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人SATB1基因5′上游序列的转录激活功能分析 被引量：1
1
作者 李颖 戴冰冰 +3 位作者 蔡蓉 仇全 于丽莉 卢健 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期221-226,共6页
在对人SATB1基因进行生物信息学分析的基础上 ,采用PCR技术 ,扩增人基因组DNA中SATB1基因 5′上游序列的 - 2 95 5～ - 9片段 ,构建了 3个分别由SATB1基因 5′上游 - 2 95 5～ - 9,- 172 7～ - 9和 - 76 0～ - 9序列片段驱动的报告载体 ... 在对人SATB1基因进行生物信息学分析的基础上 ,采用PCR技术 ,扩增人基因组DNA中SATB1基因 5′上游序列的 - 2 95 5～ - 9片段 ,构建了 3个分别由SATB1基因 5′上游 - 2 95 5～ - 9,- 172 7～ - 9和 - 76 0～ - 9序列片段驱动的报告载体 -pGL3 SP2 94 6 luc ,pGL3 SP1718 luc和pGL3 SP75 1 luc ,分别瞬时转染JurkatT ,K5 6 2 ,U937和HeLa细胞 ,通过测定荧光素酶的表达活性 ,观察SATB1基因 5′上游序列片段 3个删除突变体在不同细胞内活性的差异 .结果显示 ,SATB1上游序列- 2 95 5 - 9在 4种细胞中的转录激活能力为U937>JurkatT >K5 6 2 ,在HeLa细胞中基本无激活 ,提示SATB1的转录激活可能具有一定的细胞类型特异性 .3种 5′删除突变体转录激活性由大至小顺序为 - 76 0 - 9>- 2 95 5 - 9>- 172 7 - 9,提示SATB1的核心启动子可能存在于其 5′上游序列的- 76 0至 - 9bp区域中 . 展开更多
关键词 SATB1基因 启动子 报告基因分析 转录调控
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肺癌细胞中调控ezrin基因基本转录活性的顺式作用元件及转录因子的鉴定 被引量：5
2
作者 高书颖 李恩民 +4 位作者 孟令英 崔磊 袁华敏 杜则澎 许丽艳 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第3期288-296,共9页
研究发现,质膜-细胞骨架连接蛋白Ezrin在多种肿瘤细胞中异常表达,而且Ezrin的表达上调与肿瘤细胞的移动侵袭相关,但是调控ezrin基因转录的分子机制却不清楚.为了探明ezrin基因的转录调控机制,以肺癌细胞A549为材料,首先采用双荧光素酶... 研究发现,质膜-细胞骨架连接蛋白Ezrin在多种肿瘤细胞中异常表达,而且Ezrin的表达上调与肿瘤细胞的移动侵袭相关,但是调控ezrin基因转录的分子机制却不清楚.为了探明ezrin基因的转录调控机制,以肺癌细胞A549为材料,首先采用双荧光素酶报告基因分析系统检测ezrin基因5′侧翼嵌套缺失序列和位点突变序列的转录活性,鉴定肺癌细胞中ezrin基因的基本启动子区以及关键的顺式作用元件Sp1结合位点(-75/-69)和AP-1结合位点(-64/-58).其次,利用凝胶电泳迁移率变动分析证明,肺癌细胞核蛋白提取物能够与ezrin基因含有关键顺式作用元件的DNA序列结合,形成DNA-核蛋白复合物,而且Sp1结合位点和AP-1结合位点与重组蛋白rhSp1和rhAP-1的结合具有位点特异性.最后,利用瞬时转染实验证实,转录因子Sp1和AP-1(由c-Jun和c-Fos组成的异源二聚体)分别通过Sp1结合位点和AP-1结合位点,增强ezrin基因基本转录活性,而且,过表达转录因子Sp1、c-Jun或c-Fos上调了Ezrin蛋白表达.研究确定,肺癌细胞中调控ezrin基因基本转录活性的关键顺式作用元件是Sp1结合位点(-75/-69)和AP-1结合位点(-64/-58),与之作用的转录因子Sp1和AP-1对于ezrin基因的转录激活作用至关重要. 展开更多
关键词 EZRIN基因 转录调控元件 转录因子 双荧光素酶报告基因分析系统 凝胶电泳迁移率变动分析
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转录因子Sp1和Sp3对食管癌细胞ezrin基因的表达调控作用 被引量：3
3
作者 高书颖 李恩民 +2 位作者 杜则澎 陆晓峰 许丽艳 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期695-698,共4页
目的:明确转录因子Sp1和Sp3对食管癌细胞ezrin基因的表达调控作用。方法:将转录因子表达载体CMV-Sp1和CMV-Sp3分别转染食管癌EC109细胞,采用定量RT-PCR和Western blot技术检测过表达转录因子Sp1和Sp3对ezrinmR-NA和蛋白表达的影响;将ez... 目的:明确转录因子Sp1和Sp3对食管癌细胞ezrin基因的表达调控作用。方法:将转录因子表达载体CMV-Sp1和CMV-Sp3分别转染食管癌EC109细胞,采用定量RT-PCR和Western blot技术检测过表达转录因子Sp1和Sp3对ezrinmR-NA和蛋白表达的影响;将ezrin基因启动子驱动的报告基因表达载体与内参照质粒pRL-TK和转录因子表达载体共转染EC109细胞,采用双荧光素酶报告基因分析系统检测转录因子Sp1和Sp3对ezrin基因启动子的激活作用以及这种激活作用是否依赖于ezrin基因的Sp1结合位点-75/-69。结果:过表达转录因子Sp1和Sp3显著提高EC109细胞ezrinmRNA和蛋白表达水平以及启动子活性。Sp1和Sp3增强ezrin基因启动子活性的作用位点不同,只有Sp1通过-75/-69位点调控ezrin基因启动子活性。结论:转录因子Sp1和Sp3可调控EC109细胞ezrin基因的表达。 展开更多
关键词 EZRIN基因 食管癌细胞 转录因子 双荧光素酶报告基因分析系统
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CCR5基因5′侧翼区的克隆及调控功能初步研究
4
作者 沙新平 胡国龄 +5 位作者 谢玉桃 陈曦 刘映霞 龚环宇 侯珏 李萍 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第2期162-164,共3页
目的 :研究CCR5基因 5′侧翼区的调控序列。方法 :分段构建CCR5基因 5′侧翼区的pCAT报告基因载体 ;分析各片段在Hela细胞中的CAT调节活性。结果 :CCR5基因 5′侧翼区基因 - 1～ - 4 86bp序列的pCAT重组质粒在Hela细胞中能明显表现CAT... 目的 :研究CCR5基因 5′侧翼区的调控序列。方法 :分段构建CCR5基因 5′侧翼区的pCAT报告基因载体 ;分析各片段在Hela细胞中的CAT调节活性。结果 :CCR5基因 5′侧翼区基因 - 1～ - 4 86bp序列的pCAT重组质粒在Hela细胞中能明显表现CAT上调活性 ,其活性比pCATenhancervector的活性高 3倍。结论 :CCR5基因 5′侧翼区基因 - 1～ - 4 展开更多
关键词 5′侧翼区 克隆 调控功能 初步研究 CCR5基因 启动子 增强子 报告基因分析
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鼻咽癌细胞中ezrin基因启动子上游序列转录调控特性的研究
5
作者 郭秀璞 于洁 高书颖 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期8-11,共4页
目的:研究鼻咽癌细胞中ezrin基因启动子上游序列的转录调控特性。方法:构建一系列携带ezrin基因-1541/-706序列的报告基因表达载体,ezrin基因-1541/-706序列以正向和反向分别连接至不含启动子的报告基因上游、ezrin启动子上游、SV40启... 目的:研究鼻咽癌细胞中ezrin基因启动子上游序列的转录调控特性。方法:构建一系列携带ezrin基因-1541/-706序列的报告基因表达载体,ezrin基因-1541/-706序列以正向和反向分别连接至不含启动子的报告基因上游、ezrin启动子上游、SV40启动子上游、ezrin启动子或SV40启动子控制的报告基因下游,将质粒转染CNE2细胞,检测荧光素酶活性。结果:CNE2细胞中,当-1541/-706序列正向位于报告基因上游时表现出启动子活性,其转录激活作用约为ezrin启动子的50%;反向连接时无启动子活性。而且,当-1541/-706序列正向位于ezrin启动子或SV40启动子上游时,显著提高荧光素酶表达;当反向位于启动子下游、正向或反向位于启动子控制的报告基因下游时,转录增强作用消失。结论:CNE2细胞中ezrin基因启动子上游序列具有转录激活和转录增强作用,这种作用具有DNA序列位置和方向依赖性。 展开更多
关键词 鼻咽癌 EZRIN基因 双荧光素酶报告基因分析系统 转录调控
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人类连接蛋白基因Cx26的上游调控部位
6
作者 彭白露 周鸣 +1 位作者 曾朝阳 李桂源 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第6期871-875,共5页
人类连接蛋白２６（Ｃｏｎｎｅｘｉｎ ２６，Ｃｘ２６）已被看作乳腺癌上皮细胞中的抑瘤基因候选者．为了阐明此基因的调控机理，对其转译起始点上游的一个具有启动功能的１．６ ｋｂ 片段采用ｅｘｏ Ⅲ构建１０个单向删除重组体后进行... 人类连接蛋白２６（Ｃｏｎｎｅｘｉｎ ２６，Ｃｘ２６）已被看作乳腺癌上皮细胞中的抑瘤基因候选者．为了阐明此基因的调控机理，对其转译起始点上游的一个具有启动功能的１．６ ｋｂ 片段采用ｅｘｏ Ⅲ构建１０个单向删除重组体后进行了ＣＡＴ报告基因分析．结果表明，此１．６ ｋｂ 片段其启动子功能部位位于５′端２００ ｂｐ 范围内．其中含有－ＴＧＴ盒（位于１８２～１８７ ｂｐ），一个ＴＴＡＡＡＡ 盒位于１５８～１６３ ｂｐ，这是人类Ｃｘ２６基因的又一启动区，这些发现无疑地对了解和阐明Ｃｘ２６基因在乳腺发育过程中及其病理生理作用的复杂调控具有特别重要的意义． 展开更多
关键词 Cx26基因 基因调控 CAT 报告基因分析 乳腺 发育
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MAGE-A9对人乳腺癌MDA-MB-231细胞中P53转录活性及功能的影响
7
作者 吕伟华 桑梅香 +2 位作者 王彬 于凡 单保恩 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期535-539,共5页
目的:探讨黑素瘤相关抗原-A9(melanoma-associated antigen,MAGE-A9)对人乳腺癌细胞中P53转录活性及功能的影响。方法:通过LipofectamineTM2000体外转染质粒pcDNA3.0、pcDNA3.0-p53、pCMV6-MAGE-A9和pcDNA3.0-p53/MAGE-A9至人乳腺癌MDA-... 目的:探讨黑素瘤相关抗原-A9(melanoma-associated antigen,MAGE-A9)对人乳腺癌细胞中P53转录活性及功能的影响。方法:通过LipofectamineTM2000体外转染质粒pcDNA3.0、pcDNA3.0-p53、pCMV6-MAGE-A9和pcDNA3.0-p53/MAGE-A9至人乳腺癌MDA-MB-231细胞,RT-PCR和Western blotting检测细胞中p21WAF1mRNA和蛋白的表达,荧光素酶报告基因分析检测细胞中p21WAF1启动子介导的荧光素酶表达活性,MTT法检测转染不同质粒对MDA-MB-231细胞增殖的影响。结果:转染pcDNA3.0-p53/MAGE-A9组MDA-MB-231细胞中p21WAF1mRNA和蛋白表达水平均明显低于pcDNA3.0-p53组[(0.15±0.01)vs(0.18±0.02),(0.03±0.00)vs(0.06±0.01);均P<0.05]。转染pcDNA3.0-p53质粒可以增强MDAMB-231细胞中p21WAF1启动子介导的荧光素酶的表达[(58.56±3.47)vs(1.00±0.12),P<0.01],转染pcDNA3.0-p53/MAGE-A9后,MDA-MB-231细胞中p21WAF1启动子介导的荧光素酶的表达较转染pcDNA3.0-p53组明显降低[(22.02±4.91)vs(58.56±3.47),P<0.05]。与pcDNA3.0组相比,pcDNA3.0-p53组MDA-MB-231细胞增殖率明显明显降低[(228.89±22.39)%vs(337.23±23.67)%,P<0.05];而pcDNA3.0-p53/MAGE-A9组MDA-MB-231细胞增殖率明显高于pcDNA3.0-p53组[(291.51±5.91)%vs(228.89±22.39)%,P<0.05]。结论:MAGE-A9可抑制MDA-MB-231细胞中P53的转录活性及细胞增殖。 展开更多
关键词 黑素瘤相关抗原-A9 P53 乳腺癌 转录活性 MDA-MB-231细胞 荧光素酶报告基因分析
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不同细胞中STAT元件对刺激因子的特异性应答 被引量：1
8
作者 黄晓敏 李冰 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期464-468,共5页
以高通量药物筛选为目的,构建转录因子STAT元件驱动的萤火虫荧光素酶报告载体,并进行功能初步验证.人工合成含IRF-1和C-FOS基因上游调控序列中的2个STAT元件的DNA片段,克隆于pGL3-promoter报道质粒作为报道载体pSTAT-luc;为检测其对不... 以高通量药物筛选为目的,构建转录因子STAT元件驱动的萤火虫荧光素酶报告载体,并进行功能初步验证.人工合成含IRF-1和C-FOS基因上游调控序列中的2个STAT元件的DNA片段,克隆于pGL3-promoter报道质粒作为报道载体pSTAT-luc;为检测其对不同有效因子刺激的反应性,该报道载体与荧光内参照载体pRL-SV40瞬时共转染不同细胞,在各种因子刺激条件下,双荧光素酶检测系统测定化学发光强度.结果显示,pSTAT-luc的报道基因载体符合预期设计;该载体转染细胞实验显示,在STAT途径阳性的HeLa、A549和MCF-7细胞中,特异刺激因子INF-γ和抑瘤素OSM处理能够剂量依赖性的引起细胞内萤火虫荧光素酶的升高;在STAT途径阴性的PC-12细胞,上述因子不能引起荧光素酶的活性改变;以非该途径因子刺激时,HeLa、A549和MCF-7细胞未见发光水平的改变.结果表明,构建的报道系统具有阳性细胞反应特异性以及阳性刺激-反应特异性,能够用于建立靶向STAT信号通路的高通量药物筛选平台. 展开更多
关键词 信号转导子和转录激活子信号通路 Γ-干扰素 抑瘤素 双荧光素酶报告基因分析
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