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酶法生产7-氨基头孢烷酸的研究进展 被引量:24
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作者 罗晖 李强 +2 位作者 童忆舟 司颖涛 沈忠耀 《现代化工》 CAS CSCD 北大核心 2002年第12期18-22,共5页
氨基头孢烷酸 (7 ACA)是生产头孢菌素的重要原料 ,目前都由头孢菌素C通过化学法或生物酶法生产。综述了利用酶法生产 7 ACA的研究进展 ,其中涉及催化过程所用两种酶 (D 氨基酸氧化酶和GL 7 ACA酰化酶 )的酶学特性、表达、纯化。
关键词 7-氨基 研究进展 D-氨基氧化 GL-7-ACA酰化 菌素C
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一步酶法生产7-氨基头孢烷酸的研究进展 被引量:8
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作者 姚舜 罗晖 +3 位作者 常雁红 于慧敏 李强 沈忠耀 《现代化工》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期11-14,16,共5页
7-氨基头孢烷酸是合成头孢类抗生素的重要中间体,一般由头孢菌素C通过化学法或生物酶法裂解脱去侧链分子制备得到。综述了头孢菌素C酰化酶的来源、特性及其基因的克隆和改造,表达与纯化,固定化及其催化工艺的研究,并展望了一步酶法生产7... 7-氨基头孢烷酸是合成头孢类抗生素的重要中间体,一般由头孢菌素C通过化学法或生物酶法裂解脱去侧链分子制备得到。综述了头孢菌素C酰化酶的来源、特性及其基因的克隆和改造,表达与纯化,固定化及其催化工艺的研究,并展望了一步酶法生产7-氨基头孢烷酸的应用前景。 展开更多
关键词 7-氨基 两步 一步 菌素C酰化
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两步酶法制备去乙酰基7-氨基头孢烯酸 被引量:3
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作者 于海军 白国义 +2 位作者 李阳 闫喜龙 陈立功 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第7期667-670,共4页
以生产头孢菌素C(CPC)过程中的副产物去乙酰头孢菌素C(DCPC)为原料,用固定化D-氨基酸氧化酶(DAAO)和固定化戊二酰基酰化酶(GA),连续两步进行酶裂解,制备了去乙酰基7-氨基头孢烯酸(D-7-ACA),总收率72%。滴加浓度为1 mol/L的过氧化氢可使... 以生产头孢菌素C(CPC)过程中的副产物去乙酰头孢菌素C(DCPC)为原料,用固定化D-氨基酸氧化酶(DAAO)和固定化戊二酰基酰化酶(GA),连续两步进行酶裂解,制备了去乙酰基7-氨基头孢烯酸(D-7-ACA),总收率72%。滴加浓度为1 mol/L的过氧化氢可使去乙酰基戊二酰基7-ACA(D-G l-7-ACA)的收率提高6%。提高氧气流速和改善搅拌形式可以加快DAAO酶反应速度,使中间产物残留减少3%。高纯度的去乙酰头孢菌素C钠盐(DCPCNa)可以提高该两步酶法反应的收率和产品质量,延长酶的使用寿命。 展开更多
关键词 去乙菌素C(DCPC) 去乙7-氨基(D-7-ACA) 固定化D-氨基氧化(DAAO) 固定化酰化(GA)
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酶形式差异的三酶系统一步法转化头孢菌素C制备7-氨基头孢烷酸
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作者 邱杰 刘玉婷 +3 位作者 陈钰泉 廖威 袁晶 谭强 《广西科学》 CAS 2018年第4期438-443,共6页
【目的】对酶形式差异的三酶系统一步法裂解头孢菌素C(CPC)制备7-氨基头孢烷酸(7-ACA)进行研究。【方法】对重组大肠杆菌分别进行摇瓶和发酵罐高密度表达,获得最高酶活后使用两个形式差异的三酶系统一步法转化CPC制备7-ACA。【结果】相... 【目的】对酶形式差异的三酶系统一步法裂解头孢菌素C(CPC)制备7-氨基头孢烷酸(7-ACA)进行研究。【方法】对重组大肠杆菌分别进行摇瓶和发酵罐高密度表达,获得最高酶活后使用两个形式差异的三酶系统一步法转化CPC制备7-ACA。【结果】相较于摇瓶发酵,发酵罐发酵获得的酶活更高,发酵罐上对重组大肠杆菌的高密度表达发现,补料流加总量为400mL的甘油混合液(15%甘油+7.5%鱼蛋白胨,W/V),发酵72h后菌浓度达到32.79g/L、最高的戊二酰-7-氨基头孢烷酸酰化酶(GA)和过氧化氢酶(CAT)活力分别为7 099.85U/L和15 776.20U/L。利用一个三酶系统包括固定化D-氨基酸氧化酶(DAAO)、游离GA和CAT,一步法催化CPC获得的7-ACA生成率为87.28%;而另一个三酶系统包括固定化DAAO、冻融细胞GA和CAT一步法催化CPC获得的7-ACA生成率为87.10%。【结论】两种酶形式差异的三酶系统一步法制备7-ACA的得率大致相等。GA对α?酮己二酰-7-氨基头孢烷酸(AKA-7-ACA)的特异性和水解能力较差,限制了该工艺运用。 展开更多
关键词 系统 D-氨基氧化 戊二酰-7-氨基头孢烷酸酰化酶 过氧化氢 7-氨基
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游离细胞催化与膜分离耦合制备7-氨基头孢烷酸的工艺研究
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作者 罗晖 周航 +2 位作者 李强 于慧敏 沈忠耀 《现代化工》 CAS CSCD 北大核心 2005年第z1期138-141,共4页
利用产D-氨基酸氧化酶(DAAO)和戊二酰基-7-氨基头孢烷酸酰化酶(GLA)的高酶活重组大肠杆菌,对双酶催化制备7-ACA的工艺进行了研究。提出了一条游离细胞反应与膜分离耦合的7-ACA生产新工艺:用游离细胞进行催化,用超滤膜进行细胞和产物的... 利用产D-氨基酸氧化酶(DAAO)和戊二酰基-7-氨基头孢烷酸酰化酶(GLA)的高酶活重组大肠杆菌,对双酶催化制备7-ACA的工艺进行了研究。提出了一条游离细胞反应与膜分离耦合的7-ACA生产新工艺:用游离细胞进行催化,用超滤膜进行细胞和产物的分离。结果发现用中空纤维超滤膜可以将反应体系中的细胞和催化产物分离,分离得到的细胞可重复使用;分离得到的反应液经一步结晶,7-ACA纯度为93.1%,结晶收率为51%。 展开更多
关键词 7-氨基 D-氨基氧化 GL-7-ACA酰化 菌素C
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头孢菌素酰化酶高β-折叠区保守氨基酸附近位点突变研究
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作者 任羽 常瑞 +2 位作者 王继莲 马刘峰 王东 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期19-23,共5页
头孢菌素酰化酶(Cephalosporin acylase)能够一步催化头孢菌素C(Cephalosporin C,简称CPC)生成7-氨基头孢烷酸(7-Aminocephalosporanic acid,简称7-ACA),后者是重要的医药中间体。但头孢菌素酰化酶对CPC的一步催化活性低,远未达到工业... 头孢菌素酰化酶(Cephalosporin acylase)能够一步催化头孢菌素C(Cephalosporin C,简称CPC)生成7-氨基头孢烷酸(7-Aminocephalosporanic acid,简称7-ACA),后者是重要的医药中间体。但头孢菌素酰化酶对CPC的一步催化活性低,远未达到工业生产的要求。研究以来源于Pseudomonas sp.SE83头孢菌素酰化酶(CPCase)蛋白序列为模板,对其基因进行全局优化设计,人工合成目的基因,并克隆至表达载体pET28a,实现了CPCase的高效表达,命名为WT。将其与来自Pseudomonas SY-77、Pseudomonas N176等菌株的头孢菌素酰化酶氨基酸序列进行相似性比较,在保守氨基酸附近选择了25个突变位点,采用定点突变的方法分别突变为Ala,获得了25个突变酶。结果表明,突变体蛋白F311A对CPC的催化活性上升50%,k cat/K m提高到原来的1.7倍,比酶活达到4.302 U/mg,其他突变体对CPC催化活性均有不同程度的下降。结构分析显示,第311的Phe突变为Ala,能够使结合口袋变大,减少空间位阻,使酶与底物CPC的结合更加牢固,提高催化效率。 展开更多
关键词 菌素酰化 7-氨基 定点突变 菌素C
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GL-7-ACA酰化酶的固定化工艺条件优化 被引量:1
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作者 郭璐 黎继烈 +2 位作者 王卫 罗倩 朱晓媛 《中南林业科技大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期96-100,共5页
采用单因素和Box-Behnken实验对LX-1000EP树脂固定化戊二酰-7-氨基头孢烷酸酰化酶的工艺条件进行优化。首先通过单因素设计研究载体用量、缓冲液pH值、时间、温度四个因素对固定化戊二酰-7-氨基头孢烷酸酰化酶活力的影响,在此基础上,利... 采用单因素和Box-Behnken实验对LX-1000EP树脂固定化戊二酰-7-氨基头孢烷酸酰化酶的工艺条件进行优化。首先通过单因素设计研究载体用量、缓冲液pH值、时间、温度四个因素对固定化戊二酰-7-氨基头孢烷酸酰化酶活力的影响,在此基础上,利用响应面试验设计对LX-1000EP树脂固定化戊二酰-7-氨基头孢烷酸酰化酶的条件进行优化。载体用量、缓冲液pH值、时间、温度对固定化戊二酰-7-氨基头孢烷酸酰化酶都有影响,固定化最佳工艺条件为:载体用量3.3 g、pH值7.9、时间40 h、温度25℃,在此条件下固定化酶活力达到(69.5±0.8)U/g,酶活回收率达到42.41%。将响应面法应用于固定化戊二酰-7-氨基头孢烷酸酰化酶条件的优化是可行的。 展开更多
关键词 戊二酰-7-氨基头孢烷酸酰化酶 LX-1000EP树脂 固定化工艺 Box-Behnken实验设计
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固定化青霉素酰化酶制备7-ADCA的条件优化 被引量:1
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作者 张小飞 刘友全 莫章桦 《中南林学院学报》 CSCD 北大核心 2006年第5期113-116,共4页
详细地论述了在固定化青霉素酰化酶(IPA-750)的催化裂解下.由青霉素G扩环得到的头孢G酸(扩环酸)转化为7-ADCA.在0.05 mol/L的硼酸缓冲液中,通过改变酶促反应过程中底物质量浓度、温度、pH值,并借助HPLC色谱仪的精确分析,在IPA-750... 详细地论述了在固定化青霉素酰化酶(IPA-750)的催化裂解下.由青霉素G扩环得到的头孢G酸(扩环酸)转化为7-ADCA.在0.05 mol/L的硼酸缓冲液中,通过改变酶促反应过程中底物质量浓度、温度、pH值,并借助HPLC色谱仪的精确分析,在IPA-750用量为65 KU/g(底物)的前提下筛选出最佳反应条件为温度28-30℃、pH值8.2、质量浓度60 kg/L,头孢G酸转化率可达96%以上.同时可实现400批的重复转化反应,且反应过后不会造成严重环境污染. 展开更多
关键词 抗生素 固定化 青霉素酰化 7-氨基3-去乙氧基 高效液相色谱法
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头孢菌素酰化酶 被引量:2
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作者 李勇 王恩多 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1998年第3期238-242,共5页
氨基头孢烷酸(7aminocephalosporanicacid,7ACA)是医药工业合成大多数头孢菌素的重要原料.头孢菌素酰化酶(cephalosporinacylase,CA)催化头孢菌素C(CPC)和戊二... 氨基头孢烷酸(7aminocephalosporanicacid,7ACA)是医药工业合成大多数头孢菌素的重要原料.头孢菌素酰化酶(cephalosporinacylase,CA)催化头孢菌素C(CPC)和戊二酰7氨基头孢烷酸(GL7ACA)的水解反应,生成7ACA.根据CA催化底物的不同,可将其划分为两类:CPC酰化酶和GL7ACA酰化酶.由CA的同源性、分子质量大小和基因结构,可以把头孢菌素酰化酶划分为五种;讨论了酶的基本性质.通过CA与N端亲核水解酶(Ntn水解酶)的比较,推测CA属于Ntn水解酶,并由此可以进一步理解它们的生理功能. 展开更多
关键词 菌素 酰化 7-氨基
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Kinetically Controlled Cynthesis of Cefaclor using Penicillin G Acylase 被引量:7
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作者 YANGLiu WEIDong-zhi +1 位作者 XUEPing LUGuao-zhong 《分子催化》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第2期81-87,共7页
Enzymatic synthesis of cefaclor from 7-aminodesacetoxymethyl-3-chlorocephalosporainc acid(6-ACCA) and phenylglycine derivatives using penicillin G acylase was studied .Many factors that affect the conversion of 7-ACCA... Enzymatic synthesis of cefaclor from 7-aminodesacetoxymethyl-3-chlorocephalosporainc acid(6-ACCA) and phenylglycine derivatives using penicillin G acylase was studied .Many factors that affect the conversion of 7-ACCA to cefaclor were examined.The immobilized enzyme from Bacillis megaterium gave a better catalytic properties and the higher conversion was obtained using phenylglycine methyl ester(PGME) as acyl donor.And the external mass transfer limitation could be eliminated when the stirring rate was more than 150r/min.Low temperature was beneficial for the synthesis and the results showed that the synthetase activity was hardly influenced by temperature while the amidase activity was affected greatly by temperature.The optimum reaction conditions were determined at pH 6.5 and 10℃,respectively.The best 7-ACCA conversion of 56% was achieved when the intial concentration of 7-ACCA and PGME was at 50 mM and 150mM,respectively. 展开更多
关键词 青霉素酰化 克罗 促合成 7-ACCA 7-氨基去乙氧甲基-3-
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