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外源性肿瘤坏死因子刺激基因6对炎症环境下人牙髓干细胞成牙/成骨分化的影响
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作者 董稳航 张雪 +2 位作者 何巍 李锐 王颖 《郑州大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第2期167-172,共6页
目的:观察外源性肿瘤坏死因子刺激基因6(TSG-6)对炎症环境下人牙髓干细胞(hDPSC)成牙/成骨分化的影响及可能机制。方法:取拔除的健康、阻生智齿,从牙髓中分离培养hDPSC,鉴定后分组。正常对照组用含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养96 h,... 目的:观察外源性肿瘤坏死因子刺激基因6(TSG-6)对炎症环境下人牙髓干细胞(hDPSC)成牙/成骨分化的影响及可能机制。方法:取拔除的健康、阻生智齿,从牙髓中分离培养hDPSC,鉴定后分组。正常对照组用含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养96 h,矿化诱导组用矿化诱导液培养96 h,炎症因子组用含50μg/L TNF-α的矿化诱导液培养96 h,炎症因子+TSG-6组先用含20μg/L TSG-6的DMEM培养48 h,再用含TNF-α的矿化诱导液培养48 h,中和抗体组先与TSG-6、CD44中和抗体共培养48 h后再用含TNF-α的矿化诱导液培养48 h。采用Western blot法分别检测成牙/成骨标志物[牙本质涎磷蛋白(DSPP)、牙本质基质蛋白1(DMP-1)、RUNX家族转录因子2(RUNX2)]及P65、p-IκB、IκB蛋白的表达水平。采用免疫荧光染色观察炎症因子+TSG-6组和中和抗体组细胞核因子κB(NF-κB)的核转运水平。12只2日龄SD大鼠分4组,每组3只。麻醉后处死,取下颌骨,分别置于含二甲基亚砜的培养液、矿化诱导液、含TNF-α的矿化诱导液、含TNF-α和TSG-6的矿化诱导液中培养10 d,用HE和Masson三色染色法评价各组牙组织的矿化能力。结果:与正常对照组比较,矿化诱导组DSPP、DMP-1和RUNX2蛋白的表达水平升高(P<0.05);与矿化诱导组比较,炎症因子组上述蛋白的表达水平降低(P<0.05);与炎症因子组比较,炎症因子+TSG-6组上述蛋白的表达水平升高(P<0.05)。与正常对照组比较,炎症因子组P65、p-IκB蛋白的表达水平升高(P<0.05);与炎症因子组比较,炎症因子+TSG-6组P65、p-IκB蛋白的表达水平降低(P<0.05)。与炎症因子+TSG-6组比较,中和抗体组DSPP、DMP-1和RUNX2蛋白的表达水平降低,P65、p-IκB蛋白的表达水平升高,发生NF-κB核转运的细胞增多。动物实验表明TSG-6处理可促进炎症环境下大鼠下颌骨中前期牙本质的形成。结论:外源性TSG-6可增强炎症环境下hDPSC的成牙/成骨分化能力,其机制可能与抑制NF-κB信号通路激活有关。 展开更多
关键词 牙髓干细胞 TNF-α 肿瘤坏死因子刺激基因6 NF-ΚB信号通路 成牙/分化
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转化生长因子β1(TGF-β1)和骨形成蛋白2(BMP2)体外联合诱导成牙本质细胞样细胞分化 被引量:2
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作者 朱奇 樊明文 +2 位作者 张旗 陈智 边专 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2005年第4期357-360,共4页
目的:观察转化生长因子β1(transform ing growth factorβ1,TGF-β1)和骨形成蛋白2(bone morphogeneticprote in 2,BMP2)联合应用对体外培养的鼠牙乳头成牙本质细胞分化的影响。方法:取17 d胎龄小鼠下颌第一磨牙牙胚,胰蛋白酶消化分离... 目的:观察转化生长因子β1(transform ing growth factorβ1,TGF-β1)和骨形成蛋白2(bone morphogeneticprote in 2,BMP2)联合应用对体外培养的鼠牙乳头成牙本质细胞分化的影响。方法:取17 d胎龄小鼠下颌第一磨牙牙胚,胰蛋白酶消化分离牙乳头,置半固态培养基培养6 d,半固态培养基中单独加入重组TGFβ1、BMP2,或分别与肝素联合,或TGFβ1和BMP2联合,组织学观察牙乳头的形态学变化。结果:TGF-β1或BMP2单独加入时未见细胞极化,但基质分泌增加。TGF-β1或BMP2加肝素可诱导牙乳头周边细胞发生极化,并分泌胞外基质。半固态培养基中同时加入TGF-β1和BMP2的牙乳头培养6 d后,牙乳头周边细胞出现极化和功能性分化,牙乳头周边胞外基质沉积明显,且可见牙乳头尖形态的维持及从牙乳头尖至牙乳头基底部成牙本质细胞分化梯度的维持。结论:本研究结果证实,在没有内釉上皮和完整的基底膜存在的情况下,TGF-β1和BMP2加肝素可诱导培养的牙乳头出现成牙本质细胞分化,并促进胞外基质的分泌。TGF-β1和BMP2均能诱导成牙本质细胞的细胞学分化和分泌功能,二者联合应用可协同发挥作用增强诱导效果。 展开更多
关键词 转化生长因子Β1 蛋白 成牙本质细胞分化 牙乳头
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黄连素促人牙髓干细胞成骨/成牙本质细胞向分化 被引量:5
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作者 马兰 禹怡君 +2 位作者 刘含笑 刘超 苗雷英 《口腔医学研究》 CAS 北大核心 2020年第7期639-643,共5页
目的:研究黄连素对人牙髓干细胞(hDPSCs)增殖及成骨/成牙本质细胞向分化的影响,为促进年轻恒牙牙根继续发育提供新思路。方法:分离培养hDPSCs,流式细胞术鉴定细胞表型,诱导染色评估多向分化潜能。用不同浓度黄连素(0、1、3、10、30μmol... 目的:研究黄连素对人牙髓干细胞(hDPSCs)增殖及成骨/成牙本质细胞向分化的影响,为促进年轻恒牙牙根继续发育提供新思路。方法:分离培养hDPSCs,流式细胞术鉴定细胞表型,诱导染色评估多向分化潜能。用不同浓度黄连素(0、1、3、10、30μmol/L)刺激hDPSCs,通过CCK-8法、碱性磷酸酶活性检测、q-PCR法检测各组细胞增殖和成骨/成牙本质细胞向分化能力。结果:改良组织块酶消化法成功分离hDPSCs并对其鉴定。CCK-8结果显示培养7 d内,0~10μmol/L浓度的黄连素对hDPSCs增殖无影响,30μmol/L组在第7天时抑制细胞增殖。黄连素浓度为1、3μmol/L时细胞碱性磷酸酶活性显著升高。q-PCR结果也显示黄连素能上调成骨和成牙本质相关基因mRNA表达,且促进效果在浓度为1和3μmol/L时最显著。结论:黄连素在1~3μmol/L浓度范围内能促进hDPSCs成骨/成牙本质细胞向分化。 展开更多
关键词 黄连素 人牙髓干细胞 分化 成牙本质分化
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BMP9通过ERK5信号通路调控根尖牙乳头干细胞成骨/成牙本质分化 被引量:6
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作者 孔令姣 王金华 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期527-531,共5页
目的研究骨形成蛋白9(BMP9)是否通过激活ERK5信号通路调控永生化根尖牙乳头干细胞(i SCAP)成骨/成牙本质向分化。方法首先使用ERK5抑制剂BIX02189作用于BMP9的腺病毒转染i SCAP,采用Western blotting检测ERK5蛋白的磷酸化水平变化;然后... 目的研究骨形成蛋白9(BMP9)是否通过激活ERK5信号通路调控永生化根尖牙乳头干细胞(i SCAP)成骨/成牙本质向分化。方法首先使用ERK5抑制剂BIX02189作用于BMP9的腺病毒转染i SCAP,采用Western blotting检测ERK5蛋白的磷酸化水平变化;然后通过碱性磷酸酶(ALP)染色、RT-PCR及茜素红染色检测成骨/成牙本质相关基因Runx2、OCN、OPN和DMP1的表达,研究BMP9对i SCAP成骨/成牙本质分化的影响。结果 BMP9可以上调ERK5磷酸化水平,BIX02189干预后ERK5磷酸化下降;ALP染色,RT-PCR检测表达及茜素红染色均发现BMP9可以促进Runx2、OCN、OPN、DMP1阳性表达,而BIX02189则抑制成骨/成牙本质分化。结论 BMP9可以通过激活ERK5信号通路促进根尖牙乳头干细胞成骨/成牙本质分化。 展开更多
关键词 永生化根尖牙乳头干细胞 蛋白9 ERK5 /成牙本质分化
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Chir99021调控Wnt/β-catenin信号通路干预干细胞成骨/成牙分化的研究 被引量:3
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作者 谢惠兰 方芳 林毅 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1150-1155,共6页
目的:探讨Chir99021调控Wnt/β-catenin信号通路干预人牙髓干细胞成骨/成牙分化及其可能的机制。方法:分离纯化和培养人前磨牙牙髓干细胞(HDPSCs),免疫荧光检测牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)和波形蛋白(Vimentin),CCK-8检测不... 目的:探讨Chir99021调控Wnt/β-catenin信号通路干预人牙髓干细胞成骨/成牙分化及其可能的机制。方法:分离纯化和培养人前磨牙牙髓干细胞(HDPSCs),免疫荧光检测牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)和波形蛋白(Vimentin),CCK-8检测不同浓度Chir99021对HDPSCs细胞增殖作用的影响。将HDPSCs分为3组培养,第1组正常培养,为空白对照组;第2组成骨诱导液培养,为实验对照组;第3组成骨诱导液+Chir99021培养,为实验组。15 d后用茜素红染色对各组细胞进行钙沉积物检测;qPCR于5、10、15 d检测各组轴抑制蛋白2(axisinhibition protein2,Axin2)、β连环蛋白(β-catenin)及糖原合成激酶3(GSK-3β)水平;Western blot于5、10、15 d检测各组RUNT相关转录因子2(Runx2)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OC)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)和Ⅰ型胶原的表达。结果:分离培养后的HDPSCs中DSP和Vimentin呈阳性表达;Chir99021浓度为2000 nmol/L时,细胞增殖情况最明显;茜红素染色显示实验组钙沉积物较其余两组显著增加;实验组中Axin2、β-catenin显著上升,GSK-3β显著下降(P<0.05);Runx2、ALP在实验组及实验对照组中有显著表达(P<0.05),OC在实验组中显著表达(P<0.05);DSPP、Ⅰ型胶原在实验组中显著表达(P<0.05)。结论:Chir99021通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进HDPSCs的增殖和成骨/成牙分化。 展开更多
关键词 牙髓干细胞 Chir99021 WNT/Β-CATENIN信号通路 分化 成牙分化
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HDAC5对成牙本质细胞增殖和分化影响的研究
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作者 白玉 柳鑫 +3 位作者 程小刚 郭倩 何文喜 余擎 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期737-742,共6页
目的:研究组蛋白去乙酰化酶(HDAC5)对成牙本质细胞增殖及成牙/成骨分化的影响。方法:收集临床因治疗拔除的健康和牙髓炎状态的第三磨牙进行免疫荧光染色观察HDAC5在牙髓中的表达情况,慢病毒载体转染成牙本质细胞系(OLCs),建立过表达HDAC... 目的:研究组蛋白去乙酰化酶(HDAC5)对成牙本质细胞增殖及成牙/成骨分化的影响。方法:收集临床因治疗拔除的健康和牙髓炎状态的第三磨牙进行免疫荧光染色观察HDAC5在牙髓中的表达情况,慢病毒载体转染成牙本质细胞系(OLCs),建立过表达HDAC5的OLCs,CCK8实验检测细胞增殖,碱性磷酸酶(ALP)染色及活性检测、茜素红染色观察矿化能力,Western blot检测I型胶原(COL1α)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙蛋白(OCN)、骨涎蛋白(BSP)、牙本质基质蛋白1(DMP-1)的蛋白表达。结果:与健康牙髓组织相比,炎症牙髓成牙本质细胞层见高表达的HDAC5,过表达HDAC5后OLCs增殖活力抑制,ALP活性降低,矿化结节形成减少,成牙/成骨相关蛋白表达均降低(P<0.05)。结论:HDAC5在牙髓炎成牙本质细胞层高表达且抑制OLCs的增殖和成牙/成骨向分化。 展开更多
关键词 成牙本质细胞 表观遗传学 组蛋白去乙酰化酶5 成骨/成牙本质向分化 细胞增殖
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Cx43通过Erk1/2促进BMP-2诱导的人牙髓细胞成牙本质分化 被引量:1
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作者 丁灿灿 朱浩 +3 位作者 张安妮 何圆培 聂敏海 李适廷 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期659-664,共6页
目的:探讨骨形态发生蛋白(BMP)-2和连接蛋白(Cx) 43在促进人牙髓细胞(hDPCs)成牙本质分化过程中的联系。方法:在hDPCs中过表达Cx43并施以300 ng/m L BMP-2刺激1 h,qRT-PCR、Western blot和免疫荧光(IF)检测成牙本质分化标记物的表达变化... 目的:探讨骨形态发生蛋白(BMP)-2和连接蛋白(Cx) 43在促进人牙髓细胞(hDPCs)成牙本质分化过程中的联系。方法:在hDPCs中过表达Cx43并施以300 ng/m L BMP-2刺激1 h,qRT-PCR、Western blot和免疫荧光(IF)检测成牙本质分化标记物的表达变化;检测BMP-2介导的Smad1/5/9和Erk1/2通路活性,并施加PD98059(Erk1/2抑制剂)刺激1 h,检测抑制Erk1/2后过表达Cx43对BMP-2诱导的DSPP等的表达变化影响。结果:BMP-2上调hDPCs内osterix、DSPP、DMP-1、ALP和OCN RNA水平以及osterix蛋白表达,增强hDPCs中DSPP的荧光强度。过表达Cx43明显促进BMP-2诱导的hDPCs成牙本质分化。BMP-2激活hDPCs中的Smad1/5/9通路,过表达Cx43上调hDPCs中Erk1/2磷酸化水平。抑制Erk1/2明显减弱过表达Cx43对BMP-2诱导的osterix、DSPP、DMP-1、ALP、OCN mRNA表达以及osterix蛋白水平和DSPP染色强度的增强作用。结论:Cx43通过Erk1/2促进BMP-2诱导的osterix和DSPP等表达以及hDPCs成牙本质分化。 展开更多
关键词 形态发生蛋白-2 连接蛋白43 人牙髓细胞 成牙本质分化 ERK1/2
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牙本质支架体外诱导兔骨髓干细胞分化 被引量:1
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作者 李康婧 黄杨 陈文霞 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2012年第4期291-294,共4页
目的:探讨将人牙本质作为组织工程支架的可行性,采用不同的方式处理牙本质片,观察牙本质片处理后诱导兔骨髓基质干细胞贴壁附着生长的规律及成骨分化潜能。方法:将兔的骨髓基质干细胞分别接种于经机械去除前期牙本质加EDTA-柠檬酸脱矿处... 目的:探讨将人牙本质作为组织工程支架的可行性,采用不同的方式处理牙本质片,观察牙本质片处理后诱导兔骨髓基质干细胞贴壁附着生长的规律及成骨分化潜能。方法:将兔的骨髓基质干细胞分别接种于经机械去除前期牙本质加EDTA-柠檬酸脱矿处理(A组),标准根管预备-EDTA处理(B组)的牙本质片上,体外培养1周,扫描电镜观察细胞与牙本质片的附着情况,碱性磷酸酶、茜素红及Von kossa染色观察兔骨髓基质干细胞成骨分化。结果:兔骨髓基质细胞附着在2种方式处理的牙本质片上生长良好,贴附紧密。B组牙本质片上细胞碱性磷酸酶表达阳性率高达80%,茜素红、Von kossa染色观察到钙结节数量多于A组。结论:经标准根管预备-EDTA处理的人牙本质能有效促进骨髓基质干细胞增殖及成骨分化,可能成为一种理想的成骨生物支架,并为牙体牙髓疾病的治疗提供了新的思路。 展开更多
关键词 本质 支架髓基质干细胞分化
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细胞外基质磷酸糖蛋白在牙发生及骨形成上的研究进展 被引量:1
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作者 刘明月 郭阳 +4 位作者 李莹 张智慧 于忠艳 吴迪 胡伟平 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2013年第2期191-193,共3页
细胞外基质磷酸糖蛋白(matrix extracelluar phospho-glycoprotein,MEPE),最初由Rowe等Ⅲ从肿瘤相关性骨软化症( oncogenic hypophosphatemic osteomalacia, OHO)患者肿瘤细胞的cDNA文库中克隆而得,随后L.Argiro等在骨组织中发现... 细胞外基质磷酸糖蛋白(matrix extracelluar phospho-glycoprotein,MEPE),最初由Rowe等Ⅲ从肿瘤相关性骨软化症( oncogenic hypophosphatemic osteomalacia, OHO)患者肿瘤细胞的cDNA文库中克隆而得,随后L.Argiro等在骨组织中发现MEPE与矿化密切相关。牙和骨组织均为矿化的组织,在细胞外基质中的蛋白组成以及形成机制上是相似的。目前MEPE在成骨细胞、骨细胞和成牙本质细胞上均表达,其在牙形成及骨发生方面作用已成为研究热点。本文现就MEPE在骨及牙这两个矿化组织中的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 细胞外基质磷酸糖蛋白 牙发生 CDNA文库 成牙本质细胞 矿化组织 细胞 肿瘤相关性
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牙本质基质蛋白-1与生物矿化 被引量:2
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作者 刘冬梅 董福生 《国际口腔医学杂志》 CAS 2009年第1期98-101,共4页
牙本质基质蛋白(DMP)-1是骨、软骨、釉质、牙骨质和牙本质生物矿化所必需的一种酸性非胶原蛋白。蛋白质化学研究显示,DMP-1全基因序列是生物矿化的启动因子,由C末端和N末端组成。体内实验证实DMP-1具有多方面功能,不仅是生物矿化的信号... 牙本质基质蛋白(DMP)-1是骨、软骨、釉质、牙骨质和牙本质生物矿化所必需的一种酸性非胶原蛋白。蛋白质化学研究显示,DMP-1全基因序列是生物矿化的启动因子,由C末端和N末端组成。体内实验证实DMP-1具有多方面功能,不仅是生物矿化的信号分子,同时也是调节因子,对成骨细胞和成牙本质细胞的成熟至关重要。本文就DMP-1在基因调节、组织细胞中的表达以及成骨、成牙本质中的生物矿化作用作一综述。 展开更多
关键词 本质基质蛋白-1 生物矿化 成牙本质
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牙髓干细胞分化的研究进展 被引量:3
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作者 苟文亭 叶玲 谭红 《国际口腔医学杂志》 CAS 2012年第3期380-383,共4页
牙髓干细胞(DPSC)是一种具有高度增生、自我更新能力和多相分化潜能的成体干细胞,在一定条件下可向特定的细胞类型分化,在牙髓修复和牙齿再生中发挥着重要的作用。本文主要就DPSC成骨向分化、成牙本质向分化的研究进展作一综述。
关键词 牙髓干细胞 成牙本质向分化 向分化
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rhBMP_2作用下人牙乳头细胞内Smad1分子的转位变化 被引量:3
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作者 何文喜 牛忠英 +1 位作者 赵守亮 陈健 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期398-400,共3页
目的:观察骨形成蛋白(bone morphogenetic protein)特异的细胞内信号转导分子Smadl在人牙乳头细胞内的表达及信号转位过程,从细胞内信号转导水平探讨牙齿发育过程中成牙本质细胞的分化机制。方法:原代培养人牙乳头细胞,用转化生长因子β... 目的:观察骨形成蛋白(bone morphogenetic protein)特异的细胞内信号转导分子Smadl在人牙乳头细胞内的表达及信号转位过程,从细胞内信号转导水平探讨牙齿发育过程中成牙本质细胞的分化机制。方法:原代培养人牙乳头细胞,用转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)和重组人骨形成蛋白骨形成蛋白2(recombinant hu-man bone morphogenetic protein,rhBMP2)刺激培养的细胞,对照组用0.2%FCS的DMEM的培养液培养,不加任何刺激。免疫组化观察。结果:TGF-β1和rhBMP2刺激组均可见Smadl蛋白表达,但与对照组相比无明显差异;rhBMP2组可见Smadl从胞浆转位至核内聚集,TGF-β1组未见此作用。结论:首次观察到Smadl基因在人牙乳头细胞内的表达并参与信号转位过程,提示BMP2在牙乳头细胞内信号传递可能是通过Smadl转位至核内引起基因表达实现的。 展开更多
关键词 重组人蛋白2 人牙乳头细胞 SMAD1 转化生长因子β1 牙齿发育 细胞分化 成牙本质细胞
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