SARS冠状病毒PLpro蛋白酶对泛素样分子的DUB活性 被引量：4

1

作者 陈晓娟 杨宇东 +3 位作者 孙莉 胡日查 邢雅玲 陈忠斌 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期664-670,共7页

SARS冠状病毒基因组中非结构基因nsp3编码的木瓜样蛋白酶(PLpro)在病毒基因组复制及逃避宿主天然免疫中发挥重要作用,是研发抗病毒药物的重要靶标.SARS冠状病毒PLpro是一种病毒编码的去泛素化酶(DUB).为深入研究SARS冠状病毒PLpro对泛... SARS冠状病毒基因组中非结构基因nsp3编码的木瓜样蛋白酶(PLpro)在病毒基因组复制及逃避宿主天然免疫中发挥重要作用,是研发抗病毒药物的重要靶标.SARS冠状病毒PLpro是一种病毒编码的去泛素化酶(DUB).为深入研究SARS冠状病毒PLpro对泛素样分子(ubiquitin-likeprotein,UBL)的DUB特性,本研究构建缺失PLpro N末端泛素样结构域(Ubl)和下游跨膜结构域(TM)的PLpro构建体(constructs),并构建3种缺失蛋白酶催化活性的突变体,检测PLpro对泛素样分子干扰素刺激基因15(ISG15)及SUMO-1的作用.实验结果表明,PLpro和PLpro-TM在细胞内具有很强的去ISG(DeISGylation)活性;缺失PLpro N末端泛素样结构域(Ubl)对PLpro的去ISG15活性没有影响;对PLpro蛋白酶活性位点C1651和H1812突变后,PLpro-TM的去ISG15活性消失,而对D1826位点突变后不影响此活性.PLpro不具有去SUMO(DeSUMOylation)活性,而PLpro-TM具有一定的去SUMO活性;PLpro催化活性相关的3个关键氨基酸残基Cys-His-Asp突变后对去SUMO活性有一定的影响.研究结果提示,SARS PLpro除了具有DUB的活性,还具有体内去ISG活性和去SUMO活性;PLpro蛋白酶活性与其去ISG活性之间有一定相关性;PLpro去SUMO-1活性具有TM依赖性.SARS冠状病毒PLpro对泛素样分子作用特性的研究为阐明病毒逃避宿主天然免疫机制和开发新型抗病毒药物提供重要的理论依据. 展开更多

关键词 SARS冠状病毒 木瓜样蛋白酶(plpro) 去泛素化酶 干扰素刺激基因15(ISG15) SUMO-1

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NL63冠状病毒木瓜样蛋白酶去泛素化酶活性和对宿主抗病毒天然免疫反应调节作用 被引量：8

2

作者 孙莉 杨宇东 +3 位作者 刘殿波 邢雅玲 陈晓娟 陈忠斌 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第8期871-880,共10页

引起人类呼吸道感染的冠状病毒已多达5种.冠状病毒与宿主相互作用决定了其致病性和免疫特性.冠状病毒感染后宿主会立即启动抗病毒天然免疫反应,而人类冠状病毒往往会编码特定蛋白逃逸或抑制宿主的天然免疫反应.NL63冠状病毒是一种新型... 引起人类呼吸道感染的冠状病毒已多达5种.冠状病毒与宿主相互作用决定了其致病性和免疫特性.冠状病毒感染后宿主会立即启动抗病毒天然免疫反应,而人类冠状病毒往往会编码特定蛋白逃逸或抑制宿主的天然免疫反应.NL63冠状病毒是一种新型人类冠状病毒,其非结构蛋白nsp3编码2个木瓜样蛋白酶(PLP)核心结构域PLP1和PLP2.前期研究发现,人类冠状病毒PLP2是一种病毒编码的去泛素化酶(DUB),但是对其DUB特性和功能还不清楚.研究发现,NL63冠状病毒PLP1和PLP2两个核心结构域中只有PLP2具有DUB活性,而且,PLP2的DUB活性对K48和K63连接的多聚泛素化修饰不表现明显特异性.同时,蛋白酶活性催化位点C1678和H1836突变后对其DUB活性有明显抑制作用,而蛋白酶活性催化位点D1849突变后对DUB活性无影响.其次,PLP2而非PLP1核心结构域能够明显抑制仙台病毒和重要信号蛋白(RIG-I、ERIS/STING/MITA)激活的干扰素表达,表明PLP2是一种冠状病毒编码的干扰素拮抗剂,而且PLP2的干扰素拮抗作用不完全依赖其蛋白酶活性.机制研究表明,PLP2能够与干扰素表达通路中的重要调节蛋白RIG-I和ERIS发生相互作用,通过对RIG-I和ERIS的去泛素化负调控宿主抗病毒天然免疫反应.此外,PLP2除利用DUB活性抑制干扰素表达外,很可能存在不依赖自身催化活性的其他组分共同抑制干扰素的产生.以上研究对阐明人类新发冠状病毒免疫和致病机理以及抗病毒药物研发具有重要参考价值。 展开更多

关键词 冠状病毒NL63 木瓜样蛋白酶 去泛素化酶 干扰素拮抗剂 ERIS/STING

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靶向木瓜样蛋白酶的抗SARS-CoV-2药物虚拟筛选 被引量：2

3

作者 李广平 何清秀 +3 位作者 郭海琼 王昱璇 林治华 王远强 《重庆理工大学学报（自然科学）》 CAS 北大核心 2020年第4期66-75,共10页

利用与急性呼吸综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)具有高度同源性的人冠状病毒类木瓜蛋白酶(human coronavirus papain-like protease)晶体,对木瓜样蛋白酶(PLpro)进行同源模建,再通过该模建的蛋白对已上市或已进入临床试验的药物运用分子... 利用与急性呼吸综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)具有高度同源性的人冠状病毒类木瓜蛋白酶(human coronavirus papain-like protease)晶体,对木瓜样蛋白酶(PLpro)进行同源模建,再通过该模建的蛋白对已上市或已进入临床试验的药物运用分子对接的方法进行虚拟筛选和动力学模拟研究,以找到对SARS-CoV-2引起的新冠肺炎疾病(COVID-19)可能具有治疗作用的药物。经过筛选,共确定了11种与SARS-CoV-2 PLpro结合较好的候选药物。分子动力学模拟和结合自由能分析结果表明:疏水性相互作用在候选药物与PLpro的结合过程中具有重要作用,并且发现替诺福韦艾拉酚胺(Tenofovir alafenamide)具有对COVID-19治疗的潜力。虚拟筛选是一种快速且经济的药物筛选的方法,用此方法筛选得到的替诺福韦艾拉酚胺可能可以作为候选药物对COVID-19进行治疗。 展开更多

关键词 急性呼吸综合征冠状病毒2型 同源模建 虚拟筛选 分子对接 木瓜样蛋白酶

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猪流行性腹泻病毒通过病毒蛋白酶激活Caspase-3诱导细胞凋亡 被引量：5

4

作者 赵倩 陈晓娟 +2 位作者 邢雅玲 解晴 陈忠斌 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1171-1178,共8页

冠状病毒是一大类能够引起呼吸系统疾病,从而威胁人类健康的病毒.目前,对冠状病毒诱导细胞凋亡及其机制研究甚少.本研究以动物冠状病毒-猪流行性腹泻病毒(PEDV)为模型探讨冠状病毒诱导细胞凋亡效应及其可能作用机制.通过流式细胞术检测... 冠状病毒是一大类能够引起呼吸系统疾病,从而威胁人类健康的病毒.目前,对冠状病毒诱导细胞凋亡及其机制研究甚少.本研究以动物冠状病毒-猪流行性腹泻病毒(PEDV)为模型探讨冠状病毒诱导细胞凋亡效应及其可能作用机制.通过流式细胞术检测发现感染PEDV病毒后细胞凋亡率明显升高,且PEDV诱导细胞凋亡呈时间和剂量依赖性(P<0.05或P<0.01);进一步研究发现,冠状病毒木瓜样蛋白酶(PLP)在病毒引起凋亡过程中起重要作用.实验发现,转染PEDV PLP质粒后,caspase-3活化体表达水平明显升高.提示冠状病毒PLP蛋白酶通过激活caspase-3在病毒诱导细胞凋亡过程中起着关键作用.以上结果为研究人类冠状病毒PLP蛋白功能及其通过细胞凋亡调节宿主抗病毒天然免疫机制提供重要基础. 展开更多

关键词 冠状病毒 猪流行性腹泻病毒 木瓜样蛋白酶 凋亡 CASPASE-3

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泛素样蛋白ISG15抗冠状病毒感染作用的研究进展 被引量：1

5

作者 刘欣然 陈桐 +1 位作者 张煜 陈红 《华中师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期748-757,共10页

干扰素刺激基因15(ISG15,interferon-stimulated gene 15)是一种泛素样蛋白,在调节机体天然免疫和抗病毒感染过程中发挥重要作用。ISG15在针对流感病毒、乙型肝炎病毒、HIV病毒、埃博拉病毒、SARS病毒、中东呼吸综合征冠状病毒、巨细胞... 干扰素刺激基因15(ISG15,interferon-stimulated gene 15)是一种泛素样蛋白,在调节机体天然免疫和抗病毒感染过程中发挥重要作用。ISG15在针对流感病毒、乙型肝炎病毒、HIV病毒、埃博拉病毒、SARS病毒、中东呼吸综合征冠状病毒、巨细胞病毒等病毒的抗病毒研究已有文献报道。除此以外,最新的研究表明ISG15分子会在新型冠状病毒的木瓜蛋白酶样蛋白酶的作用下失活,从而抑制其抗病毒功能。因此抑制新型冠状病毒木瓜蛋白酶样蛋白酶,除能直接阻断病毒的生命周期、抑制病毒在体内的复制以外,同时也会提升ISG15分子水平,继而间接提升机体免疫能力,降低感染风险。该文介绍ISG15抗新冠病毒的过程,重点介绍ISG15抗冠状病毒作用的特异性,此外,总结新冠病毒通过木瓜蛋白酶样蛋白酶阻断ISG15介导的天然免疫实现免疫逃避的机制,并罗列了潜在的木瓜蛋白酶样蛋白酶的抑制剂。本文从ISG15抗病毒天然免疫的分子机制角度,总结抗SARS-CoV-2药物的最新进展,并对相关药物的研发前景进行展望。 展开更多

关键词 泛素样蛋白ISG15 ISG15修饰 木瓜蛋白酶样蛋白酶 冠状病毒

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通过MC-Tryptase-PAR-2-FLS途径探讨资木瓜总苷对K/B×N小鼠血清转移性关节炎的治疗作用 被引量：1

6

作者 周婷婷 陈先勇 +2 位作者 陈桂婷 曹楠 李世刚(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期395-399,409,共6页

目的:研究资木瓜总苷(TSCS)通过MC-Tryptase-PAR-2-FLS途径对K/B×N小鼠血清转移性关节炎的治疗作用。方法:小鼠随机分为6组:C57BL/6小鼠分别注射C57BL/6小鼠血清、K/B×N小鼠血清作为正常对照组和模型组,KitW-4Bao小鼠注射K/B&... 目的:研究资木瓜总苷(TSCS)通过MC-Tryptase-PAR-2-FLS途径对K/B×N小鼠血清转移性关节炎的治疗作用。方法:小鼠随机分为6组:C57BL/6小鼠分别注射C57BL/6小鼠血清、K/B×N小鼠血清作为正常对照组和模型组,KitW-4Bao小鼠注射K/B×N小鼠血清作为阴性对照组,移植肥大细胞(MC)的KitW-4Bao小鼠随机分为3组:阳性药物(色甘酸钠)组、TSCS低、高剂量组,均注射K/B×N小鼠血清。游标卡尺测量小鼠关节肿胀度,HE染色观察关节形态学变化,甲苯胺蓝染色观察MC脱颗粒变化,免疫组化和qRT-PCR检测关节组织中类胰蛋白酶(Tryptase)、蛋白酶激活受体2(PAR-2)表达情况,ELISA检测血清IgG及关节中炎症因子含量变化。结果:KitW-4Bao小鼠对血清转移性关节炎抵抗,移植MC后,对K/B×N小鼠血清恢复敏感,引发关节炎。与模型组相比,TSCS高剂量组小鼠关节肿胀度、关节炎评分、病理学评分、MC脱颗粒率、Tryptase和PAR-2表达、血清IgG和炎症因子水平显著降低。结论:MC在K/B×N小鼠血清转移性关节炎模型中发挥重要作用;TSCS通过抑制MC脱颗粒释放类胰蛋白酶,影响MC-Tryptase-PAR-2-FLS通路,治疗K/B×N小鼠血清转移性关节炎。 展开更多

关键词 肥大细胞 类胰蛋白酶 PAR-2 成纤维样滑膜细胞 资木瓜总苷 K/B×N小鼠血清转移性关节炎模型

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SARS-CoV-2 PLpro在对IFN-α应答的肝细胞中独立诱导过度炎症相关坏死性死亡 被引量：1

7

作者 任舒凡 林欣仪 +1 位作者 张婉玲 王通 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1729-1737,共9页

目的:探讨新型冠状病毒(SARS-CoV-2)木瓜蛋白酶样蛋白酶(PLpro)在对干扰素α(IFN-α)应答的肝细胞中所介导的功能蛋白质组改变及其效应机制。方法:构建稳定表达PLpro的三株单克隆Huh7肝细胞(PLpro1~3)和对应的空载细胞(NC),分别以IFN-... 目的:探讨新型冠状病毒(SARS-CoV-2)木瓜蛋白酶样蛋白酶(PLpro)在对干扰素α(IFN-α)应答的肝细胞中所介导的功能蛋白质组改变及其效应机制。方法:构建稳定表达PLpro的三株单克隆Huh7肝细胞(PLpro1~3)和对应的空载细胞(NC),分别以IFN-α刺激各株细胞建立处于IFN-α应答状态的肝细胞模型,采用数据非依赖质谱分析PLpro和NC组的定量蛋白质组,以生物信息学分析,预测PLpro对IFN-α应答性肝细胞的作用机制,并采用RT-qPCR、Western blot、细胞促炎因子水平分析、乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性分析和Annexin V-Alexa Fluor 647/PI凋亡检测等方法对上述机制进行生物学验证。结果:IFN-α可显著上调空载Huh7细胞株(NC细胞)中的ISG化蛋白(P<0.01),而相同条件下,PLpro细胞蛋白的ISG(IFN-stimulated gene)化修饰被显著下调(P<0.01),表明PLpro细胞株表达了具去ISG化活性PLpro,提示本研究成功建立了细胞模型。质谱分析鉴定和定量得到5619个交集蛋白质和149个差异表达蛋白质,IPA上游因子分析和生物学验证表明,PLpro可显著激活IFN-α应答性Huh7细胞中的IFN-α等7个炎症细胞因子的下游效应蛋白(P<0.01),然而,PLpro并不能在蛋白和mRNA水平显著上调这些细胞因子的丰度(P>0.05)。验证性实验结果表明,在对IFN-α应答的Huh7细胞中,PLpro可显著促进细胞坏死(P<0.01)和诱导细胞毒性(P<0.01)。结论:在对IFN-α应答的肝细胞中,SARS-CoV-2 PLpro可不经上调炎症细胞因子而独立上调这些细胞因子的下游效应蛋白质,并介导肝细胞坏死性死亡。 展开更多

关键词 新型冠状病毒 木瓜蛋白酶样蛋白酶 干扰素Α 细胞因子 细胞坏死

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猪流行性腹泻病毒(PEDV)与抗病毒天然免疫 被引量：25

8

作者 张百灵 陈建飞 +2 位作者 邢雅玲 冯力 陈忠斌 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期516-523,共8页

猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是引起猪流行性腹泻病等肠道疾病的一种动物冠状病毒.PEDV与宿主系统相互作用,特别是其对宿主抗病毒天然免疫调节作用和机制是目前动物冠状病毒研究的基础科学问题之一.基于作... 猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是引起猪流行性腹泻病等肠道疾病的一种动物冠状病毒.PEDV与宿主系统相互作用,特别是其对宿主抗病毒天然免疫调节作用和机制是目前动物冠状病毒研究的基础科学问题之一.基于作者近几年来对人类重要冠状病毒对宿主抗病毒天然免疫系统调节作用的研究,本文对PEDV基因组与编码蛋白主要功能以及PEDV调节宿主抗病毒天然免疫反应及其可能机制的进展和现状进行了分析.与人类冠状病毒相似,PEDV编码的木瓜样蛋白酶(papain-like protease,PLP)是一个多功能蛋白酶,除了蛋白酶活性外,还具有去泛素化酶(DUB)活性和宿主干扰素拮抗活性,是PEDV编码的一种新型病毒来源DUB和宿主干扰素拮抗蛋白.这些研究为阐明PEDV对宿主抗病毒天然免疫反应调节作用和其致病机制提供了重要的理论依据,为研制新型PEDV免疫防治措施提供了重要理论基础. 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 木瓜样蛋白酶 去泛素化酶 抗病毒天然免疫反应 干扰素

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人类冠状病毒调节宿主抗病毒天然免疫分子机制 被引量：4

9

作者 孙莉 刘殿波 +3 位作者 杨宇东 邢雅玲 陈晓娟 陈忠斌 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第3期239-244,共6页

SARS冠状病毒和正在全球流行的猪源H1N1型流感病毒等人类新发呼吸道病毒对人类生命健康构成严重威胁.人类重要呼吸道病毒与宿主抗病毒天然免疫的关系是近年来研究热点.SARS冠状病毒等很多RNA病毒能够编码某种蛋白质,抑制干扰素表达以及... SARS冠状病毒和正在全球流行的猪源H1N1型流感病毒等人类新发呼吸道病毒对人类生命健康构成严重威胁.人类重要呼吸道病毒与宿主抗病毒天然免疫的关系是近年来研究热点.SARS冠状病毒等很多RNA病毒能够编码某种蛋白质,抑制干扰素表达以及干扰素介导的抗病毒信号通路.人类冠状病毒木瓜样蛋白酶(papain-like protease,PLP)利用其自身去泛素化酶(DUB)活性,使干扰素表达通路中重要调节蛋白发生去泛素化,从而抑制干扰素信号传导.同时,PLP蛋白酶通过阻碍干扰素表达信号通路中最新发现的重要调节蛋白ERIS(也称MITA/STING)二聚化,使其失活并丧失激活干扰素通路的功能,这些发现对于阐明人类重要呼吸道病毒对宿主细胞抗病毒天然免疫反应的调节作用及其机制具有重要意义,为人类新发病毒致病机理、免疫防治以及抗病毒药物研究提供新的思路. 展开更多

关键词 冠状病毒 木瓜样蛋白酶 干扰素 MITA/ERIS 抗病毒天然免疫反应

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食品中总膳食纤维测定方法的优化 被引量：2

10

作者 徐瑞 于安芬 +3 位作者 许文艳 李瑞琴 白滨 陶海霞 《甘肃农业科技》 2017年第12期39-40,共2页

对酶重量法测定膳食纤维含量的试验条件进行了优化。以BCR-383四季豆标准样品为材料,将已有AACC32-07方法中的1.0 g样品称样量降低至0.5 g,将进口蛋白酶(P390)优化为木瓜蛋白酶。在降低成本的同时,试验结果与未优化的一致。

关键词 总膳食纤维 称样量 蛋白酶(P390) 木瓜蛋白酶

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法匹拉韦抗新型冠状病毒的机制研究进 展 被引量：3

11

作者 阿热依·巴哈提 王均琪 +6 位作者 祝娜 白颖璐 曹靖宜 张明烁 张严 李志勇 黄秀兰 《医药导报》 CAS 北大核心 2022年第11期1651-1659,共9页

新型冠状病毒肺炎(COVID-19)是一种由严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)所致的传染病,自2019年末以来在全球迅速传播。当前科学界正进行前所未有的努力,研究该病毒感染的潜在机制并提出合理的临床应用药物,以降低COVID-19发病... 新型冠状病毒肺炎(COVID-19)是一种由严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)所致的传染病,自2019年末以来在全球迅速传播。当前科学界正进行前所未有的努力,研究该病毒感染的潜在机制并提出合理的临床应用药物,以降低COVID-19发病率。法匹拉韦(favipiravir)是一种RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)抑制剂,在中国被批准用于治疗COVID-19。该文概述法匹拉韦通过结合SARS-CoV-23种关键病毒酶RdRp、3-胰凝乳蛋白酶样半胱氨酸蛋白酶(3CLpro)和木瓜蛋白酶样蛋白酶(PLpro)抑制SARS-CoV-2的机制,并综述法匹拉韦与上述病毒蛋白酶的分子对接数据。 展开更多

关键词 法匹拉韦 新型冠状病毒肺炎 RNA依赖性RNA聚合酶 3-胰凝乳蛋白酶样半胱氨酸蛋白酶 木瓜蛋白酶样蛋白酶

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