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多重实时荧光PCR TaqMan-MGB杂交探针标记法快速鉴定转基因玉米MIR162 被引量:1
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作者 王凤军 许海锋 +2 位作者 陈强 杨伊平 金浩然 《保鲜与加工》 CAS 2023年第3期56-61,共6页
为对转基因玉米MIR162的进口实行监测、规范转基因玉米在国内市场中的流通,建立一种转基因玉米MIR162准确快速的检测方法,通过设计转基因玉米MIR162品系特异性序列的引物和探针,摸索和优化多重荧光PCR体系和参数,开发建立多重实时荧光PC... 为对转基因玉米MIR162的进口实行监测、规范转基因玉米在国内市场中的流通,建立一种转基因玉米MIR162准确快速的检测方法,通过设计转基因玉米MIR162品系特异性序列的引物和探针,摸索和优化多重荧光PCR体系和参数,开发建立多重实时荧光PCR TaqMan-MGB杂交探针标记法快速鉴定转基因玉米MIR162。结果表明,转基因玉米MIR162品系标准品和平行样品中内标基因和品系特异性基因均出现明显扩增曲线,其他转基因玉米品系标准品仅内标基因有扩增曲线,空白对照无扩增曲线,说明该TaqMan-MGB探针对转基因玉米MIR162品系具有扩增特异性。该方法可作为鉴定筛查转基因玉米MIR162品系及其转化体成分的有效方法,用于规范管理转基因产品在市场上的流通。 展开更多
关键词 转基因玉米MIR162 多重实时荧光PCR TaqMan-MGB杂交探针标记 快速鉴定
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地高辛标记LEA3蛋白基因探针的制备及其在转基因草莓核酸杂交中的应用 被引量:1
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作者 王俊丽 葛会波 +2 位作者 彭士琪 张红梅 续九如 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期331-333,共3页
用地高辛对胚胎发生晚期丰富蛋白LEA3基因片段(1.0 kh)进行了探针标记。斑点杂交表明,该探针的检测灵敏度为5 Pg。用地高辛标记和未标记的标准分子量DL 2000进行杂交时,只检测到2.00、1.00、0.75、0.50 kb4条杂交带。应用LEA3探针对转... 用地高辛对胚胎发生晚期丰富蛋白LEA3基因片段(1.0 kh)进行了探针标记。斑点杂交表明,该探针的检测灵敏度为5 Pg。用地高辛标记和未标记的标准分子量DL 2000进行杂交时,只检测到2.00、1.00、0.75、0.50 kb4条杂交带。应用LEA3探针对转基因草莓(Fragaria ananassa Duch.)进行了Southern blot分析,检测到1.0 kh杂交带,表明外源LEA3基因整合到草莓染色体上。 展开更多
关键词 地高辛 LEA3基因 探针标记 转基因草莓
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多寡核苷酸探针同步标记在Northern blot多基因分析中的应用
3
作者 杜明梅 叶玲 +3 位作者 翟冰 刘建伟 刘静 杨立娜 《医学研究生学报》 CAS 2007年第7期685-688,共4页
目的:建立一种多探针同时标记同步杂交检测多基因的简化的Northern blot方法。方法:通过T4多聚核苷酸激酶5′末端放射性磷酸化标记法对Northern blot中多寡核苷酸探针同时标记,实现对同一张转移印迹膜上的多基因同步杂交显影检测。结果... 目的:建立一种多探针同时标记同步杂交检测多基因的简化的Northern blot方法。方法:通过T4多聚核苷酸激酶5′末端放射性磷酸化标记法对Northern blot中多寡核苷酸探针同时标记,实现对同一张转移印迹膜上的多基因同步杂交显影检测。结果:与常规mRNA逐一检测的效果进行比较,同步简化法的各目的基因同时得到较好的检测。结论:同步简化法简化了实验过程,缩减了实验时间,节省了实验试剂,并使各基因表达丰度之间的比较具有更高的准确性,提高了Northern blot的检测效率和成功率。 展开更多
关键词 NORTHERN BLOT 寡核苷酸探针 探针标记 多基因分析
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新疆多浪羊IFN-γ基因地高辛探针的标记与敏感性检测 被引量:2
4
作者 艾东旭 徐宏伟 +3 位作者 李玮 张晶 宋显明 李莲瑞 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1436-1441,共6页
为获得多浪羊IFN-γ地高辛探针,并对其标记效率进行检测。将多浪羊pMD-18T-IFN-γ克隆菌进行PCR扩增,经切胶回收及目的基因浓缩后获得目的基因IFN-γ,然后用地高辛标记和检测试剂盒对IFN-γ基因进行标记,获得IFN-γ地高辛探针。IFN-γ的... 为获得多浪羊IFN-γ地高辛探针,并对其标记效率进行检测。将多浪羊pMD-18T-IFN-γ克隆菌进行PCR扩增,经切胶回收及目的基因浓缩后获得目的基因IFN-γ,然后用地高辛标记和检测试剂盒对IFN-γ基因进行标记,获得IFN-γ地高辛探针。IFN-γ的PCR扩增产物经8g/L琼脂糖电泳分离后转移至Hybond N+膜,膜上显影后进行敏感性检测并计算探针质量浓度,结果显示,IFN-γ地高辛探针在杂交液中的质量浓度为30μg/L。Southern杂交显示,Hybond N+膜上有IFN-γ基因的双链DNA,且浓缩后的DNA(2.5μg)标记的特异性探针质量浓度较高,可以在Hybond N+膜上呈现出清晰的杂交条带,证明获得的探针质量浓度符合要求。 展开更多
关键词 多浪羊 IFN-Γ基因 地高辛 探针标记 检测
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荧光团杂化纳米SiO_2微球作为生物标记探针的应用研究 被引量:12
5
作者 曲会英 杨黄浩 +3 位作者 林鹏 李顺华 杨薇 许金钩 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2003年第3期422-424,共3页
Recent advances in the nanomaterials, such as luminescent quantum dots, latex fluorescent nanospheres and dye-doped silica nanoparticles, have opened a promising field toward the development of luminescent biolabel. I... Recent advances in the nanomaterials, such as luminescent quantum dots, latex fluorescent nanospheres and dye-doped silica nanoparticles, have opened a promising field toward the development of luminescent biolabel. In this paper, we develop a kind of novel nanometer-sized fluorescent hybrid silica(NFHS) particles used as a sensitive and photostable fluorescent probe in biological staining and diagnostics. The NFHS particles are prepared by controlled hydrolysis of the fluorophore silica precursor using the reverse micelle technique. The fluorophores are dispersed homogeneously in the silica network of the NFHS particles and well protected from the environmental oxygen. In comparison with single organic fluorophores without incorporation, these nanoparticle probes are brighter, more stable against photobleaching and do not suffer from intermittent on/off light emission(blinking). The NFHS particles have also shown unique advantages over the existing common organic fluorophores, quantum dots, and latex-based fluorescent particles for biomolecule recognition in the following four major points: easy preparation, good photostability, high sensitivity, and low toxicity. The approach proposed in this article for making NFHS nanoparticles is a general one, and it is not restricted to a particular type of fluorophore molecule as selected in this study. 展开更多
关键词 荧光团 杂化 纳米SiO2微球 生物标记探针 荧光免疫分析
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用地高辛标记的核酸探针检测猪伪狂犬病毒野毒感染的研究 被引量:12
6
作者 刘志杰 任慧英 +4 位作者 温建新 刘文华 邹玲 韩先杰 魏笑笑 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1621-1624,共4页
利用PCR技术从带有伪狂犬病毒(PRV)gE基因的重组质粒pMD18-T-gE中扩增回收约304 bp大小的片段,并制备出地高辛标记的gE基因核酸探针。特异性检测结果表明,该探针能与重组质粒DNA发生特异性杂交,而与对照的PRV Bartha-k61株疫苗毒DNA、... 利用PCR技术从带有伪狂犬病毒(PRV)gE基因的重组质粒pMD18-T-gE中扩增回收约304 bp大小的片段,并制备出地高辛标记的gE基因核酸探针。特异性检测结果表明,该探针能与重组质粒DNA发生特异性杂交,而与对照的PRV Bartha-k61株疫苗毒DNA、猪细小病毒(PPV)DNA、猪圆环病毒(PCV)DNA、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)cDNA、猪瘟病毒(CSFV)cDNA的杂交反应均为阴性;敏感性检测结果表明,该探针对PRV野毒的最低检出量为4 pg。应用该探针对11份繁殖障碍病料进行了杂交检测,共检出4份阳性病料,该结果与PCR检测结果一致,表明该核酸探针可用于猪伪狂犬病野毒感染的临床诊断。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 GE基因 地高辛标记探针 斑点杂交 野毒株
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新疆多浪羊IL-1β基因地高辛探针的标记和敏感性检测
7
作者 曾国航 徐宏伟 +3 位作者 潘伊微 贾山岭 曹玉华 李莲瑞 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期560-565,共6页
【目的】IL-1β是一种多效的促炎因子,在细胞因子炎性反应中为重要介质,处于介导炎性反应的重要因子,在造血和免疫活性中都发挥重要的作用。该实验结果为进一步研究绵羊分子免疫学,从多浪羊外周血淋巴细胞c DNA文库的筛选基因,寻找与IL-... 【目的】IL-1β是一种多效的促炎因子,在细胞因子炎性反应中为重要介质,处于介导炎性反应的重要因子,在造血和免疫活性中都发挥重要的作用。该实验结果为进一步研究绵羊分子免疫学,从多浪羊外周血淋巴细胞c DNA文库的筛选基因,寻找与IL-1β相关的新基因奠定基础。【方法】将构建好的多浪羊的p MD-18T-IL-1β质粒[1]进行PCR扩增,经过切胶回收,目的基因的浓缩后,采用罗氏地高辛标记和检测试剂盒标记IL-1β基因,获得IL-1β地高辛探针,进行敏感性检测,在Hybond N+膜上显影,计算探针浓度。【结果】计算出标记后的探针浓度为17.1 g/m L。【结论】通过southern杂交可以得知,Hybond N+膜上有IL-1β基因的双链DNA,标准杂交液中为DIG标记的IL-1β基因单链DNA,通过避光显色,在Hybond N+膜有深紫色的杂交条带,证明探针的浓度达到标准浓度。 展开更多
关键词 多浪羊IL-1β基因 地高辛 探针标记 检测
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地高辛标记核酸探针检测鸭瘟病毒 被引量:4
8
作者 韩先杰 王君伟 +3 位作者 布日额 李慧昕 高宏丽 Ulrich Neuman 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2004年第11期20-21,共2页
关键词 地高辛标记核酸探针 检测 鸭瘟病毒 增殖 DNA样本
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用地高辛标记核酸探针检测猪细小病毒的研究 被引量:4
9
作者 白红光 卫广森 +2 位作者 徐宏军 李尚波 王文成 《动物医学进展》 CSCD 2005年第9期80-84,共5页
根据猪细小病毒(PPV)基因组序列,设计引物克隆了PPV YK株保守序列NS1基因,将NS1基因纯化,利用地高辛标记制备了NS1基因PCR产物探针和克隆NS1探针,两种核酸探针的标记都达到了0.1 pg/μL。特异性试验结果表明,这两种探针都能与PPV DNA发... 根据猪细小病毒(PPV)基因组序列,设计引物克隆了PPV YK株保守序列NS1基因,将NS1基因纯化,利用地高辛标记制备了NS1基因PCR产物探针和克隆NS1探针,两种核酸探针的标记都达到了0.1 pg/μL。特异性试验结果表明,这两种探针都能与PPV DNA发生特异的阳性杂交,而与对照的PRV、PCV、PRRSV和HCV的核酸杂交呈阴性。敏感性试验结果表明,克隆NS1探针敏感度为0.5 pg/μL,NS1基因PCR产物探针敏感度为1 pg/μL。综上所述,这两种DIG标记探针特异性强,敏感性高,可用于PPV的检测。 展开更多
关键词 猪细小病毒 地高辛标记核酸探针 杂交
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鸡传染性支气管炎病毒地高辛标记探针检测方法的的建立和应用 被引量:5
10
作者 孟凡磊 刁有祥 +3 位作者 王辉 王妮 刘方娜 刘霞 《福建农业学报》 CAS 2007年第1期39-42,共4页
根据GenBank中已经发表的IBV N基因的保守序列,设计合成一对引物,利用RT-PCR技术扩增IBVN基因的582 bp的核酸片段,并制备出地高辛标记的IBV核酸探针。特异性检测结果表明,该探针能与不同毒株的IBV核酸发生特异性杂交,而与对照的NDV、鹅... 根据GenBank中已经发表的IBV N基因的保守序列,设计合成一对引物,利用RT-PCR技术扩增IBVN基因的582 bp的核酸片段,并制备出地高辛标记的IBV核酸探针。特异性检测结果表明,该探针能与不同毒株的IBV核酸发生特异性杂交,而与对照的NDV、鹅副粘病毒的核酸杂交反应为阴性;敏感性检测结果表明,该探针对IBV的最低检出量为10 pg,显示所制备的核酸探针用于IBV的检测是可行的。 展开更多
关键词 鸡传染性支气管炎病毒 地高辛标记核酸探针 检测
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用地高辛标记的核酸探针从尿囊液和组织中检测传染性支气管炎病毒 被引量:4
11
作者 王泽霖 王丽 +2 位作者 闫若潜 钟凯 王新卫 《中国预防兽医学报》 CSCD 2000年第1期64-66,共3页
将IBVT株基因组S1 基因上0.6kb 片段(位于S1 基因上1121bp~1723bp 之间) 克隆到PIBPCRCloning vector 中,用地高辛标记探针,分别与9 株IBV的PCR 产物和12 株IBV 的核酸进行点杂交均呈阳性反应,而该探针不与IBDV和NDV 的RNA,EDS76 ... 将IBVT株基因组S1 基因上0.6kb 片段(位于S1 基因上1121bp~1723bp 之间) 克隆到PIBPCRCloning vector 中,用地高辛标记探针,分别与9 株IBV的PCR 产物和12 株IBV 的核酸进行点杂交均呈阳性反应,而该探针不与IBDV和NDV 的RNA,EDS76 病毒的DNA及正常鸡胚尿囊液的抽提物反应。探针检测IBVPCR产物的灵敏度为100~200pg。用该探针检测不同毒株IBV在鸡胚中的繁殖动态,接种24~30 小时后的的尿囊液均获阳性结果。用M 和宜株混合感染5 日龄雏鸡12 小时能从气管粘液中检出病毒,38~46 小时后能从肾组织中检出病毒。对7 只就诊病鸡的病变肾脏进行杂交检测,有5 只呈阳性反应。核酸杂交技术为生产上提供了直接从尿囊液和感染鸡组织中快速检测病毒,诊断IBV 展开更多
关键词 支气管炎病毒 地高辛标记探针 点杂交 IBV
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标记基因探针的快速简易制备 被引量:1
12
作者 何彬 范明 甘思德 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1992年第5期404-405,共2页
在基因探针制备过程中,常通过琼脂糖电泳分离目的DNA片段和载体,然后采用电洗脱、冻融等方法回收并纯化目的片段,再作同位素或非同位素标记。为减轻非特异性本底,往往还需要分离出标记探针,以去除游离标记物,整个过程比较繁琐费时。我... 在基因探针制备过程中,常通过琼脂糖电泳分离目的DNA片段和载体,然后采用电洗脱、冻融等方法回收并纯化目的片段,再作同位素或非同位素标记。为减轻非特异性本底,往往还需要分离出标记探针,以去除游离标记物,整个过程比较繁琐费时。我们在工作中尝试了一种简便的方法,将探针的制备、回收。 展开更多
关键词 基因探针 标记探针 制备
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地高辛标记探针检测鼻气管鸟杆菌的研究与应用 被引量:1
13
作者 李瑶瑶 刁有祥 李宏梅 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2010年第4期19-23,共5页
【目的】建立鼻气管鸟杆菌(Ornithobacteriumrhinotracheale,ORT)快速、准确的检测方法。【方法】利用PCR扩增鼻气管鸟杆菌16 S rRNA基因的671 bp特异性片段,经回收纯化后用地高辛标记,建立了地高辛标记探针诊断ORT的方法。【结果】特... 【目的】建立鼻气管鸟杆菌(Ornithobacteriumrhinotracheale,ORT)快速、准确的检测方法。【方法】利用PCR扩增鼻气管鸟杆菌16 S rRNA基因的671 bp特异性片段,经回收纯化后用地高辛标记,建立了地高辛标记探针诊断ORT的方法。【结果】特异性试验表明,地高辛标记探针可与ORT不同血清型参考菌株的核酸发生特异性杂交,而与鸡大肠杆菌、副鸡嗜血杆菌、鸡白痢沙门氏菌、禽多杀性巴氏杆菌的核酸杂交均为阴性;敏感性试验结果表明,地高辛标记探针对ORT的最低检出量为100 pg/μL;利用该探针对分离菌株和疑似病料进行检测,结果均与PCR检测结果一致。【结论】建立了地高辛标记探针检测ORT的方法,为ORT的诊断提供了一种敏感性高、特异性强、简便且易行的方法。 展开更多
关键词 鼻气管鸟杆菌 地高辛标记探针 杂交检测
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地高辛标记探针检测重组鸡痘病毒中的MDVgB基因 被引量:1
14
作者 王志亮 彭大新 +2 位作者 潘勇 尹希海 刘秀梵 《中国动物检疫》 CAS 1996年第1期4-6,共3页
以XbaI从pVLgB中切下gB基因片段,用dig试剂盒通过六聚核苷酸随机引物合成DNA探针,对粗提的重组FPV、MDVGA、FPV282E4和CEFDNA以及pFGB1175质粒DNA进行打点杂交(Dot-blot)。经免疫学测定、NBT显色后发现,重组FPV、MDVGA、pFGB1175... 以XbaI从pVLgB中切下gB基因片段,用dig试剂盒通过六聚核苷酸随机引物合成DNA探针,对粗提的重组FPV、MDVGA、FPV282E4和CEFDNA以及pFGB1175质粒DNA进行打点杂交(Dot-blot)。经免疫学测定、NBT显色后发现,重组FPV、MDVGA、pFGB1175斑点呈明显阳性反应;而FPV282E4和CEFDNA则呈阴性反应.从而在DNA水平上证实了重组FPV基因组中gB基因的存在。 展开更多
关键词 鸡痘病毒 马立克氏病 糖蛋白B 地高辛 标记探针
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用~3H和地高辛配基标记TNF—α cDNA探针进行原位杂交的比较 被引量:1
15
作者 刘天菊 司履生 杨居祥 《西安医科大学学报》 CSCD 1992年第3期209-211,共3页
用~3H和地高辛配基标记肿瘤坏死因子-αcDNA探针以及原位杂文技术检测33例子宫颈癌和28例阴道尖锐湿疣活检标本中的TNF mRNA。结果表明,两种标记探针原位杂交结果基本一致,~3H标记探针敏感性稍高于地高辛配基标记探针。但放射性核素探... 用~3H和地高辛配基标记肿瘤坏死因子-αcDNA探针以及原位杂文技术检测33例子宫颈癌和28例阴道尖锐湿疣活检标本中的TNF mRNA。结果表明,两种标记探针原位杂交结果基本一致,~3H标记探针敏感性稍高于地高辛配基标记探针。但放射性核素探针的固有缺点及非同位素探针的安全、快速、方便使非同位素探针有着日益广泛的应用前景。 展开更多
关键词 标记探针 地高辛配基 免疫诊断
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HRP标记探针MVR分型法在法医学上的应用 被引量:1
16
作者 郑秀芬 叶健 +1 位作者 倪锦堂 李伯龄 《法医学杂志》 CAS CSCD 1998年第1期14-15,17,共3页
采用辣根酶标记寡核管酸探针数字编码小卫星MS可变重复序列(HRP标记探针MVR方法),检验微量生物材料。结果表明,相当于5μl血液的血痕、单根有毛囊的毛发以及相当于4μl唾液的斑迹均获得了清晰易读的MVR图谱,灵敏度达1ng。将此方法... 采用辣根酶标记寡核管酸探针数字编码小卫星MS可变重复序列(HRP标记探针MVR方法),检验微量生物材料。结果表明,相当于5μl血液的血痕、单根有毛囊的毛发以及相当于4μl唾液的斑迹均获得了清晰易读的MVR图谱,灵敏度达1ng。将此方法应用于检案实践取得了较好的效果。MVR-PCR技术在法医学个人识别和亲子鉴定方面极有应用前景。 展开更多
关键词 HRP标记探针 MVR分型法 法医学 应用
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地高辛标记探针检测猪胸膜肺炎放线杆菌的研究与应用 被引量:9
17
作者 刁有祥 丁家波 +3 位作者 姜世金 孙淑红 崔治中 陈本龙 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期585-589,共5页
利用PCR反应扩增出胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣ基因650 bp的DNA,回收并纯化PCR产物,用地高辛标记,制备出地高辛标记的核酸探针。该探针与不同血清型的胸膜肺炎放线杆菌均能发生特异性杂交,而与大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌... 利用PCR反应扩增出胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣ基因650 bp的DNA,回收并纯化PCR产物,用地高辛标记,制备出地高辛标记的核酸探针。该探针与不同血清型的胸膜肺炎放线杆菌均能发生特异性杂交,而与大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、猪肺炎支原体、支气管败血波氏杆菌等细菌的核酸杂交均为阴性。对胸膜肺炎放线杆菌的最低检出限量为10×102 个放线杆菌。对疑似胸膜肺炎放线杆菌感染病变组织检测结果表明,在扁桃体、鼻腔、气管、肺脏均可检测出胸膜肺炎放线杆菌,以扁桃体的检出率最高。为猪胸膜肺炎放线杆菌的诊断和流行病学调查提供了良好的方法。 展开更多
关键词 猪胸膜肺炎放线杆菌 地高辛标记探针 支气管败血波氏杆菌 多杀性巴氏杆菌 应用 猪肺炎支原体 流行病学调查 PCR反应 PCR产物 核酸探针 大肠杆菌 沙门氏菌 葡萄球菌 核酸杂交 检测结果 病变组织 扁桃体 DNA APX 特异性 血清型
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地高辛标记DNA探针对茶园NPV的检测 被引量:1
18
作者 谭荣荣 毛迎新 龚自明 《湖北农业科学》 北大核心 2013年第23期5894-5897,共4页
研究合成了茶尺蠖核型多角体病毒(Ectropis oblique nuclear polyhedrosis virus,EcobNPV)的地高辛标记DNA探针,采用斑点杂交检测茶园几种核型多角体病毒。结果表明,以含EcobNPV克隆片段的大肠杆菌菌液为样品时,斑点杂交检测灵敏度为80 ... 研究合成了茶尺蠖核型多角体病毒(Ectropis oblique nuclear polyhedrosis virus,EcobNPV)的地高辛标记DNA探针,采用斑点杂交检测茶园几种核型多角体病毒。结果表明,以含EcobNPV克隆片段的大肠杆菌菌液为样品时,斑点杂交检测灵敏度为80 CFU/μL。以感染病毒致死的茶尺蠖幼虫为试材,提取病毒基因组DNA,采用斑点杂交法检测均得到强的杂交信号。斑点杂交检测可有效区分茶园中几种核型多角体病毒,表明地高辛标记DNA探针的特异性好。 展开更多
关键词 茶尺蠖核型多角体病毒(Ectropis OBLIQUE NUCLEAR polyhedrosis virus EcobNPV) 地高辛标记DNA探针 斑点杂交 检测
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同位素标记探针对检测肺组织氧合血红素酶表达的影响
19
作者 王俊霞 周君琳 +2 位作者 丛斌 凌亦凌 雍平 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第12期1260-1260,1262,共2页
关键词 基因表达 氧合血红素酶 同位素标记探针
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三种PCR引物法制备生物素标记的HpLV衣壳蛋白基因cDNA探针检测效果的比较
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作者 韩盛 刘升学 +1 位作者 向本春 曹连莆 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2006年第4期415-418,共4页
采用正义、反义引物及正义和反义引物双链PCR法制备了生物素标记的HpLV衣壳蛋白基因的cDNA探针。检测结果表明,三种PCR引物法标记的cDNA探针显色灵敏度均可达到10pg/μL,对目标基因DNA的检测灵敏度可达90pg/μL,但反义引物PCR法标记探... 采用正义、反义引物及正义和反义引物双链PCR法制备了生物素标记的HpLV衣壳蛋白基因的cDNA探针。检测结果表明,三种PCR引物法标记的cDNA探针显色灵敏度均可达到10pg/μL,对目标基因DNA的检测灵敏度可达90pg/μL,但反义引物PCR法标记探针的检测效果要好于正义和反义引物双链PCR法制备的探针;在目标基因DNA浓度一定的情况下,探针的浓度对检测效果的影响并不大;正义、反义引物PCR法制备的探针可不经煮沸变性处理直接使用;用50ng/mL浓度的反义引物PCR法制备的生物素标记cDNA探针可检测到带毒啤酒花叶片和花瓣中的啤酒花潜隐病毒RNA。 展开更多
关键词 HpLV 核酸杂交 生物素标记探针 cDNA检测效果
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