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麦胚无细胞蛋白合成系统研究进展 被引量:7
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作者 刘永祥 陈思远 +3 位作者 张逸婧 曹小舟 陈海娟 沈新春 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第17期379-383,共5页
小麦胚芽作为面粉加工过程中的副产物,具有很高的生物活性,其中包含许多蛋白质合成必需的活性成分,如蛋白质合成场所、蛋白因子及其他相关酶系等。本文综述了在后基因组时代,随着生物技术的发展,以小麦胚芽为原料的无细胞蛋白合成系统... 小麦胚芽作为面粉加工过程中的副产物,具有很高的生物活性,其中包含许多蛋白质合成必需的活性成分,如蛋白质合成场所、蛋白因子及其他相关酶系等。本文综述了在后基因组时代,随着生物技术的发展,以小麦胚芽为原料的无细胞蛋白合成系统在结构蛋白、毒性蛋白和功能蛋白表达方面的优势,阐述了其在蛋白质组学研究和生物制药等领域的重要应用潜力,以期小麦胚芽的深层次开发利用提供了重要依据。 展开更多
关键词 小麦胚芽 蛋白合成因子 麦胚无细胞蛋白合成系统 深度加工
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用无细胞蛋白合成系统重组表达恶性疟原虫蛋白的研究 被引量:1
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作者 曹俊 金子修 +4 位作者 坪井敬文 鸟居本美 诸葛洪祥 夏超明 高琪 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期816-819,823,共5页
目的探索无细胞麦芽体外蛋白合成系统重组表达恶性疟原虫蛋白可行性,并检测用重组蛋白制备的免疫血清对原虫蛋白的特异性反应。方法将目的蛋白PfRON2的部分片断克隆连接到重组表达载体后,用无细胞麦芽体外蛋白合成系统进行重组表达并纯... 目的探索无细胞麦芽体外蛋白合成系统重组表达恶性疟原虫蛋白可行性,并检测用重组蛋白制备的免疫血清对原虫蛋白的特异性反应。方法将目的蛋白PfRON2的部分片断克隆连接到重组表达载体后,用无细胞麦芽体外蛋白合成系统进行重组表达并纯化,用纯化的重组蛋白免疫小鼠制备免疫血清,并用免疫斑点实验(Western blot)和免疫荧光抗体实验(IFA)检测该血清对恶性疟蛋白的特异性反应。结果成功克隆的重组质粒能在无细胞麦芽体外蛋白合成系统中生成大小相符的GST融合蛋白,并能较好地纯化。免疫斑点实验中,用该重组蛋白制备的免疫血清能检测到重组蛋白和恶性疟目标蛋白,免疫荧光抗体实验显示该免疫血清能成功地标记恶性疟目标蛋白所在部位。结论无细胞麦芽体外蛋白合成系统可应用于恶性疟原虫蛋白的重组表达,获得的免疫血清能特异性识别疟原虫蛋白。 展开更多
关键词 无细胞蛋白合成 恶性疟原虫 重组表达 免疫血清
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无细胞蛋白合成系统中细胞提取物和模板DNA的研究进展
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作者 许博楠 冯佳 +1 位作者 周见庭 蒋建兰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期100-114,共15页
无细胞蛋白合成系统(cell-free protein synthesis,CFPS)是一种体外蛋白质合成的高效平台,与体内蛋白合成系统相比,它突破了活细胞的限制,使蛋白合成反应可以在试管中进行,具有灵活、高效、可控性强的特点。近几年来,合成生物学领域新... 无细胞蛋白合成系统(cell-free protein synthesis,CFPS)是一种体外蛋白质合成的高效平台,与体内蛋白合成系统相比,它突破了活细胞的限制,使蛋白合成反应可以在试管中进行,具有灵活、高效、可控性强的特点。近几年来,合成生物学领域新技术的涌现推动了CFPS系统的快速发展,尤其在细胞提取物和模板DNA方面。细胞提取物和模板DNA是CFPS系统中不可或缺的重要组成,很大程度上决定了无细胞反应的效率和成本。本文综述了CFPS系统中细胞提取物和模板DNA方面的研究进展,主要介绍了最近新开发的细胞提取物系统的特点和应用前景,以及质粒DNA模板和线性DNA模板的研究进展。 展开更多
关键词 无细胞蛋白合成 细胞提取物 质粒DNA模板 线性DNA模板
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无细胞蛋白质合成:从基础研究到工程应用 被引量:2
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作者 后佳琦 姜楠 +1 位作者 马莲菊 卢元 《合成生物学》 CSCD 2022年第3期465-486,共22页
无细胞蛋白质合成是无细胞合成生物学的技术核心,亦被称为体外蛋白质翻译,是一种用于补充基于细胞的蛋白质表达的技术。无细胞蛋白质合成系统无需完整的活细胞就可以在体外受控环境中模拟整个细胞的转录和翻译过程,并允许对单个成分和... 无细胞蛋白质合成是无细胞合成生物学的技术核心,亦被称为体外蛋白质翻译,是一种用于补充基于细胞的蛋白质表达的技术。无细胞蛋白质合成系统无需完整的活细胞就可以在体外受控环境中模拟整个细胞的转录和翻译过程,并允许对单个成分和反应网络进行详细深入的研究。因此,无细胞蛋白质合成作为一种平台技术,有望克服当前胞内生产系统中因为细胞膜约束带来的表达局限性,在基础科学研究和应用科学研究中具有广阔的前景。无细胞系统操作简单、便于控制,相对于体内蛋白质表达,其优势还包括其开放特性、消除对活细胞的依赖以及将所有系统物质能量集中在目标蛋白质生产上。本文首先概述了无细胞蛋白质合成系统的组成及基于不同组件类型的无细胞蛋白质合成系统的发展,包括以不同生物提取物为基础的系统以及使用重组元素的蛋白质合成体系。之后介绍了以分批反应、连续交换为代表的无细胞蛋白质合成系统的不同反应模式,阐述了无细胞在基因电路、蛋白质工程和人工“生命体系”构建中的应用和研究进展。其中,基因电路主要概述了无细胞技术在原型设计、生物传感、代谢工程三个方面的最新应用;蛋白质工程依次罗列了无细胞技术在膜蛋白、类病毒颗粒、翻译后修饰、非天然氨基酸嵌入以及蛋白质进化等方面的应用拓展;在人工“生命体系”构建中,噬菌体的合成和人工细胞的构筑开辟了新的前沿领域。最后文章分析了无细胞蛋白质合成系统在未来进一步的科学研究和工业化应用中面临的机遇和挑战。 展开更多
关键词 无细胞蛋白合成 基因电路 蛋白质工程 人工细胞
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融合人工智能和自动化的蛋白质设计表征实验教学实践 被引量:1
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作者 姜雨佳 于洋 《实验技术与管理》 北大核心 2025年第3期190-197,共8页
在生物化工研究向智能化、自动化转型背景下,为生物化工专业方向一年级研究生开发了名为“蛋白质计算设计与表征”的实验课程。该课程基于人工智能方法的蛋白质计算设计与无细胞蛋白质合成及使用自动液体工作站等先进仪器进行高通量筛... 在生物化工研究向智能化、自动化转型背景下,为生物化工专业方向一年级研究生开发了名为“蛋白质计算设计与表征”的实验课程。该课程基于人工智能方法的蛋白质计算设计与无细胞蛋白质合成及使用自动液体工作站等先进仪器进行高通量筛选等实验技术相结合,完成整个蛋白质工程工作流程,即从计算机设计和基因合成到蛋白质表达、纯化和功能表征。通过融合蛋白质计算(“干实验”)和蛋白质表达(“湿实验”),该课程使学生在掌握基本生化操作的同时,培养跨学科高效解决问题能力。通过广泛接触自动化仪器,学生可以获得与自动化生化实验室相关的实践经验,是一种将新兴技术和跨学科方法融入生物化工研究生实践教学的有效模式。 展开更多
关键词 生物化工实验课程 蛋白质计算设计 无细胞蛋白合成 高通量筛选
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人造细胞内蛋白质合成的研究进展
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作者 赵晶晶 王雪靖 +1 位作者 穆韡 韩晓军 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2021年第2期121-134,共14页
无细胞蛋白质合成(cell-free protein synthesis,CFPS)是一种在体外快速合成目标蛋白质的方法,通过构建含有CFPS系统的人造细胞,能够实现蛋白质的高通量表达和功能性膜蛋白的体外重构.本文详细综述了4种CFPS系统(包括大肠杆菌裂解液、... 无细胞蛋白质合成(cell-free protein synthesis,CFPS)是一种在体外快速合成目标蛋白质的方法,通过构建含有CFPS系统的人造细胞,能够实现蛋白质的高通量表达和功能性膜蛋白的体外重构.本文详细综述了4种CFPS系统(包括大肠杆菌裂解液、兔网织红细胞裂解液、小麦胚芽提取物、酵母提取物)的适用范围和优缺点,总结了基于CFPS系统构建的人造细胞体系内蛋白质合成的研究现状,以及该领域面临的挑战及未来的发展方向. 展开更多
关键词 无细胞蛋白合成系统 磷脂囊泡类细胞结构 聚合物囊泡类细胞结构 蛋白质体类细胞结构
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基于无细胞体系的生物合成代谢模块设计、构建与快速途径原型
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作者 唐士茗 胡纪元 +2 位作者 郑穗平 韩双艳 林影 《合成生物学》 CSCD 2022年第6期1250-1261,共12页
随着代谢工程及合成生物学技术的发展,化学品高效生物合成与绿色制造成为可能。高效生物合成体系的设计与构建是绿色生物制造的核心,其理论体系建立及关键技术突破,将为实现绿色生物制造领域高效生产及资源与环境可持续发展提供有力支... 随着代谢工程及合成生物学技术的发展,化学品高效生物合成与绿色制造成为可能。高效生物合成体系的设计与构建是绿色生物制造的核心,其理论体系建立及关键技术突破,将为实现绿色生物制造领域高效生产及资源与环境可持续发展提供有力支撑。本文借助代谢途径模块设计的案例,探讨化合物生物合成过程中潜在通用模块设计原则、设计工具,以及基于无细胞蛋白合成体系的代谢模块快速构建及测试的方法,将突破生物合成途径多基因、多模块“设计-构建-测试”(Design-Build-Test cycle,DBT cycle)高效循环迭代的技术瓶颈。结合机器学习方法的应用,将使“设计-构建-测试”向“设计-构建-测试-学习”(Design-Build-Test-Learn cycle,DBTL cycle)进一步延伸,对高效合成模块的“精准-鲁棒性”设计与构建、推动合成生物学科学与技术发展具有重要意义。 展开更多
关键词 生物合成模块 无细胞蛋白合成 无细胞快速原型 机器学习
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膜蛋白的表达:在无细胞体系中实现功能性表达、折叠和组装 被引量:3
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作者 李剑勇 满亚辉 +2 位作者 陈倩 裴迪 吴文健 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2018年第4期389-400,共12页
膜蛋白在人类和其他物种的生命活动中都起着至关重要的作用.在已完成测序的基因组中,膜蛋白占据30%.药物作用靶向位点、细胞之间的信号传递以及对外界环境的探测等功能,大多是通过生物膜上的特殊膜受体蛋白实现的.膜蛋白研究在工业、环... 膜蛋白在人类和其他物种的生命活动中都起着至关重要的作用.在已完成测序的基因组中,膜蛋白占据30%.药物作用靶向位点、细胞之间的信号传递以及对外界环境的探测等功能,大多是通过生物膜上的特殊膜受体蛋白实现的.膜蛋白研究在工业、环境、国防、医学等领域具有重大意义.嗅觉受体蛋白是一类典型的膜蛋白,属于G蛋白偶联受体家族.嗅觉受体蛋白调控着生物的食物寻找、危险趋避和求偶行为.其主要分布于脊椎动物鼻腔和昆虫触角.嗅觉受体蛋白可以直接识别气味分子,将生物信号转化为电信号,最终传递至神经中枢,进而做出相关应答.膜蛋白的获取并不容易.天然组织中的膜蛋白含量太低不足以支撑学术研究.异源表达难以实现膜蛋白整合上膜,这给膜蛋白的结构和功能研究带来很大挑战.无细胞蛋白质合成系统是一个开放体系,且不依赖细胞活性,是体外表达蛋白质的有效方法.通过无细胞蛋白合成体系,在体外实现膜蛋白二聚体的自组装,将为膜蛋白研究带来全新突破.本文总结了用于无细胞表达的膜蛋白研究进展. 展开更多
关键词 嗅觉受体蛋白 无细胞蛋白合成系统 蛋白 生物传感 信号传导
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限制性内切酶的无细胞快速制备研究 被引量:1
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作者 刘晚秋 季向阳 +2 位作者 许慧玲 卢屹聪 李健 《合成生物学》 CSCD 2023年第4期840-851,共12页
限制性内切酶在分子生物学研究中是一类重要的工具酶,目前主要由异源生物合成的方式进行表达与生产,由于它们对特定的DNA序列(即酶切位点)具有切割活性,在异源表达时会对宿主产生较高的细胞毒性。而无细胞生物合成体系具有操作快捷、灵... 限制性内切酶在分子生物学研究中是一类重要的工具酶,目前主要由异源生物合成的方式进行表达与生产,由于它们对特定的DNA序列(即酶切位点)具有切割活性,在异源表达时会对宿主产生较高的细胞毒性。而无细胞生物合成体系具有操作快捷、灵活高效、无细胞毒性等优势,因此,本研究利用无细胞蛋白合成(cellfree protein synthesis,CFPS)技术进行限制性内切酶的表达制备。本课题组选择3种限制性内切酶Eco RⅠ、BamHⅠ和BsaⅠ作为研究对象,构建线性DNA为表达模板,无需甲基化酶对宿主的保护,在6 h内即可完成蛋白表达。经亲和色谱与凝胶色谱两步纯化,得到了纯度高(95%左右)、酶活相当(EcoRⅠ3.7×10^(5)~3.7×10^(6)U/mg,BamHⅠ8.3×10^(2)~4.1×10^(3)U/mg,BsaⅠ4.4×10^(5)~4.4×10^(6)U/mg)的目标蛋白。同时,建立了限制性内切酶的实时酶活检测方法,将有助于限制性内切酶的催化和快速筛选研究。本研究所开发的限制性内切酶无细胞表达制备体系,从基因模板构建到纯化蛋白所需时间短(1~2 d)、蛋白产量高(32.5~130 mg/L无细胞反应)、制备效率高(1.3×10^(5)~5.7×10^(8)U/L无细胞反应),具有较好的普适性,为限制性内切酶的研发与制备生产提供了新的思路。 展开更多
关键词 限制性内切酶 无细胞蛋白合成 蛋白制备 酶活检测 合成生物学
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激素和活性多肽
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《生物技术通报》 CAS CSCD 1996年第6期61-63,共3页
962161 用一种无细胞系统合成生物学活性的人神经生长因子和脑衍生的神经营养因子[英]/Takeshita,T.//J.Ferment. Bioeng.-1996,81(1).
关键词 生物学活性 人神经生长因子 神经营养因子 黄体酮 启动子 序列分析 无细胞蛋白合成系统 质粒DNA 选择性修饰 生物转化
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