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动物源化改型单链抗体的设计、表达及杀虫活性
1
作者
仲建锋
高美静
+1 位作者
卢莉娜
张志勇
《农药学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第6期1069-1079,共11页
抗独特型抗体制备技术是开发新型抗虫蛋白资源的一项创新策略。为设计构造以基因工程抗体为基础的杀虫蛋白资源,制备了对小菜蛾(Plutella xylostella)具有杀虫活性的猪、牛源改型单链抗体(single chain variable fragment,sc Fv)。通过N...
抗独特型抗体制备技术是开发新型抗虫蛋白资源的一项创新策略。为设计构造以基因工程抗体为基础的杀虫蛋白资源,制备了对小菜蛾(Plutella xylostella)具有杀虫活性的猪、牛源改型单链抗体(single chain variable fragment,sc Fv)。通过NCBI数据库搜索猪、牛源抗体重、轻链可变区的8个骨架区,在其中植入人源抗独特型sc Fv 3E1的6个互补决定区,并进行人工合成及替换成噬菌体展示表达载体p IT2;利用间接竞争ELISA对动物源化改型sc Fv进行分型鉴定;利用表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)技术分析动物源化改型sc Fv与小菜蛾刷状缘膜囊泡(brush border membrane vesicles,BBMV)的结合能力;采用浸叶法测定动物源化改型sc Fv对小菜蛾的生物活性。通过替换表达载体获得了猪源swine-3E1-p IT2质粒和牛源bovine-3E1-p IT2质粒,结果显示:swine-p IT2和bovine-p IT2表达上清液对Cry1B与其多克隆抗体(p Ab)结合的抑制率分别为44.3%和43.0%,模拟抗原Cry1B的某些结构功能,发现两者均属于β型抗独特型sc Fv。SPR分析发现,swine-p IT2、bovine-p IT2与小菜蛾BBMV的结合能力分别为209.48和195.31 RU。生物活性测定结果显示,改造后的swinep IT2和bovine-p IT2对小菜蛾幼虫均具有杀虫活性,LD_(50)值分别为5.90×10^(7)和6.22×10^(7)CFU/m L,均低于亲本3E1的6.86×10^(7)CFU/m L;并且改造后2种材料的毒力回归方程的斜率分别为1.50和1.48,均高于3E1(1.23)。综上,动物源化swine-p IT2和bovine-p IT2改型sc Fv属β型抗独特型sc Fv,能够与小菜蛾的BBMV结合,且具有杀虫活性,为新型生物农药蛋白资源挖掘提供了新的思路。
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关键词
动物源化
BT毒素
改型抗体
杀虫活性
表面等离子共振
小菜蛾
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职称材料
巨型引物PCR法对抗CD3改型单链抗体的定点诱变
2
作者
刘晶
尹长城
+1 位作者
黄华梁
姜述德
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2001年第5期756-760,共5页
亲和力是影响改型单链抗体应用于临床的重要因素之一 .利用巨型引物PCR定点诱变方法 ,设计并化学合成出两组含多个突变位点的简并引物 ,在第一轮PCR中使用简并引物分别扩增出含突变碱基的两条特异性的DNA片段 ,即巨型引物 ,将其经琼脂...
亲和力是影响改型单链抗体应用于临床的重要因素之一 .利用巨型引物PCR定点诱变方法 ,设计并化学合成出两组含多个突变位点的简并引物 ,在第一轮PCR中使用简并引物分别扩增出含突变碱基的两条特异性的DNA片段 ,即巨型引物 ,将其经琼脂糖凝胶电泳分离纯化后 ,作为 3′和 5′的两端引物应用于第二轮PCR反应中 .通过改变标准PCR反应条件 ,调整引物与模板的浓度 ,扩增出特异性较强的目的DNA条带 .PCR产物经回收后 ,进行DNA测序 .
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关键词
CD3
改型
单链
抗体
定点诱变
PCR
巨型引物
慢速退火
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职称材料
题名
动物源化改型单链抗体的设计、表达及杀虫活性
1
作者
仲建锋
高美静
卢莉娜
张志勇
机构
江苏省食品质量安全重点实验室——省部共建国家重点实验室培育基地
出处
《农药学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第6期1069-1079,共11页
基金
国家自然科学基金(32272589)
科技创新2030重大项目(2022ZD0402007)
江苏省自然科学基金(BK20210155)。
文摘
抗独特型抗体制备技术是开发新型抗虫蛋白资源的一项创新策略。为设计构造以基因工程抗体为基础的杀虫蛋白资源,制备了对小菜蛾(Plutella xylostella)具有杀虫活性的猪、牛源改型单链抗体(single chain variable fragment,sc Fv)。通过NCBI数据库搜索猪、牛源抗体重、轻链可变区的8个骨架区,在其中植入人源抗独特型sc Fv 3E1的6个互补决定区,并进行人工合成及替换成噬菌体展示表达载体p IT2;利用间接竞争ELISA对动物源化改型sc Fv进行分型鉴定;利用表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)技术分析动物源化改型sc Fv与小菜蛾刷状缘膜囊泡(brush border membrane vesicles,BBMV)的结合能力;采用浸叶法测定动物源化改型sc Fv对小菜蛾的生物活性。通过替换表达载体获得了猪源swine-3E1-p IT2质粒和牛源bovine-3E1-p IT2质粒,结果显示:swine-p IT2和bovine-p IT2表达上清液对Cry1B与其多克隆抗体(p Ab)结合的抑制率分别为44.3%和43.0%,模拟抗原Cry1B的某些结构功能,发现两者均属于β型抗独特型sc Fv。SPR分析发现,swine-p IT2、bovine-p IT2与小菜蛾BBMV的结合能力分别为209.48和195.31 RU。生物活性测定结果显示,改造后的swinep IT2和bovine-p IT2对小菜蛾幼虫均具有杀虫活性,LD_(50)值分别为5.90×10^(7)和6.22×10^(7)CFU/m L,均低于亲本3E1的6.86×10^(7)CFU/m L;并且改造后2种材料的毒力回归方程的斜率分别为1.50和1.48,均高于3E1(1.23)。综上,动物源化swine-p IT2和bovine-p IT2改型sc Fv属β型抗独特型sc Fv,能够与小菜蛾的BBMV结合,且具有杀虫活性,为新型生物农药蛋白资源挖掘提供了新的思路。
关键词
动物源化
BT毒素
改型抗体
杀虫活性
表面等离子共振
小菜蛾
Keywords
animalization
Bt toxin
reshaped antibody
insecticidal activity
surface plasmon resonance
Plutella xylostella
分类号
S482.39 [农业科学—农药学]
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职称材料
题名
巨型引物PCR法对抗CD3改型单链抗体的定点诱变
2
作者
刘晶
尹长城
黄华梁
姜述德
机构
中国协和医科大学
中国科学院遗传学研究所
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2001年第5期756-760,共5页
基金
国家"8 63"资助项目 (10 2 0 9 0 4 0 1)~~
文摘
亲和力是影响改型单链抗体应用于临床的重要因素之一 .利用巨型引物PCR定点诱变方法 ,设计并化学合成出两组含多个突变位点的简并引物 ,在第一轮PCR中使用简并引物分别扩增出含突变碱基的两条特异性的DNA片段 ,即巨型引物 ,将其经琼脂糖凝胶电泳分离纯化后 ,作为 3′和 5′的两端引物应用于第二轮PCR反应中 .通过改变标准PCR反应条件 ,调整引物与模板的浓度 ,扩增出特异性较强的目的DNA条带 .PCR产物经回收后 ,进行DNA测序 .
关键词
CD3
改型
单链
抗体
定点诱变
PCR
巨型引物
慢速退火
Keywords
anti-CD3 ScFv
site-directed mutagenesis
polymerase chain reaction
megaprimer
slow annealing
分类号
R392.2 [医药卫生—免疫学]
R394.8 [医药卫生—医学遗传学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
动物源化改型单链抗体的设计、表达及杀虫活性
仲建锋
高美静
卢莉娜
张志勇
《农药学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
0
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职称材料
2
巨型引物PCR法对抗CD3改型单链抗体的定点诱变
刘晶
尹长城
黄华梁
姜述德
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2001
0
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职称材料
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