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光色素荧光探针测定抗体蛋白质
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作者 王丽丽 庄惠生 周纯 《理化检验(化学分册)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1276-1278,共3页
由于牛血清白蛋白(BSA)与光色素的结合反应,引起光色素荧光淬灭,且其荧光淬灭程度与BSA的浓度在0.050~1.0 mg.L-1范围内呈线性关系。据此提出了以光色素为探针测定抗体蛋白质的荧光方法。方法的检出限(3S/N)为8.0μg.L-1。用标准加入... 由于牛血清白蛋白(BSA)与光色素的结合反应,引起光色素荧光淬灭,且其荧光淬灭程度与BSA的浓度在0.050~1.0 mg.L-1范围内呈线性关系。据此提出了以光色素为探针测定抗体蛋白质的荧光方法。方法的检出限(3S/N)为8.0μg.L-1。用标准加入法对方法的回收率作了试验,测得回收率在95.0%~104.0%之间,测定值的相对标准偏差(n=6)小于2.5%。 展开更多
关键词 荧光光谱法 荧光探针 光色素 抗体蛋白质 牛血清白蛋白
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叶绿体基因编码蛋白质在水稻叶片生长过程中的表达研究 被引量:13
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作者 兰金苹 李莉云 +6 位作者 贾霖 曹英豪 白辉 陈浩 刘胜南 吴琳 刘国振 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第7期652-660,共9页
叶绿体是绿色植物把光能转化为化学能的重要细胞器.目前,多种植物的叶绿体基因组序列已经获得,对叶绿体内发生的各种生物学过程人们也已经有相当深入的了解,但对叶绿体基因编码蛋白质的表达还所知甚少.用蛋白质印迹实验系统地检测了15... 叶绿体是绿色植物把光能转化为化学能的重要细胞器.目前,多种植物的叶绿体基因组序列已经获得,对叶绿体内发生的各种生物学过程人们也已经有相当深入的了解,但对叶绿体基因编码蛋白质的表达还所知甚少.用蛋白质印迹实验系统地检测了15个叶绿体基因编码蛋白质在水稻叶片不同生长时期的表达.其中7个与光合作用相关蛋白质的表达具有相似的模式,其表达量随叶片生长而增加,一般在孕穗期、开花期达到最高峰,在成熟期叶片下降,这种模式与水稻生长对光合作用的需求有明显相关性.4个与DNA复制相关的RNA聚合酶在苗期叶片中表达量达到最高,说明这些聚合酶在较早时期发挥作用.4个NADH脱氢酶蛋白质的表达呈2种不同的模式,其中亚基2和4在种子萌发后的早期叶片中就达到最高峰,亚基5和7的最高峰出现在中后期,反映了它们之间功能上的不同.实验结果直观且相对定量地揭示了叶绿体编码蛋白质的表达与叶片生长之间的关联关系,为深入了解其功能提供了重要的线索. 展开更多
关键词 水稻 叶绿体 蛋白质表达谱 基于抗体蛋白质组学
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水稻叶绿体蛋白质在生长发育过程中的表达研究 被引量:12
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作者 白辉 王宪云 +6 位作者 曹英豪 李晓明 李莉云 陈浩 刘丽娟 朱健辉 刘国振 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第9期988-995,共8页
在植物中,叶绿体是负责光合作用的细胞器,对叶绿体内的各种生物过程人们已经积累了很多知识,但对叶绿体蛋白质的表达还所知甚少.为了解水稻叶绿体蛋白质在正常生长发育过程中的表达情况,尝试基于抗体的水稻蛋白质组学策略.选取了10个水... 在植物中,叶绿体是负责光合作用的细胞器,对叶绿体内的各种生物过程人们已经积累了很多知识,但对叶绿体蛋白质的表达还所知甚少.为了解水稻叶绿体蛋白质在正常生长发育过程中的表达情况,尝试基于抗体的水稻蛋白质组学策略.选取了10个水稻叶绿体基因,利用表达的蛋白质或合成的抗原决定簇片段制备了抗体,用Westernblotting检测了相应蛋白质在5个发育时期的根、茎、叶及穗组织中的表达.发现10个蛋白质均在叶片中表达,在根中不表达.与原初反应相关的叶绿素A/B结合蛋白1和2(CAB1和CAB2)、与电子传递相关的放氧增强蛋白1(OEE1)及与活性氧清除相关的过氧还蛋白过氧化物酶(2-CysP)和硫氧还蛋白(Trx)在茎中表达.而在卡尔文循环中发挥作用的Rubisco活化酶(RCA)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、果糖二磷酸醛缩酶(FBPA)和景天庚酮糖-1,7-二磷酸酶(SBPase)蛋白质在茎中不表达.在穗中,这些蛋白质的表达时序不同,CAB2和2-CysP在穗发育的全程表达,CAB1和OEE1在中后期表达,而卡尔文循环中的蛋白质只在中期表达.有意思的是,卡尔文循环中的蛋白质表达模式相似,这一结果从蛋白质表达水平支持它们之间的相互衔接关系.此外,实验还揭示了可能的蛋白质修饰、二聚体及不同的转录本现象.将目标基因的表达谱与转录谱进行比较,发现二者间有一定的平行性,但也有明显的区别.以水稻叶绿体蛋白质为对象,直观并相对定量地揭示了它们的表达模式,为阐释其功能提供了信息,也为基于抗体的水稻蛋白质组学策略提供了一个初步数据. 展开更多
关键词 水稻 叶绿体 光合作用 蛋白质表达谱 基于抗体蛋白质组学
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水稻核糖核酸酶T2蛋白质在叶片生长和盐胁迫过程中的表达研究 被引量:4
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作者 曾祥然 魏健 +6 位作者 贾霖 关明俐 刘钊 兰金苹 刘丽娟 李莉云 刘国振 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期743-749,共7页
核糖核酸酶(Ribonucleases,RNase,RNS)T2普遍存在于各种生物中,其保守性提示了功能的重要性。在水稻基因组中有8个RNase T2成员,本试验采用基于抗体的蛋白质组学策略,用免疫印迹(Western Blotting,WB)技术检测了它们在叶片生长及盐胁迫... 核糖核酸酶(Ribonucleases,RNase,RNS)T2普遍存在于各种生物中,其保守性提示了功能的重要性。在水稻基因组中有8个RNase T2成员,本试验采用基于抗体的蛋白质组学策略,用免疫印迹(Western Blotting,WB)技术检测了它们在叶片生长及盐胁迫条件下的表达,发现OsRNS1-OsRNS7蛋白质在叶片中有表达,其中OsRNS4主要在苗期表达,提示其在苗期发挥作用,其它蛋白质主要在成株期表达,但没有检测到OsRNS8的表达;水稻OsRNS4在盐胁迫条件下表达上调,提示其可能在盐胁迫应答过程中发挥作用,其它RNase T2蛋白质的表达大多随盐胁迫时间的延长而下降。将RNase T2蛋白质的表达与转录信号进行比较,发现二者在部分基因中有一定的相关性。本试验获得的数据为揭示水稻RNase T2基因的功能提供了线索。 展开更多
关键词 水稻 核糖核酸酶(RNase)蛋白质 免疫印迹 基于抗体蛋白质组学
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水稻线粒体基因编码蛋白质在种子萌发及叶片发育过程中的表达分析 被引量:2
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作者 兰金苹 丁国涛 +4 位作者 刘钊 郭亚璐 郭美岑 史佳楠 刘国振 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期1-8,共8页
线粒体是真核生物中主要的能量供应细胞器,虽然多种植物的线粒体基因组序列已知,但对线粒体基因编码蛋白质的表达研究关注甚少。本研究采取基于抗体的蛋白质组学策略,制备了17个线粒体基因编码蛋白质的特异性抗体,包括NADH脱氢酶、细胞... 线粒体是真核生物中主要的能量供应细胞器,虽然多种植物的线粒体基因组序列已知,但对线粒体基因编码蛋白质的表达研究关注甚少。本研究采取基于抗体的蛋白质组学策略,制备了17个线粒体基因编码蛋白质的特异性抗体,包括NADH脱氢酶、细胞色素C氧化酶、细胞色素C合成酶、ATP合酶和核糖体蛋白质等5类,利用免疫印迹技术(Western blot)调查了这些蛋白质在水稻种子萌发及不同生长发育时期叶片中的表达情况。结果发现,在种子萌发阶段,ATP合酶中的亚基9和核糖体蛋白质S13亚基表达上调,细胞色素C合成酶CCMB和CCMC表达下调,其余13个表达没有发生变化。在叶片发育阶段,15个蛋白质发生表达上调,且表达模式基本相似,均呈现前期较低,随发育逐渐提高,到成株期达到峰值,其中部分蛋白质在成熟期仍维持在较高的峰值强度(如NAD4、CCMFc、ATP9、RPS1、RPS4和RPS7),提示这些蛋白质在成熟后的灌浆期仍发挥一定作用,而其余蛋白质在成熟期表达量明显下降,提示其功能主要是在营养生长阶段发挥。有意思的是,在叶片发育阶段,RPS19蛋白质表达下调,ATP1蛋白质的表达稳定,它们的特征和功能值得进一步关注。本试验结果直观且相对定量地揭示了线粒体基因编码蛋白质的表达与种子萌发和叶片生长之间的关联,为深入了解其功能提供了有价值的线索。 展开更多
关键词 水稻 线粒体 蛋白质表达 基于抗体蛋白质组学 免疫印记
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过表达OsMPK17激酶蛋白质增强了水稻的耐旱性 被引量:4
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作者 马金姣 兰金苹 +9 位作者 张彤 陈悦 郭亚璐 刘玉晴 燕高伟 魏健 窦世娟 杨明 李莉云 刘国振 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期20-30,共11页
促分裂原活化蛋白质激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)在真核生物中高度保守,在水稻逆境应答反应中也发挥着重要作用。本研究表达纯化了水稻OsMPK17蛋白质,制备了特异性抗体,对多种非生物逆境胁迫下的蛋白质样品进行免疫印... 促分裂原活化蛋白质激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)在真核生物中高度保守,在水稻逆境应答反应中也发挥着重要作用。本研究表达纯化了水稻OsMPK17蛋白质,制备了特异性抗体,对多种非生物逆境胁迫下的蛋白质样品进行免疫印迹分析,发现OsMPK17蛋白质在干旱胁迫下诱导表达,提示该蛋白质在干旱胁迫应答中发挥作用。对脱落酸和茉莉酸甲酯处理的离体叶片蛋白质分析发现,OsMPK17蛋白质表达丰度下降,提示该蛋白质的功能发挥可能受激素调控。为此,构建了过表达OsMPK17蛋白质的载体,转化水稻后筛选获得了OsMPK17蛋白质过表达的纯合株系。田间种植鉴定结果表明,转基因株系的株高变矮、穗长变短、结实率降低。种子萌发期拟旱(PEG-6000)处理条件下,过表达OsMPK17株系的种子长势明显比野生型好,根长与芽长均显著大于野生型。幼苗期失水试验表明,转基因植株的失水率低于野生型。在土培干旱胁迫后恢复浇水的试验中,过表达OsMPK17蛋白质的转基因水稻生长也好于野生型。综上,过表达OsMPK17蛋白质提高了水稻的耐旱性。本研究增进了对水稻OsMPK17基因功能的了解。 展开更多
关键词 水稻 MAPK蛋白质 免疫印迹 逆境胁迫 过表达 基于抗体蛋白质组学
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抗大肠癌组织差异表达蛋白(SCAP47)抗体的制备及初步应用
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作者 王志红 曹建彪 李世荣 《科学技术与工程》 2004年第7期562-565,570,共5页
制备一种新的大肠癌组织差异表达蛋白质抗体(抗SCAP47),用于检测大肠癌相关肿瘤抗原SCAP47。采用本室制备的大肠癌组织差异表达蛋白质(SCAP47)免疫新西兰纯种兔,制备兔抗SCAP47抗体,用双向免疫扩散法和ELISA法测定抗体效价;并用ELISA法... 制备一种新的大肠癌组织差异表达蛋白质抗体(抗SCAP47),用于检测大肠癌相关肿瘤抗原SCAP47。采用本室制备的大肠癌组织差异表达蛋白质(SCAP47)免疫新西兰纯种兔,制备兔抗SCAP47抗体,用双向免疫扩散法和ELISA法测定抗体效价;并用ELISA法检测129例患者的胃肠道肿瘤和疾病及正常对照组织的可溶性SCAP47抗原。用SCAP47抗原免疫新西兰纯种兔,获得抗SCAP47抗体,经检测其最高效价:双向免疫扩散法为1∶32;ELISA法为1∶6400。129例患者的胃肠道肿瘤和疾病及正常对照组织可溶性SCAP47抗原ELISA法检测结果显示:诊断大肠癌的敏感性52.4%,特异性95.4%,阳性预示值84.6%,阴性预示值80.6%,似然比11.4,约登指数0.47。本实验制备的抗SCAP47抗体是一种新的大肠癌相关抗原SCAP47抗体。由于SCAP47不同于CEA、P^(27)、CCA等大肠癌肿瘤标志物,且在大肠癌中呈现高度表达,推测其可能是一种新的大肠癌相关抗原。因此,制备抗SCAP47抗体为用于多种指标联合检测早期大肠肿瘤提供了一种新的检测工具。 展开更多
关键词 大肠癌 抗大肠癌组织差异表达蛋白质抗体 大肠癌早期诊断
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人间隙连接蛋白31相互作用蛋白AnnexinⅡ的筛选与证实
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作者 刘宇 贺力强 +11 位作者 谭志平 唐程远 迟静薇 蔡芳 潘乾 龙志高 梁德生 邬玲仟 戴和平 夏昆 张灼华 夏家辉 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第6期501-507,共7页
间隙连接蛋白31(connexin31,Cx31)是间隙连接蛋白(connexin)家族的一员,目前对于Cx31的功能及其调节方式知之甚少.采用固相多肽合成的方法合成Cx31羧基端一个多肽片段(250 ̄266),经HPLC纯化后偶联到匙孔血蓝蛋白,免疫新西兰雄兔后采血... 间隙连接蛋白31(connexin31,Cx31)是间隙连接蛋白(connexin)家族的一员,目前对于Cx31的功能及其调节方式知之甚少.采用固相多肽合成的方法合成Cx31羧基端一个多肽片段(250 ̄266),经HPLC纯化后偶联到匙孔血蓝蛋白,免疫新西兰雄兔后采血检测、并纯化、经蛋白质印迹、细胞免疫荧光染色、免疫沉淀证实得到的抗体为特异性抗Cx31的抗体.运用制备的抗Cx31多克隆抗体免疫沉淀,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离,蛋白质条带回收,蛋白质胶块酶解,Q-TOF质谱分析,数据库扫描筛选可能相互作用蛋白,运用抗体pull-down实验,筛选到可能相互作用蛋白annexinⅡ,经过免疫共沉淀、细胞免疫共定位等实验证实annexinⅡ与Cx31相互作用. 展开更多
关键词 间隙连接蛋白31 抗体蛋白质相互作用 annexinⅡ 免疫共沉淀 免疫共定位
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CENP-B抗体阳性的原发性干燥综合征患者的临床和免疫学特征 被引量:4
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作者 孟彦宏 陈怡帆 周培茹 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1088-1096,共9页
目的:探讨着丝点蛋白B(centromere protein B,CENP-B)抗体阳性的原发性干燥综合征(primary Sj9gren’s syndrome,pSS)患者的临床和免疫学特征。方法:采用横断面研究的研究设计,回顾性纳入2016年1月至2022年8月就诊于北京大学口腔医院并... 目的:探讨着丝点蛋白B(centromere protein B,CENP-B)抗体阳性的原发性干燥综合征(primary Sj9gren’s syndrome,pSS)患者的临床和免疫学特征。方法:采用横断面研究的研究设计,回顾性纳入2016年1月至2022年8月就诊于北京大学口腔医院并确诊为pSS的患者,收集分析患者的一般及临床特征、唾液腺造影、唇腺活检病理、血清免疫学及生化检查等资料。将pSS患者分为CENP-B抗体阳性组和阴性组,用SPSS 23.0软件对数据进行描述性分析、单因素及相关性分析,并将CENP-B抗体阳性组分为CENP-B抗体单阳性组及合并其他抗体阳性组进行亚组分析。结果:共纳入288例pSS患者,其中CENP-B抗体阳性组75例(26.0%),阴性组213例(74.0%)。CENP-B抗体阳性组的发病年龄较大,罹患自身免疫性肝病的比例较高,唾液腺肿大的比例较低,SSA/Ro60、Ro52、SSB抗体的阳性率均较低,免疫球蛋白G、类风湿因子的水平较低,免疫球蛋白M的水平较高,总蛋白水平较低,而白蛋白/球蛋白比值、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转移酶、乳酸脱氢酶的水平较高。亚组分析显示,CENP-B抗体单阳性组的总蛋白、免疫球蛋白A水平低于合并其他抗体阳性组。结论:CENP-B抗体阳性的pSS患者具有独特的临床和免疫学特征,表现为疾病活动性较低,较少发生唾液腺肿大,但易罹患自身免疫性肝病,肝功能生化指标水平偏高,提示CENP-B抗体可能是pSS亚型分类的特异性标志物。 展开更多
关键词 着丝点蛋白质B抗体 原发性干燥综合征 自身抗体 免疫学特征
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Wegener肉芽肿1例
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作者 陈仁贵 庄寅 +1 位作者 钱黎华 李敏 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第12期722-723,共2页
报告1例Wegener肉芽肿病。患者女,29岁。主要表现为肺部炎症,抗生素治疗无效。鼻黏膜糜烂,舌部溃疡,双下肢紫癜和坏死性结痂。组织病理检查:鼻黏膜糜烂为非特异性炎症;小腿皮疹为坏死性血管炎和肉芽肿性血管炎改变。实验室检查:抗中性... 报告1例Wegener肉芽肿病。患者女,29岁。主要表现为肺部炎症,抗生素治疗无效。鼻黏膜糜烂,舌部溃疡,双下肢紫癜和坏死性结痂。组织病理检查:鼻黏膜糜烂为非特异性炎症;小腿皮疹为坏死性血管炎和肉芽肿性血管炎改变。实验室检查:抗中性粒细胞胞质抗体cANCA和蛋白酶3PR3-ANCA均阳性,肾功能不全。给予甲泼尼龙80mg/d和环磷酰胺100mg/d治疗,2周后小腿皮疹消退,但肾功能改善不明显,转入肾脏科继续治疗。 展开更多
关键词 WEGENER肉芽肿 抗中性细胞质抗体 蛋白质白酶3抗体
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氟化物对鸡免疫功能的影响机理
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《河南畜牧兽医(综合版)》 1999年第7期52-52,共2页
关键词 鸡免疫 细胞免疫功能 氟化钠 体液免疫功能 生长发育 机体免疫功能 中枢淋巴器官 抗体蛋白质 保护性应答 干细胞
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