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外泌体的核酸适配体筛选技术研究进展
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作者 郑李婷 杨歌 屈锋 《色谱》 北大核心 2025年第5期424-433,共10页
外泌体密切参与细胞间通讯,调控细胞生理过程,是目前癌症和其他疾病早期诊断的潜在生物标志物之一。因此,具有特定功能的外泌体的检测与分离具有重要临床意义。与此同时,开发低成本、高灵敏度的外泌体特异性识别元件,将在疾病早期诊断... 外泌体密切参与细胞间通讯,调控细胞生理过程,是目前癌症和其他疾病早期诊断的潜在生物标志物之一。因此,具有特定功能的外泌体的检测与分离具有重要临床意义。与此同时,开发低成本、高灵敏度的外泌体特异性识别元件,将在疾病早期诊断和治疗过程中发挥关键作用。核酸适配体是通过指数富集配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)筛选获得的、可与靶标特异性结合的单链脱氧核糖核酸或核糖核酸,具备稳定性高、可化学合成、高亲和力和特异性以及靶标范围广等独特优势。目前,靶向外泌体的适配体已应用于细胞成像、药物递送、疾病诊疗等众多研究领域。然而,外泌体的异质性以及复杂结构,为精准识别特定外泌体的适配体筛选带来巨大挑战,高效的筛选技术是获得优良性能适配体的关键。本文总结了外泌体适配体筛选过程中关键靶点的功能及其选择策略,概述了目前应用于外泌体适配体筛选的主要方法与应用,包括磁珠-SELEX、微流控-SELEX、硝酸纤维素膜-SELEX、细胞-SELEX和毛细管电泳-SELEX等5种筛选技术,并对其分离原理、优势与限制以及最新应用进行阐述与分析。最后,对外泌体适配体筛选所面临的问题与挑战进行了总结与展望。 展开更多
关键词 适配 指数富集系统进化技术 外泌
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蛋白质的核酸适配体筛选的研究进展 被引量:7
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作者 杨歌 魏强 +1 位作者 赵新颖 屈锋 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期370-381,共12页
核酸适配体是通过指数富集系统配体进化(SELEX)筛选获得的,与靶标具有高亲和力和特异性结合的单链DNA或RNA。蛋白质是生命进程中的关键功能分子。近年来,以蛋白质为靶标的适配体筛选在蛋白质相关的基础及应用研究领域受到广泛关注。核... 核酸适配体是通过指数富集系统配体进化(SELEX)筛选获得的,与靶标具有高亲和力和特异性结合的单链DNA或RNA。蛋白质是生命进程中的关键功能分子。近年来,以蛋白质为靶标的适配体筛选在蛋白质相关的基础及应用研究领域受到广泛关注。核酸适配体应用性能的优劣取决于其亲和力、特异性与稳定性。目前,适配体筛选方法的优化主要是提高筛选效率、提升适配体性能及降低筛选成本。适配体主要筛选步骤包括复合物分离、核酸库优化、次级库的富集、适配体序列分析以及亲和力表征等。迄今为止,以蛋白质-核酸复合物的分离为核心步骤的适配体筛选方法有20余种。本文归纳总结了2005年以来以蛋白质为靶标的适配体筛选技术,讨论了各方法的缺陷与局限。介绍了核酸库的设计优化方法、适配体的序列特征,以及常用的亲和力表征方法。 展开更多
关键词 核酸适配 蛋白质 筛选 指数富集系统配体进化 综述
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用SELEX技术筛选葡萄球菌肠毒素B特异性适配体 被引量:8
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作者 江丽 兰小鹏 +1 位作者 曾燕丽 甘龙杰 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期420-421,共2页
目的通过指数级富集配体的系统进化技术(SELEX)筛选能与葡萄球菌肠毒素B(SEB)特异、高亲和力结合的单链DNA(ssDNA)适配体(aptamer)。方法体外构建一个长度为96个碱基的随机ssDNA文库,与靶物质SEB混合,以磁珠作为固相介质,利用热洗脱方... 目的通过指数级富集配体的系统进化技术(SELEX)筛选能与葡萄球菌肠毒素B(SEB)特异、高亲和力结合的单链DNA(ssDNA)适配体(aptamer)。方法体外构建一个长度为96个碱基的随机ssDNA文库,与靶物质SEB混合,以磁珠作为固相介质,利用热洗脱方法分离与靶标结合的核苷酸片段,通过PCR反复扩增、富集数个循环。利用荧光素标记适配体,测定筛选过程中各轮结合率;通过地高辛标记适配体,与碱性磷酸酶标记的抗地高辛抗体进行酶促显色反应,检测适配体的特异性。结果经过13轮筛选,ssDNA文库与SEB的结合百分率从1.1%提高到39.8%。制备的适配体针对SEB的特异性强,与葡萄球菌A蛋白(SPA)及牛血清清蛋白(BSA)无非特异性结合。结论成功利用SELEX技术筛选获得了特异结合SEB的高亲和力的ssDNA适配体,为金黄色葡萄球菌感染的诊断与治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 指数富集的配进化技术 SEB 磁珠
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与草甘膦特异结合的核酸适配体筛选及应用 被引量:1
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作者 秦鸣蔚 张晓萌 +4 位作者 靖乐 宋玉竹 张金阳 夏雪山 韩芹芹 《分析科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期57-62,共6页
通过体外指数富集配体系统进化(SELEX)技术,筛选靶向草甘膦核酸适配体A08。使用酶联寡核苷酸测定法(ELONA)和斑点印迹确认草甘膦核酸适配体A08与草甘膦的特异性,未观察到非特异性。基于ELONA平台,草甘膦检测限为4 ng/μL。圆二色谱(CD)... 通过体外指数富集配体系统进化(SELEX)技术,筛选靶向草甘膦核酸适配体A08。使用酶联寡核苷酸测定法(ELONA)和斑点印迹确认草甘膦核酸适配体A08与草甘膦的特异性,未观察到非特异性。基于ELONA平台,草甘膦检测限为4 ng/μL。圆二色谱(CD)实验表明,草甘膦核酸适配体A08形成茎环和分子内G-四链体,可以稳定存在于结合的磷酸盐缓冲溶液中。此外,亲和力实验显示草甘膦与核酸适配体之间具有强的结合力,解离常数(K d)为38.38±9.094 nmol/L。基于草甘膦核酸适配体A08的ELONA法测定的准确性在真正的草甘膦样品中得到证实。获得的草甘膦核酸适配体A08为制备检测草甘膦试剂盒奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 核酸适配 指数富集系统进化技术 草甘膦 酶联寡核苷酸测定
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化学修饰提高核酸适体结合亲和力的研究进展 被引量:3
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作者 刘珂 靳宇 +1 位作者 梁建功 吴园 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2021年第11期3477-3492,共16页
核酸适体(Aptamer)是通过体外筛选得到的短单链DNA或RNA寡核苷酸,具有与抗体相当或更优异的特异性及亲和力,且具有靶标范围广、易制备和灵活可控修饰、免疫原性低、批次差异性小以及易于运输保存等优势,为食品、环境和生物医学等领域提... 核酸适体(Aptamer)是通过体外筛选得到的短单链DNA或RNA寡核苷酸,具有与抗体相当或更优异的特异性及亲和力,且具有靶标范围广、易制备和灵活可控修饰、免疫原性低、批次差异性小以及易于运输保存等优势,为食品、环境和生物医学等领域提供了全新的分子识别工具,获得了研究者的广泛关注.但是目前其商业应用的数量仍有限.为了增强核酸适体的应用性能,研究者对核酸适体进行了大量的改性研究.本文系统总结了核酸适体筛选前、后采用非共价或共价方式对其进行化学修饰,以增加核酸适体与靶标的结合亲和力的相关研究进展,并对未来发展前景进行了展望. 展开更多
关键词 核酸适 指数富集系统进化技术 化学修饰 亲和力
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核酸适体及其在疫病诊断中的应用
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作者 祖立闯 王金良 +1 位作者 李娇 沈志强 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第7期80-84,共5页
核酸适体是采用指数富集配体的系统进化技术从随机单链寡核苷酸库中筛选出的能与靶物质高特异性、高亲和力结合的配体。因其具有亲和力高、特异性强、精确识别、易体外合成与修饰等优点,逐渐成为抗体的代替或补充试剂,已成功应用于生物... 核酸适体是采用指数富集配体的系统进化技术从随机单链寡核苷酸库中筛选出的能与靶物质高特异性、高亲和力结合的配体。因其具有亲和力高、特异性强、精确识别、易体外合成与修饰等优点,逐渐成为抗体的代替或补充试剂,已成功应用于生物芯片、生物传感器、分子信标等多种疫病诊断技术平台,显示出了良好的应用前景,在未来的疫病诊断中将发挥越来越重要的作用。论文就适体技术及其在疫病诊断中的应用进展进行综述。 展开更多
关键词 核酸适 指数富集系统进化技术 疫病诊断
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肝癌血清特异标志物Dickkopf-1核酸适体的筛选及其鉴定 被引量:1
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作者 何雷 赵运旺 +1 位作者 李保林 安晓刚 《分子影像学杂志》 2019年第4期528-533,共6页
目的筛选和鉴定肝癌血清特异标志物Dickkopf-1核酸适体(Apt)。方法采用配体指数级富集系统进化(SELEX)技术,以DKK1为靶蛋白,羧基化琼脂磁珠为筛选介质,从随机ssDNA文库中筛选出一组能够特异性与其结合的核酸适体。利用生物信息学方法对... 目的筛选和鉴定肝癌血清特异标志物Dickkopf-1核酸适体(Apt)。方法采用配体指数级富集系统进化(SELEX)技术,以DKK1为靶蛋白,羧基化琼脂磁珠为筛选介质,从随机ssDNA文库中筛选出一组能够特异性与其结合的核酸适体。利用生物信息学方法对核酸适体进行序列分析和二级结构预测,表面等离子体共振仪分析测定核酸适体的亲和力。结果经过6轮消减SELEX筛选,次级ssDNA文库与DKK1靶标蛋白的亲和力趋向稳定,将第6轮筛选产物经PCR扩增进行高通量测序。表面等离子体共振仪检测结果表明,筛选得到的DKK1核酸适体与DKK1的结合解离常数均在纳摩尔级水平,Apt-5的Kd值最小,亲和力最高,Apt-26和Apt-28核酸适体亲和力相对较弱。二级结构预测分析表明,茎环和茎凸环结构为主要的结构形式。圆二色光谱分析结果显示,3个候选核酸适体(Apt-5,Apt-26,Apt-28)能特异形成G-四链体结构识别DKK1靶标蛋白。结论获得了与DKK1靶标蛋白特异性结合的核酸适体,为后续核酸适体的应用研究以及DKK1蛋白功能的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 DICKKOPF-1 指数富集系统进化技术 核酸适 亲和力
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