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小金海棠总RNA提取方法比较及cDNA的LD-PCR扩增 被引量:49
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作者 张玉刚 成建红 +2 位作者 韩振海 许雪峰 李天忠 《生物技术通报》 CAS CSCD 2005年第4期50-53,共4页
用CTAB和SDS-酚两种方法提取了小金海棠根的总RNA,以CTAB法提取的总RNA为模板,用长距离PCR(LD-PCR)的方法合成了双链cDNA并进行了扩增。结果表明,CTAB法比SDS-酚法提取的总RNA纯度高、完整性好,宜于进行RT-PCR和cDNA文库的构建,SDS-酚... 用CTAB和SDS-酚两种方法提取了小金海棠根的总RNA,以CTAB法提取的总RNA为模板,用长距离PCR(LD-PCR)的方法合成了双链cDNA并进行了扩增。结果表明,CTAB法比SDS-酚法提取的总RNA纯度高、完整性好,宜于进行RT-PCR和cDNA文库的构建,SDS-酚法操作简单易行,提取产物可以直接用于转膜进行Northern杂交。 展开更多
关键词 小金海棠 总RNA 提取方法 cdna LD-PCR 酶活性
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小麦叶片cDNA-AFLP扩增反应体系的优化 被引量:4
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作者 李剑峰 张跃强 +4 位作者 樊哲儒 王岩军 王浩 曲延英 范玲 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期489-494,共6页
【目的】建立并优化小麦叶片cDNA-AFLP扩增反应体系,进行cDNA-AFLP分析,挖掘新春6号相关抗旱基因。【方法】在盆栽小麦苗期水分胁迫下叶片cDNA-AFLP的试验中,分别对20μL预扩增和选择性扩增反应体系中的4种反应条件影响因子进行不同梯... 【目的】建立并优化小麦叶片cDNA-AFLP扩增反应体系,进行cDNA-AFLP分析,挖掘新春6号相关抗旱基因。【方法】在盆栽小麦苗期水分胁迫下叶片cDNA-AFLP的试验中,分别对20μL预扩增和选择性扩增反应体系中的4种反应条件影响因子进行不同梯度优化的研究,包括引物、dNTP、Mg2+及TaqDNA聚合酶的用量。【结果】PCR预扩增20μL反应体系中,引物(40 mM)1.0μLd、NTP(2.5 mM)1.8μL、Mg2+(25 mM)2.2μL、TaqDNA聚合酶(5U)0.5μL时预扩增效果较好;PCR选择性扩增20μL反应体系中,引物(40 mM)0.6μL、dNTP(2.5 mM)2.0μL、Mg2+(25 mM)1.6μL、TaqDNA聚合酶(5U)0.4μL时,可得到更多清晰可辨的TDFs(transcriptderived fragments)。【结论】试验通过对引物、dNTP、Mg2+、TapDNA聚合酶用量等因子进行筛选,获得较为理想的预扩增和选择性扩增体系,得到了更多有效的条带,为利用cDNA-AFLP研究小麦抗旱相关基因的分离及其克隆奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 小麦叶片 cdna—AFLP 选择性 体系优化
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利用Y-RACE法进行棉花胚珠cDNA末端快速扩增 被引量:4
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作者 肖月华 罗明 +4 位作者 方卫国 罗克明 侯磊 罗小英 裴炎 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期688-692,共5页
在YADE(Y shapedadaptordependentextension)方法的基础上 ,设计了一种新的cDNA末端快速扩增方法 ,称为Y RACE法 .利用该方法只需一次cDNA合成就能进行多个基因的 3′和 5′末端的扩增 .分别利用Y RACE方法和RACE试剂盒 (TaKaRa)扩增了... 在YADE(Y shapedadaptordependentextension)方法的基础上 ,设计了一种新的cDNA末端快速扩增方法 ,称为Y RACE法 .利用该方法只需一次cDNA合成就能进行多个基因的 3′和 5′末端的扩增 .分别利用Y RACE方法和RACE试剂盒 (TaKaRa)扩增了一个棉花胚珠cDNA片段F0 2 7的末端序列 .序列比较表明 ,用Y RACE方法扩增的末端序列较试剂盒所得序列在最末端稍短 ,但同样能进行正确拼接并获得全长编码序列 .对Y RACE法的优缺点和可能的改进作了进一步讨论 . 展开更多
关键词 Y-RACE法 棉花 胚珠 cdna末端 快速
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一步PCR快速扩增辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA3′末端序列(英文) 被引量:11
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作者 李秋莉 高晓蓉 +2 位作者 袁晓东 刘大伟 安利佳 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期179-181,共3页
根据已获得的辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA的部分序列 ,设计一条基因特异性引物 ,与通用引物并用 ,一步PCR成功地克隆了辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA 3′末端。与常规的 3′RACE法相比 ,一步PCR法具有快速、简便、经济等优点 ,是一种非常... 根据已获得的辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA的部分序列 ,设计一条基因特异性引物 ,与通用引物并用 ,一步PCR成功地克隆了辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA 3′末端。与常规的 3′RACE法相比 ,一步PCR法具有快速、简便、经济等优点 ,是一种非常快捷的扩增cDNA 展开更多
关键词 一步PCR 辽宁碱蓬 甜菜碱醛脱氢酶 3′cdna末端 快速
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一种新的cDNA末端快速扩增获取全长cDNA的方法 被引量:5
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作者 邱为民 张思仲 +2 位作者 武辉 张戈 肖翠英 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期480-482,共3页
为克隆精子发生相关基因的全长cDNA ,根据mRNA差异显示获得的ESTs设计引物 ,利用一种新的cDNA末端快速扩增方法 (SMARTRACE)扩增该EST的 5′末端 ,并进行克隆测序 ,与mRNA差异显示获得ESTs拼接后 ,获得了三个新的全长cDNA。结果表明 ,SM... 为克隆精子发生相关基因的全长cDNA ,根据mRNA差异显示获得的ESTs设计引物 ,利用一种新的cDNA末端快速扩增方法 (SMARTRACE)扩增该EST的 5′末端 ,并进行克隆测序 ,与mRNA差异显示获得ESTs拼接后 ,获得了三个新的全长cDNA。结果表明 ,SMARTRACE是一种简便、有效的克隆cDNA5′末端未知序列的技术。 展开更多
关键词 cdna末端快速 精子发生相关基因 睾丸
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反向嵌套PCR法高效扩增辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA5′末端序列 被引量:8
6
作者 李秋莉 高晓蓉 +3 位作者 范琦 袁晓东 刘大伟 安利佳 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2001年第11期17-19,共3页
采用反向嵌套PCR法 ,根据已获得的辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA的部分序列 ,设计一条 5′末端磷酸化的特异性反转录引物和两对特异性反向嵌套PCR引物 ,成功地克隆了辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA 5′末端。与锚定PCR法相比 ,反向嵌套PCR法... 采用反向嵌套PCR法 ,根据已获得的辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA的部分序列 ,设计一条 5′末端磷酸化的特异性反转录引物和两对特异性反向嵌套PCR引物 ,成功地克隆了辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA 5′末端。与锚定PCR法相比 ,反向嵌套PCR法具有特异性强、扩增效率高等优点 ,是一种非常有效的扩增cDNA 5′末端序列的方法。 展开更多
关键词 反向嵌套PCR 辽宁碱蓬 甜菜碱醛脱氢酶 5′cdna 末端序列 基因工程 RACE 反转录 克隆 效率
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猪瘟病毒石门株基因组cDNA片断的扩增与克隆测序 被引量:5
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作者 王敏华 江金益 +2 位作者 范必勤 赵启祖 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第5期436-442,共7页
以猪瘟病毒(HCV)中国石门株强毒的血毒、细胞毒及C系兔化弱毒的细胞毒中提取的总RNA为模板,应用逆转录─聚合酶链式反应(RT一PCR),在合成的两对HCV特异引物引导下,扩增出与预计大小一致的441和300bp两个... 以猪瘟病毒(HCV)中国石门株强毒的血毒、细胞毒及C系兔化弱毒的细胞毒中提取的总RNA为模板,应用逆转录─聚合酶链式反应(RT一PCR),在合成的两对HCV特异引物引导下,扩增出与预计大小一致的441和300bp两个核酸片断。寡核苷酸探针杂交证实确为HCVP_80和gp44/48蛋白编码区特异性的cDNA片断。扩增片断克隆入pUC_19和pBSK(+)中,并对HCV石门株P_80区cDNA片断进行测序分析,其与国外Alfort、Brescia株同源性分别为90.6%和94.6%。氨基酸水平上同源性高达98.4%。为抗猪瘟病毒P_80区核酶的设计和应用提供了依据。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 cdna 克隆与测序
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香蕉ACC合成酶cDNA5’末端的快速扩增 被引量:3
8
作者 金志强 徐碧玉 +2 位作者 邵寒霜 彭世清 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 2001年第3期24-28,共5页
采用cDNA末端快速扩增(RapidamplificationofcDNAends,RACE)的方法对香蕉ACC合成酶的cDNA5’末端进行了扩增,获得677bp的产物,序列测定的结果表明,其中一个连续编码区编码149个氨基酸,其序列含有ACC合成酶的第一和第二保守区和一段长23... 采用cDNA末端快速扩增(RapidamplificationofcDNAends,RACE)的方法对香蕉ACC合成酶的cDNA5’末端进行了扩增,获得677bp的产物,序列测定的结果表明,其中一个连续编码区编码149个氨基酸,其序列含有ACC合成酶的第一和第二保守区和一段长230bp的非翻译区。 展开更多
关键词 香蕉 ACC合成酶 cdna5' 末端
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一步法扩增IBDV上海株全长基因组cDNA 被引量:2
9
作者 孙建和 陆苹 +1 位作者 赵渝 李晖 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期194-197,共4页
为了研究鸡传染性法氏囊病病毒 (IBDV)上海株的全部核苷酸序列 ,应用蛋白酶K消化、割胶纯化获得了高纯度的dsRNA ,应用随机引物合成了cDNA的第一链。参照基因库中相关IBDV毒株的基因序列 ,设计合成了两对引物 ,一步扩增出IBDV上海株全... 为了研究鸡传染性法氏囊病病毒 (IBDV)上海株的全部核苷酸序列 ,应用蛋白酶K消化、割胶纯化获得了高纯度的dsRNA ,应用随机引物合成了cDNA的第一链。参照基因库中相关IBDV毒株的基因序列 ,设计合成了两对引物 ,一步扩增出IBDV上海株全长基因组cDNA的A片段和B片段。为了验证获得的A片段和B片段的正确性 ,以扩增出的A片段为模板 ,成功扩增出IBDV的VP2 基因 ,并应用T载体进行了克隆和测序 ,测序结果显示 ,其与国内外数株IBDV毒株的同源性很高 ,表明本文建立的扩增IBDV全长基因组cDNA的一步法正确。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 全长基因组 cdna VP2基因 基因克隆 一步法 IBDVD上海株
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人喉癌细胞端粒酶催化亚基cDNA片段的扩增与克隆 被引量:2
10
作者 马鹤雯 张玉静 +3 位作者 阮承迈 陈守义 张立树 马永红 《白求恩医科大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第3期331-333,共3页
目的 :测定人喉鳞状上皮癌 hep- 2细胞的端粒酶活性水平并获得 hep- 2细胞中 h TERT c DNA片段的克隆。方法 :采用 TRAP- ELISA法测定酶活性水平 ,RT- PCR技术扩增获得目的片段。利用酶切法、PCR法和序列分析法对所获克隆进行检测。结果... 目的 :测定人喉鳞状上皮癌 hep- 2细胞的端粒酶活性水平并获得 hep- 2细胞中 h TERT c DNA片段的克隆。方法 :采用 TRAP- ELISA法测定酶活性水平 ,RT- PCR技术扩增获得目的片段。利用酶切法、PCR法和序列分析法对所获克隆进行检测。结果 :hep- 2细胞具有较高的端粒酶活性水平 ,获得含h TERT c DNA片段的克隆。结论 :利用 RT- PCR法能够从具有较高端粒酶活性水平的 hep- 2细胞中扩增获得 h TERT c 展开更多
关键词 端粒酶 端粒酶催化亚基 反义聚合酶链式反应 喉癌 鳞状上皮癌 cdna 基因 克隆
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一种获取新基因的有效方法——cDNA末端快速扩增 被引量:2
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作者 韩春来 汪明 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2005年第9期61-63,共3页
关键词 cdna末端快速 锚定PCR RACE 生物信息学分析 生物设计 兽医临床医学
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利用聚会酶链式反应技术扩增层粘连蛋白受体的cDNA 被引量:1
12
作者 张鸿来 张卫国 吴秉铨 《北京医科大学学报》 CSCD 1994年第1期33-33,共1页
利用聚会酶链式反应技术扩增层粘连蛋白受体的cDNA北京医科大学病理学教研室张鸿来,张卫国,吴秉铨聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction,PcR)技术产生仅数年,却以惊人的速度发展,应用于分子生... 利用聚会酶链式反应技术扩增层粘连蛋白受体的cDNA北京医科大学病理学教研室张鸿来,张卫国,吴秉铨聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction,PcR)技术产生仅数年,却以惊人的速度发展,应用于分子生物学研究的各个领域,其中包括肿瘤转... 展开更多
关键词 层粘连蛋白 受体 cdna
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基于cDNA末端快速扩增的刚地弓形虫核仁G蛋白-1的克隆
13
作者 申川军 何蔼 +6 位作者 郑小英 余南 郑斌 郑焕钦 李卓雅 曹爱莲 詹希美 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第4期283-287,共5页
目的 克隆弓形虫核仁G蛋白- 1(NOG1)基因的全长cDNA序列。方法 根据NCBIGeneBank中登录的弓形虫NOG1基因的唯一EST序列设计引物,利用cDNA 5’-末端快速扩增法(5’-RACE)和cDNA 3’-末端快速扩增法(3’-RACE)分别对已知序列进行延伸,... 目的 克隆弓形虫核仁G蛋白- 1(NOG1)基因的全长cDNA序列。方法 根据NCBIGeneBank中登录的弓形虫NOG1基因的唯一EST序列设计引物,利用cDNA 5’-末端快速扩增法(5’-RACE)和cDNA 3’-末端快速扩增法(3’-RACE)分别对已知序列进行延伸,将扩增获得的3’-端和5’-端未知序列与位于中间位置的已知序列进行拼接,然后经Blast检验全长序列的正确性。结果 5’-RACE扩增获得3个不同长度的片断,最长片断全长12 87bp ,去除引物和夹杂的已知序列后,通过5’-RACE在5’端扩增获得未知序列为1196bp。3’-RACE扩增后得到一条特异性条带,位于大约1.7kb左右,测序全长为16 34bp ,去除引物和已知序列,经3’-RACE扩增获得的3’-端未知序列为12 0 4bp。Blast全长为316 7bp的3段拼接序列,发现其覆盖NOG1基因cDNA的完整ORF或者CDS序列(6 5 0bp 2 80 9bp)。推导翻译出的蛋白质一级结构包含719个氨基酸(aa) ,在所有已发现物种的NOG1中,弓形虫NOG1基因的cDNA和相应的aa序列都是最长的。该序列已登录NCBIGeneBank ,核酸序列登录号AY6 86 734,对应蛋白质的aa序列登录号为AAT94 2 90。结论 本研究首次克隆获得了弓形虫NOG1基因的全长cDNA序列,并对相应的aa序列进行了推导翻译和简单分析。 展开更多
关键词 弓形虫 核仁G蛋白-1 cdna末端快速技术 克隆
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cDNA末端快速扩增法克隆高山离子芥原叶绿酸酯氧化还原酶基因及其表达特异性分析
14
作者 李玉华 邓培渊 +1 位作者 赵奇 雷志华 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期374-379,410,共7页
用cDNA末端快速扩增技术从高山离子芥中克隆得到完整的原叶绿酸酯氧化还原酶(POR,EC:1.3.1.33)基因,命名为CbPORB,DNAMAN软件分析CbPORB和其他几种植物的POR基因,有很高的同源性,将其cDNA序列提交到NCBI数据库(序列接受号为FJ390503)。C... 用cDNA末端快速扩增技术从高山离子芥中克隆得到完整的原叶绿酸酯氧化还原酶(POR,EC:1.3.1.33)基因,命名为CbPORB,DNAMAN软件分析CbPORB和其他几种植物的POR基因,有很高的同源性,将其cDNA序列提交到NCBI数据库(序列接受号为FJ390503)。CbPORB基因全长1444bp,包含1个1209bp的开放阅读框(ORF),编码402个氨基酸的蛋白CbPORB(序列号为ACJ12925)。NCBI数据库在线软件计算高山离子芥CbPORB蛋白的等电点为9.43,推测其相对分子量为43.37kD。组织特异性表达分析显示:CbPORB在叶、茎中表达,根中不表达,具有器官特异性;干旱胁迫处理抑制CbPORB的转录水平;而表油菜素内酯(24-epibrassinolide;EBR)处理提高了CbPORB的转录水平。 展开更多
关键词 cdna末端快速 CbPORB 半定量RT-PCR 高山离子芥
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cDNA末端快速扩增技术及其方法的改进 被引量:2
15
作者 贺斌 黄兴奇 +4 位作者 余腾琼 钟巧芳 王玲仙 张秀 程在全 《浙江农业科学》 2012年第9期1352-1357,共6页
cDNA末端快速扩增(RACE)技术可以快速扩增mRNA3'和5'末端,从而获得全长的cDNA序列,为分离和研究新的基因提供了一个快速简便的方法。从RACE的原理出发,综述RACE技术的优缺点,阐述RACE技术的改良,并对其应用现状和发展前景进行... cDNA末端快速扩增(RACE)技术可以快速扩增mRNA3'和5'末端,从而获得全长的cDNA序列,为分离和研究新的基因提供了一个快速简便的方法。从RACE的原理出发,综述RACE技术的优缺点,阐述RACE技术的改良,并对其应用现状和发展前景进行了分析。 展开更多
关键词 cdna末端快速 RACE原理 RACE的优化 TdT加尾 RLM-RACE
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鼻咽癌组织的显微切割及其RNA线性扩增 被引量:8
16
作者 周艳宏 曾朝阳 +12 位作者 熊炜 罗晓敏 李小玲 范松青 张文玲 刘华英 李征 杨一新 武明花 唐珂 曹利 沈守荣 李桂源 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第5期463-467,共5页
从微小体积鼻咽癌活检标本中获取纯净癌细胞一直是鼻咽癌分子生物学研究中的难题.为了寻找一种能从鼻咽癌活检组织中获得高纯度、高质量RNA来完成cDNA微阵列(cDNA Microarray)实验的简便实用方法,采用RNAlater技术保存鼻咽癌活检组织,... 从微小体积鼻咽癌活检标本中获取纯净癌细胞一直是鼻咽癌分子生物学研究中的难题.为了寻找一种能从鼻咽癌活检组织中获得高纯度、高质量RNA来完成cDNA微阵列(cDNA Microarray)实验的简便实用方法,采用RNAlater技术保存鼻咽癌活检组织,显微切割技术来获得高纯度鼻咽癌细胞,利用RNA线性扩增技术得到cDNA微阵列实验所需RNA.结果表明:利用RNAlater技术可以很好地保持组织RNA的稳定,通过优化显微切割和RNA线性扩增的条件获得了cDNA微阵列实验所需的高纯度、高质量RNA. 展开更多
关键词 RNAlater技术 手工显微切割 RNA线性技术 cdna微阵列
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甘薯IbNPR1全长cDNA序列的分离与表达特性分析(英文) 被引量:5
17
作者 陈观水 周以飞 +2 位作者 林生 张铮 潘大仁 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期2218-2224,共7页
在植物系统获得性抗性(SAR)中,NPR1蛋白是水杨酸介导的基因表达中关键调控因子。本研究以青农2号为试验材料,利用同源序列法和RACE技术分离甘薯SAR途径的主要抗病信号元件NPR1(none expresser of PR gene)的全长cDNA序列。序列分析表明,... 在植物系统获得性抗性(SAR)中,NPR1蛋白是水杨酸介导的基因表达中关键调控因子。本研究以青农2号为试验材料,利用同源序列法和RACE技术分离甘薯SAR途径的主要抗病信号元件NPR1(none expresser of PR gene)的全长cDNA序列。序列分析表明,IbNPR1基因全长2353bp,包含一个编码586个氨基酸残基的开放阅读框,包含有类似拟南芥NPR1蛋白中的BTB/POZ和锚蛋白重复氨基酸序列结构域。聚类分析显示IbNPR1与来源于番茄的NPR1蛋白关系最近。Southern杂交及半定量RT-PCR分析表明,甘薯NPR1基因属于低拷贝基因家族,表达模式为组成型表达,并且SA能提高其表达水平。由该结果推测,IbNPR1可能在甘薯抵御病原物的侵染中起重要的作用。 展开更多
关键词 甘薯 IbNPR1基因 抗病 cdna末端快速技术
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小麦NBS-LRR类抗病基因同源cDNA序列的分离与鉴定 被引量:5
18
作者 张立荣 杨文香 刘大群 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期431-436,共6页
利用抗病基因的保守结构设计引物,从抗叶锈病近等基因系材料TcLr24中扩增出一条703bp的条带RGA1,通过与GenBank比对,选取与RGA1高度同源的若干条带,在它们共有的保守序列位置设计引物,利用cDNA末端快速扩增(RACE)技术扩增抗病同源基因c... 利用抗病基因的保守结构设计引物,从抗叶锈病近等基因系材料TcLr24中扩增出一条703bp的条带RGA1,通过与GenBank比对,选取与RGA1高度同源的若干条带,在它们共有的保守序列位置设计引物,利用cDNA末端快速扩增(RACE)技术扩增抗病同源基因cDNA全长。扩增到3条全长cDNA,经BLASTp比较,这些序列都含有NBS保守结构域和多个LRR结构域,与很多已知植物抗病基因的功能相应区域一致。对FRGA-1、FRGA-2和FRGA-3实时定量PCR分析,表明这3个基因在小麦叶片中都是组成型表达。本研究在小麦材料TcLr24中得到3条抗病基因同源cDNA全长,为研究小麦抗病基因奠定了基础。 展开更多
关键词 小麦抗叶锈病基因 cdna末端快速技术 生物信息学 同源基因
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严重烧伤F344大鼠免疫细胞中一个EST全长序列的扩增
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作者 石胜军 夏照帆 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期176-179,共4页
目的 :探讨免疫细胞在大面积烧伤后全身免疫功能紊乱中的变化 ,对F344大鼠烧伤后血液淋巴细胞和单核细胞中的 1个差异表达基因片段 (AI764697 1 )进一步研究。方法 :根据该片段核苷酸序列设计双向引物和巢式引物 ,应用cDNA末端快速扩增... 目的 :探讨免疫细胞在大面积烧伤后全身免疫功能紊乱中的变化 ,对F344大鼠烧伤后血液淋巴细胞和单核细胞中的 1个差异表达基因片段 (AI764697 1 )进一步研究。方法 :根据该片段核苷酸序列设计双向引物和巢式引物 ,应用cDNA末端快速扩增技术 (SMARTRACE)对该片段进行双向扩增 ,扩增后结果经测序 ,用Northernblot杂交验证。结果 :设计的两对引物经扩增都得到了产物 ,克隆测序后得到 1条长度为 592bp的片段。Northernblot杂交在烧伤后得到 1个长度约 70 0bp的产物 ,在脾脏中表达水平较高 ,与RACE结果符合。该核苷酸序列已得到Gen Bank登录号AF2 4 4 895。结论 :在严重烧伤F344大鼠的血液淋巴细胞和单核细胞中分离并扩增出一个新的基因全长序列 ,其来源。 展开更多
关键词 烧伤 cdna 末端快速 差异表达基因 大鼠
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牙鲆自然杀伤细胞增强因子(NKEF)全长cDNA的克隆及表达分析 被引量:1
20
作者 王志坚 陈松林 季相山 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期86-90,共5页
采用快速扩增cDNA末端(rapid amplification of cDNA ends,RACE)的方法,分离和测定了牙鲆自然杀伤细胞增强因子(NKEF)cDNA的全长核苷酸序列,5'RACE扩增分离得到了400bp左右的片段,3'RACE扩增得到了800bp左右的片段,经过拼接得... 采用快速扩增cDNA末端(rapid amplification of cDNA ends,RACE)的方法,分离和测定了牙鲆自然杀伤细胞增强因子(NKEF)cDNA的全长核苷酸序列,5'RACE扩增分离得到了400bp左右的片段,3'RACE扩增得到了800bp左右的片段,经过拼接得到了牙鲆NKEF全长cDNA序列.牙鲆NKEF cDNA全长1028bp(不包含polyA),其中包括67bp的5'非翻译区、597bp的开放阅读框和364bp的3'非翻译区(不包含polyA),整个开放阅读框编码198个氨基酸.RT-PCR分析表明,NKEF基因在牙鲆不同组织中普遍表达,但是表达水平存在着明显的差异.研究结果为提高牙鲆自身免疫防御能力的研究提供了理论依据. 展开更多
关键词 牙鲆 自然杀伤细胞强因子 快速cdna末端 cdna
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