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实时荧光环介导等温扩增快速检测黄曲霉毒素产生菌方法的建立
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作者 陈晨 陶泽 +5 位作者 王可 李晴晴 安红玉 卢增慧 李拖平 李苏红 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第4期335-344,共10页
黄曲霉毒素是一种具备强致肝损伤性、致癌性和致畸性的微生物毒素。根据产黄曲霉毒素调节基因aflR、柄曲霉素转甲基酶基因omt-1、杂色曲霉素A脱氢酶基因ver-1分别对实时荧光环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP... 黄曲霉毒素是一种具备强致肝损伤性、致癌性和致畸性的微生物毒素。根据产黄曲霉毒素调节基因aflR、柄曲霉素转甲基酶基因omt-1、杂色曲霉素A脱氢酶基因ver-1分别对实时荧光环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)引物进行设计,对其建立并优化LAMP体系。结果显示,该文所建立的方法针对aflR、omt-1、ver-1基因设计的引物,黄曲霉菌DNA的检出限分别是1.0×10^(-2)、1.0×10^(-3)、1.0×10^(-4) ng/μL。此体系与黄曲霉及寄生曲霉反应成阳性,与其他菌体反应皆为阴性,该方法耗时短、设备要求低,借助恒温荧光读取设备或根据显色剂颜色变化可在60 min内迅速判定待检菌株是否为黄曲霉毒素产生菌,可满足各机构现场快速高效检测的需要。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素产生菌 实时荧光环介导等温 快速检测 黄曲霉毒素调节基因aflR 柄曲霉素转甲基酶基因omt-1 杂色曲霉素A脱氢酶基因ver-1
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实时重组酶辅助扩增技术快速检测狗源性成分
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作者 刘明明 颜海燕 +3 位作者 周朝旭 叶语桦 李志刚 肖昭竞 《肉类研究》 北大核心 2025年第4期24-29,共6页
为快速检测狗源性成分,针对cytb基因保守区域设计3对重组酶辅助扩增(recombinaseaided amplification,RAA)引物和1条核酸外切酶(exonuclease,exo)探针,通过引物和探针浓度的筛选,构建一种实时RAA(real-time RAA,Rt-RAA)方法。利用交叉... 为快速检测狗源性成分,针对cytb基因保守区域设计3对重组酶辅助扩增(recombinaseaided amplification,RAA)引物和1条核酸外切酶(exonuclease,exo)探针,通过引物和探针浓度的筛选,构建一种实时RAA(real-time RAA,Rt-RAA)方法。利用交叉反应和重复性实验对该检测方法的特异性和稳定性进行评估,并将Rt-RAA方法灵敏度以及对混合模拟样品和市售样品的检测结果与相应的国标检测方法进行对比。结果表明,Rt-RAA检测方法特异性强、稳定性好,在30 min内可检测到目的序列,对狗源性成分的检出限为0.2%,明显优于实时荧光聚合酶链式反应检测方法,应用Rt-RAA方法与国标方法对模拟样品和市售实际样品检测结果完全一致。因此,本研究建立的Rt-RAA检测方法适用于狗源性成分的检测,为肉源性成分鉴定提供了另一种快速、准确的新方法。 展开更多
关键词 实时荧光重组酶辅助技术 狗源性成分 肉制品掺假
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利用双重实时荧光重组酶辅助扩增技术快速检测肉制品中鼠源性成分 被引量:1
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作者 刘明明 周朝旭 +2 位作者 颜海燕 田碧英 李根容 《肉类研究》 北大核心 2024年第9期15-20,共6页
为实现肉制品中大鼠和小鼠源性成分的同步检测,基于实时荧光重组酶辅助扩增(real-time recombinase-aided amplification,Rt-RAA)技术,以大鼠COX3基因和小鼠16S rRNA基因序列保守区域为靶标,分别设计相应的Rt-RAA引物和探针,通过反应参... 为实现肉制品中大鼠和小鼠源性成分的同步检测,基于实时荧光重组酶辅助扩增(real-time recombinase-aided amplification,Rt-RAA)技术,以大鼠COX3基因和小鼠16S rRNA基因序列保守区域为靶标,分别设计相应的Rt-RAA引物和探针,通过反应参数的优化确定最佳双重Rt-RAA检测反应条件。进一步对建立的双重Rt-RAA检测方法进行特异性、灵敏度及稳定性评估,并应用该方法对模拟市售肉制品进行检测。结果表明,所建立的双重RtRAA检测方法特异性强、稳定性好,大鼠和小鼠源性成分的检出限分别为0.5%和0.2%,同步检测2种源性成分检出限为0.5%,同步检测混合模拟市售样品检出限仍低至0.5%,双重Rt-RAA与实时荧光定量聚合酶链式反应对市售样品和模拟样品检测结果高度一致。因此,本研究建立的双重Rt-RAA检测方法适用于大鼠和小鼠源性成分的检测,为肉制品掺假检测提供了一种快捷、高效及准确的新方法。 展开更多
关键词 大鼠 小鼠 肉制品 实时荧光重组酶辅助技术 肉制品掺假
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实时荧光核酸恒温扩增技术检测泌尿生殖道沙眼衣原体感染 被引量:22
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作者 顾伟鸣 杨阳 +1 位作者 吴磊 莫小辉 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期271-272,共2页
目的评价实时荧光核酸恒温扩增技术(simultaneous amplification and testing,SAT)检测沙眼衣原体(CT)核酸试剂盒(RNA恒温扩增)的敏感性和特异性。方法对229例临床疑似患者的尿样及拭子标本同时进行SAT检测和"金标准"沙眼衣... 目的评价实时荧光核酸恒温扩增技术(simultaneous amplification and testing,SAT)检测沙眼衣原体(CT)核酸试剂盒(RNA恒温扩增)的敏感性和特异性。方法对229例临床疑似患者的尿样及拭子标本同时进行SAT检测和"金标准"沙眼衣原体细胞培养检测,检测结果有差异的标本采用PCR方法对拭子标本进行复测,根据实验结果评估SAT技术在尿样及拭子标本检测中的敏感性和特异性。结果结合细胞培养和PCR的实验结果作为"扩大金标准",得出SAT技术对临床拭子标本的检测敏感性为97.1%,特异性为100%;对尿样标本检测的敏感性为89.4%,特异性为99.2%。拭子和尿样标本检测结果的符合率为95.2%,经卡方检验,差异无显著性(χ2=3.27,P>0.05)。结论 SAT技术检测CT试剂盒对拭子及尿样标本敏感性及特异性均较好,适用于临床实验室对CT的检测。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 实时荧光核酸恒温检测技术 尿样检测
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实时荧光环介导等温扩增技术检测乳粉中的肺炎克雷伯氏菌 被引量:15
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作者 陈文秀 姜旋 +1 位作者 马晓燕 张伟 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第20期192-197,共6页
为了建立食品中肺炎克雷伯氏菌灵敏快速的检测方法,根据GenBank中已公布的肺炎克雷伯氏菌phoE基因设计引物,利用实时荧光监测仪,建立实时荧光环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术检测食品中肺炎克雷伯氏... 为了建立食品中肺炎克雷伯氏菌灵敏快速的检测方法,根据GenBank中已公布的肺炎克雷伯氏菌phoE基因设计引物,利用实时荧光监测仪,建立实时荧光环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术检测食品中肺炎克雷伯氏菌的方法,可直观判定检测结果,仪器亦可自动显示检测结果。对该检测方法的特异性、灵敏度等方面进行研究,并与聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法进行比较。结果表明,实时荧光LAMP检测方法特异性强、灵敏度高。用于特异性实验的21株实验菌株中,4株肺炎克雷伯氏菌,呈现阳性结果,而其他17株非肺炎克雷伯氏菌,均呈阴性结果;检测纯菌的灵敏度和检测人工污染乳粉的检出限分别为79 CFU/mL和79 CFU/g,是常规PCR检测方法的100倍。总之,本研究建立的实时荧光LAMP检测方法灵敏度高、特异性强、耗时短、结果判定直观,实现了对肺炎克雷伯氏菌的快速检测。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯氏菌 phoE基因 实时荧光环介导等温 检测 SYBR GreenⅠ
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实时荧光核酸恒温扩增技术检测食品中金黄色葡萄球菌的方法评价 被引量:4
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作者 李桂金 宋晓礁 +2 位作者 张銮 李洪宽 乌日琴 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2021年第12期4852-4857,共6页
目的以传统国标培养法作为参比方法,评价实时荧光核酸恒温扩增检测(real-time simultaneous amplification and testing, SAT)方法检测食品中金黄色葡萄球菌的能力。方法依据GB 4789.10—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色... 目的以传统国标培养法作为参比方法,评价实时荧光核酸恒温扩增检测(real-time simultaneous amplification and testing, SAT)方法检测食品中金黄色葡萄球菌的能力。方法依据GB 4789.10—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》对SAT法检测食品中金黄色葡萄球菌的能力进行评价。分别检测纯培养物、人工污染样品以及实际样品来评价试剂盒的灵敏度、特异性、假阴性率、假阳性率和准确度,同时采取2种方法的显著性差异分析,确定最终结果。结果 SAT法灵敏度为100%,纯培养物检出限为10^(3) CFU/mL,人工污染检出限灵敏度为10^(3) CFU/mL,假阴性率为0、假阳性率为2.9%;金黄色葡萄球菌的特异性符合要求。结论 SAT检测方法灵敏度高、特异性好,假阳性率、假阴性率、准确度等检测结果全部达标,并且检测时间短,适用于食品中金黄色葡萄球菌的快速检测。 展开更多
关键词 实时荧光核酸恒温检测 灵敏度 特异性 金黄色葡萄球菌 准确度
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RNA实时荧光核酸恒温扩增检测技术在结核病诊断中的价值分析 被引量:7
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作者 柴国祥 韩斌孝 +6 位作者 孙建军 章国平 杨永红 王磊 牛晨霞 李兴芳 徐英春 《中国实用医药》 2018年第26期50-51,共2页
目的分析RNA实时荧光核酸恒温扩增(SAT)检测技术在结核病诊断中的价值。方法 400例疑似肺结核病患者,采取RNA实时扩增检测试剂盒进行检测,并选择痰菌培养及痰涂片进行比较,鉴定阳性菌株。结果以临床诊断结果为金标准,RNA实时荧光核酸恒... 目的分析RNA实时荧光核酸恒温扩增(SAT)检测技术在结核病诊断中的价值。方法 400例疑似肺结核病患者,采取RNA实时扩增检测试剂盒进行检测,并选择痰菌培养及痰涂片进行比较,鉴定阳性菌株。结果以临床诊断结果为金标准,RNA实时荧光核酸恒温扩增检测出结核病患者阳性133例,涂阳患者61例,涂阴72例,敏感度为72.68%,特异度为98.62%。实时荧光核酸恒温扩增检测的符合率为86.75%,显著高于痰分枝杆菌的培养(69.75%)和痰抗酸杆菌涂片(67.50%),对比差异具有统计学的意义(P<0.05)。其中实时荧光核酸恒温扩增检测的3例非阴性阳性,涂片均为阳性。183例诊断结果为肺结核的患者中,涂阳培阳患者实时荧光核酸恒温扩增检测检出率为100.00%,涂阴培阳患者检出率为78.95%,涂阴培阴患者检出率为56.00%,涂阳培阴患者检出率为40.00%。结论 RNA实时荧光核酸恒温扩增检测技术在检测肺结核病具快速、便捷、经济和高敏感度等特点,该方法值得在临床的结核筛查中进行应用。 展开更多
关键词 RNA实时荧光核酸恒温检测 结核病 诊断价值
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基于实时荧光环介导等温扩增技术同时检测副溶血弧菌与金黄色葡萄球菌 被引量:9
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作者 刘丹 谢加玲 +3 位作者 张孟雨 陈松 李孜 钟青萍 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2022年第22期255-262,共8页
分别针对副溶血弧菌及金黄色葡萄球菌的特异性基因bla_(CARB-17)、nuc设计引物,通过优化反应条件,建立一种能够同时检测副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌的实时荧光环介导等温扩增(real-time loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP... 分别针对副溶血弧菌及金黄色葡萄球菌的特异性基因bla_(CARB-17)、nuc设计引物,通过优化反应条件,建立一种能够同时检测副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌的实时荧光环介导等温扩增(real-time loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)的检测方法,对其特异性、灵敏度和适用性进行了研究。结果表明该方法特异性好、灵敏度高,对副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌的检出限分别为3.62×10^(2)、1.45×10^(4) copies/mL,灵敏度是普通PCR方法的10倍。实现了一次LAMP反应中同时检测2种食源性致病菌,既缩短检测时间,也提高了检测效率,为多重LAMP检测食源性致病菌的研究提供参考。 展开更多
关键词 食源性致病菌 副溶血弧菌 金黄色葡萄球菌 实时荧光环介导等温技术 快速检测
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实时荧光环介导等温扩增技术检测牛乳中的蜡样芽孢杆菌 被引量:25
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作者 贾雅菁 付博宇 +4 位作者 王羽 马晓燕 张先舟 苑宁 张伟 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第6期184-189,共6页
建立牛乳中蜡样芽孢杆菌便捷可靠的检测方法,根据已公布的蜡样芽孢杆菌hbl A基因序列设计内外引物,并向反应体系中加入荧光染料SYBRGreenⅠ,利用实时荧光监测仪,建立实时荧光环介导等温扩增技术(real-time fluorescence loop-mediated i... 建立牛乳中蜡样芽孢杆菌便捷可靠的检测方法,根据已公布的蜡样芽孢杆菌hbl A基因序列设计内外引物,并向反应体系中加入荧光染料SYBRGreenⅠ,利用实时荧光监测仪,建立实时荧光环介导等温扩增技术(real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification,Real Amp)检测蜡样芽孢杆菌的方法,扩增产物经电泳和酶切鉴定。通过21株致病菌验证RealAmp特异性,并比较了Real Amp与普通环介导等温扩增技术的敏感性,对人工污染的检出限进行了测定。结果表明对21 株致病菌进行特异性实验,4株蜡样芽胞杆菌呈阳性结果,17株非蜡样芽胞杆菌均呈阴性结果。RealAmp检测纯菌的灵敏度为8.2 CFU/m L,比普通环介导等温扩增技术的灵敏度高10倍,人工污染牛乳RealAmp的检出限为8.2 CFU/m L。并且在20 min左右即可判定结果。该方法快速、准确、灵敏度高、操作便捷、可实时监控检测蜡样芽孢杆菌,有望成为快速检测蜡样芽孢杆菌的有效方法。 展开更多
关键词 实时荧光环介导等温检测技术 蜡样芽胞杆菌 检测 牛乳
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实时荧光环介导等温扩增技术快速检测牛肉中的大肠杆菌O157 被引量:3
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作者 苑宁 石磊 +5 位作者 王永 陈发荣 时凡 徐慧 贾丽娜 张伟 《食品安全质量检测学报》 CAS 2018年第24期6489-6495,共7页
目的建立实时荧光环介导等温扩增技术(real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification,RF-LAMP)快速检测大肠杆菌(Escherichia coli,EHEC)O157的分析斱法。方法针对大肠杆菌O157编码O抗原的rfbE基因设计引物。对该斱... 目的建立实时荧光环介导等温扩增技术(real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification,RF-LAMP)快速检测大肠杆菌(Escherichia coli,EHEC)O157的分析斱法。方法针对大肠杆菌O157编码O抗原的rfbE基因设计引物。对该斱法迚行特异性验证,同时对大肠杆菌O157:H7纯培养物的灵敏度和人工污染牛肉的检出限迚行测定,对61份牛肉样品迚行RF-LAMP检测,幵与GB4789.36-2016斱法迚行比较,评价RF-LAMP斱法的敏感性、特异性和准确度。结果 10株大肠杆菌O157呈阳性结果, 21株非大肠杆菌O157呈阴性结果,该斱法特异性良好。纯培养物检测的灵敏度为5.1CFU/mL,人工污染的牛肉样品的检出限为5.1 CFU/g。结论本研究建立的RF-LAMP技术特异性好、灵敏度高、操作简单,可实时监测扩增反应,避克了繁琐的电泳过程,实现了对大肠杆菌O157的快速检测,对大肠杆菌O157引起的食源性疾病的预防和控制具有重要意义。 展开更多
关键词 实时荧光 环介导等温 大肠杆菌O157 rfbE基因 牛肉 快速检测
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实时荧光跨越式滚环等温扩增技术检测食品中的志贺氏菌 被引量:1
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作者 王立娟 郭威 +2 位作者 张先舟 马晓燕 张伟 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2021年第14期125-131,共7页
该研究建立一种实时荧光跨越式滚环等温扩增(real-time fluorescence saltatory rolling circle amplification,RFSRCA)技术快速检测志贺氏菌(Shigella)。该方法以志贺氏菌的ipaH基因设计引物,使用32株不同菌株对RF-SRCA方法的特异性进... 该研究建立一种实时荧光跨越式滚环等温扩增(real-time fluorescence saltatory rolling circle amplification,RFSRCA)技术快速检测志贺氏菌(Shigella)。该方法以志贺氏菌的ipaH基因设计引物,使用32株不同菌株对RF-SRCA方法的特异性进行分析,根据实时荧光曲线法对RF-SRCA方法的灵敏度和检出限进行判定,并使用该方法对60份食品样品进行检测。结果表明:13株志贺氏菌菌株呈阳性结果,19株非志贺氏菌菌株呈阴性结果,说明该方法特异性良好;RF-SRCA的灵敏度为5.97×10^(0)fg/μL,比普通SRCA方法高10倍;其在人工污染牛奶样品中的检出限为8.6×10^(0)CFU/mL,比普通SRCA方法检出限低10倍;60份食品样品中阳性样品数为2份,其检出率与SRCA方法一致,为3.33%。综上,RF-SRCA方法在检测志贺氏菌方面操作简单,特异性强,灵敏度高,能够实现快速检测。 展开更多
关键词 志贺氏菌 实时荧光跨越式滚环等温技术 ipaH 检测 牛奶
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RNA实时荧光恒温扩增技术在儿童支原体肺炎抗生素治疗中的指导价值 被引量:11
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作者 王紫荆 汪蓉 +8 位作者 胡小林 方剑 赵云 尹清金 侯晓华 谢屹峰 朱静 马云驰 庄琴 《成都医学院学报》 CAS 2020年第6期716-719,共4页
目的评估支原体RNA实时荧光恒温扩增技术(MP-SAT)在儿童支原体肺炎抗生素治疗中的指导价值。方法选取成都儿童专科医院2019年1-12月因支原体肺炎住院且咽拭子MP-SAT检测阳性的患儿70例为研究对象。入院当天,在使用抗生素治疗前,采集患... 目的评估支原体RNA实时荧光恒温扩增技术(MP-SAT)在儿童支原体肺炎抗生素治疗中的指导价值。方法选取成都儿童专科医院2019年1-12月因支原体肺炎住院且咽拭子MP-SAT检测阳性的患儿70例为研究对象。入院当天,在使用抗生素治疗前,采集患儿咽拭子。予阿奇霉素抗感染治疗2~4周,MP-SAT结果转阴后,停用阿奇霉素治疗。在治疗开始后,每周复查MP-SAT及胸部X线片各1次(每种检查结果转阴后不再复查),分别记录两种检查结果及临床症状体征的恢复情况。结果MP-SAT转阴率随抗生素治疗时间延长而增高,MP-SAT转阴时间(2.41±0.62)周;胸部X线片转阴率随治疗时间延长而增高,胸部X线片转阴时间(3.40±1.46)周;体温恢复正常时间为(1.14±0.35)周,其他临床症状体征恢复较慢,临床症状体征恢复正常时间为(3.26±1.16)周;MP-SAT转阴时间与胸部X线片转阴时间比较,差异有统计学意义(t=5.65,P<0.001);MP-SAT转阴时间与临床症状体征恢复正常时间比较,差异有统计学意义(t=4.15,P<0.001)。结论在儿童支原体肺炎抗生素治疗过程中,MP-SAT转阴时间短于胸部X线片转阴时间和临床症状体征恢复正常时间。在评估支原体肺炎疗效指标中,使用MP-SAT转阴指标优于传统胸部X线片和临床症状体征恢复正常的指标。 展开更多
关键词 RNA实时荧光恒温技术 支原体肺炎 抗生素 疗效
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实时荧光环介导等温扩增快速检测鸡肉中沙门氏菌 被引量:20
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作者 王瑾 林丽萍 +1 位作者 郜彦彦 吴国平 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第24期170-174,共5页
根据沙门氏菌inv A基因序列设计特异性引物,利用Midori Green新型核酸荧光染料,建立了沙门氏菌实时荧光定量环介导等温扩增检测方法。结果表明,检测过程仅需45 min,灵敏度达6 CFU/管,而且细菌数量对数值(lg(CFU/管))与扩增荧光指数增加... 根据沙门氏菌inv A基因序列设计特异性引物,利用Midori Green新型核酸荧光染料,建立了沙门氏菌实时荧光定量环介导等温扩增检测方法。结果表明,检测过程仅需45 min,灵敏度达6 CFU/管,而且细菌数量对数值(lg(CFU/管))与扩增荧光指数增加时间(Tp值)具有良好正相关线性关系,R2为0.985 1。通过模拟沙门氏菌人工污染25 g鸡肉样品,经37℃保温4 h,提取样品制备DNA模板用于实时荧光定量环介导等温扩增检测,结果表明灵敏度达450 CFU/g,共需时约7 h。随机从市场购买冷冻鸡肉样品21份,采用国标沙门氏菌检测方法和鸡肉样品实时荧光定量环介导等温扩增检测进行对比检测,结果两种方法均检测出同一份样品为沙门氏菌阳性,其余20份样品均为沙门氏菌阴性,表明本研究建立的鸡肉沙门氏菌实时荧光定量环介导等温扩增检测,其灵敏性和准确性与国标检测方法相当,但检测时间可缩短至7 h。 展开更多
关键词 沙门氏菌 鸡肉 实时荧光定量环介导等温 检测
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结核感染T细胞斑点试验联合结核分枝杆菌RNA恒温扩增实时检测技术在痰涂阴性肺结核诊断中的应用价值 被引量:3
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作者 李伦 张智辉 王丽娜 《河南医学研究》 CAS 2021年第20期3811-3813,共3页
目的探讨结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)联合结核分枝杆菌RNA恒温扩增实时检测技术(sAT-TB)检测在痰涂阴性肺结核诊断中的应用价值。方法选取2018年6月至2019年12月平顶山市第一人民医院收治的806例痰涂阴性肺结核患者作为观察组,经... 目的探讨结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)联合结核分枝杆菌RNA恒温扩增实时检测技术(sAT-TB)检测在痰涂阴性肺结核诊断中的应用价值。方法选取2018年6月至2019年12月平顶山市第一人民医院收治的806例痰涂阴性肺结核患者作为观察组,经实验室细菌学、组织学、影像学、临床表现等检查确诊,选取同期100例疑似肺结核患者作为对照组,两组均接受T-SPOT.TB、sAT-TB检测。比较T-SPOT.TB、sAT-TB单独与联合检测在痰涂阴性肺结核诊断中的应用价值。结果T-SPOT.TB诊断真阳性733例,真阴性57例,漏诊73例,误诊43例;sAT-TB诊断真阳性540例,真阴性88例,漏诊266例,误诊12例;联合诊断真阳性799例,真阴性56例,漏诊7例,误诊44例。联合诊断痰涂阴性肺结核准确度(94.37%)、灵敏度(99.13%)、阴性预测值(88.89%)高于T-SPOT.TB(87.20%、90.94%、43.85%)、sAT-TB(69.32%、67.00%、24.86%)单独诊断,漏诊率(0.87%)低于T-SPOT.TB(9.06%)、sAT-TB(33.00%)单独诊断,差异有统计学意义(P<0.05);联合诊断特异度(56.00%)、阳性预测值(94.78%)低于sAT-TB单独诊断(88.00%、97.83%),误诊率(44.00%)高于sAT-TB单独诊断(12.00%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论T-SPOT.TB、sAT-TB联合能有效提高痰涂阴性肺结核诊断的准确度、灵敏度、阴性预测值,降低漏诊率,但特异性较低,必要时需实施细菌培养,以降低误诊风险。 展开更多
关键词 痰涂阴性肺结核 结核感染T细胞斑点试验 结核分枝杆菌RNA恒温实时检测技术
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应用依赖解旋酶DNA恒温扩增技术检测副溶血性弧菌 被引量:10
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作者 石琰璟 王建广 +6 位作者 房保海 张健 祝素珍 刘云国 姜英辉 雷质文 杨大伟 《青岛科技大学学报(自然科学版)》 CAS 2011年第1期42-45,共4页
以副溶血性弧菌的tlh基因为目的片段设计特异性引物,成功建立了恒温条件下快速检测副溶血性弧菌的依赖解旋酶DNA恒温扩增技术(HDA)的检测法,进行了特异性和灵敏度实验,并与普通PCR方法进行了比较。该HDA检测方法最低检测限为19.9ng·... 以副溶血性弧菌的tlh基因为目的片段设计特异性引物,成功建立了恒温条件下快速检测副溶血性弧菌的依赖解旋酶DNA恒温扩增技术(HDA)的检测法,进行了特异性和灵敏度实验,并与普通PCR方法进行了比较。该HDA检测方法最低检测限为19.9ng·mL-1,与普通PCR方法相当。副溶血性弧菌的HDA检测方法具有普通PCR的特异、灵敏等特点,并且对仪器要求更低,用普通水浴槽即可进行反应。 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 检测 依赖解旋酶DNA恒温技术
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病毒性出血性败血症病毒(VHSV)实时荧光环介导等温扩增检测方法的建立 被引量:5
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作者 陈进会 陈文 +6 位作者 黄伟 李红梅 石磊 邱杨 刘建丽 叶蕾 唐大运 《中国动物检疫》 CAS 2013年第5期42-46,共5页
根据VHSV的较为保守的glyG基因,设计了三套LAMP引物,筛选出扩增效率最优的第二套引物VHSV-2,引入其环引物以加快其反应。采用ESE-Quant tube scanner(德国QIAGEN公司)恒温实时荧光反应及检测平台,反应温度为63℃,恒温下30min内可得出结... 根据VHSV的较为保守的glyG基因,设计了三套LAMP引物,筛选出扩增效率最优的第二套引物VHSV-2,引入其环引物以加快其反应。采用ESE-Quant tube scanner(德国QIAGEN公司)恒温实时荧光反应及检测平台,反应温度为63℃,恒温下30min内可得出结果。同时评价VHSV引物的灵敏度和特异性,灵敏度结果显示其检测限可达到4.5pg每反应,与几种重要的病原RNA均无交叉反应。本文建立的检测VHSV的RT-LAMP检测方法简单、易操作,同时具有较高的灵敏度和特异性。本研究建立的实时荧光RT-LAMP检测方法可作为VHSV的快速诊断工具,适合VHSV的现场快速检测和大规模监控。 展开更多
关键词 病毒性出血性败血症病毒 恒温实时荧光 环介导等温
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实时荧光环介导等温扩增快速分型致泻大肠埃希氏菌方法的建立
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作者 李芮 黄艳梅 +5 位作者 童晓钰 山珊 刘成伟 谭俣宬 陈芳 刘道峰 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期233-240,I0005,I0006,共10页
致泻大肠埃希氏菌(diarrheagenic Escherichia coli,DEC)是一种重要的食源性致病菌,该研究立足DEC目前流行率高、基层分型困难的现状,建立了快速分型5种DEC的实时荧光环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法... 致泻大肠埃希氏菌(diarrheagenic Escherichia coli,DEC)是一种重要的食源性致病菌,该研究立足DEC目前流行率高、基层分型困难的现状,建立了快速分型5种DEC的实时荧光环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法。针对DEC的8段特征性毒力基因pic、aggR、lt、st、stx 1、stx2、escV、invE及大肠埃希氏菌属特异性基因uidA设计LAMP引物,优化反应体系,并对方法的分析性能及临床菌株分型效果进行了评价。结果显示,所建立的方法对pic和escV的检出限是1 ng/μL,对aggR、stx 1、invE和uidA的检出限是100 pg/μL,对lt、st和stx 2的检出限是10 pg/μL,该方法灵敏度与特异度均为100%,DEC型别间无交叉反应,对临床菌株的分型与实际结果完全一致。方法快速简便、设备要求低,借助恒温荧光读取设备可在40 min内迅速判定待检菌株是否为DEC及其致病类型,可满足各机构现场快速检测的需求。 展开更多
关键词 致泻大肠埃希氏菌 实时荧光环介导等温 快速检测 毒力基因 分型 食品安全
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应用解旋恒温基因扩增技术检测沙门氏杆菌 被引量:2
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作者 刘洵 程天印 王晓君 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期450-453,共4页
为寻求快速简便的检测沙门氏杆菌及其他病原生物新方法,以沙门氏杆菌invA基因为目的片段,设计特异性引物,通过条件优化,建立了检测沙门氏杆菌的HDA法,用4株沙门氏杆菌和6种其他病原菌(大肠埃希菌、志贺氏菌、变形杆菌、绿脓杆菌、葡萄... 为寻求快速简便的检测沙门氏杆菌及其他病原生物新方法,以沙门氏杆菌invA基因为目的片段,设计特异性引物,通过条件优化,建立了检测沙门氏杆菌的HDA法,用4株沙门氏杆菌和6种其他病原菌(大肠埃希菌、志贺氏菌、变形杆菌、绿脓杆菌、葡萄球菌、链球菌)考核特异性,用稀释法测定灵敏度.结果表明,本研究建立的HDA法可在恒温水浴锅中进行,扩增时程75 min;阳性检测率为100%,无假阳性;用HAD法检测12份饲料样品,结果检出沙门氏杆菌呈阳性的3份,阳性率为25%.HDA法极适合基层实验室使用. 展开更多
关键词 沙门氏杆菌 检测 解旋恒温基因技术
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传染性造血器官坏死病毒(IHNV)实时荧光环介导等温扩增快速检测方法的建立 被引量:1
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作者 陈进会 唐大运 +5 位作者 黄伟 邱杨 刘建丽 叶蕾 石磊 李红梅 《中国动物检疫》 CAS 2013年第12期53-58,共6页
建立了一套基于环介导等温扩增技术(LAMP)的实时荧光检测方法,用于IHNV的检测。根据IHNV的保守基因glyG,设计合成3套LAMP引物,LAMP反应在63℃下进行,引入环引物后,第3套LAMP引物显示出良好的扩增效率。以ESE-Quant tube scanner为恒温... 建立了一套基于环介导等温扩增技术(LAMP)的实时荧光检测方法,用于IHNV的检测。根据IHNV的保守基因glyG,设计合成3套LAMP引物,LAMP反应在63℃下进行,引入环引物后,第3套LAMP引物显示出良好的扩增效率。以ESE-Quant tube scanner为恒温反应及检测平台,对IHNV进行实时荧光检测,反应在40 min内可得出结果。本研究建立的IHNV实时荧光LAMP法检测限达到3.6 pg。特异性试验表明仅IHNV发生特异性扩增,而SVCV、VHSV、HRV、PFRV以及IPNV均不发生反应。所建立的恒温实时荧光检测法操作简单、反应迅速,同时具有较高的灵敏度和特异性。引入的ESE-Quant tube scanner平台设备要求低,同时使扩增过程数字化和自动化,适合IHNV的现场检测和大规模疫病的监控。 展开更多
关键词 传染性造血器官坏死病毒 环介导等温 恒温实时荧光 ESE Quanttube SCANNER
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环介导恒温扩增技术在动物病原检测中的应用
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作者 史喜菊 马贵平 +2 位作者 刘全国 李冰玲 李炎鑫 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第11期114-117,共4页
环介导恒温扩增技术(LAMP)是一种新型核酸扩增技术,是依赖于靶目标上6个区域的4条引物和一种具有链置换活性的DNA聚合酶Bst的作用,在60℃-65℃恒温条件下1 h之内即可完成的基因扩增技术。该技术虽然起步较晚,但发展迅速,目前在很多领... 环介导恒温扩增技术(LAMP)是一种新型核酸扩增技术,是依赖于靶目标上6个区域的4条引物和一种具有链置换活性的DNA聚合酶Bst的作用,在60℃-65℃恒温条件下1 h之内即可完成的基因扩增技术。该技术虽然起步较晚,但发展迅速,目前在很多领域的研究和应用已经取得很大进展。论文从技术原理、引物设计、反应机制和特点等方面了介绍了环介导恒温扩增技术,并就该技术在动物细菌性病原微生物、病毒和寄生虫检测中的应用做了介绍。 展开更多
关键词 环介导恒温技术 病原 检测
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