无细胞系统的基因表达与蛋白质合成 被引量：3

1

作者 王景林 高培基 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1998年第5期422-425,共4页

无细胞翻译———利用细胞提取液在体外合成蛋白质，已是国外分子生物学实验室的一项常规技术，但在国内此项技术的利用却几乎是空白．对体外无细胞系统的特性、功能、优缺点及其进展等进行了全面的介绍，以期使国内学者了解和利用这一... 无细胞翻译———利用细胞提取液在体外合成蛋白质，已是国外分子生物学实验室的一项常规技术，但在国内此项技术的利用却几乎是空白．对体外无细胞系统的特性、功能、优缺点及其进展等进行了全面的介绍，以期使国内学者了解和利用这一方便而有效的表达系统，进行应用生物化学与分子生物学的实验研究． 展开更多

关键词 无细胞系统 基因表达 蛋白质合成

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无细胞系统原位制备蛋白质芯片及其应用 被引量：7

2

作者 章杰 刘琼明 +1 位作者 许丹科 贺福初 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第4期391-397,共7页

主要介绍了目前在生物芯片表面进行蛋白质无细胞表达与定向制备蛋白质芯片的研究进展,包括各种基因植入芯片的方法、蛋白质体外不同表达的途径、蛋白质固定的策略以及可能的应用发展前景等.蛋白质芯片以其高通量、高灵敏和检测迅速等优... 主要介绍了目前在生物芯片表面进行蛋白质无细胞表达与定向制备蛋白质芯片的研究进展,包括各种基因植入芯片的方法、蛋白质体外不同表达的途径、蛋白质固定的策略以及可能的应用发展前景等.蛋白质芯片以其高通量、高灵敏和检测迅速等优点正成为蛋白质组学研究中的重要工具之一.蛋白质的高效表达与纯化、蛋白质在芯片表面的有效固定与蛋白质活性的保持等内容是蛋白质芯片技术发展的关键.采用纳米生物技术与无细胞表达系统,已经可以在生物芯片表面通过植入基因的方式制备相关的蛋白质芯片,从而为蛋白质芯片的原位制备开辟了新的方向. 展开更多

关键词 蛋白质芯片 无细胞蛋白质表达 体外蛋白质表达 原位制备蛋白质阵列 无细胞系统

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微紫青霉CBHⅠ基因(Cbh1)在体外无细胞系统中的表达 被引量：3

3

作者 王景林 高培基 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第6期885-887,共3页

以含Ｃｂｈ１的ｐＵＣ１８－１８１ ＤＮＡ 为模板，经ＰＣＲ扩增得到带有Ｔ７启动子的Ｃｂｈ１片段，随后在缺乏糖基化的兔网织红细胞裂解液中得到成功表达，表达量为２１．７ μｇ／ｍ ｌ．得到的ＣＢＨ Ⅰ虽未经糖基化修饰，却可水... 以含Ｃｂｈ１的ｐＵＣ１８－１８１ ＤＮＡ 为模板，经ＰＣＲ扩增得到带有Ｔ７启动子的Ｃｂｈ１片段，随后在缺乏糖基化的兔网织红细胞裂解液中得到成功表达，表达量为２１．７ μｇ／ｍ ｌ．得到的ＣＢＨ Ⅰ虽未经糖基化修饰，却可水解对硝基酚－β－Ｄ－纤维二糖苷（ｐＮＰＣ），对ｐＮＰＣ的ＫＭ 和Ｖｍ ａｘ分别为０．８２ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ和０．０６７ μｍ ｏｌ·ｍ ｉｎ－ １·μｇ－ １，但对羧甲基纤维素钠（ＣＭＣ－Ｎａ）无酶活力．这表明，糖基化修饰可能不影响胞外纤维素酶的活力． 展开更多

关键词 微紫青霉 无细胞表达系统 Cbh1 基因表达

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无细胞蛋白质合成系统的研究进展 被引量：5

4

作者 徐志南 陈海琴 +1 位作者 汪家权 岑沛霖 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期289-293,共5页

无细胞蛋白质合成系统是一种以外源mRNA或DNA为模板 ,通过在细胞抽提物的酶系中补充底物和能源物质来合成蛋白质的体外系统 .与传统的体内重组表达系统相比 ,体外无细胞合成系统具有多种优点 ,如可表达对细胞有毒害作用或含有非天然氨基... 无细胞蛋白质合成系统是一种以外源mRNA或DNA为模板 ,通过在细胞抽提物的酶系中补充底物和能源物质来合成蛋白质的体外系统 .与传统的体内重组表达系统相比 ,体外无细胞合成系统具有多种优点 ,如可表达对细胞有毒害作用或含有非天然氨基酸 (如D 氨基酸 )的特殊蛋白质 ,能够直接以PCR产物作为模板同时平行合成多种蛋白质 ,开展高通量药物筛选和蛋白质组学的研究等 .本文综述了无细胞蛋白质合成系统的发展历史、系统中合成蛋白质所需的能量供应、遗传模板的稳定性和微型无细胞生物反应器等多方面的研究 ,并探讨了无细胞蛋白质合成系统中存在的难点。 展开更多

关键词 蛋白质 多肽 生物合成 无细胞系统

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大肠杆菌无细胞蛋白质合成系统的初步研究 被引量：2

5

作者 陈海琴 徐志南 +2 位作者 汪诚 廖玉华 岑沛霖 《浙江大学学报（工学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第5期843-847,共5页

在近几年来被广泛研究和应用的大肠杆菌无细胞蛋白质合成系统中,大肠杆菌抽提物的制备、底物浓度的配比以及能量再生体系的选择是最关键的几个因素.以绿色荧光蛋白(GFP)为报导基因,以缺失核酸酶I基因的大肠杆菌A19为实验菌株,通过对大... 在近几年来被广泛研究和应用的大肠杆菌无细胞蛋白质合成系统中,大肠杆菌抽提物的制备、底物浓度的配比以及能量再生体系的选择是最关键的几个因素.以绿色荧光蛋白(GFP)为报导基因,以缺失核酸酶I基因的大肠杆菌A19为实验菌株,通过对大肠杆菌无细胞抽提物制备过程中菌体收集时间、细胞破碎压力、后处理条件等参数的摸索和确定、无细胞蛋白质合成系统中底物浓度配比的正交实验优化以及系统中能量再生体系的比较和选择,制备得到了GFP表达量为154μg/mL的大肠杆菌无细胞蛋白质合成系统,与优化前相比产量提高了29倍. 展开更多

关键词 蛋白质 生物合成 无细胞系统 绿色荧光蛋白(GFP)

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麦胚无细胞蛋白合成系统研究进展 被引量：7

6

作者 刘永祥 陈思远 +3 位作者 张逸婧 曹小舟 陈海娟 沈新春 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第17期379-383,共5页

小麦胚芽作为面粉加工过程中的副产物,具有很高的生物活性,其中包含许多蛋白质合成必需的活性成分,如蛋白质合成场所、蛋白因子及其他相关酶系等。本文综述了在后基因组时代,随着生物技术的发展,以小麦胚芽为原料的无细胞蛋白合成系统... 小麦胚芽作为面粉加工过程中的副产物,具有很高的生物活性,其中包含许多蛋白质合成必需的活性成分,如蛋白质合成场所、蛋白因子及其他相关酶系等。本文综述了在后基因组时代,随着生物技术的发展,以小麦胚芽为原料的无细胞蛋白合成系统在结构蛋白、毒性蛋白和功能蛋白表达方面的优势,阐述了其在蛋白质组学研究和生物制药等领域的重要应用潜力,以期小麦胚芽的深层次开发利用提供了重要依据。 展开更多

关键词 小麦胚芽 蛋白合成因子 麦胚无细胞蛋白合成系统 深度加工

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非洲爪蟾卵非细胞体系在药物筛选方面应用初探

7

作者 田辉凯 姚小皓 +1 位作者 张红梅 李学军 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期251-256,共6页

目的　为寻找具有分子水平、特异、快速、可用来筛选具有调节凋亡作用药物的方法 ,非洲爪蟾卵非细胞体系 (XS 2 0 0 )作为一种药物的筛选平台 ,研究其作为筛选药物方法的可能性。对体系内凋亡过程的影响进行了初步的研究。方法　药物 (... 目的　为寻找具有分子水平、特异、快速、可用来筛选具有调节凋亡作用药物的方法 ,非洲爪蟾卵非细胞体系 (XS 2 0 0 )作为一种药物的筛选平台 ,研究其作为筛选药物方法的可能性。对体系内凋亡过程的影响进行了初步的研究。方法　药物 (激素 :雌激素及其部分拮抗剂 ,中药提取物 :灵芝三萜和多糖 ,小分子药物 :阿司匹林、水杨酸钠和乙酰唑胺 ,维生素C及重组蛋白rhTFAR19)预先与XS 2 0 0共孵育 ,然后加入阈剂量 (0 .0 6 2 5 μmol·L- 1)的细胞色素C和小鼠肝细胞核 ,提取总DNA进行电泳鉴定。结果　rhTFAR19对XS 2 0 0凋亡过程有直接的促进作用 ,而其他药物则无明显作用。结论　XS 2 0 0可以成为一个良好的分子水平的药物筛选平台 ,特异筛选具有调节凋亡作用的药物。 展开更多

关键词 无细胞系统 凋亡 药物筛选

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鼠PrP的无细胞表达及其多克隆抗体的制备 被引量：1

8

作者 汤鑫 鞠传静 +9 位作者 梁斌斌 李忠义 孟轲音 刘文森 郝镯 栾世慧 张晓晶 李莎 沈景林 万家余 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期327-329,332,共4页

目的成功的表达鼠的PrP,制备特异性的兔抗PrP多克隆抗体。方法以BALB/c小鼠肝脏基因组DNA作为模板运用PCR技术成功扩增了PrP23-231,将其克隆到pRSET原核表达载体中,构建重组表达载体pRSET PrP23-231。将该重组载体进行无细胞表达,然后... 目的成功的表达鼠的PrP,制备特异性的兔抗PrP多克隆抗体。方法以BALB/c小鼠肝脏基因组DNA作为模板运用PCR技术成功扩增了PrP23-231,将其克隆到pRSET原核表达载体中,构建重组表达载体pRSET PrP23-231。将该重组载体进行无细胞表达,然后对成功表达的PrP进行纯化,然后用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体,并进行Western-blot鉴定。结果通过Western-blot鉴定,有约30kD的目的条带,证明蛋白成功表达,并进行其多克隆抗体的制备并进行Western-blot鉴定,有约30kD的目的条带,证明成功制备了PrP的多克隆抗体。结论成功表达了PrP23-231,并且成功制备了其多克隆抗体,为进一步研究PrP的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 朊蛋白 无细胞表达系统 多克隆抗体

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无细胞蛋白质芯片的制备及其应用 被引量：2

9

作者 狄翠霞 张红 +1 位作者 杨立娜 王小虎 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期28-34,共7页

蛋白质芯片是生物技术和功能蛋白组学的关键技术之一.传统的生产蛋白的方法周期长且费用高.无细胞蛋白质合成系统和蛋白芯片的结合,避免了基因的克隆、蛋白的表达、纯化和保存等繁琐过程,使整个无细胞蛋白芯片的制备过程快捷、迅速和高... 蛋白质芯片是生物技术和功能蛋白组学的关键技术之一.传统的生产蛋白的方法周期长且费用高.无细胞蛋白质合成系统和蛋白芯片的结合,避免了基因的克隆、蛋白的表达、纯化和保存等繁琐过程,使整个无细胞蛋白芯片的制备过程快捷、迅速和高效.本文详细综述了无细胞蛋白质合成系统及其分类、无细胞表达系统在制备蛋白质芯片方面的研究进展,并探讨了无细胞蛋白质芯片在蛋白组学研究中的最新应用. 展开更多

关键词 蛋白质芯片 无细胞蛋白质表达系统 体外蛋白质表达

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利用细胞培养物产生的酶生产癌症药物前体

10

作者 李思经 《生物技术通报》 CAS CSCD 1989年第10期15-15,共1页

广泛地用于癌症化学治疗的二聚物吲哚生物碱长春新碱和长春花碱由等克分子当量的单体长春花碱和文多林组成。目前,是以费时而昂贵的提取方法从完整长春花植物中获得长春新碱和长春花碱的。加拿大多伦多大学 J.I.Smith

关键词 药物前体 长春花碱 细胞培养物 化学治疗 吲哚生物碱 细胞悬浮培养 二聚物 长春花新碱 无细胞系统 二聚体

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膜蛋白的表达:在无细胞体系中实现功能性表达、折叠和组装 被引量：3

11

作者 李剑勇 满亚辉 +2 位作者 陈倩 裴迪 吴文健 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2018年第4期389-400,共12页

膜蛋白在人类和其他物种的生命活动中都起着至关重要的作用.在已完成测序的基因组中,膜蛋白占据30%.药物作用靶向位点、细胞之间的信号传递以及对外界环境的探测等功能,大多是通过生物膜上的特殊膜受体蛋白实现的.膜蛋白研究在工业、环... 膜蛋白在人类和其他物种的生命活动中都起着至关重要的作用.在已完成测序的基因组中,膜蛋白占据30%.药物作用靶向位点、细胞之间的信号传递以及对外界环境的探测等功能,大多是通过生物膜上的特殊膜受体蛋白实现的.膜蛋白研究在工业、环境、国防、医学等领域具有重大意义.嗅觉受体蛋白是一类典型的膜蛋白,属于G蛋白偶联受体家族.嗅觉受体蛋白调控着生物的食物寻找、危险趋避和求偶行为.其主要分布于脊椎动物鼻腔和昆虫触角.嗅觉受体蛋白可以直接识别气味分子,将生物信号转化为电信号,最终传递至神经中枢,进而做出相关应答.膜蛋白的获取并不容易.天然组织中的膜蛋白含量太低不足以支撑学术研究.异源表达难以实现膜蛋白整合上膜,这给膜蛋白的结构和功能研究带来很大挑战.无细胞蛋白质合成系统是一个开放体系,且不依赖细胞活性,是体外表达蛋白质的有效方法.通过无细胞蛋白合成体系,在体外实现膜蛋白二聚体的自组装,将为膜蛋白研究带来全新突破.本文总结了用于无细胞表达的膜蛋白研究进展. 展开更多

关键词 嗅觉受体蛋白 无细胞蛋白质合成系统 膜蛋白 生物传感 信号传导

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无细胞合成策略在生物材料研究中的应用 被引量：1

12

作者 吉博涛 钱志刚 夏小霞 《合成生物学》 CSCD 2022年第4期658-675,共18页

生物材料凭借其可再生、可降解及生物相容性好等诸多优点,在生物技术及生物医学应用领域备受关注。基于“自下而上”设计理念的无细胞表达系统,作为细胞合成体系的有益补充,大力加速了生物材料的开发生产及其应用范围,并成为了材料合成... 生物材料凭借其可再生、可降解及生物相容性好等诸多优点,在生物技术及生物医学应用领域备受关注。基于“自下而上”设计理念的无细胞表达系统,作为细胞合成体系的有益补充,大力加速了生物材料的开发生产及其应用范围,并成为了材料合成生物学发展的前沿。本文介绍了无细胞表达系统的独特优势,并列举了其用于生物材料可持续生产的策略、与材料结合后的创新设计、赋予材料功能化和智能化方法,以及通过加速设计-构建-测试(DBT)循环来促进新型生物材料开发的各项应用,而这些例证都充分表明无细胞策略在生物材料设计与合成中的创新优势。尽管无细胞表达系统用于生物材料合成仍然存在诸如成本、翻译后修饰较弱、亟需交叉领域合作等方面的挑战,但相信随着合成生物学的发展及多学科交叉研究的深入,无细胞表达系统将为新型生物材料研发及产业化提供强大的助力,并为共同解决全球环境问题、保护人类生命健康等方面作出不可忽视的贡献。 展开更多

关键词 生物材料 无细胞表达系统 材料智能化和功能化 DBT循环 合成生物学

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人造细胞内蛋白质合成的研究进展

13

作者 赵晶晶 王雪靖 +1 位作者 穆韡 韩晓军 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2021年第2期121-134,共14页

无细胞蛋白质合成(cell-free protein synthesis,CFPS)是一种在体外快速合成目标蛋白质的方法,通过构建含有CFPS系统的人造细胞,能够实现蛋白质的高通量表达和功能性膜蛋白的体外重构.本文详细综述了4种CFPS系统(包括大肠杆菌裂解液、... 无细胞蛋白质合成(cell-free protein synthesis,CFPS)是一种在体外快速合成目标蛋白质的方法,通过构建含有CFPS系统的人造细胞,能够实现蛋白质的高通量表达和功能性膜蛋白的体外重构.本文详细综述了4种CFPS系统(包括大肠杆菌裂解液、兔网织红细胞裂解液、小麦胚芽提取物、酵母提取物)的适用范围和优缺点,总结了基于CFPS系统构建的人造细胞体系内蛋白质合成的研究现状,以及该领域面临的挑战及未来的发展方向. 展开更多

关键词 无细胞蛋白质合成系统 磷脂囊泡类细胞结构 聚合物囊泡类细胞结构 蛋白质体类细胞结构

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中心法则还在演变

14

作者 陈乃富 《生物学教学》 1988年第2期23-23,共1页

当今八十年代,人们对核酸构象的进一步研究,认识到不同构象的DNA之间,在一定条件下可以发生构象转变。如所周知,DNA的脱氧核糖,其2′和3′位碳原子均可发生“信封式折皱”,有内、外式之分。即2E（内式）、2E（外式）、3E（内式）、3E（... 当今八十年代,人们对核酸构象的进一步研究,认识到不同构象的DNA之间,在一定条件下可以发生构象转变。如所周知,DNA的脱氧核糖,其2′和3′位碳原子均可发生“信封式折皱”,有内、外式之分。即2E（内式）、2E（外式）、3E（内式）、3E（外式）等类型。而RNA的接糖,因其位上有羟基。 展开更多

关键词 中心法则 碳原子 八十年代 DNA 核糖核酸酶 聚合酶 RNA 模板合成 GRIFFIN 无细胞系统

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体外转录信使RNA在再生医学领域的研究进展 被引量：1

15

作者 辛振龙 吕建军 +5 位作者 宋福军 胡伟 李悦 段大鑫 蒋帅 杨阳 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第18期2948-2949,共2页

再生医学是一门研究组织器官受损后修复和再生的学科,主要研究正常机体的组织特征功能、创伤修复与再生机制及干细胞分化机制,以寻找有效的生物治疗方法,促进机体自我修复与再生,构建新的组织与器官。体外转录信使RNA（in vitro transcr... 再生医学是一门研究组织器官受损后修复和再生的学科,主要研究正常机体的组织特征功能、创伤修复与再生机制及干细胞分化机制,以寻找有效的生物治疗方法,促进机体自我修复与再生,构建新的组织与器官。体外转录信使RNA（in vitro transcription messenger RNA,IVT m RNA）是在体外无细胞系统下,模拟体内转录过程合成的一种mRNA． 展开更多

关键词 再生医学 体外转录 RNA 无细胞系统 模拟体 转录过程 分化机制 创伤修复 生物治疗 细胞转染

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医药其它

16

《生物技术通报》 CAS CSCD 1994年第3期77-83,共7页

关键词 融合蛋白 DYSTROPHIN 启动子调控 高拷贝数 细胞生长 蠕形青霉 无细胞系统 遗传修饰 链霉菌 测序法

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含his标签水通道蛋白AqpZ的体外表达和功能表征 被引量：2

17

作者 王钦沪 杨修亮 +2 位作者 黄磊 蔡谨 徐志南 《化学工程》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期58-61,66,共5页

利用大肠杆菌无细胞表达系统可溶性表达含his标签的水通道蛋白Z(AqpZ),并经镍柱亲和层析纯化,浓缩得到质量浓度为490μg/mL的AqpZ。将纯AqpZ重构到DOPC脂质体中,嵌入率为57%。用停留光谱定量分析了AqpZ的滤水功能,测得其水渗透因子Pf值... 利用大肠杆菌无细胞表达系统可溶性表达含his标签的水通道蛋白Z(AqpZ),并经镍柱亲和层析纯化,浓缩得到质量浓度为490μg/mL的AqpZ。将纯AqpZ重构到DOPC脂质体中,嵌入率为57%。用停留光谱定量分析了AqpZ的滤水功能,测得其水渗透因子Pf值为(258.1±8.9)μm/s,约是对照组未嵌入AqpZ的空脂质体的2.8倍。采用静电吸附、层层自组装的方法制备嵌入AqpZ的仿生纳滤膜。用截留反渗透装置分析其水通量和NaCl截留率,结果表明:与未整合AqpZ的膜相比,嵌入含his标签AqpZ的仿生膜的水通量明显高于对照,且保持较高的截盐率。本研究为进一步研究水通道蛋白和仿生膜打下了坚实的基础。 展开更多

关键词 AqpZ 无细胞表达系统 停留光谱 仿生膜 水通量 截盐率

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激素和活性多肽

18

《生物技术通报》 CAS CSCD 1996年第6期61-63,共3页

962161 用一种无细胞系统合成生物学活性的人神经生长因子和脑衍生的神经营养因子[英]/Takeshita,T.//J.Ferment. Bioeng.-1996,81(1).

关键词 生物学活性 人神经生长因子 神经营养因子 黄体酮 启动子 序列分析 无细胞蛋白合成系统 质粒DNA 选择性修饰 生物转化

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