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成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)介导的基因组编辑技术研究进展被引量：3: 1; 作者单琳琳夏海滨《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期856-862,共7页; 成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)介导的基因组编辑技术已成为生物医学领域中研究基因功能及其表达调控的重要手段之一。随着CRISPR技术的拓展,各种基于CRISPR技术的新型研究、诊断和治疗等工具得到进一步的开发,并在新型动物疾... 展开更多; 关键词成簇的规律间隔的短回文重复序列(crispr) crispr相关蛋白(cas) 基因编辑基因诊断基因治疗综述; 在线阅读下载PDF 职称材料

运用CRISPR/Cas9技术构建敲除体轴抑制蛋白1(AXIN1)基因的ACT-1人未分化甲状腺癌细胞系被引量：2: 2; 作者文丹黄蓉 +2 位作者谢建平温琥玲林师宇《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期419-424,共6页; 目的构建体轴抑制蛋白1(AXIN1)基因敲除的ACT-1人未分化甲状腺癌单克隆细胞系。方法用分子克隆技术及成簇的规律间隔的短回文重复序列/Cas9核酸酶(CRISPR/Cas9)基因编辑技术构建AXIN1基因敲除的单克隆细胞系;采用实时荧光定量PCR检测AC... 展开更多; 关键词成簇的规律间隔的短回文重复序列/cas9核酸酶(crispr/cas9) 未分化甲状腺癌体轴抑制蛋白1(AXIN1); 在线阅读下载PDF 职称材料

基于CRISPR/Cas9方法构建‘沪农灵芝1号’基因编辑系统被引量：3: 3; 作者张志刚张劲松 +5 位作者邹根唐传红冯杰鲍大鹏陈建波谭贻《食用菌学报》 CSCD 北大核心 2023年第2期9-18,共10页; 构建密码子优化的cas 9表达质粒pMD-EXP-cas 9,通过聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)介导转化灵芝(Ganoderma lucidum)菌株‘沪农灵芝1号’(‘Hunong No.1’)单核菌株L1,得到含有cas9完整表达盒的菌株L1-cas9。利用T7启动子构建靶向u... 展开更多; 关键词 ‘沪农灵芝1号’ 基因破坏成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9(crispr/cas9) 曲拉通X-100; 在线阅读下载PDF 职称材料

CRISPR/Cas9技术敲除RAW264.7细胞的GPR43基因抑制其对肺炎克雷伯菌的吞噬功能被引量：1: 4; 作者徐方明苏丛 +5 位作者伍婷陈昊然张鹏飞刘艳艳兰燕虎李家斌《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期481-486,共6页; 目的利用成簇的规律间隔的短回文重复序列/Cas9核酸酶(CRISPR/Cas9)技术构建稳定敲除G蛋白偶联受体43(GPR43)基因的RAW264.7细胞系,探究GPR43基因在肺炎克雷伯菌感染过程中的作用机制。方法设计3对针对GPR43基因的小导向RNA(sgRNA),将sg... 展开更多; 关键词 RAW264.7细胞成簇的规律间隔的短回文重复序列/cas9核酸酶(crispr/cas9) G蛋白偶联受体43(GPR43) 肺炎克雷伯; 在线阅读下载PDF 职称材料

CRISPR/Cas9基因编辑非病毒递送系统: 5; 作者盛劲菡郑琪臻汪铭《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2023年第3期156-166,共11页; 规律间隔成簇短回文重复序列及相关蛋白9(CRISPR/Cas9)系统的基因编辑技术为哺乳细胞基因组的精准修饰与编辑研究提供了高效、快捷的工具,但其化学生物学应用依然面临着CRISPR基因编辑工具Cas9蛋白和gRNA的细胞及活体递送等问题.近年来... 展开更多; 关键词规律间隔成簇短回文重复序列及相关蛋白9(crispr/cas9) 基因编辑药物递送非病毒载体纳米颗粒; 在线阅读下载PDF 职称材料

弓形虫srs19d基因敲除株的构建及其在宿主细胞中的生物学功能分析: 6; 作者牛水珠潘明 +1 位作者葛层层黄思扬《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第8期10-17,共8页; 为探究弓形虫表面抗原1相关序列(SRS)蛋白家族新成员SRS19D的功能,本试验以弓形虫Ⅱ型Pru虫株为亲本,运用成簇规律间隔短回文重复-CRISPR相关蛋白9(CRISPR/Cas9)技术构建了PruΔsrs 19 d敲除虫株,并进行了噬斑试验、细胞内增殖试验、体... 展开更多; 关键词弓形虫表面抗原1相关序列(SRS) srs19d 成簇规律间隔短回文重复-crispr相关蛋白9(crispr/cas9) 生物学功能; 在线阅读下载PDF 职称材料

CRISPR基因编辑技术的发展及应用被引量：7: 7; 作者巩琦凡郑晓飞付汉江《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期332-340,共9页; 对基因组DNA进行自由编辑,一直是生物学家的梦想,随着CRISPR-Cas9这一强大基因编辑工具的发现及应用,这一梦想终于成真。起初,科学家发现Cas9、Cas12a及Cas12f等多种CRISPR-Cas系统可用于真核细胞DNA的编辑,随后,又陆续发现Cas13a、Cas... 展开更多; 关键词基因编辑成簇的规律间隔短回文重复序列(crispr) cas9变体 crispr筛选免疫治疗; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)介导的基因组编辑技术研究进展被引量：3: 1; 作者单琳琳夏海滨; 机构陕西师范大学生命科学学院基因治疗研究室; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期856-862,共7页; 基金国家自然科学基金(81471772 81773265) 陕西师范大学中央高校自由探索项目(2016TS058); 文摘成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)介导的基因组编辑技术已成为生物医学领域中研究基因功能及其表达调控的重要手段之一。随着CRISPR技术的拓展,各种基于CRISPR技术的新型研究、诊断和治疗等工具得到进一步的开发,并在新型动物疾病模型的建立、疾病快速诊断、肿瘤及免疫相关性疾病的治疗等方面取得了重大进展和突破。我们重点对CRISPR/CRISPR相关蛋白(Cas)技术的发展现状及其在生物医学领域的应用进展进行综述,并对其未来应用前景和发展方向进行讨论和展望。; 关键词成簇的规律间隔的短回文重复序列(crispr) crispr相关蛋白(cas) 基因编辑基因诊断基因治疗综述; 分类号 R318. [医药卫生—生物医学工程] Q343.1 [生物学—遗传学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名运用CRISPR/Cas9技术构建敲除体轴抑制蛋白1(AXIN1)基因的ACT-1人未分化甲状腺癌细胞系被引量：2: 2; 作者文丹黄蓉谢建平温琥玲林师宇; 机构川北医学院附属医院核医学科川北医学院药学院; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期419-424,共6页; 基金市校科技战略合作专项(NSMC 20170435) 川北医学院附属医院院级科研课题(2020JC004)。; 文摘目的构建体轴抑制蛋白1(AXIN1)基因敲除的ACT-1人未分化甲状腺癌单克隆细胞系。方法用分子克隆技术及成簇的规律间隔的短回文重复序列/Cas9核酸酶(CRISPR/Cas9)基因编辑技术构建AXIN1基因敲除的单克隆细胞系;采用实时荧光定量PCR检测ACT-1细胞的AXIN1 mRNA水平,Western blot法检测AXIN1蛋白水平。结果通过T7检测成功获得有效的两个单链导向RNA(sgRNA)Cr3及Cr5;通过酶切鉴定及测序成功构建携带绿色荧光蛋白(GFP)的靶向AXIN1的sgRNA病毒载体;成功获得包括阴性对照在内的4个单克隆ACT-1未分化甲状腺癌细胞系;敲除组细胞AXIN1 mRNA及蛋白水平均明显降低。结论采用CRISPR-Cas9技术成功建立了敲除AXIN1基因的ACT-1未分化甲状腺癌细胞系。; 关键词成簇的规律间隔的短回文重复序列/cas9核酸酶(crispr/cas9) 未分化甲状腺癌体轴抑制蛋白1(AXIN1); Keywords crispr/cas9 undifferentiated thyroid cancer axis inhibition protein 1(AXIN1); 分类号 R392.11 [医药卫生—免疫学] R736.1 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名基于CRISPR/Cas9方法构建‘沪农灵芝1号’基因编辑系统被引量：3: 3; 作者张志刚张劲松邹根唐传红冯杰鲍大鹏陈建波谭贻; 机构上海师范大学生命科学学院上海市农业科学院食用菌研究所; 出处《食用菌学报》 CSCD 北大核心 2023年第2期9-18,共10页; 基金上海市现代农业产业技术体系(沪农科产字2022第9号) 上海市农业科学院卓越团队建设计划(G2022003)。; 文摘构建密码子优化的cas 9表达质粒pMD-EXP-cas 9,通过聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)介导转化灵芝(Ganoderma lucidum)菌株‘沪农灵芝1号’(‘Hunong No.1’)单核菌株L1,得到含有cas9完整表达盒的菌株L1-cas9。利用T7启动子构建靶向ura3基因的表达质粒psgRNA-1和psgRNA-2,体外转录后得到sgRNA 1和sgRNA 2。通过PEG介导的转化,将sgRNA 1和sgRNA 2转化进L1-cas9的原生质体中,得到ura3基因被破坏的突变体,首次在‘沪农灵芝1号’菌株单核体中构建成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9(clustered regularly interspaced short palindromic repeat/CRISPR-associated protein 9,CRISPR/Cas9)基因编辑系统,ura3基因的编辑效率为4个突变体(107个原生质体)。利用0.006%曲拉通X-100优化PEG介导的转化系统,可使ura3基因编辑效率提高至18个以上突变体(107个原生质体),本研究的结果为灵芝基因功能的研究和分子育种提供更高效的方法。; 关键词 ‘沪农灵芝1号’ 基因破坏成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9(crispr/cas9) 曲拉通X-100; Keywords Ganoderma lucidum‘Hunong No.1’cultivar gene disruption crispr/cas9 Triton X-100; 分类号 S567.31 [农业科学—中草药栽培]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名CRISPR/Cas9技术敲除RAW264.7细胞的GPR43基因抑制其对肺炎克雷伯菌的吞噬功能被引量：1: 4; 作者徐方明苏丛伍婷陈昊然张鹏飞刘艳艳兰燕虎李家斌; 机构安徽医科大学第一附属医院感染病科安徽医科大学附属巢湖医院感染病科安徽省细菌耐药性监控中心安徽医科大学细菌耐药研究所; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期481-486,共6页; 基金国家自然科学基金(81673242,81973983)。; 文摘目的利用成簇的规律间隔的短回文重复序列/Cas9核酸酶(CRISPR/Cas9)技术构建稳定敲除G蛋白偶联受体43(GPR43)基因的RAW264.7细胞系,探究GPR43基因在肺炎克雷伯菌感染过程中的作用机制。方法设计3对针对GPR43基因的小导向RNA(sgRNA),将sgRNA插入pLenticrisprV2质粒中,利用慢病毒包装系统包装含有sgRNA的重组质粒pLenticrisprV2;将病毒感染RAW264.7细胞,嘌呤霉素筛选单克隆细胞;将扩增的单克隆细胞提取基因组DNA,测序GPR43基因相关序列并与野生型GPR43基因进行比对,确认敲除成功的细胞株(GPR43^-/-RAW264.7细胞),Western blot法检测GPR43蛋白水平。肺炎克雷伯菌感染GPR43^-/-RAW264.7细胞,实时定量PCR法检测细菌感染后细胞内白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达水平的变化,并观察敲除GPR43后,RAW264.7细胞吞噬能力的变化。结果挑选的单克隆细胞经Western blot验证GPR43蛋白不表达,并且DNA测序结果显示在sgRNA插入位置缺失34个碱基,证明成功敲除GPR43基因。GPR43^-/-RAW264.7细胞感染肺炎克雷伯菌后,细胞中的IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平均低于对照组,且GPR43^-/-RAW264.7细胞对肺炎克雷伯菌的吞噬能力降低。结论CRISPR/Cas9技术敲除GPR43基因,抑制其对肺炎克雷伯菌的吞噬功能及炎性细胞因子的产生。; 关键词 RAW264.7细胞成簇的规律间隔的短回文重复序列/cas9核酸酶(crispr/cas9) G蛋白偶联受体43(GPR43) 肺炎克雷伯; Keywords RAW264.7 cells crispr/cas9 GPR43 Klebsiella pneumoniae; 分类号 R392.12 [医药卫生—免疫学] R392-33 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名CRISPR/Cas9基因编辑非病毒递送系统: 5; 作者盛劲菡郑琪臻汪铭; 机构中国科学院化学研究所; 出处《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2023年第3期156-166,共11页; 基金国家重点研发计划项目(批准号:2017YFA0208100)资助.; 文摘规律间隔成簇短回文重复序列及相关蛋白9(CRISPR/Cas9)系统的基因编辑技术为哺乳细胞基因组的精准修饰与编辑研究提供了高效、快捷的工具,但其化学生物学应用依然面临着CRISPR基因编辑工具Cas9蛋白和gRNA的细胞及活体递送等问题.近年来,研究人员通过开发多种非病毒递送载体,实现了编码CRISPR/Cas9基因编辑工具的DNA和信使RNA(mRNA)以及Cas9/gRNA核糖核蛋白(RNP)复合物的递送,并应用于靶基因的化学修饰与编辑调控.本文主要概述了近期CRISPR/Cas9基因编辑递送的研究进展,并对其化学生物学应用前景进行了展望.; 关键词规律间隔成簇短回文重复序列及相关蛋白9(crispr/cas9) 基因编辑药物递送非病毒载体纳米颗粒; Keywords Clustered regularly interspaced short palindromic repeats(crispr)/crispr-associated protein 9(crispr/cas9) Genome editing Drug delivery Non-viral vector Nanoparticles; 分类号 Q812 [生物学—生物工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名弓形虫srs19d基因敲除株的构建及其在宿主细胞中的生物学功能分析: 6; 作者牛水珠潘明葛层层黄思扬; 机构扬州大学兽医学院教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室; 出处《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第8期10-17,共8页; 基金江苏省杰出青年基金项目(BK20190046) 江苏高校优势学科建设工程资助项目(PAPD)。; 文摘为探究弓形虫表面抗原1相关序列(SRS)蛋白家族新成员SRS19D的功能,本试验以弓形虫Ⅱ型Pru虫株为亲本,运用成簇规律间隔短回文重复-CRISPR相关蛋白9(CRISPR/Cas9)技术构建了PruΔsrs 19 d敲除虫株,并进行了噬斑试验、细胞内增殖试验、体外缓殖子转化试验、小鼠毒力试验和小鼠脑包囊检测试验。噬斑试验和细胞内增殖试验结果显示,与Pru虫株相比,PruΔsrs 19 d敲除虫株在人包皮成纤维(HFF)细胞上形成的噬斑显著变小(P<0.05),纳虫泡内形成的速殖子个数显著减少(P<0.05)。体外缓殖子转化试验发现,与Pru虫株相比,PruΔsrs 19 d敲除虫株的体外缓殖子转化率极显著降低(P<0.01)。小鼠毒力试验结果显示,与Pru虫株相比,弓形虫PruΔsrs 19 d敲除虫株不会引起ICR小鼠的死亡(P<0.05)。小鼠脑包囊检测试验结果显示,与Pru虫株相比,PruΔsrs 19 d敲除虫株感染小鼠后形成的脑包囊数量极显著减少(P<0.01)。本试验成功构建了弓形虫PruΔsrs 19 d敲除虫株,发现srs 19 d基因在弓形虫的体外生长、复制、毒力和慢性感染中发挥重要作用,为进一步探究SRS19D的功能和作用机制提供参考。; 关键词弓形虫表面抗原1相关序列(SRS) srs19d 成簇规律间隔短回文重复-crispr相关蛋白9(crispr/cas9) 生物学功能; Keywords Toxoplasma gondii surface antigen 1-related sequences(SRS) srs 19 d crispr/cas9 biological function; 分类号 S852 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名CRISPR基因编辑技术的发展及应用被引量：7: 7; 作者巩琦凡郑晓飞付汉江; 机构军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所河北大学化学与环境科学学院; 出处《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期332-340,共9页; 基金国家自然科学基金项目(No.81773038,32071290)资助。; 文摘对基因组DNA进行自由编辑,一直是生物学家的梦想,随着CRISPR-Cas9这一强大基因编辑工具的发现及应用,这一梦想终于成真。起初,科学家发现Cas9、Cas12a及Cas12f等多种CRISPR-Cas系统可用于真核细胞DNA的编辑,随后,又陆续发现Cas13a、Cas13b及Cas13d等核酸酶靶向RNA分子。不仅如此,通过各种各样的改造,科学家还开发一系列新型CRISPR-Cas系统。这些人工改造的基因编辑系统比天然的CRISPR系统具有更高的DNA切割活性、更强的特异性以及更小的体积,它们形成了一个强大的工具集,可用于DNA序列的敲除、替换、表观遗传编辑甚至基因表达的激活和抑制。CRISPR基因编辑技术不仅是基因功能研究的强大工具,其在疾病治疗靶点的发现、病原体的核酸诊断与肿瘤等疾病的临床治疗方面也展现出巨大的潜力。当然,CRISPR技术在实际应用中仍然存在许多潜在的问题尚待解决,例如其在体内的高效递送,免疫原性和脱靶效应等。这些问题都将在本综述中展开讨论。相信随着CRISPR编辑技术的进一步改进,它将以更加完善和精确的方式在人类疾病的预防和治疗中发挥更大的作用。; 关键词基因编辑成簇的规律间隔短回文重复序列(crispr) cas9变体 crispr筛选免疫治疗; Keywords gene editing clustered regularly interspaced short palindromic repeats(crispr)editing technology cas9 variations crispr screening immunotherapy; 分类号 Q71 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)介导的基因组编辑技术研究进展	单琳琳夏海滨	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2018	3	在线阅读下载PDF 职称材料
2	运用CRISPR/Cas9技术构建敲除体轴抑制蛋白1(AXIN1)基因的ACT-1人未分化甲状腺癌细胞系	文丹黄蓉谢建平温琥玲林师宇	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2020	2	在线阅读下载PDF 职称材料
3	基于CRISPR/Cas9方法构建‘沪农灵芝1号’基因编辑系统	张志刚张劲松邹根唐传红冯杰鲍大鹏陈建波谭贻	《食用菌学报》 CSCD 北大核心	2023	3	在线阅读下载PDF 职称材料
4	CRISPR/Cas9技术敲除RAW264.7细胞的GPR43基因抑制其对肺炎克雷伯菌的吞噬功能	徐方明苏丛伍婷陈昊然张鹏飞刘艳艳兰燕虎李家斌	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2020	1	在线阅读下载PDF 职称材料
5	CRISPR/Cas9基因编辑非病毒递送系统	盛劲菡郑琪臻汪铭	《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心	2023	0	在线阅读下载PDF 职称材料
6	弓形虫srs19d基因敲除株的构建及其在宿主细胞中的生物学功能分析	牛水珠潘明葛层层黄思扬	《中国兽医杂志》 CAS 北大核心	2024	0	在线阅读下载PDF 职称材料
7	CRISPR基因编辑技术的发展及应用	巩琦凡郑晓飞付汉江	《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心	2023	7	在线阅读下载PDF 职称材料