克隆到载体pET-42a(+)中,PCR扩增、酶切及测序鉴定;根据测序结果用定点突变法逐一改正错误位点。随后将该基因插入到转座载体pFastBac HT C的MCS中,转化大肠杆菌DH5-αT1,以LB/AP平板筛选阳性重组子,PCR扩增、酶切鉴定,提取pFastBac HT C-BJ46a重组体进一步转化DH10Bac感受态细胞,48h后通过蓝白筛选,挑取单个白色菌落划线,证实所得菌落均为白斑,挑克隆PCR鉴定。结果表明成功构建杆状病毒重组转座载体、重组穿梭载体。含BJ46a基因的重组杆状病毒感染Sf 9昆虫细胞,获得目的蛋白的表达。BJ46a基因的合成及杆状病毒表达载体的成功构建,为进一步研究其生物学功能奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 蛇毒金属蛋白酶抑制剂(BJ46a) 基因合成 基因克隆 基因突变 重组杆状病毒载体
在线阅读 下载PDF
人VEGF基因杆状病毒表达载体的构建及生物学活性鉴定 被引量:4
12
作者 孙丽翠 王雅梅 +3 位作者 闫豫东 张静宜 司杨 祁雅慧 《首都医科大学学报》 CAS 2006年第5期623-626,共4页
目的构建含人血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因的杆状病毒表达载体,并对其表达产物的生物学活性进行测定。方法用HindⅢ对pcDNA3.1/VEGF进行酶切,回收575 bp的VEGF片段;pFast a载体用HindⅢ酶切回收,与VEGF片段连接。NcoI酶切鉴定方向,... 目的构建含人血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因的杆状病毒表达载体,并对其表达产物的生物学活性进行测定。方法用HindⅢ对pcDNA3.1/VEGF进行酶切,回收575 bp的VEGF片段;pFast a载体用HindⅢ酶切回收,与VEGF片段连接。NcoI酶切鉴定方向,得到正向连接重组载体pFast/VEGF;将其转化DH10BAC感受态细胞,经卡那霉素、四环霉素、庆大霉素及蓝白斑筛选得到重组杆状病毒载体pBacmid-Fa-VEGF,PCR扩增鉴定得到单一VEGF条带。将该病毒载体转染sf9细胞,用噬斑筛选及SDS-PAGE和Western blot检测VEGF表达,并通过MTT法检测VEGF促内皮细胞生长活性。结果病毒液在稀释到10-7时出现噬斑,Western blot检测出现单一条带,MTT检测促内皮细胞生长率为19.44%。结论成功构建了含VEGF基因的杆状病毒表达载体,且表达产物具有显著的促内皮细胞生长作用。 展开更多
关键词 人血管内皮细胞生长因子 重组杆状病毒载体 Western BLOT SF9细胞 MTT
在线阅读 下载PDF
具全期启动子盒的杆状病毒高效表达载体的组建与应用
13
作者 吴文言 龙綮新 +1 位作者 曲士芮 庞义 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期1-5,共5页
通过PCR扩增,得到苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(AutographacalifornicaNuclearPolyhedrosisVirus,AcNPV)具早晚期启动子元件的p35基因启动子,将其插入到杆状病毒转移载体... 通过PCR扩增,得到苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(AutographacalifornicaNuclearPolyhedrosisVirus,AcNPV)具早晚期启动子元件的p35基因启动子,将其插入到杆状病毒转移载体质粒pSXIVVI+X3多克隆位点上游,使之与pSXIVVI+X3质粒中的人工合成后期启动子(PSyn)、多角体XIV启动子(PXIV)串联构成早期、晚期、极晚期能持续启动外源基因表达的转移载体质粒pSX35.将pSX35用于组建含HBsAg基因并形成多角体的重组TnNPV,HB-sAg基因的表达量显著提高,表达时间亦明显提前,从而实现了外源基因在杆状病毒表达系统的全期、高效表达.mRNA引物延伸试验结果显示,Pp35在重组病毒中可产生2套转录本,分别于病毒感染的早期和晚期起始HBsAg基因的表达. 展开更多
关键词 杆状病毒载体 全期启动子盒 基因载体 基因表达
在线阅读 下载PDF
猪流感H1N1亚型NP基因杆状病毒表达载体构建及其在昆虫细胞中的表达 被引量:1
14
作者 段博芳 张利仙 +5 位作者 段纲 董俊 叶玲玲 周晓黎 徐志斌 艾军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1118-1122,共5页
目的获得研发A型猪流感病毒ELISA检测试剂盒和制备NP蛋白单克隆抗体的抗原物质。方法根据已报道的猪流感病毒H1N1亚型NP基因序列(GenBank登录号:GQ422386)人工合成NP基因,通过XbaⅠ和EcoRⅠ特异性酶切,将NP基因克隆于昆虫杆状病毒表达载... 目的获得研发A型猪流感病毒ELISA检测试剂盒和制备NP蛋白单克隆抗体的抗原物质。方法根据已报道的猪流感病毒H1N1亚型NP基因序列(GenBank登录号:GQ422386)人工合成NP基因,通过XbaⅠ和EcoRⅠ特异性酶切,将NP基因克隆于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTB,经PCR、酶切、测序鉴定后,获得携带NP基因的重组质粒pFast-BacHTB-NP。该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态细胞,经抗生素、PCR筛选,获得转座的杆粒Bac-mid-NP。在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒,再感染细胞,收获目的蛋白。结果通过SDS-PAGE和Westernblotting分析表明该蛋白得到表达,且具有良好的生物活性,大小约为57KD。结论实验结果表明已成功构建了携带NP基因的重组质粒pFastBacHTB-NP和转座的杆粒Bacmid-NP,转染后在sf9昆虫细胞上成功的表达。 展开更多
关键词 H1N1 NP基因 杆状病毒表达载体 昆虫细胞
在线阅读 下载PDF
日本血吸虫翻译控制肿瘤蛋白基因的杆状病毒表达载体构建和在昆虫细胞中的表达 被引量:1
15
作者 王海 胡少敏 +3 位作者 黄艳 吕刚 吴忠道 余新炳 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第8期656-659,共4页
目的构建日本血吸虫的翻译控制肿瘤蛋白(SjTCTP)基因的杆状病毒重组供体质粒pFASTA-TCTP,用该重组转移质粒转化含有杆状病毒表达载体以构建BacmidGFP-TCTP,感染昆虫细胞进行表达。方法将已克隆的SjTCTP基因与线性化的pFASTA进行连接为pF... 目的构建日本血吸虫的翻译控制肿瘤蛋白(SjTCTP)基因的杆状病毒重组供体质粒pFASTA-TCTP,用该重组转移质粒转化含有杆状病毒表达载体以构建BacmidGFP-TCTP,感染昆虫细胞进行表达。方法将已克隆的SjTCTP基因与线性化的pFASTA进行连接为pFASTA-TCTP,使pFASTA-TCTP与DH10BAC感受菌进行转座重组,利用抗性及蓝白斑筛选重组BacmidGFP-TCTP克隆,提取BacmidGFP-TCTP转染昆虫细胞Sf9获得有感染力的病毒,利用病毒感染Sf9细胞进行蛋白表达,通过荧光镜观察、RT-PCR、SDS-PAGE和Western-Blotting检测表达情况。结果获得了重组SjTCTP的杆状病毒,细胞能表达出与SjTCTP单抗结合的、分子量为23kDa左右的融合有组氨酸标签的目的蛋白。结论SjTCTP能在昆虫细胞中获得良好表达,为其的分子生物学活性研究奠定了基础。 展开更多
关键词 日本血吸虫 SjTCTP 杆状病毒表达载体 SF9细胞
在线阅读 下载PDF
人VEGF基因昆虫杆状病毒表达载体的构建 被引量:1
16
作者 孙丽翠 王雅梅 +2 位作者 祁雅慧 闫豫东 张静宜 《首都医科大学学报》 CAS 2004年第2期159-161,共3页
为了在昆虫杆状病毒表达系统表达人血管内皮细胞生长因子 (VEGF)基因 ,用HindⅢ对 pcDNA3 .1 /VEGF进行酶切 ,回收 5 75bp的VEGF片段 ,与 pFastBacI载体连接 ,得到含VEGF基因的转座载体 pFast/VEGF ,NcoI酶切鉴定方向 ;将其转化到含有... 为了在昆虫杆状病毒表达系统表达人血管内皮细胞生长因子 (VEGF)基因 ,用HindⅢ对 pcDNA3 .1 /VEGF进行酶切 ,回收 5 75bp的VEGF片段 ,与 pFastBacI载体连接 ,得到含VEGF基因的转座载体 pFast/VEGF ,NcoI酶切鉴定方向 ;将其转化到含有穿梭载体杆粒 (Bacmid)的DH1 0Bac感受态细胞 ,得到重组杆状病毒穿梭载体Bacmid/VEGF ,采用琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增对重组转座载体、穿梭载体进行鉴定。将Bacmid/VEGF转染sf 9细胞 ,进行病毒重组及噬斑筛选。结果 :琼脂糖电泳得到杆粒 (Bacmid)DNA条带 ,PCR扩增得到 5 75bp的VEGF片段 ,病毒液在 1 0 - 7稀释度时出现噬斑 ,约 5 0个 /孔。说明已成功构建了重组杆状病毒穿梭载体并重组出杆状病毒。 展开更多
关键词 人VEGF基因 昆虫杆状病毒表达载体 构建 噬斑筛选
在线阅读 下载PDF
禽腺联病毒VP基因的克隆及杆状病毒表达载体的构建
17
作者 王安平 朱善元 +3 位作者 吴双 王永娟 左伟勇 洪伟鸣 《江苏农业科学》 北大核心 2013年第8期25-27,共3页
根据禽腺联病毒VP基因序列设计引物,扩增出VP基因,将其克隆至杆状病毒表达载体pFastBac1,经酶切鉴定筛选出阳性重组转移载体pFastBac-VP,并对阳性质粒进行测序及序列分析;将pFastBac-VP转化到DH10Bac感受态细胞中,与Bacmid发生位点特异... 根据禽腺联病毒VP基因序列设计引物,扩增出VP基因,将其克隆至杆状病毒表达载体pFastBac1,经酶切鉴定筛选出阳性重组转移载体pFastBac-VP,并对阳性质粒进行测序及序列分析;将pFastBac-VP转化到DH10Bac感受态细胞中,与Bacmid发生位点特异性转座作用,经抗性和蓝白斑筛选,获得含VP基因的重组穿梭载体rBacmid-VP。研究结果为进一步在昆虫细胞中表达VP基因,开发研制重组禽腺联病毒载体奠定了基础。 展开更多
关键词 禽腺联病毒 VP基因 杆状病毒表达载体 克隆
在线阅读 下载PDF
利用杆状病毒表达载体系统表达重组乙型肝炎病毒核心蛋白 被引量:2
18
作者 高琳琳 王晓燕 +4 位作者 张颖慧 李岩 邓菲 张艳芳 林菊生 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期787-790,共4页
目的利用杆状病毒表达载体系统制备重组乙型肝炎病毒核心蛋白。方法构建含有HBV C基因的杆状病毒转移载体pFastBac Dual-HBV core,转化大肠埃希菌DH10Bac进行转座,提取重组Bacmid DNA转染昆虫细胞Sf9,获得含有HBV C基因的重组杆状病毒... 目的利用杆状病毒表达载体系统制备重组乙型肝炎病毒核心蛋白。方法构建含有HBV C基因的杆状病毒转移载体pFastBac Dual-HBV core,转化大肠埃希菌DH10Bac进行转座,提取重组Bacmid DNA转染昆虫细胞Sf9,获得含有HBV C基因的重组杆状病毒。用重组杆状病毒感染Sf9细胞进行乙型肝炎病毒核心蛋白表达,然后通过SDS-PAGE电泳和Western blot分析表达情况。结果成功构建了含HBV C基因的重组杆状病毒,而且在昆虫细胞Sf9中表达了乙型肝炎病毒核心蛋白。结论利用Bac to Bac杆状病毒表达系统,成功地表达了乙型肝炎病毒核心蛋白,为进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒核心蛋白 杆状病毒表达载体系统 昆虫细胞
在线阅读 下载PDF
人血小板因子Ⅳ在家蚕杆状病毒表达载体系统中的表达 被引量:1
19
作者 于威 金勇丰 +1 位作者 吴玉澄 张耀洲 《蚕业科学》 CAS CSCD 2001年第2期100-103,共4页
将人血小板因子Ⅳ (HumanPlateletFactorⅣ ,简称hPF4)基因重组于家蚕杆状病毒转移载体pBacPAK8中 ,获得重组转移载体pBacPAK PF4,并与线性化病毒Bm BacPAK6DNA共转染家蚕培养细胞 ,在细胞内发生同源重组 ,获得重组病毒BacPAK PF4。Sout... 将人血小板因子Ⅳ (HumanPlateletFactorⅣ ,简称hPF4)基因重组于家蚕杆状病毒转移载体pBacPAK8中 ,获得重组转移载体pBacPAK PF4,并与线性化病毒Bm BacPAK6DNA共转染家蚕培养细胞 ,在细胞内发生同源重组 ,获得重组病毒BacPAK PF4。Southern杂交结果表明重组病毒基因组中含有hPF4基因。重组病毒以MOI=10感染家蚕培养细胞 (2× 10 6个细胞 )和家蚕 5龄幼虫 ,表达产物用体外培养的血管内皮细胞测定其生物活性 ,测得表达量在家蚕培养细胞中第 3天达到最高值为 6 0 88μg/ 2× 10 6个细胞 ;在蚕体内表达第 5天达到最高值 。 展开更多
关键词 人血小板因子Ⅳ 家蚕杆状病毒表达载体系统 基因表达 生物活性
在线阅读 下载PDF
昆虫杆状病毒的研究与应用 被引量:4
20
作者 王晓玲 魏美才 夏春兰 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2006年第6期61-65,共5页
杆状病毒是鳞翅目昆虫的重要病原微生物,在重要农业害虫的生物防治中具有很大的应用前景。同时,杆状病毒—昆虫细胞表达系统是一类重要的真核表达系统,现已成为目前基因工程四大表达系统之一。另外,杆状病毒是非复制型载体,能高效表达... 杆状病毒是鳞翅目昆虫的重要病原微生物,在重要农业害虫的生物防治中具有很大的应用前景。同时,杆状病毒—昆虫细胞表达系统是一类重要的真核表达系统,现已成为目前基因工程四大表达系统之一。另外,杆状病毒是非复制型载体,能高效表达目的蛋白,其作为基因转移载体在基因治疗中已显示出良好的应用前景。文中综述了杆状病毒在以上方面应用的最新进展。 展开更多
关键词 杆状病毒 杆状病毒载体 重组杆状病毒 基因治疗 杆状病毒杀虫剂
在线阅读 下载PDF
上一页 1 2 4 下一页 到第
使用帮助 返回顶部