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利用1型糖尿病小鼠模型分析犬成纤维生长因子21的长效降糖效果
1
作者 郭云鹏 牛顿 +4 位作者 李爽 姜兴昊 张立夏 任桂萍 尹杰超 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期770-784,共15页
本研究分别将Fc片段、穿膜肽R11和穿膜肽TAT与犬成纤维生长因子21(canine fibroblast growth factor 21,cFGF-21)相连构建了3种融合蛋白,旨在探讨cFGF-21对1型糖尿病的长效降糖作用。用链脲佐菌素(STZ)建立1型糖尿病小鼠模型,随后分别用... 本研究分别将Fc片段、穿膜肽R11和穿膜肽TAT与犬成纤维生长因子21(canine fibroblast growth factor 21,cFGF-21)相连构建了3种融合蛋白,旨在探讨cFGF-21对1型糖尿病的长效降糖作用。用链脲佐菌素(STZ)建立1型糖尿病小鼠模型,随后分别用cFGF-21、R11-cFGF-21、Fc-cFGF-21和TAT-cFGF-21治疗。治疗分为3个阶段:1)每天给药一次(第1~14天);2)每3 d给药一次(第15~29天);3)每5 d给药一次(第30~44天)。在治疗过程中,每隔3 d检测一次小鼠血糖,在每阶段结束时检测试验小鼠12 h内血糖波动。试验结束前,对所有小鼠进行口服葡萄糖耐量试验。通过ELISA法检测小鼠血清中炎症相关因子IL-10、IL-1β、IL-17A和抗炎因子IL-10表达水平。通过Real-time PCR检测肝、脂肪、肠和肾等组织中的糖代谢相关因子的转录水平。试验结束后,对所有小鼠进行糖基化血红蛋白(HbA1c)、血脂四项和肝功能、血清胰岛素和HbA1c检测并对小鼠胰腺组织进行病理分析。结果显示:在治疗的第一阶段,与cFGF-21组相比,TAT-cFGF-21降糖效果明显降低,R11-cFGF-21和Fc-cFGF-21组没有显著差异;在治疗的第二、三阶段,与cFGF-21组相比,TAT-cFGF-21组血糖明显上升,R11-cFGF-21和Fc-cFGF-21组可在给药3~5 d内能将血糖控制在更低的水平。治疗8周后,与cFGF-21组相比,R11-cFGF-21和Fc-cFGF-21组口服葡萄糖耐量(OGTT)和血脂紊乱明显改善,糖化血红蛋白(HbA1c)接近正常水平,肝损伤明显修复,而TAT-cFGF-21组与cFGF-21组没有明显差距。此外,ELISA检测和HE染色结果显示,相较cFGF-21和TAT-cFGF-21组,R11-cFGF-21和Fc-cFGF-21组氧化应激和炎症反应得到显著改善且胰岛β细胞修复效果明显。经R11和Fc修饰的cFGF-21长效降糖能力的显著增加,而TAT-cFGF-21长期的降血糖能力较弱。此外,经R11和Fc修饰的cFGF21能显著改善氧化应激、胰腺炎症和脂质代谢,修复肝损伤和胰岛β细胞,治疗效果明显优于cFGF21。 展开更多
关键词 犬糖尿病 成纤维细胞生长因子-21 cfgf-21 Fc 穿膜肽 长效性
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成纤维细胞生长因子21通过抑制肥胖小鼠肝脏氧化应激改善胰岛素抵抗 被引量：9
2
作者 周博 郭秦乐 +2 位作者 李会霞 徐琳 李红霞 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期161-165,187,共6页
目的探索成纤维细胞生长因子21(FGF21)改善胰岛素抵抗的可能机制以及在氧化应激过程中的作用。方法构建高脂饮食小鼠模型后分组,干预组小鼠注射FGF21,进行糖耐量及胰岛素耐量实验测定,运用免疫印迹分析和免疫共沉淀检测肝脏组织氧化应... 目的探索成纤维细胞生长因子21(FGF21)改善胰岛素抵抗的可能机制以及在氧化应激过程中的作用。方法构建高脂饮食小鼠模型后分组,干预组小鼠注射FGF21,进行糖耐量及胰岛素耐量实验测定,运用免疫印迹分析和免疫共沉淀检测肝脏组织氧化应激标志物(iNOS)和胰岛素信号通路分子的蛋白(IRS-1和Akt)表达情况,同时运用油红O染色评估肝脂肪变性水平。结果与模型组比较,FGF21干预组的体重、血糖及胰岛素水平降低,胰岛素敏感性提高。同时,在FGF21干预组小鼠肝脏组织的iNOS及TNF-α蛋白表达降低,IRS-1酪氨酸和Akt丝氨酸的磷酸化水平增高;FGF21组较对照组的肝脏脂质积聚明显减少,改善了肥胖小鼠的肝脂肪变性。结论 FGF21可作为一个重要的糖脂代谢调控子,通过抑制肝脏氧化应激,重建其受损的胰岛素信号通路,减少肝脏脂肪积聚,改善肥胖小鼠的胰岛素抵抗,具有潜在的临床应用价值。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子21(fgf21) 氧化应激 肝脂肪变性 胰岛素抵抗
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马铃薯X病毒载体介导的人成纤维细胞生长因子21(hFGF21)在烟草中的表达 被引量：4
3
作者 付宏岐 薛萍 +1 位作者 杨莉芳 庞实锋 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2013年第4期45-51,共7页
【目的】利用马铃薯X病毒(PVX)表达载体(pgR107),在本氏烟草中表达人成纤维细胞生长因子21(Fibroblast growth factor 21,FGF21),旨在寻求一种低成本、方便、安全,且保持hFGF21蛋白生物活性的方法。【方法】将包含组氨酸(His)标签序列的... 【目的】利用马铃薯X病毒(PVX)表达载体(pgR107),在本氏烟草中表达人成纤维细胞生长因子21(Fibroblast growth factor 21,FGF21),旨在寻求一种低成本、方便、安全,且保持hFGF21蛋白生物活性的方法。【方法】将包含组氨酸(His)标签序列的hFGF21-smGFP融合基因和hFGF21基因克隆进PVX表达载体,构建重组表达质粒pgR107-His-hFGF21-smGFP和pgR107-His-hFGF21。采用冻融法将质粒pgR107-His-hFGF21-smGFP、pgR107-smGFP和pgR107-His-hFGF21转入根瘤农杆菌GV3101中,通过农杆菌介导注射侵染接种本氏烟的叶片,采用SDS-PAGE、Western blotting和ELISA检测hFGF21-smGFP和hFGF21蛋白的表达情况。烟草叶片表达的融合蛋白经Ni-NTA柱纯化后,再用重组牛肠激酶(rbEK)裂解,获得纯度较高的重组hFGF21活性蛋白。hFGF21调节葡萄糖吸收活性用微量化的GOD-POD法检测。【结果】成功构建了植物病毒双元表达载体pgR107-His-hFGF21-smGFP和pgR107-His-hFGF21。表型观察发现,侵染第7天,烟草外源蛋白积累最高,smGFP和hFGF21-smGFP蛋白的积累主要在细胞质中。SDS-PAGE、Western blotting和ELISA分析表明,hFGF21重组蛋白可在烟草中有效表达,表达量高达500μg/g(鲜叶质量)。生物活性检测结果表明,纯化的hFGF21蛋白可以促进3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的吸收。【结论】利用PVX病毒载体,在本氏烟草中表达的重组hFGF21蛋白具备生物活性。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子21(fgf21) 融合蛋白 烟草 马铃薯X病毒
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人成纤维细胞生长因子-21基因的克隆表达及蛋白的纯化 被引量：7
4
作者 王会岩 田海山 +6 位作者 赵宏鑫 张耀方 万晓姗 邵明龙 杨苹 肖业臣 李校堃 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期81-85,共5页
目的:构建和表达人成纤维细胞生长因子-21(FGF21)的基因工程菌,为治疗2型糖尿病的新药开发提供实验数据。方法:通过PCR方法,以质粒pET20b-FGF21为模板扩增FGF21全长,将其与分子伴侣SUMO相融合,再将该融合基因与原核表达载体pET20b连接... 目的:构建和表达人成纤维细胞生长因子-21(FGF21)的基因工程菌,为治疗2型糖尿病的新药开发提供实验数据。方法:通过PCR方法,以质粒pET20b-FGF21为模板扩增FGF21全长,将其与分子伴侣SUMO相融合,再将该融合基因与原核表达载体pET20b连接后转化至BL21(Rosetta)宿主细胞中,通过IPTG诱导获得可溶性表达。将融合蛋白经Ni-NTA、分子筛等进行纯化,获得的蛋白纯度在95%以上。结果:经酶切和基因测序证实获得的FGF21基因序列与GenBank(登录号NM019113)报道的完全一致,构建的pET20b-SUMO-FGF21表达载体在BL21大肠杆菌中成功表达FGF21蛋白,蛋白表达量在15%以上,经SDS-PAGE证实其相对分子质量为19401,与理论预期值相符。Western blotting分析该表达产物与人FGF21多克隆抗体具有特异性结合能力,经SUMO酶酶切后获得纯度大于95%以上的纯蛋白。结论:成功构建表达人FGF21融合蛋白的基因工程菌,经IPTG诱导、Ni-NTA、分子筛等进行纯化后获得了FGF21纯蛋白。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子21 pET-20b 小泛素相关修饰蛋白质类
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利用转基因番茄表达人成纤维细胞生长因子21(FGF21) 被引量：5
5
作者 付宏岐 李海燕 +7 位作者 庞实锋 杨晶 李洪志 薛萍 刘秀明 李营 王艳芳 李校堃 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2011年第7期163-170,共8页
【目的】在番茄中表达人成纤维细胞生长因子-21(Fibroblast growth factor-21,FGF21),为利用植物反应器规模化生产FGF21奠定基础。【方法】以甘露糖-6-磷酸异构酶基因(pmi)作为转基因植物的选择标记,将人源fgf21基因克隆至表达载体pCAMB... 【目的】在番茄中表达人成纤维细胞生长因子-21(Fibroblast growth factor-21,FGF21),为利用植物反应器规模化生产FGF21奠定基础。【方法】以甘露糖-6-磷酸异构酶基因(pmi)作为转基因植物的选择标记,将人源fgf21基因克隆至表达载体pCAMBIA1390RⅡ(简写为p1390RⅡ)上,构建重组表达质粒p1390 RⅡMFGF21。采用冻融法将质粒p1390RⅡMFGF21转入根瘤农杆菌EHA105,叶盘法转化番茄(Lycopersicon esculentum)"中蔬6号",采用PCR检测、Southern杂交筛选转基因番茄阳性植株,并对FGF21蛋白在转基因番茄叶片中的表达进行了Western blot分析。【结果】成功构建了带pmi安全选择标记基因的植物双元表达载体p1390RⅡMFGF21,在番茄中初步建立了以pmi为选择标记基因的遗传转化体系,共获得了26株转基因番茄植株,其中5株为阳性克隆,转化率为19.2%。采用PCR扩增和Southern blot分析进行检测,结果表明,重组fgf21基因已整合到转基因番茄基因组中。Western blot分析检测结果显示,FGF21蛋白在转基因番茄叶片中有一定水平的表达,并具有良好的抗原性。【结论】获得了以pmi为选择标记成功表达FGF21蛋白的转基因番茄遗传体系。 展开更多
关键词 农杆菌 成纤维细胞生长因子-21 甘露糖-6-磷酸异构酶 生物反应器 番茄 遗传转化
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成纤维细胞生长因子-21[Arg^(59)]突变体基因的克隆及融合蛋白的表达与纯化 被引量：2
6
作者 万晓珊 赵宏鑫 +4 位作者 张耀方 张海淼 邵明龙 王会岩 李校堃 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期491-495,共5页
目的:对野生型成纤维细胞生长因子-21(FGF21)进行突变改造及表达与纯化,为后续蛋白质体外偶联(Pull-down)实验及建立人源肝癌裸鼠模型奠定基础。方法:采用PCR定点突变方法,将FGF21cDNA第59位赖氨酸密码子突变为精氨酸密码子,所得的突变... 目的:对野生型成纤维细胞生长因子-21(FGF21)进行突变改造及表达与纯化,为后续蛋白质体外偶联(Pull-down)实验及建立人源肝癌裸鼠模型奠定基础。方法:采用PCR定点突变方法,将FGF21cDNA第59位赖氨酸密码子突变为精氨酸密码子,所得的突变体片段与SUMO分子伴侣相连后插入表达载体pET20b,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。对表达产物进行Ni-NTA柱亲和层析、酶切和除盐等纯化分析。结果:PCR扩增出约546bp的特异性片段,测序分析表明已成功引入突变;所构建的pET20b-SUMO-FGF21[Arg59]重组阳性克隆经PCR与双酶切鉴定及测序分析,与预期结果一致;SDS-PAGE显示表达产物相对分子质量约31500,且为可溶性;Western blotting分析证实:纯化后产物是成熟的FGF21[Arg59]突变体蛋白。结论:成功构建FGF21[Arg59]突变体基因,并经表达纯化得到成熟的FGF21[Arg59]突变体蛋白。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子-21 突变体 SUMO融合表达 纯化
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农杆菌介导的成纤维细胞生长因子-21基因转化甘蓝型油菜研究 被引量：1
7
作者 李营 庞实锋 +7 位作者 薛萍 刘秀明 付宏岐 李洪志 熊丽东 潘国庆 李海燕 李校堃 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2010年第8期124-130,共7页
【目的】利用基因工程技术获得FGF21转基因油菜植株,为FGF21蛋白生产体系的建立奠定基础。【方法】将人源FGF21基因的cDNA序列,根据植物偏好密码子进行改造,并通过PCR拼接技术扩增FGF21全长基因,将该基因插入油菜油体特异表达载体,通过... 【目的】利用基因工程技术获得FGF21转基因油菜植株,为FGF21蛋白生产体系的建立奠定基础。【方法】将人源FGF21基因的cDNA序列,根据植物偏好密码子进行改造,并通过PCR拼接技术扩增FGF21全长基因,将该基因插入油菜油体特异表达载体,通过冻融法转到根瘤农杆菌LBA4404,叶盘法转化甘蓝型油菜"沪油15",并对转基因油菜进行PCR检测和Southern blot分析,最后对FGF21蛋白在转基因油菜种子中的表达的进行了Western blot分析。【结果】合成了FGF21全长基因,成功构建了含FGF21基因的植物双元表达载体p1390yoFGF21,并建立了油菜遗传转化体系。通过油菜遗传转化获得2株转基因植株,PCR扩增和Southern blot检测证实,重组FGF21基因已整合到油菜基因组中;Western blot分析检测显示,FGF21在转基因油菜种子蛋白中具有一定水平的表达量,并具有良好的抗原性。【结论】FGF21基因被成功整合到油菜基因组中,收获的T0代种子蛋白具有良好的抗原性。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子-21 甘蓝型油菜 生物反应器 转基因 农杆菌
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不同理化因素对重组人成纤维细胞生长因子21蛋白纯度的影响
8
作者 王长文 刘敏 +4 位作者 刘磊 姜勇 张磊 李艳 王会岩 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期506-509,共4页
目的：研究重组人成纤维细胞生长因子21（rhFGF21）在不同保存条件下的稳定性,阐明温度、pH值、缓冲溶液和反复冻融因素对rhFGF21稳定性的影响,进一步完善纯化rhFGF21的工艺。方法：rhFGF21在不同温度（-20℃、4℃和25℃）、不同pH值缓... 目的：研究重组人成纤维细胞生长因子21（rhFGF21）在不同保存条件下的稳定性,阐明温度、pH值、缓冲溶液和反复冻融因素对rhFGF21稳定性的影响,进一步完善纯化rhFGF21的工艺。方法：rhFGF21在不同温度（-20℃、4℃和25℃）、不同pH值缓冲液（醋酸-醋酸钠缓冲液pH 4.0和pH 5.0、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液pH 5.0和pH 6.0、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液pH 6.0、pH 6.5和pH 7.0,TrisHCl缓冲液pH 7.5和pH 8.0）中及反复冻融条件下分别保存,采用高效液相色谱法（HPLC）检测rhFGF21纯度,同时观察外观性状。结果：于-20℃和4℃分别保存时,rhFGF21的各项性质在观察期内均无明显变化;25℃时,rhFGF21存放14d纯度由0d时（100.00±0.00）%下降至（15.20±0.14）%（P〈0.01）;在pH 4.0和pH 5.0缓冲液中25℃条件下保存7d,溶液出现浑浊;在pH 5.0和pH 6.0缓冲液中25℃条件下保存7d,溶液出现浑浊;在pH 6.5和pH 8.0磷酸盐和Tris-HCl缓冲液中,溶液澄清透明;rhFGF21原液反复冻融后其纯度变化差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：rhFGF21在低温和pH 6.5－8.0磷酸盐和Tris-HCl缓冲液中溶液较稳定,反复冻融处理对rhFGF21稳定性也有明显影响。 展开更多
关键词 重组人成纤维细胞生长因子21 纯度 稳定性 理化因素
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重组人成纤维细胞生长因子21调节成牙骨质细胞矿化作用及其机制研究 被引量：3
9
作者 邬浩 李莹 +3 位作者 王玉琢 于继泽 包幸福 胡敏 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期140-148,共9页
目的探讨重组人成纤维细胞生长因子21(rhFGF21)对成牙骨质细胞增殖和矿化的作用及其机制。方法采用苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色和免疫荧光法检测成纤维细胞生长因子21(FGF21)在大鼠牙周组织和成牙骨质细胞OCCM-30中的表达和分布... 目的探讨重组人成纤维细胞生长因子21(rhFGF21)对成牙骨质细胞增殖和矿化的作用及其机制。方法采用苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色和免疫荧光法检测成纤维细胞生长因子21(FGF21)在大鼠牙周组织和成牙骨质细胞OCCM-30中的表达和分布;采用CCK-8法检测经不同浓度rhFGF21处理OCCM-30的增殖情况;采用碱性磷酸酶染色和茜素红染色分别检测OCCM-30矿化诱导3、7 d后的矿化状态;通过实时定量聚合酶链反应(PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测成骨相关基因Runx2和Osterix的转录及蛋白表达情况;通过PCR阵列分析评估OCCM-30内转化生长因子β(TGFβ)/骨形态发生蛋白(BMP)信号通路基因的表达变化。结果FGF21在大鼠牙周组织和OCCM-30中存在表达;rhFGF21对OCCM-30的增殖能力无明显影响,但50 ng/mL rhFGF21能促进OCCM-30矿化能力增强(P<0.001);实时定量PCR结果显示Runx2和Osterix的转录水平在50 ng/mL rhFGF21矿化诱导3 d时上升,5 d时下降;Western blot结果显示,Runx2及Osterix的蛋白表达水平在矿化诱导过程中增强,rhFGF21上调细胞内Bmpr1b的表达。结论rhFGF21能够促进OCCM-30矿化,这与TGFβ/BMP信号通路的激活有关。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子21 牙骨质再生 成牙骨质细胞 转化生长因子β/骨形态发生蛋白信号通路
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成纤维细胞生长因子21对小鼠肝纤维化的作用及其机制 被引量：4
10
作者 王大秀 韩继武 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2018年第6期1215-1219,共5页
目的探索成纤维细胞生长因子(FGF)21对小鼠肝纤维化的作用及机制。方法将40只雄性ICR小鼠随机分为对照组(n=10)、模型组(CCl4处理)(n=15)、治疗组(CCl4+1.0 mg/kg FGF21处理)(n=15)。连续处理36 d后取血清及肝组织。检测ALT、AST、ALP、... 目的探索成纤维细胞生长因子(FGF)21对小鼠肝纤维化的作用及机制。方法将40只雄性ICR小鼠随机分为对照组(n=10)、模型组(CCl4处理)(n=15)、治疗组(CCl4+1.0 mg/kg FGF21处理)(n=15)。连续处理36 d后取血清及肝组织。检测ALT、AST、ALP、TBil、IL-6、IL-1β、TNFα水平;Masson染色观察病理改变;4-羟脯氨酸(4-Hyp)试剂盒检测肝内4-Hyp水平;real-time PCR检测肝胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TGFβ、IL-6、IL-1β、TNFαmRNA水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 Masson染色结果显示,模型组肝纤维化程度较对照组明显加重,治疗组肝纤维化程度较模型组明显减轻;生化检测结果显示,模型组小鼠血清ALT、AST、ALP、TBil水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P值均<0.05);治疗组小鼠血清ALT、AST、ALP、TBil水平较模型组明显下降,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。血清ELISA检测结果显示,模型组小鼠血清IL-6、IL-1β、TNFα水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P值均<0.05);治疗组小鼠血清IL-6、IL-1β、TNFα水平较模型组明显下降,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。4-Hyp及realtime PCR检测结果显示,模型组4-Hyp以及CollagenⅠ、α-SMA mRNA水平较对照组明显升高,差异均有统计学意义(P值分别为0.004、<0.001、<0.001);治疗组4-Hyp以及CollagenⅠ、α-SMA mRNA水平明显低于模型组,差异均有统计学意义(P值分别为0.005、<0.001、<0.001);模型组小鼠肝内TGFβ、IL-6、IL-1β、TNFαmRNA水平较对照组明显升高,差异均有统计学意义(P值均<0.001);治疗组小鼠肝内TGFβ、IL-6、IL-1β、TNFαmRNA水平明显低于模型组,差异均有统计学意义(P值均<0.001)。结论 FGF21改善小鼠肝纤维化的作用机制与抑制肝内TGFβ和IL-6、IL-1β、TNFα等炎症因子表达有关。 展开更多
关键词 肝硬化 成纤维细胞生长因子21 细胞因子类 小鼠 近交ICR
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鼠源成纤维细胞生长因子-21对脂肪细胞糖代谢的作用 被引量：18
11
作者 姜媛媛 刘铭瑶 +3 位作者 任桂萍 王文飞 刘晓民 李德山 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第2期157-164,共8页
成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)是FGF家族的成员之一.近年发现FGF-21是一种新的代谢调节因子.从小鼠肝脏克隆FGF-21cDNA,经测序正确后亚克隆至具有羟胺切割位点的小泛素相关修饰物表达载体上,转化宿主菌Rosetta,得到的转化子经IPTG诱导... 成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)是FGF家族的成员之一.近年发现FGF-21是一种新的代谢调节因子.从小鼠肝脏克隆FGF-21cDNA,经测序正确后亚克隆至具有羟胺切割位点的小泛素相关修饰物表达载体上,转化宿主菌Rosetta,得到的转化子经IPTG诱导后获得稳定、高效、可溶的表达产物.表达产物经羟胺切割、透析、复性、柱层析纯化后,在每升宿主菌中可获得4mg纯度为95%的成熟鼠源FGF-21蛋白,利用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶(POD-GOD)法在小鼠3T3-L1脂肪细胞中进行生物学活性检测.结果表明,鼠源FGF-21具有促进脂肪细胞吸收葡萄糖的作用,短期作用(1h)与胰岛素相似,长期作用(8和12h)明显优于胰岛素.这一结果为以鼠源FGF-21为模型进一步研究FGF-21的生物学活性及其在糖代谢方面的作用机理奠定了基础. 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子-21 糖尿病 糖代谢 3T3-L1
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成纤维细胞生长因子21(FGF21)通过SIRT1通路抑制棕榈酸酯诱导的人肝细胞脂肪堆积和炎症反应 被引量：7
12
作者 南瑛 相里伟 +2 位作者 张薇 郭玉芳 曹健 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期606-612,共7页
目的研究成纤维细胞生长因子21(FGF21)对棕榈酸酯诱导的人肝细胞脂肪堆积、炎症因子表达的作用及其机制。方法采用组蛋白去乙酰化酶转录沉默信息调节因子1(SIRT1)短发夹RNA(shRNA)慢病毒,建立L02SIRT1稳定敲低细胞系;L02细胞以及SIRT1... 目的研究成纤维细胞生长因子21(FGF21)对棕榈酸酯诱导的人肝细胞脂肪堆积、炎症因子表达的作用及其机制。方法采用组蛋白去乙酰化酶转录沉默信息调节因子1(SIRT1)短发夹RNA(shRNA)慢病毒,建立L02SIRT1稳定敲低细胞系;L02细胞以及SIRT1敲低细胞系给予棕榈酸酯(palmitate)处理,建立高脂细胞模型,在此基础上给予FGF21,检测细胞甘油三酯(TG)、丙二醛(MDA)水平;ELISA检测细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平;MitoSOX染色结合流式细胞术检测细胞线粒体活性氧(ROS)水平;实时定量PCR检测SIRT1、过氧化物酶体增殖物激活受体辅激活因子1α(PGC1α)、超氧化物歧化酶2(SOD2)以及过氧化氢酶(CAT)的mRNA水平;Western blot法检测SIRT1、 PGC1α、 SOD2、 CAT蛋白水平;JC-1染色结合激光共聚焦检测线粒体膜电位;Seahorse XF细胞线粒体压力测试试剂盒检测线粒体氧化呼吸功能。结果棕榈酸酯可增加L02细胞内TG水平,引起细胞和线粒体氧化应激,降低SIRT1、 PGC1α、 SOD2以及CAT的mRNA和蛋白水平,增加细胞TNF-α、 IL-6水平,降低线粒体膜电位、损害线粒体功能。FGF21处理显著逆转以上作用。SIRT1敲低后,则FGF21的上述作用消失。结论 FGF21通过激活SIRT1通路改善高脂诱导的人肝细胞脂肪堆积,减少细胞氧化应激反应和炎症因子释放,改善线粒体功能。 展开更多
关键词 成纤维化生长因子21(fgf21) 脂肪变 线粒体功能异常 沉默信息调节因子1(SIRT1) 氧化应激 炎症反应
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成纤维细胞生长因子21对1型糖尿病动物模型的肝糖代谢影响及机制研究 被引量：15
13
作者 孙国鹏 叶贤龙 +2 位作者 任桂萍 李晋南 李德山 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第10期953-960,共8页
成纤维细胞生长因子(FGF)-21是FGF家族的成员之一.作为近年发现的一种新的糖代谢调节因子,大量研究表明,FGF-21是一种不依赖胰岛素,能够独立降糖的2型糖尿病治疗潜力型药物.但是,能否应用于1型糖尿病的治疗,国内外目前尚无报道.通过改... 成纤维细胞生长因子(FGF)-21是FGF家族的成员之一.作为近年发现的一种新的糖代谢调节因子,大量研究表明,FGF-21是一种不依赖胰岛素,能够独立降糖的2型糖尿病治疗潜力型药物.但是,能否应用于1型糖尿病的治疗,国内外目前尚无报道.通过改良传统造模方法,诱导小鼠缓慢产生糖耐量异常,研究FGF-21对此类模型的糖代谢影响及肝糖代谢机制.通过检测FGF-21短期注射和长期注射后模型动物血糖的变化,研究FGF-21在模型动物上对血糖的调控效果.采用实时定量PCR检测FGF-21对模型动物肝脏中葡萄糖转运蛋白(GLUT)1、4 mRNA的表达影响.利用蒽酮法检测模型动物肝脏中糖原合成量.实验结果显示,FGF-21能够调节1型糖尿病动物的血糖水平,并呈剂量依赖性.同时,首次在1型糖尿病动物模型上证实了低剂量FGF-21(0.125 mg/kg)与胰岛素的协同作用效果优于相同剂量FGF-21和胰岛素单独注射的效果.治疗结果表明,FGF-21能够维持1型糖尿病动物模型血糖在正常范围,效果优于胰岛素.实时定量PCR结果发现,与胰岛素上调GLUT4 mRNA表达量不同的是,FGF-21作用动物模型8周后,GLUT1 mRNA表达量显著提高,长期的FGF-21与胰岛素协同注射使GLUT1、4 mRNA表达量同时显著提高.长期FGF-21与胰岛素协同注射组和高剂量FGF-21注射均可显著提高模型动物肝糖原的合成.结果表明,FGF-21促进动物模型糖代谢机制与增加GLUT1表达、增加糖原合成作用有关.为临床应用FGF-21治疗1型糖尿病,增加胰岛素敏感性提供了理论依据. 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子21 迟发性1型糖尿病动物模型 糖代谢 胰岛素协同作用 糖尿病治疗药物
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2型糖尿病肥胖或超重患者血清成纤维细胞生长因子21水平及其临床价值研究 被引量：11
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作者 张楠 姜天 +2 位作者 孙莉 代芳 章秋 《中国全科医学》 CAS 北大核心 2018年第5期521-525,共5页
目的研究2型糖尿病(T2DM)肥胖或超重患者血清成纤维细胞生长因子21(FGF21)的水平,并探讨其与体质指数(BMI)、稳态胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)等因素的相关性。方法选取2014年1月—2016年7月安徽医科大学第一附属医院内分泌科住院治疗的T2D... 目的研究2型糖尿病(T2DM)肥胖或超重患者血清成纤维细胞生长因子21(FGF21)的水平,并探讨其与体质指数(BMI)、稳态胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)等因素的相关性。方法选取2014年1月—2016年7月安徽医科大学第一附属医院内分泌科住院治疗的T2DM患者213例,根据BMI分为T2DM肥胖超重组(BMI≥24.0 kg/m^2,127例)和T2DM非肥胖超重组(BMI<24.0 kg/m^2,86例),另选取同期本院体检健康者为健康对照组(114例)。记录受试者血压、BMI、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、糖化血红蛋白(Hb A1c)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、HOMA-IR及FGF21水平。结果各组舒张压、体质量、BMI、TG、HDL-C、LDL-C、Hb A1c、FBG、FINS、HOMA-IR比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。T2DM非肥胖超重组FGF21水平高于健康对照组,T2DM肥胖超重组FGF21水平高于健康对照组、T2DM非肥胖超重组(P<0.05)。Spearman相关分析显示,T2DM肥胖超重组FGF21水平与BMI、FINS、HOMA-IR呈正相关(rs=0.312、0.311、0.243,P<0.05)。多元线性回归分析显示,BMI[b=3.654,95%CI(1.543,5.764)]、FINS[b=1.310,95%CI(0.537,2.082)]是T2DM肥胖超重组FGF21水平的影响因素(P<0.05)。结论 T2DM肥胖或超重患者血清FGF21水平升高,且与BMI、胰岛素抵抗等因素有关;FGF21可能用于预测糖尿病、肥胖的发生,并成为治疗糖尿病、肥胖的新一代药物。 展开更多
关键词 糖尿病 2型 肥胖症 成纤维细胞生长因子21 体脂肪率 胰岛素抵抗
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长期注射成纤维细胞生长因子21对二乙基亚硝胺诱发肝癌的预防作用 被引量：7
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作者 李德山 张瑛杰 +4 位作者 徐鹏飞 袁清艳 任桂萍 刘铭瑶 刘芝航 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期17-22,30,共7页
研究成纤维细胞生长因子21(FGF21)对二乙基亚硝胺(DEN)诱导肝癌模型的预防作用及机制。健康雄性wistar大鼠随机分3组:FGF21组,模型对照组及正常对照组。FGF21组大鼠每天注射一次FGF21,注射20周。2周后,FGF21组大鼠和模型组大鼠同时每3 ... 研究成纤维细胞生长因子21(FGF21)对二乙基亚硝胺(DEN)诱导肝癌模型的预防作用及机制。健康雄性wistar大鼠随机分3组:FGF21组,模型对照组及正常对照组。FGF21组大鼠每天注射一次FGF21,注射20周。2周后,FGF21组大鼠和模型组大鼠同时每3 d注射一次DEN,直至试验结束。给药结束后,取各组大鼠血清样本测定肝功,统计各组大鼠肝癌发生率,比较各组大鼠肝脏内氧化应激水平。结果表明,FGF21治疗组肝功显著低于模型对照组,接近正常水平。通过分析各组大鼠肝脏变化发现,FGF21治疗组大鼠肝癌发生率为18.1%,而注射生理盐水的模型对照组肝癌发生率为60.0%。FGF21治疗组肝脏内的活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量显著低于模型对照组,接近正常对照组;FGF21治疗组肝脏内超氧化物歧化酶(SOD)活性与正常对照组持平,显著高于模型对照组。Real-time PCR结果显示,FGF21治疗组肝脏的抗氧化酶基因(G6pdh,GCL-c,Gpx-1,Sod2)表达水平显著高于模型对照组。结果表明,长期注射FGF21可通过抑制肝脏内氧化应激水平预防DEN诱导的肝癌。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子21 二乙基亚硝胺 肝癌 氧化应激
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慢性肾脏病患者及动物模型中成纤维细胞生长因子21的表达及意义 被引量：5
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作者 陈琰 高依依 +3 位作者 李占园 叶菡洋 郑育 周志宏 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第21期2462-2466,共5页
目的：观察慢性肾脏病（CKD）患者和CKD动物模型中成纤维细胞生长因子21（FGF21）的表达及其与肾功能等因素的相关性，以探讨FGF21在CKD进展中的意义。方法临床研究：选取2012年在温州医科大学附属第二医院就诊的CKD患者200例，根据估... 目的：观察慢性肾脏病（CKD）患者和CKD动物模型中成纤维细胞生长因子21（FGF21）的表达及其与肾功能等因素的相关性，以探讨FGF21在CKD进展中的意义。方法临床研究：选取2012年在温州医科大学附属第二医院就诊的CKD患者200例，根据估算肾小球滤过率（eGFR）将患者分为CKD1～2期组（76例）、 CKD3～4期组（56例）和CKD5期组（68例）；另选取本院同期体检健康者40例（对照组）。检测所有受检者一般资料及外周血空腹血糖、空腹胰岛素、血脂、清蛋白、肌酐、尿素氮、尿酸、脂联素和FGF21水平。实验研究：取清洁级雄性8周龄C57BL/6小鼠36只，将其随机分为正常对照组（ C组）、模型组（ M组）、低剂量FGF21干预组（ M＋L组）和高剂量FGF21干预组（ M＋H组），每组9只，观察小鼠给药期间的生存状况，4周后处死小鼠，检测小鼠血清肌酐、尿素氮、尿酸、清蛋白水平，观察肾组织病理改变，并采用免疫组化方法检测肾组织中FGF21的表达情况。结果临床研究结果：对照组、 CKD1～2期组、 CKD3～4期组、 CKD5期组血清FGF21水平〔（147.3±12.2）、（402.9±35.0）、（845.8±238.7）、（1447.9±146.5） ng/L〕依次增加（P＜0.05）。 CKD患者中，合并糖尿病者血清FGF21水平高于非糖尿病者〔（1253.0±170.1） ng/L与（714.0±82.1） ng/L， P＜0.05〕。通过对年龄、性别、 BMI、糖尿病校正后， Pearson相关分析显示血清FGF21水平与三酰甘油、血肌酐、尿素氮、脂联素呈正相关（ P＜0.05），与低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、 eGFR呈负相关（ P＜0.05）。实验研究结果： M组小鼠血肌酐、尿素氮、血尿酸水平较C组升高；与M组比较， FGF21干预后小鼠血肌酐、尿素氮、血尿酸水平升高，且M＋H组上述3项肾功能指标较M＋L组恶化（ P＜0.05）。光镜下肾组织病理显示M＋H组小鼠肾脏损伤较M＋L组加重；免疫组化检测显示， M组小鼠肾组织中FGF21表达较C组升高； FGF21干预后，随着FGF21干预剂量的增加，肾组织中FGF21表达亦升高。结论随着CKD病情的进展，患者血清FGF21水平逐渐升高。随着FGF21干预剂量的升高， CKD小鼠肾脏损伤加重。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子21 肾功能不全 慢性 模型 动物 Fibroblastgrowthfactor21
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肥胖合并黑棘皮病患者胰岛素分泌特征与血清成纤维细胞生长因子21的相关性 被引量：3
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作者 黄玥晔 王兴纯 +2 位作者 陈佳奇 李妍 曲伸 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期167-172,共6页
目的探讨肥胖合并黑棘皮病患者中成纤维细胞生长因子21(FGF21)的表达及其与胰岛素分泌特征的关系。方法选取肥胖合并黑棘皮病患者38例和单纯性肥胖患者35例,以及年龄匹配的正常对照组20例。分别检测各组炎症指标(游离脂肪酸、尿酸、C-... 目的探讨肥胖合并黑棘皮病患者中成纤维细胞生长因子21(FGF21)的表达及其与胰岛素分泌特征的关系。方法选取肥胖合并黑棘皮病患者38例和单纯性肥胖患者35例,以及年龄匹配的正常对照组20例。分别检测各组炎症指标(游离脂肪酸、尿酸、C-反应蛋白)、糖脂代谢指标和胰岛素水平,并采用ELISA法测定血清FGF21水平。结果肥胖合并黑棘皮病患者组表现为高胰岛素血症和胰岛素抵抗,血清FGF21、空腹胰岛素和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)高于其他两组(P<0.05,P<0.01),胰岛素作用指数(IAI)低于其他两组(P<0.01)。相关性分析显示肥胖患者血清FGF21水平与空腹胰岛素及HOMA-IR正相关(r=0.410,P=0.009;r=0.350,P=0.027),与IAI和体脂率呈负相关(r=-0.615,P<0.001;r=-0.554,P<0.001)。Logistic回归分析显示尿酸水平升高和FGF21升高是肥胖患者合并黑棘皮病的独立危险因素(P=0.008,P=0.020)。结论肥胖合并黑棘皮病患者在临床上表现为高胰岛素血症和高FGF21水平。FGF21升高与胰岛素抵抗明显相关,而黑棘皮病患者的糖耐量受损较无黑棘皮病的肥胖症患者低,提示FGF21的升高可能对糖代谢有一定保护作用。尿酸和FGF21升高是肥胖症患者合并黑棘皮病的独立危险因素。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子21 黑棘皮病 肥胖症 尿酸 胰岛素抵抗
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成纤维细胞生长因子-21对体外诱导的非酒精性脂肪肝细胞模型脂代谢的影响 被引量：3
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作者 刘敏 孔祥鑫 +3 位作者 杨苹 陈玉斌 李校堃 王会岩 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期477-481,I0001,共6页
目的:探讨成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)对体外诱导的非酒精性脂肪肝(NAFLD)细胞模型脂代谢的影响及其可能的作用机制。方法:采用MTT法筛选医用脂肪乳注射液使用浓度和FGF-21作用浓度,将体外诱导的NAFLD细胞分为对照组、模型组、脱离... 目的:探讨成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)对体外诱导的非酒精性脂肪肝(NAFLD)细胞模型脂代谢的影响及其可能的作用机制。方法:采用MTT法筛选医用脂肪乳注射液使用浓度和FGF-21作用浓度,将体外诱导的NAFLD细胞分为对照组、模型组、脱离脂肪乳组和FGF-21治疗组,光学显微镜观察油红O染色情况,全自动生化仪检测NAFLD细胞内甘油三酯(TG)水平,免疫细胞化学方法观察细胞内肉毒碱脂酰转移酶-1(CPT-1)、过氧化氢酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)及固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)的表达。结果:MTT法筛选出0.1%医用脂肪乳注射液作为建立体外诱导NAFLD细胞模型的最佳诱导浓度,与正常肝细胞株HL7702比较,模型组油红O染色后细胞浆内有大量被染成橘红色的脂滴,细胞内TG水平显著升高(P<0.01),CPT-1蛋白表达减弱,PPARγ和SREBP-1c蛋白表达增加。MTT法筛选出0.5mg.L-1FGF-21作为观察该药物对NAFLD细胞模型影响的作用浓度,与模型组比较,FGF-21处理组细胞内TG水平显著降低(P<0.01),CPT-1蛋白表达增加,PPARγ和SREBP-1c蛋白表达减弱。结论:FGF-21处理能减轻NAFLD细胞中TG蓄积,并使HL7702细胞CPT-1蛋白表达增加,而PPARγ和SREBP-1c蛋白表达减少。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子-21 非酒精性脂肪肝病 医用脂肪乳注射液
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人成纤维细胞生长因子-21的拟南芥油体表达系统构建 被引量：2
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作者 付宏岐 李海燕 +7 位作者 庞实锋 杨晶 薛萍 刘秀明 王艳芳 李营 李洪志 李校堃 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2011年第8期190-196,共7页
【目的】利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)油体系统表达人成纤维细胞生长因子-21(Fibroblastgrowth factor-21,FGF21),为利用植物油体表达系统规模化生产FGF21奠定基础。【方法】以磷酸甘露糖异构酶(PMI)基因作为转基因植物的安全筛选... 【目的】利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)油体系统表达人成纤维细胞生长因子-21(Fibroblastgrowth factor-21,FGF21),为利用植物油体表达系统规模化生产FGF21奠定基础。【方法】以磷酸甘露糖异构酶(PMI)基因作为转基因植物的安全筛选标记,将带有组氨酸标签的人源FGF21基因与大豆油体蛋白基因融合,克隆至大豆油体蛋白启动子驱动的表达载体pCAMBIA1390MDo(p1390MDo)上,构建植物双元表达载体p1390MDoFGF21。采用冻融法将植物双元表达载体p1390MDoFGF21转入农杆菌GV3101,花粉管导入法转化拟南芥,采用PCR检测、Southern blot筛选转基因拟南芥阳性植株(T0),并对FGF21蛋白在转基因拟南芥种子(T1)中的表达进行Western blot分析。【结果】成功构建了带PMI安全筛选标记的植物双元表达载体p1390MDoFGF21。PCR扩增和Southern blot分析结果表明,重组FGF21融合基因以单拷贝和多拷贝2种方式已整合到转基因拟南芥基因组中。BandScand 5.0软件和Western blot分析结果显示,FGF21融合蛋白约占转基因拟南芥种子可溶性蛋白的3.76%,并具有良好的免疫原性。【结论】FGF21融合基因已经转入拟南芥中,并在以PMI为选择标记的转基因拟南芥种子中成功高效表达。 展开更多
关键词 拟南芥 成纤维细胞生长因子-21 油体表达 磷酸甘露糖异构酶
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MicroRNA-99b-5p通过抑制成纤维细胞生长因子21表达促进心肌细胞肥大 被引量：3
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作者 陈丽文 郭晶 +5 位作者 陈泽润 朱杰宁 徐金东 郭惠明 单志新 王晟 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期192-202,共11页
【目的】研究微小RNA microRNA-99b-5p(miR-99b-5p)对心肌细胞肥大表型的调节作用及机制。【方法】实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测人心肌组织(包括健康对照者、心力衰竭患者心肌组织)以及横向主动脉缩窄(TAC)手术小鼠心肌中miR-99b-5p的... 【目的】研究微小RNA microRNA-99b-5p(miR-99b-5p)对心肌细胞肥大表型的调节作用及机制。【方法】实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测人心肌组织(包括健康对照者、心力衰竭患者心肌组织)以及横向主动脉缩窄(TAC)手术小鼠心肌中miR-99b-5p的表达水平。血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)处理原代乳小鼠心肌细胞(NMVCs)后,利用鬼笔环肽染色呈现心肌细胞大小,RT-qPCR检测miR-99b-5p表达水平。利用RT-qPCR及蛋白质免疫印迹法检测转染miR-99b-5p mimic对NMVCs中肥大相关基因及成纤维细胞生长因子21(Fgf21)表达的影响。双萤光素酶报告实验验证miR-99b-5p与Fgf21基因3′端非翻译区(3’UTR)的结合作用。利用腺病毒介导在NMVCs中过表达Fgf21及超氧化物歧化酶2(Sod2),并利用小干扰RNA(siRNA)敲低NMVCs中Fgf21和Sod2表达,研究Fgf21/Sod2轴是否介导miR-99b-5p对心肌细胞肥大表型的调节作用。【结果】MiR-99b-5p在心衰患者心肌组织、TAC术后的小鼠心肌组织及在AngⅡ处理的心肌细胞中均表达上调(P<0.01)。MiR-99b-5p可促进NMVCs中与肥大相关基因的表达(P<0.01)。双萤光素酶报告基因实验证实miR-99b-5p与Fgf21基因的3’UTR存在结合作用,并且miR 99b-5p可抑制Fgf21及其下游基因Sod2表达(P<0.05)。在NMVCs中过表达Fgf21或Sod2均可有效逆转miR 99b-5p的促心肌细胞肥大作用(P<0.05)。【结论】MiR-99b-5p在肥厚心肌中表达增加,并通过Fgf21/Sod2轴发挥促进心肌细胞肥大的作用。 展开更多
关键词 心肌细胞肥大 微小RNA-99-5p 成纤维细胞生长因子21
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