抑制性消减杂交技术及其应用研究进展 被引量：4

1

作者 周变华 王宏伟 +3 位作者 杨自军 王国永 郝雪琴 孔涛 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2011年第12期40-42,共3页

抑制性消减杂交(SSH)技术是结合抑制性PCR和消减杂交技术发展起来的一种高效分离差异表达基因的方法,具有特异性高、假阳性率低、操作简便、速度快、效率高等优点。利用SSH技术进行不同状态下基因的表达变化分析、差异基因的克隆和鉴定... 抑制性消减杂交(SSH)技术是结合抑制性PCR和消减杂交技术发展起来的一种高效分离差异表达基因的方法,具有特异性高、假阳性率低、操作简便、速度快、效率高等优点。利用SSH技术进行不同状态下基因的表达变化分析、差异基因的克隆和鉴定对了解基因表达调控有着重要意义。为此,综述了SSH技术的原理及其在发育调控基因、疾病发生机制、药物研发、性状筛选及环境生物修复等方面的应用研究进展。 展开更多

关键词 抑制性消减杂交技术 抑制性PCR 分子生物学

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抑制性消减杂交技术及其在肺癌研究中的应用 被引量：2

2

作者 梁锐 金克炜 畅继武 《中国肺癌杂志》 CAS 2007年第1期68-71,共4页

关键词 抑制性消减杂交技术 差异表达基因 病理学类型 肺癌 基因差异表达 SSH技术 相互作用 异常表达

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应用抑制性消减杂交技术克隆人肺鳞癌差异性表达基因 被引量：1

3

作者 沈晨阳 刘军 +4 位作者 王丹蕾 赵辉 姜冠潮 王俊 张国良 《中国肺癌杂志》 CAS 2002年第1期10-13,共4页

目的　克隆人肺鳞癌肿瘤差异性表达基因。方法　应用抑制性消减杂交技术 (suppressionsub tractivehybridization,SSH)构建人肺鳞癌cDNA消减杂交文库 ,筛选后挑选阳性克隆进行测序 ,并在GenBank数据库中进行同源性比较 ,最后经RT PCR验... 目的　克隆人肺鳞癌肿瘤差异性表达基因。方法　应用抑制性消减杂交技术 (suppressionsub tractivehybridization,SSH)构建人肺鳞癌cDNA消减杂交文库 ,筛选后挑选阳性克隆进行测序 ,并在GenBank数据库中进行同源性比较 ,最后经RT PCR验证。结果　成功克隆 1 0个差异基因片段 ,其中 2个为新基因 (Gen Bank登录号分别为 :C2 0 :AF3630 68;C34 :AY0 32 661 )。 展开更多

关键词 差异性表达基因 抑制性消减杂交技术 肺癌状细胞癌 基因克隆 肺肿瘤 互补DNA

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应用抑制性消减杂交技术筛选HBxAg蛋白结合蛋白XBP1的上调基因 被引量：1

4

作者 樊万虎 成军 +2 位作者 刘小静 张树林 王琦 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期671-675,共5页

目的应用酵母双杂交及生物信息学(bioinformatics)技术获得HBxAg蛋白结合蛋白XBP1,为了解该基因的反式调节机制,利用抑制性消减杂交技术筛选并克隆XBP1蛋白反式激活的靶基因。方法以XBP1表达质粒pcD-NA3.1(-)-myc-his(A)-XBP1转染HepG2... 目的应用酵母双杂交及生物信息学(bioinformatics)技术获得HBxAg蛋白结合蛋白XBP1,为了解该基因的反式调节机制,利用抑制性消减杂交技术筛选并克隆XBP1蛋白反式激活的靶基因。方法以XBP1表达质粒pcD-NA3.1(-)-myc-his(A)-XBP1转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)-myc-his(A)为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并合成cDNA,经RsaⅠ酶切后将实验组cDNA分成两组,分别衔接两种不同接头,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次PCR反应,产物与T/A克隆载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆经PCR鉴定后进行测序及同源性分析。结果成功构建人XBP1蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA。扩增后得到80个200～1 000bp插入片段的克隆,随机挑选其中30个插入片段测序,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果共获得28个已知编码序列基因和2个未知的新基因。结论 XBP1在肝细胞内表达后能够上调HepG2细胞中许多不同基因表达的变化,这些基因与细胞信号转导、细胞增殖与分化、免疫应答、能量代谢、细胞凋亡、肿瘤发生等生物过程密切相关。 展开更多

关键词 XBP1基因 HEPG2细胞 抑制性消减杂交技术 反式调节

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抑制性消减杂交技术在研究热适应机制中的应用 被引量：2

5

作者 肖军 邹飞 蔡绍曦 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第10期1035-1037,共3页

目的探索热适应动物体内在常温静息状态下是否存在与热适应相关的基因差异表达,评估从基因差异表达角度研究热适应机理的可行性。方法在大鼠肝组织标本上提取mRNA,反转录成双链cDNA,应用抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hyb... 目的探索热适应动物体内在常温静息状态下是否存在与热适应相关的基因差异表达,评估从基因差异表达角度研究热适应机理的可行性。方法在大鼠肝组织标本上提取mRNA,反转录成双链cDNA,应用抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)比较热适应组与常温对照组基因的差异,构建差异表达基因消减文库。采用PCR-Select Differential Screening技术鉴定是否存在差异表达的基因。结果初期实验证实6个cDNA片段为差异表达。结论热适应大鼠在常温静息状态下肝脏组织中存在热适应相关基因的差异表达,推测可能与大鼠保持热适应能力有关。提示通过分离热适应相关的差异表达基因研究热适应机制是一种可行的思路。 展开更多

关键词 抑制性消减杂交技术 热适应 基因表达 文库 动物模型

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抑制性消减杂交技术(SSH)及其在烟草生物学研究中的应用 被引量：3

6

作者 李立芹 鲁黎明 《中国烟草科学》 CSCD 北大核心 2011年第3期89-94,共6页

抑制性消减杂交技术(SSH)是基于抑制性PCR及差减杂交技术建立的一种新技术。目前,由于该技术具有速度快、假阳性率低、灵敏程度高等优点,在植物学研究的各个领域得到了广泛的应用。对该技术的原理和方法、主要优缺点及其在烟草研究中的... 抑制性消减杂交技术(SSH)是基于抑制性PCR及差减杂交技术建立的一种新技术。目前,由于该技术具有速度快、假阳性率低、灵敏程度高等优点,在植物学研究的各个领域得到了广泛的应用。对该技术的原理和方法、主要优缺点及其在烟草研究中的应用进行了综述。 展开更多

关键词 抑制性消减杂交技术 基因差异表达 烟草

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抑制性消减杂交技术(SSH)在辣椒抗病基因研究中的应用 被引量：2

7

作者 肖仲久 李小霞 +1 位作者 张素勤 蒋选利 《长江蔬菜》 2009年第06X期1-4,共4页

基于抑制性PCR及差减杂交技术建立的抑制性消减杂交技术,因其假阳性率低、敏感性高、效率高等优点广泛应用于植物基因差异表达研究。对该技术的原理、主要优缺点及其在辣椒植物抗病性机制研究中的应用进行了综述。

关键词 抑制性消减杂交技术 植物抗病性 辣椒

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应用抑制性消减杂交技术筛选流感病毒感染宿主应答基因

8

作者 陈忠斌 杨静 +2 位作者 王华 孙偶军 王升启 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期156-161,共6页

从宿主系统寻找病毒感染特异性相关的生物大分子是研究病毒药物靶标和诊断标志物的新方向 .为了筛选宿主细胞中流感病毒感染特异性基因 ,采用抑制性消减杂交技术 (SSH) ,以流感病毒A 鲁防 93 9(H3N2 )感染MDCK细胞及正常MDCK细胞为材... 从宿主系统寻找病毒感染特异性相关的生物大分子是研究病毒药物靶标和诊断标志物的新方向 .为了筛选宿主细胞中流感病毒感染特异性基因 ,采用抑制性消减杂交技术 (SSH) ,以流感病毒A 鲁防 93 9(H3N2 )感染MDCK细胞及正常MDCK细胞为材料 ,构建病毒感染特异性差减cDNA文库 ,PCR法扩增鉴定其中插入片段大小 .从差减文库中随机挑取 10 0个克隆进行测序 ,用生物信息学方法对其同源性和基因功能进行分析和预测 .结果显示 ,成功构建了流感病毒感染特异性差减cDNA文库 ,文库中cDNA片段长度在 2 5 0～ 10 0 0bp之间 .从文库中随机选取 10 0个克隆测序 ,获得了 95个有效序列 ,经blast同源性分析发现 ,大部分基因为参与宿主细胞能量代谢和蛋白质生物合成过程中的基因 ;其中 19个为无任何功能线索的新基因片段 .流感病毒感染特异性差减cDNA文库的建立和筛选出病毒感染应答候选新基因cDNA片段 。 展开更多

关键词 流感病毒 抑制性消减杂交技术 病毒感染应答基因 宿主系统 药物靶标 诊断标志物 筛选

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抑制性消减杂交技术在水产无脊椎动物中的应用

9

作者 秦艳杰 马俊峰 +1 位作者 李霞 张慧敏 《安徽农业科学》 CAS 2012年第9期5222-5225,共4页

抑制性消减杂交技术(SSH)是近年来兴起的一种分离、克隆差异基因的新技术。系统阐述了该技术的原理和优缺点,综述了该技术在水产无脊椎动物差异表达基因筛选方面应用的研究进展,并对该领域面临的问题进行剖析。

关键词 抑制性消减杂交技术 水产无脊椎动物 研究进展

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抑制性消减杂交技术(SSH)在动物免疫相关基因方面的研究进展 被引量：1

10

作者 谷笑笑 张娇 +1 位作者 王振华 潘康成 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期269-274,共6页

对于一个生物个体来讲,尽管所有细胞的基因组成是相同的,但在不同的细胞、同一细胞不同的分化阶段或受到外界的不同刺激时,相关基因的表达及蛋白质的功能都会有所差异（[1]）。基因的差异表达是调控生物生命活动的核心机制,个体的生长... 对于一个生物个体来讲,尽管所有细胞的基因组成是相同的,但在不同的细胞、同一细胞不同的分化阶段或受到外界的不同刺激时,相关基因的表达及蛋白质的功能都会有所差异（[1]）。基因的差异表达是调控生物生命活动的核心机制,个体的生长发育和衰老死亡,以及对各种环境因子的应答,本质上都离不开差异基因的表达。为了阐明各种生命过程的分子机制,必须对差异表达基因进行分离、克隆并进一步研究,抑制性消减杂交（Suppression subtractive hybridization,SSH）应运而生, 展开更多

关键词 动物免疫 免疫相关 抑制性消减杂交技术 SSH 相关基因 研究进展

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抑制性消减杂交技术在细菌活的非可培养状态研究中的应用 被引量：2

11

作者 李文博 谭平平 +2 位作者 李影 袁翔 王甲慧 《现代畜牧兽医》 2013年第9期61-66,共6页

在基因分离与克隆中,构建各种cDNA文库是近些年在发现新基因及研究基因功能常用的基础工具之一。其中,抑制性消减杂交技术是一种高效分离差异表达基因的方法,在分离筛选细菌活的非可培养状态与正常菌株差异基因中,应用这种研究方法是研... 在基因分离与克隆中,构建各种cDNA文库是近些年在发现新基因及研究基因功能常用的基础工具之一。其中,抑制性消减杂交技术是一种高效分离差异表达基因的方法,在分离筛选细菌活的非可培养状态与正常菌株差异基因中,应用这种研究方法是研究细菌VBNC状态株毒力、致病性和耐药性及菌株遗传分化关系的重要途径。本文旨在介绍SSH构建消减cDNA文库在原核生物中的应用及对其在细菌VBNC状态新基因筛选中的应用前景进行综合论述,并对其进一步研究提出了展望。 展开更多

关键词 CDNA文库 抑制性消减杂交技术 活的非可培养状态

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抑制性消减杂交技术在植物基因克隆中的应用 被引量：2

12

作者 刘文荣 张木清 《亚热带农业研究》 2006年第2期146-151,共6页

抑制性消减杂交(SSH)技术是近十年来才发展起来的一种克隆差异新基因的快速、高效的技术。本文通过与其他几种目前主要的差异基因分离技术的比较,介绍了SSH技术基本原理、基本过程及优缺点,并对SSH技术在植物基因研究应用上的最新进展... 抑制性消减杂交(SSH)技术是近十年来才发展起来的一种克隆差异新基因的快速、高效的技术。本文通过与其他几种目前主要的差异基因分离技术的比较,介绍了SSH技术基本原理、基本过程及优缺点,并对SSH技术在植物基因研究应用上的最新进展进行评述。 展开更多

关键词 抑制性消减杂交(SSH)技术 基因克隆

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抑制性消减杂交技术在水产无脊椎动物中的应用

13

作者 汤春雨 《农业与技术》 2013年第11期172-172,共1页

抑制性消减杂交(SSH)技术是一种鉴定、分离、筛选组织细胞中未知基因表达的新技术,它与抑制PCR与消减杂交相结合,具有灵敏度高、操作简便、假阳率低于特异性强等优点,目前在水生动物基因差异表达中已离不开这一新技术。随着抑制性消减... 抑制性消减杂交(SSH)技术是一种鉴定、分离、筛选组织细胞中未知基因表达的新技术,它与抑制PCR与消减杂交相结合,具有灵敏度高、操作简便、假阳率低于特异性强等优点,目前在水生动物基因差异表达中已离不开这一新技术。随着抑制性消减杂交技术近年来被越来越多地关注,其相应的完善与改进也得以不断向前推进。本文就抑制性消减杂交技术的原理与优缺点,阐述了这一技术在水产无脊椎动物中的研究进展及应用。 展开更多

关键词 抑制性消减杂交技术 在水产无脊椎动物中 研究进展 应用

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抑制性消减杂交和基因芯片技术在牙髓差异表达基因研究中的应用

14

作者 吴煜 周学东 《国际口腔医学杂志》 CAS 2011年第1期75-78,共4页

基因表达的时、空、量模式的变化引起了生命过程中细胞的发育和分化、细胞周期的调节、细胞的衰老和死亡以及细胞的病理过程。寻找差异表达基因成为目前基因研究的一个非常重要的内容。近年来,分离差异表达基因的技术不断完善,先后出现... 基因表达的时、空、量模式的变化引起了生命过程中细胞的发育和分化、细胞周期的调节、细胞的衰老和死亡以及细胞的病理过程。寻找差异表达基因成为目前基因研究的一个非常重要的内容。近年来,分离差异表达基因的技术不断完善,先后出现了消减杂交、mRNA差异显示法、代表性差异分析法、基因表达系列分析、抑制性消减杂交和(半)定量聚合酶链反应等多种分析技术。本文就牙髓研究中的2种常用的大规模快速筛选差异基因的分析方法和应用进展作一综述。 展开更多

关键词 牙髓 抑制性消减杂交技术 基因芯片技术

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用抑制性消减杂交方法筛选人肾癌相关基因 被引量：1

15

作者 王莹 陈葳 李旭 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期89-93,共5页

目的应用抑制性消减杂交技术构建人肾癌差异表达基因文库并进行差异表达基因筛选。方法以肾癌细胞株RLC-310和肾近曲小管细胞株HK-2互为实验组和对照组,提取mRNA,应用抑制性消减杂交技术进行正反两向消减杂交,获得人肾癌细胞差异表达基... 目的应用抑制性消减杂交技术构建人肾癌差异表达基因文库并进行差异表达基因筛选。方法以肾癌细胞株RLC-310和肾近曲小管细胞株HK-2互为实验组和对照组,提取mRNA,应用抑制性消减杂交技术进行正反两向消减杂交,获得人肾癌细胞差异表达基因文库,结合反向Northern斑点印迹杂交,筛选差异基因克隆,并进行测序分析。结果正向和反向文库共包含1200多个阳性克隆,经斑点杂交筛选后,对213个差异克隆进行测序并经BLAST分析,得到144个差异表达基因,与肾癌相关的高表达基因67个,低表达基因77个,其中新EST14个,未知功能基因21个;对测序基因进行聚类分析发现与细胞生长、黏附、凋亡等肿瘤细胞生物学行为相关。结论该文库质量可靠,所筛选出的差异基因和新的基因为进一步筛选肾癌特异性相关基因,绘制肾癌差异基因表达谱,最终阐明肾癌发生、发展、转移机制提供了实验材料和研究靶点。 展开更多

关键词 抑制性消减杂交技术 肾癌 差异表达基因

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抑制消减杂交技术及其在动物繁育研究中的应用

16

作者 李林凤 刘希斌 +3 位作者 史文清 关伟军 马月辉 韩俊文 《上海畜牧兽医通讯》 2005年第5期7-9,共3页

关键词 抑制消减杂交技术 应用 动物 抑制性消减杂交技术 基因组DNA文库 差异表达基因 抑制消减杂交法 繁育 RT-PCR

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干旱胁迫下刚毛柽柳消减文库的构建及分析 被引量：15

17

作者 刘桂丰 侯英杰 +1 位作者 王玉成 褚延广 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期69-73,共5页

以干旱胁迫下的刚毛柽柳根部组织cDNA为tester,正常生长的刚毛柽柳根部组织cDNA为driver,利用抑制性消减杂交技术 (SSH)构建了干旱胁迫下刚毛柽柳根部组织的消减文库。文库克隆的重组率为 95 % ,插入片段大部分集中在 2 5 0～ 60 0bp之... 以干旱胁迫下的刚毛柽柳根部组织cDNA为tester,正常生长的刚毛柽柳根部组织cDNA为driver,利用抑制性消减杂交技术 (SSH)构建了干旱胁迫下刚毛柽柳根部组织的消减文库。文库克隆的重组率为 95 % ,插入片段大部分集中在 2 5 0～ 60 0bp之间。通过对文库阳性克隆的随机测序 ,获得了如Mn SOD、myb相关蛋白、锌指蛋白等 1 7种与干旱胁迫相关的基因 ,它们涉及了植物的渗透调节、信号传递、转录调控、活性氧清除等方面。所得EST序列已被GenBank收录。 展开更多

关键词 干旱胁迫 刚毛柽柳 消减文库 抑制性消减杂交技术 表达序列标签 抗旱性 抗旱基因

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SSH技术在丝状真菌功能基因筛选中的应用 被引量：1

18

作者 张蕾蕾 余永涛 +1 位作者 何生虎 葛松 《湖北农业科学》 北大核心 2014年第3期500-504,共5页

抑制性消减杂交(SSH)技术是基于抑制性PCR和消减杂交技术发展起来的一种高效分离差异表达基因的方法。因其具有特异性高、假阳性率低、背景低、快速高效等特点,已广泛应用于丝状内生真菌功能基因筛选中。主要对抑制性消减杂交技术的原... 抑制性消减杂交(SSH)技术是基于抑制性PCR和消减杂交技术发展起来的一种高效分离差异表达基因的方法。因其具有特异性高、假阳性率低、背景低、快速高效等特点,已广泛应用于丝状内生真菌功能基因筛选中。主要对抑制性消减杂交技术的原理、技术流程、特点及其在丝状真菌生长发育、代谢活性物质及致病基因等方面的应用作简要综述。 展开更多

关键词 抑制性消减杂交(SSH)技术 差异基因 丝状真菌 筛选

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益气活血中药复方影响CVB_3病毒性心肌炎模型乳鼠心肌细胞MCP-1、Rps4基因表达的实验研究 被引量：5

19

作者 刘峻 张明雪 +2 位作者 何伟 车红花 顾平 《辽宁中医杂志》 CAS 北大核心 2011年第5期1001-1004,共4页

目的:观察益气活血中药复方对CVB3病毒性心肌炎模型大鼠心肌细胞small inducible cytokine A2(MCP-1/CCL2)、ribosomal protein S4基因表达的影响,以期从基因水平揭示益气活血中药复方治疗CVB3心肌炎的作用机制,进一步证实益气活血中药... 目的:观察益气活血中药复方对CVB3病毒性心肌炎模型大鼠心肌细胞small inducible cytokine A2(MCP-1/CCL2)、ribosomal protein S4基因表达的影响,以期从基因水平揭示益气活血中药复方治疗CVB3心肌炎的作用机制,进一步证实益气活血中药复方是治疗CVB3病毒性心肌炎的有效方剂。方法:通过改良的抑制性消减杂交技术(SSH),克隆了受CVB3攻击的宿主细胞中被中药调控的基因,并通过荧光rt-PCR对上述结果进行验证。结果:益气活血中药复方能够上调CVB3病毒性心肌炎模型大鼠心肌细胞small inducible cytokine A2(MCP-1/CCL2)、ribosomal protein S4基因的表达。结论:益气活血中药复方可能通过调节small inducible cytokine A2(MCP-1/CCL2)、ribosomal protein S4基因的表达而实现治疗病毒性心肌炎的目的。 展开更多

关键词 病毒性心肌炎 益气活血中药复方 抑制性消减杂交技术(SSH) small inducible cytokine A2(MCP-1/ CCL2) RIBOSOMAL protein s4

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益气活血中药复方对病毒性心肌炎模型大鼠趋化因子CXCL12 SASH1表达的影响 被引量：4

20

作者 刘峻 张明雪 +2 位作者 车红花 何伟 顾平 《中华中医药学刊》 CAS 2010年第12期2491-2494,共4页

目的:研究益气活血中药复方影响病毒性心肌炎模型大鼠趋化因子CXCL12(CXC chemokine ligand-12)、Sash1(SAM and SH3 domain containing 1 protein)表达的作用机制。方法:通过改良的抑制性消减杂交技术(SSH),克隆了受CVB3攻击的宿主细... 目的:研究益气活血中药复方影响病毒性心肌炎模型大鼠趋化因子CXCL12(CXC chemokine ligand-12)、Sash1(SAM and SH3 domain containing 1 protein)表达的作用机制。方法:通过改良的抑制性消减杂交技术(SSH),克隆了受CVB3攻击的宿主细胞中被中药调控的基因,并通过荧光rt-PCR对上述结果进行验证。结果:趋化因子CXCL12、Sash1在中药组中呈高表达,病毒组中表达减弱或被抑制。结论:益气活血法能够影响受CVB3攻击的宿主细胞趋化因子CXCL12、Sash1表达,阻断心肌肥大进程,防止向心衰进展。 展开更多

关键词 病毒性心肌炎 益气活血中药复方 抑制性消减杂交技术(SSH) 趋化因子CXCL12 Sash1

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