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纳米抗体多聚化测略提升间接竞争性酶联免疫吸附实验检测黄曲霉毒素M_(1)的灵敏度 被引量:2
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作者 刘颖达 刘海媛 +5 位作者 苏娜 李庆辉 刘佳 TUYATSETSEG Jambel 伊丽 吉日木图 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第18期291-299,共9页
酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)具有高通量、操作简单、检测结果明显等优点,是一种较为理想的检测食品中真菌污染物的免疫分析技术。然而,传统的ELISA方法具有较大的局限性,比如使用时抗体易受温度影响,容... 酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)具有高通量、操作简单、检测结果明显等优点,是一种较为理想的检测食品中真菌污染物的免疫分析技术。然而,传统的ELISA方法具有较大的局限性,比如使用时抗体易受温度影响,容易变性,贮存期短,易受到检测环境中其他物质干扰而造成假阳性或假阴性等。该实验使用实验室前期获得的抗黄曲霉毒素M_(1)(aflatoxin M_(1),AFM_(1))纳米抗体(nanobody-M4,Nb-M4)与C4结合蛋白(recombinant C4 binding protein alpha,C4BPa)C端片段融合形成自组装七聚体融合蛋白(Nb-M4-C4 bpα),并基于该七聚体开发应用于乳制品中AFM_(1)的间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)。在最佳实验参数下,AFM_(1)的IC_(50)为0.038 ng/mL,检测限为0.009 ng/mL,较单体Nb-M4的提高了8.63倍和5.56倍。与AFM_(1)类似物和其他常见真菌毒素的交叉反应可忽略不计,且在加标乳样中获得了良好的回收率和可重复性。此外,将所开发的方法应用于实际样品中AFM_(1)的分析,结果与HPLC的结果具有很好的相关性(R^(2)=0.995)。该研究表明,自组装的七聚化纳米抗体是改善亲和力和信号放大的有效策略,今后可用于灵敏、选择性和快速检测食品中的霉菌毒素和其他小分子污染物。 展开更多
关键词 竞争性免疫吸附实验 纳米抗体 多聚化 灵敏度增强方法
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梅毒螺旋体重组抗原酶联免疫吸附试验的建立及应用
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作者 何君 杜兰英 +2 位作者 庄辉 黄策 周育森 《生物技术通报》 CAS CSCD 2001年第2期28-30,共3页
建立梅毒螺旋体重组抗原酶联免疫吸附试验 (ELISA) ,用于梅毒血清学诊断和调查。其法 ,用表达的重组抗原TPN17和TmpA ,建立检测血清特异抗体的间接ELISA ,并与其它检测方法比较 ,分别检测梅毒参比血清、病人及献血员血清。其结果 ,敏感... 建立梅毒螺旋体重组抗原酶联免疫吸附试验 (ELISA) ,用于梅毒血清学诊断和调查。其法 ,用表达的重组抗原TPN17和TmpA ,建立检测血清特异抗体的间接ELISA ,并与其它检测方法比较 ,分别检测梅毒参比血清、病人及献血员血清。其结果 ,敏感性、特异性均为 10 0 %。新建ELISA与TPHA的总符合率为 95 .7% ,明显高于RPR与TPHA的总符合率 ( 89.1% )。献血员人群抗体阳性率为 0 .3%~ 0 .6 9% 。 展开更多
关键词 梅毒螺旋体 重组抗原 免疫吸附试验 血清学检测
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兽医实验室酶联免疫吸附试验操作要点 被引量:2
3
作者 姚伟 《现代畜牧兽医》 2015年第2期36-38,共3页
酶联免疫吸附试验(ELISA)是兽医实验室常用检测方法,具有灵敏度高、特异性强以及操作简便等特点。为了刚好地使用ELISA方法进行疫情检测以及疫病诊断,本文总结了常见ELISA试验各个操作步骤的注意事项,为广大实验员提供获得更准确有效的... 酶联免疫吸附试验(ELISA)是兽医实验室常用检测方法,具有灵敏度高、特异性强以及操作简便等特点。为了刚好地使用ELISA方法进行疫情检测以及疫病诊断,本文总结了常见ELISA试验各个操作步骤的注意事项,为广大实验员提供获得更准确有效的实验结果提供参考。 展开更多
关键词 免疫吸附试验(ELISA) 兽医实验 操作
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以赭曲霉毒素A单克隆抗体建立竞争酶联免疫吸附分析方法的研究 被引量:19
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作者 刘仁荣 余宙 +1 位作者 何庆华 许杨 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第11期174-177,共4页
本研究通过活性酯法合成赭曲霉毒素A人工抗原,免疫小鼠制备单克隆抗体,在此基础上建立了竞争ELISA检测方法,线性范围为200~6000pg/ml,检测下限为150pg/ml。单抗与赭曲霉毒素B的交叉反应率为35%,与桔霉素、黄曲霉毒素B1和展青霉素等毒... 本研究通过活性酯法合成赭曲霉毒素A人工抗原,免疫小鼠制备单克隆抗体,在此基础上建立了竞争ELISA检测方法,线性范围为200~6000pg/ml,检测下限为150pg/ml。单抗与赭曲霉毒素B的交叉反应率为35%,与桔霉素、黄曲霉毒素B1和展青霉素等毒素交叉反应低于0.01%。在小麦样品中的加标回收率为83%~116%,变异系数为9.4%~19.8%。测试23份样品,赭曲霉毒素A的含量在0.6~2.56μg/kg之间。 展开更多
关键词 赭曲霉毒素A 人工抗原 单克隆抗体 免疫吸附分析方法
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农药残留酶联免疫吸附分析技术研究进展 被引量:13
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作者 刘冰 魏松红 +2 位作者 尹晓东 何智勇 白莹莹 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第21期6484-6484,6515,共2页
酶联免疫吸附分析法具有灵敏度高、特异性强、方便快捷的特点,在现场筛选和大量样品的快速检测中显示了其独特的优势。简要介绍了农药残留酶联免疫吸附分析技术的关键环节及其应用,并对该技术存在的问题和应用前景进行了讨论。
关键词 农药残留 免疫吸附分析 抗原 抗体
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间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清4型鸭疫里默氏杆菌抗体的研究 被引量:13
6
作者 程安春 汪铭书 +4 位作者 方鹏飞 郭宇飞 刘兆宇 陈孝跃 周毅 《中国家禽》 北大核心 2004年第16期11-14,共4页
应用超声波裂解法制备的血清4型鸭疫里默氏杆菌(RA)裂解物作为抗原包被酶标板,成功建立了4型RA抗体检测的间接ELISA法。
关键词 间接免疫吸附试验 ELISA 血清4型 鸭疫里默氏杆菌 抗原 抗体检测 养鸭业
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甲萘威酶联免疫吸附分析技术研究 被引量:29
7
作者 刘曙照 冯大和 钱传范 《农药学学报》 CAS CSCD 1999年第1期62-68,共7页
合成了两种不同结构的甲萘威半抗原并与载体蛋白质共价偶联制备人工抗原。以人工抗原免疫动物获得对甲萘威具特异性的高效价抗体 ,建立并优化了痕量甲萘威的竞争性酶联免疫吸附测定法。该法测定甲萘威的线性浓度范围为 10 1~ 10 -4 μg... 合成了两种不同结构的甲萘威半抗原并与载体蛋白质共价偶联制备人工抗原。以人工抗原免疫动物获得对甲萘威具特异性的高效价抗体 ,建立并优化了痕量甲萘威的竞争性酶联免疫吸附测定法。该法测定甲萘威的线性浓度范围为 10 1~ 10 -4 μg/ml,检测限低于 0 .0 1ng/ml。 展开更多
关键词 甲萘威 抗原 人工抗原 免疫吸附测定法 氨基甲酸酯类杀虫剂 残留 免疫分析化学
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呋喃西林代谢物多克隆抗体制备及酶联免疫吸附分析方法 被引量:7
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作者 任海涛 沈玉栋 +5 位作者 徐振林 杨金易 雷红涛 肖治理 王弘 孙远明 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期330-333,379,共5页
为了建立检测呋喃西林代谢物(SEM)的酶联免疫吸附分析方法(ELISA),将所设计合成的系列半抗原与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫原并免疫新西兰大白兔,筛选获得源于新颖半抗原H3的具有高亲和力、高特异性抗SEM多克隆抗体。同时,基于设计... 为了建立检测呋喃西林代谢物(SEM)的酶联免疫吸附分析方法(ELISA),将所设计合成的系列半抗原与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫原并免疫新西兰大白兔,筛选获得源于新颖半抗原H3的具有高亲和力、高特异性抗SEM多克隆抗体。同时,基于设计合成的系列同/异源包被抗原,考察了不同结构包被原对ELISA灵敏度的影响,发现H4-OVA作为异源包被原建立SEM的ELISA检测方法可获得最佳的检测效果,结果显示:ELISA方法的半抑制浓度(IC50)为12.37ng/mL;定量检测线性范围(IC20~IC80)为0.439~110.78ng/mL;检测限(IC10)达0.07ng/mL,达到了国内外相关检测限量要求,可应用于实际食品样品检测。 展开更多
关键词 硝基西林 抗原设计 多克隆抗体 异源包被 ELISA(免疫吸附分析)
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间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清2型鸭疫里默氏杆菌抗体的研究 被引量:13
9
作者 程安春 汪铭书 +4 位作者 方鹏飞 郭宇飞 刘兆宇 陈孝跃 周毅 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2004年第12期14-16,共3页
关键词 RA 抗体 血清流行病学调查 ELISA 间接免疫吸附试验 抗原成分 慢性 鸭疫里默氏杆菌 气囊炎 琼脂扩散试验
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完整弓形虫P35重组蛋白IgM-酶联免疫吸附测定法检测弓形虫急性感染 被引量:4
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作者 吕斌 吴少廷 +5 位作者 周宜开 徐顺清 张仁利 高世同 林敏 张志仁 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第1期134-137,共4页
为利用重组的完整弓形虫表面抗原P35 GST蛋白对弓形虫感染进行血清学诊断 ,构建了可表达P35 GST的JM10 9细胞株 .采用亲和层析对融合蛋白进行分离和纯化 ,用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和蛋白质印迹 (Westernblot)分析所表达... 为利用重组的完整弓形虫表面抗原P35 GST蛋白对弓形虫感染进行血清学诊断 ,构建了可表达P35 GST的JM10 9细胞株 .采用亲和层析对融合蛋白进行分离和纯化 ,用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和蛋白质印迹 (Westernblot)分析所表达的蛋白质 ,并用纯化的重组蛋白进行IgM 酶联免疫吸附测定法 (IgM ELISA)检测不同病人血清中的抗 P35抗体 .SDS PAGE分析发现P35 GST重组蛋白的大小约 6 0ku ,为一亲水性蛋白 ,蛋白质印迹分析表明该蛋白与弓形虫阳性感染病人的血清有特异性反应 .利用P35 GST为抗原 ,对 6 0例血清进行IgM ELISA分析 ,发现P35 GST可明显区分近期感染和既往感染 ,在弓形虫的诊断上有很大的应用前景 . 展开更多
关键词 完整弓形虫表面抗原 P35-GST蛋白 弓形虫感染 IgM-免疫吸附测定法
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酶联免疫吸附试验方法的比较 被引量:5
11
作者 庞保平 程家安 陈正贤 《中国生物防治》 CSCD 1999年第1期31-34,共4页
应用白背飞虱单克隆抗体比较了3种酶联免疫吸附试验方法。结果表明:间接酶联免疫吸附试验的灵敏度高于直接酶联免疫吸附试验,分别为0.03125μg蛋白/ml(相当于1/256头成虫)和0.0625μg蛋白/ml(相当于1... 应用白背飞虱单克隆抗体比较了3种酶联免疫吸附试验方法。结果表明:间接酶联免疫吸附试验的灵敏度高于直接酶联免疫吸附试验,分别为0.03125μg蛋白/ml(相当于1/256头成虫)和0.0625μg蛋白/ml(相当于1/128头成虫),而双抗夹心酶联免疫吸附试验无法使用。样品中非目标抗原(捕食者)浓度对检测结果有显著的影响,且对直接酶联免疫吸附试验的影响更大。 展开更多
关键词 免疫吸附试验 灵敏度 非目标抗原 单克隆抗体
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蛋白芯片-酶联免疫吸附法检测148例弥漫性结缔组织病患者抗ENA抗体 被引量:1
12
作者 张宁 李爽 +2 位作者 李典 崔华东 付文轶 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期232-233,共2页
应用蛋白芯片-酶联免疫吸附法和Western blot分别检测148例弥漫性结缔组织病患者和30名健康人的抗可提取性核抗原(抗ENA)抗体谱,比较两种方法检测抗Sm、抗U1-RNP、抗SS-A和抗SS-B抗体在各自相对特异性疾病中的阳性率。蛋白芯片-酶联免... 应用蛋白芯片-酶联免疫吸附法和Western blot分别检测148例弥漫性结缔组织病患者和30名健康人的抗可提取性核抗原(抗ENA)抗体谱,比较两种方法检测抗Sm、抗U1-RNP、抗SS-A和抗SS-B抗体在各自相对特异性疾病中的阳性率。蛋白芯片-酶联免疫吸附法检测抗ENA抗体谱准确、方便。 展开更多
关键词 可提取性核抗原 蛋白芯片 免疫吸附
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酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎e抗原和e抗体
13
作者 梅雅馨 康庸 +3 位作者 孟令先 李翔 许健音 孙威 《中国医科大学学报》 CAS 1985年第2期132-134,共3页
应用酶联免疫试验(ELISA)检测e抗原、e抗体,是一种特异性强、敏感度高、重复性好的方法。较ID法大大提高了检出率。
关键词 免疫吸附试验 乙肝E抗原 乙肝e抗体
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酶联免疫吸附试验检测姜片虫感染者血清抗体
14
作者 陈思礼 陈强 +10 位作者 袁媛 周雨丝 李玲 张喜红 刘辉 陈建设 陈思义 吴凤娇 廖林贵 石教伦 余祥光 《湖北农业科学》 北大核心 2004年第4期123-125,共3页
超声粉碎制备姜片吸虫成虫冷浸抗原,以1:3500工作浓度包被酶标板;采用Kato—Katz氏定透法普查姜片吸虫病,对虫卵阳性者用ELISA法测定血清抗体,同时测定健康居民的血清和其他吸虫病患者血清,以评价ELISA法检测姜片虫病血清抗体的敏感性... 超声粉碎制备姜片吸虫成虫冷浸抗原,以1:3500工作浓度包被酶标板;采用Kato—Katz氏定透法普查姜片吸虫病,对虫卵阳性者用ELISA法测定血清抗体,同时测定健康居民的血清和其他吸虫病患者血清,以评价ELISA法检测姜片虫病血清抗体的敏感性、特异性和交叉反应性。按常规ELISA方法操作,目视与酶标仪判断结果。普查2 189人中姜片吸虫卵阳性者168例;168例中165例ELISA阳性,ELISA与Kato—Katz氏定透法的阳性符合率98.21%;健康居民血清147份,阳性6份,阳性率4.08%;与血吸虫病交叉阳性为9.38%,肺吸虫病交叉阳性为5.36%。应用此法检测姜片虫感染者血清抗体具有敏感性高、特异性强和交叉反应率低等特点,可代替粪检法广泛用于姜片吸虫感染的检测。 展开更多
关键词 姜片吸虫 成虫抗原 免疫吸附试验 血清抗体测定
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酶联免疫吸附分析法应用于战场水环境TNT检测的可行性研究
15
作者 刘婧婷 谯华 +1 位作者 冯孝杰 陈志莉 《湖北农业科学》 2017年第1期125-127,131,共4页
为了快速检测战场水环境中TNT含量以判断水源可用性,提出了建立关于TNT的酶联免疫吸附分析法(ELISA)。分析ELISA的建立要点:根据TNT分子结构官能团的可改造性提出了合成半抗原的3种方法;对应3类半抗原采用不同蛋白偶联方法合成3种人工抗... 为了快速检测战场水环境中TNT含量以判断水源可用性,提出了建立关于TNT的酶联免疫吸附分析法(ELISA)。分析ELISA的建立要点:根据TNT分子结构官能团的可改造性提出了合成半抗原的3种方法;对应3类半抗原采用不同蛋白偶联方法合成3种人工抗原;分析动物体对TNT人工抗原可产生有效免疫应答并可获得满足ELISA要求的抗血清;样品前处理方法可满足快速检测要求。从理论证明建立TNT的ELISA并满足检测要求的可行性;同时,提出了利用此法检测待解决和优化的问题。 展开更多
关键词 TNT 水环境 免疫吸附分析法 抗原 抗血清
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兽医实验室酶联免疫吸附试验操作要点
16
作者 乔飞 安彩霞 《河南畜牧兽医(综合版)》 2019年第7期35-35,共1页
1样品的基本知识主要介绍样品采集、处理以及保存的知识,ELISA测定样品很多,如血清、尿液、唾液、排泄物等。部分样品可直接开展ELISA检测,比如血清;而部分样品则需要经过预处理,比如粪便。兽医实验室一般根据常规方式采集样品,禽类采... 1样品的基本知识主要介绍样品采集、处理以及保存的知识,ELISA测定样品很多,如血清、尿液、唾液、排泄物等。部分样品可直接开展ELISA检测,比如血清;而部分样品则需要经过预处理,比如粪便。兽医实验室一般根据常规方式采集样品,禽类采心脏、翅静脉血的方式;猪采前腔静脉等处血;羊采颈静脉血;牛采颈静脉、尾静脉血。将血清分离时,避免出现溶血°现阶段,ELISA试剂盒多数使用的辣根过氧化物酶作为标记,红细胞溶解就会释放出较多的过氧化酶活性物质,在ELISA检测中,溶血会造成非特异性显色,导致假阳性,最后很难得到精确的检测结果。 展开更多
关键词 兽医实验 免疫吸附 试验操作 ELISA检测 ELISA试剂盒 辣根过氧化物 样品采集 血清分离
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烯效唑酶联免疫吸附分析方法研究 被引量:2
17
作者 江小雪 张昭 +2 位作者 武霓 施海燕 王鸣华 《分析科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期677-680,共4页
合成了半抗原烯效唑琥珀酸半酯,分别将半抗原与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联制备了免疫抗原和包被抗原,并成功建立了水和土壤中烯效唑残留的酶联免疫吸附分析法。用免疫抗原免疫新西兰大白兔得到多克隆抗体,抗体的效价达到1.02&#... 合成了半抗原烯效唑琥珀酸半酯,分别将半抗原与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联制备了免疫抗原和包被抗原,并成功建立了水和土壤中烯效唑残留的酶联免疫吸附分析法。用免疫抗原免疫新西兰大白兔得到多克隆抗体,抗体的效价达到1.02×106。方法的线性范围为0.005~10mg/L,检出限为1.82±0.83μg/L。除烯唑醇有一定的交叉反应外,与大部分三唑类杀菌剂都没有明显的交叉反应。在水和土壤中添加不同浓度的烯效唑,回收率分别在82.40%~105.92%和92.42%~100.08%之间。 展开更多
关键词 烯效唑 抗原 多克隆抗体 免疫吸附分析
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精吡氟禾草灵酶联免疫吸附分析方法研究 被引量:1
18
作者 鲍华军 武霓 +1 位作者 施海燕 王鸣华 《分析科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期665-668,共4页
建立了定量测定精吡氟禾草灵的间接竞争酶联免疫吸附分析方法(ic-ELISA)。将精吡氟禾草灵在碱性条件下水解制得半抗原,再将半抗原与蛋白质偶联形成抗原后免疫新西兰大白兔,获得多克隆抗体。对其进行条件优化后,得到了精吡氟禾草灵的ic-E... 建立了定量测定精吡氟禾草灵的间接竞争酶联免疫吸附分析方法(ic-ELISA)。将精吡氟禾草灵在碱性条件下水解制得半抗原,再将半抗原与蛋白质偶联形成抗原后免疫新西兰大白兔,获得多克隆抗体。对其进行条件优化后,得到了精吡氟禾草灵的ic-ELISA方法的标准曲线。该方法的Ic50为0.553mg/L。检出限为0.0062mg/L。方法对其他芳氧苯氧基丙酸酯类除草剂没有明显交叉反应。精吡氟禾草灵在样品中的回收率为86.80%~103.41%,变异系数为3.96%~12.32%。表明本研究建立的精吡氟禾草灵的ELISA方法符合农药残留分析的要求。 展开更多
关键词 精吡氟禾草灵 抗原 多克隆抗体 免疫吸附分析
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直接竞争酶联免疫吸附法检测虾过敏蛋白 被引量:1
19
作者 罗奕铭 王丽 钟青萍 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期337-339,347,共4页
目的:建立酶标抗原的直接竞争酶联免疫吸附法(dcELISA)检测食品中虾过敏蛋白,为食品过敏诊断试剂的开发和应用提供理论基础。方法:提取虾主要过敏蛋白,免疫小鼠制备抗虾过敏蛋白多克隆抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记抗原,建立酶标抗原的d... 目的:建立酶标抗原的直接竞争酶联免疫吸附法(dcELISA)检测食品中虾过敏蛋白,为食品过敏诊断试剂的开发和应用提供理论基础。方法:提取虾主要过敏蛋白,免疫小鼠制备抗虾过敏蛋白多克隆抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记抗原,建立酶标抗原的dcELISA检测虾过敏蛋白。结果:所建立的dcELISA法最低检测限为3.94ng/mL,标准曲线在0.12~128.86ng/mL范围内线性良好,批内和批间变异系数分别为6.16%和2.73%,回收率为82%~98%。结论:该方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性,为进一步研制检测虾过敏蛋白的ELISA试剂盒提供有效的方法。 展开更多
关键词 虾过敏蛋白 检测 多克隆抗体 抗原 直接竞争免疫吸附
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快速定量分析牛乳中α-乳白蛋白的竞争酶联免疫吸附法 被引量:2
20
作者 宋宏新 程妮 +1 位作者 薛海燕 杜枘宣 《中国科学院大学学报(中英文)》 CSCD 北大核心 2016年第3期360-364,共5页
建立一种灵敏度高和特异性好的直接竞争ELISA法来定性和定量检测牛乳中α-乳白蛋白(α-LA).通过使用牛乳α-LA多次免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并采用过碘酸钠氧化法制备辣根过氧化物酶(HRP)标记的α-LA,建立检测α-LA的直接竞... 建立一种灵敏度高和特异性好的直接竞争ELISA法来定性和定量检测牛乳中α-乳白蛋白(α-LA).通过使用牛乳α-LA多次免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并采用过碘酸钠氧化法制备辣根过氧化物酶(HRP)标记的α-LA,建立检测α-LA的直接竞争ELISA法.所制备的多克隆抗体特异性较高,无明显交叉反应,效价为1∶80 920.酶标抗原的标记率达66.67%.直接竞争ELISA法标准曲线相关系数为0.998 57,回收率在86.00%-117.50%之间,重复性高,变异系数〈5%.与国标电泳方法进行样品检测比较,结果显示该方法可有效地用于食品中α-LA的快速定性和定量检测. 展开更多
关键词 定量分析 蛋白质 竞争免疫吸附实验 Α-乳白蛋白 免疫试验
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