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重庆城口地区家养山羊携带产志贺毒素大肠埃希菌情况及其分子特征分析
1
作者 彭晶晶 胡彬 +8 位作者 杨茜 李轶 黄海 刘文双 孟宇 王礼君 熊衍文 袁毅 侯配斌 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第5期529-536,共8页
目的了解重庆城口地区家养山羊中产志贺毒素大肠埃希菌的携带情况、耐药情况及分子特征。方法2023年8月采集重庆城口辖区内不同村镇养殖户的羊粪便样本283份。经EC肉汤增菌后接种选择性培养基进行产志贺毒素大肠埃希菌菌株分离,对stx1/s... 目的了解重庆城口地区家养山羊中产志贺毒素大肠埃希菌的携带情况、耐药情况及分子特征。方法2023年8月采集重庆城口辖区内不同村镇养殖户的羊粪便样本283份。经EC肉汤增菌后接种选择性培养基进行产志贺毒素大肠埃希菌菌株分离,对stx1/stx2阳性菌株进行耐药性分析和全基因组测序。通过全基因组序列分析菌株stx基因亚型、血清型、多位点序列型、毒力基因和耐药基因携带情况并进行系统进化分析。结果从283份羊粪样本中检出46株产志贺毒素大肠埃希菌,检出率为16.25%。46株菌分为12种O∶H血清型,最常见的是O76∶H19和O8∶H7,各为9株;O157∶H7型5株。MLST型有11种,ST675、ST196为优势型别,均为9株菌,占比均为19.57%。菌株共分为7种不同stx亚型及组合,主要为stx1c亚型(26/46,56.52%),其次为stx2k亚型(9/46,19.57%),其中9株stx2k亚型菌株血清型和MLST型均为O8∶H7和ST196。在耐药表型检测实验中,46株菌中对氨苄西林耐药的有2株,对氨苄西林/舒巴坦、头孢唑啉及头孢西丁耐药的各1株。鉴定出的9株产2k亚型志贺毒素大肠埃希菌(Stx2k-STEC)菌株虽然均携带β-内酰胺类耐药相关基因blaEC-18,但药敏试验显示对检测的15种抗菌药物均敏感。系统进化分析显示9株Stx2k-STEC菌株高度相似,但与中国其他地区的Stx2k-STEC分离株的遗传差异较大。结论重庆城口地区家养山羊为STEC的重要动物宿主,并携带与国内其他地区不同克隆的Stx2k-STEC新菌型。 展开更多
关键词 产志贺毒素大肠埃希菌 志贺毒素2k亚型 血清分型 药物敏感性检测 全基因组测序
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单克隆抗体S2C4对2型志贺毒素及其亚型毒性的中和作用(英文) 被引量：3
2
作者 焦永军 曾晓燕 +3 位作者 郭喜玲 史智扬 冯振卿 汪华 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第6期736-742,共7页
纯化的2型志贺毒素(Shiga toxin2,Stx2)经福尔马林脱毒后免疫BALB/c小鼠制备Stx2单克隆抗体,用体外中和试验对具有中和活性的阳性抗体克隆进行初筛,对所获得的中和抗体的重、轻链同种型及结合特异性进行鉴定,其中和保护作用通过体内、... 纯化的2型志贺毒素(Shiga toxin2,Stx2)经福尔马林脱毒后免疫BALB/c小鼠制备Stx2单克隆抗体,用体外中和试验对具有中和活性的阳性抗体克隆进行初筛,对所获得的中和抗体的重、轻链同种型及结合特异性进行鉴定,其中和保护作用通过体内、体外中和试验加以验证,最后,中和抗体对Stx2亚型Stx2c和Stx2vha的中和谱用体内中和试验验证.结果显示,12株抗Stx2的阳性抗体克隆中,只有1株具有中和活性,命名为S2C4,其重、轻链同种型为G1/κ,其靶分子为Stx2的A亚单位,与Stx2的B亚单位或Stx1不结合.在体外中和试验中S2C4可有效中和Stx2对Vero细胞的杀伤作用,同样,S2C4可中和致死量的Stx2及其亚型Stx2c和Stx2vha对小鼠的毒性作用.该抗体有望成为治疗产志贺毒素大肠杆菌感染的候选分子. 展开更多
关键词 单克隆抗体S2C4 2型志贺毒素 中和作用 产志贺毒素大肠杆菌
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肠出血性大肠杆菌O157：H7志贺样毒素2B亚基的表达 被引量：1
3
作者 丁益强 王长军 俞守义 《医学研究生学报》 CAS 2008年第6期587-590,I0003,共5页
目的:克隆肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7 AH07株志贺样毒素2B(Stx2B)亚单位基因,应用原核表达系统制备重组蛋白质。方法:根据靶基因序列设计特异性寡核苷酸引物,采用PCR法克隆EHEC AH07株Stx2B的编码基因stx2b,靶基因经TA克隆后连接... 目的:克隆肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7 AH07株志贺样毒素2B(Stx2B)亚单位基因,应用原核表达系统制备重组蛋白质。方法:根据靶基因序列设计特异性寡核苷酸引物,采用PCR法克隆EHEC AH07株Stx2B的编码基因stx2b,靶基因经TA克隆后连接到表达载体pET-28a构建重组质粒,阳性重组子转化表达宿主菌E.coliBL-21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导目的蛋白表达,应用SDS-PAGE和Western-blot(WB)分析重组蛋白生物活性。结果:PCR扩增stx2b基因约220 bp,成功构建重组质粒pET28a-stx2b,并在原核细胞中得到高效表达,目的蛋白质的相对分子质量约为7500,约占蛋白质总量的40%;WB显示目的蛋白质可与特异性抗体发生特异性反应。结论:成功克隆EHEC O157∶H7stx2b基因,在原核系统获得目的蛋白质的高效表达,为O157∶H7感染机制及疾病诊断和疫苗研究奠定基础。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌0157:H7 志贺样毒素2B亚基 克隆表达
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猪源大肠杆菌志贺样毒素2型突变体B亚基与LTB基因的融合与表达
4
作者 王红珍 冉雪琴 +1 位作者 吴拥军 王嘉福 《西南农业学报》 CSCD 2007年第6期1324-1328,共5页
猪水肿病的主要毒力因子是志贺样毒素的2型突变体(Stx2e),毒素的A亚基是有毒的酶活性单位,B亚基无毒,介导毒素与受体的结合。为了增加B亚基的免疫原性,采用重叠PCR将猪源志贺样毒素Ⅱ型突变体B亚单位(Stx2e B)连接至热敏肠毒素的B亚单位... 猪水肿病的主要毒力因子是志贺样毒素的2型突变体(Stx2e),毒素的A亚基是有毒的酶活性单位,B亚基无毒,介导毒素与受体的结合。为了增加B亚基的免疫原性,采用重叠PCR将猪源志贺样毒素Ⅱ型突变体B亚单位(Stx2e B)连接至热敏肠毒素的B亚单位(LTB)成熟肽N末端,获得Stx2e B与LTB相连的融合蛋白基因Stx2e B-LTB。融合基因克隆到表达载体pQE30中,在IPTG的诱导下,融合基因在大肠杆菌中获得表达,表达量占细菌总蛋白的8%。融合蛋白的获得为猪水肿病基因工程亚单位疫苗的制备、猪水肿病的预防奠定了基础。 展开更多
关键词 猪 大肠杆菌 志贺样毒素2型突变体 热敏肠毒素 基因融合
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Stx2A-LHRH重组质粒的构建及分析
5
作者 岳瑛 祖莉莉 +3 位作者 于晓伟 冯书章 朱平 李荷莲 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期177-179,共3页
目的 :表达志贺毒素 2 A-黄体生成激素释放激素 ( Stx2 A- LHRH)重组毒素 ,探讨其是否具有特异杀伤癌细胞的可能性。方法 :用 PCR方法扩增带有 Nco 和 Eco R 酶切位点的 Stx2 A-LHRH DNA基因 ,克隆至 p ET- 2 0 b( + )质粒中 ,转化大肠... 目的 :表达志贺毒素 2 A-黄体生成激素释放激素 ( Stx2 A- LHRH)重组毒素 ,探讨其是否具有特异杀伤癌细胞的可能性。方法 :用 PCR方法扩增带有 Nco 和 Eco R 酶切位点的 Stx2 A-LHRH DNA基因 ,克隆至 p ET- 2 0 b( + )质粒中 ,转化大肠杆菌 BL2 1 ( DE3) ,挑取单菌落培养 ,提取质粒、酶切。结果 :经鉴定、测序 ,获得重组质粒 p ET2 0 - SL。结论 :利用分子生物学技术成功地构建了带有 Stx2 A- LHRH重组毒素基因的质粒 ,使其表达 Stx2 A- LHRH重组毒素成为可能 ,为进一步研究导向药物奠定了基础。 展开更多
关键词 志贺毒素2A 黄体生成激素释放激素 重组毒素 质粒
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大肠杆菌O157VT2 B亚基基因的克隆与表达 被引量：1
6
作者 郑峰 周志江 刘建青 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第2期115-118,共4页
目的对大肠杆菌O157VT2毒素B亚基基因进行克隆、表达与鉴定,为VT2毒素的抗原、抗体大规模制备及疾病的预防、诊断和疫苗研究打下基础。方法设计寡核苷酸引物,利用PCR技术从出血性大肠杆菌O157的染色体基因组中扩增出VT2毒素B亚基基因,... 目的对大肠杆菌O157VT2毒素B亚基基因进行克隆、表达与鉴定,为VT2毒素的抗原、抗体大规模制备及疾病的预防、诊断和疫苗研究打下基础。方法设计寡核苷酸引物,利用PCR技术从出血性大肠杆菌O157的染色体基因组中扩增出VT2毒素B亚基基因,连接到表达载体pET-28a以构建重组质粒。将重组质粒转入表达宿主菌BL21感受态细胞,通过IPTG诱导进行表达,对表达蛋白进行SDSPAGE电泳分析和Western检测。结果用PCR方法扩增出了预期大小的VT2B亚基基因,克隆得到重组质粒pET28aVT2B,转化后宿主菌成功表达分子量为8kD的目的蛋白,用特异抗体经Western检测该条带为阳性反应。结论目的基因成功克隆到宿主菌内,目的蛋白得到高效表达,最佳诱导时间为4h,目的蛋白表达量可达总蛋白量45.72%。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157 志贺毒素2 B亚基 克隆与表达
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志贺菌6种毒力基因的多重PCR检测 被引量：1
7
作者 徐兰英 许汴利 马宏 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2009年第6期1218-1221,共4页
目的:建立志贺菌6种毒力基因[志贺菌肠毒素1基因(set1)、志贺菌肠毒素2基因(sen)、侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)、侵袭相关蛋白基因(ial)、志贺毒素1基因(stx1)及调控基因(virA)]的多重PCR鉴定方法,实现多基因的同时检测。方法:选择志贺菌... 目的:建立志贺菌6种毒力基因[志贺菌肠毒素1基因(set1)、志贺菌肠毒素2基因(sen)、侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)、侵袭相关蛋白基因(ial)、志贺毒素1基因(stx1)及调控基因(virA)]的多重PCR鉴定方法,实现多基因的同时检测。方法:选择志贺菌的6种毒力基因作为靶基因,以A群和C群4株标准及B群和D群4株临床分离株为模型,应用降落PCR方法在1个反应管中同时进行扩增,根据扩增片段大小定性判断结果。通过样本倍比稀释检验多重PCR的灵敏性,并在NCBI网站上用BLAST检索各引物的特异性。另选取河南省2001年至2007年115株志贺菌进行多重PCR检测,以验证多重PCR的可行性。结果:多重PCR能同时检测上述6种毒力基因,与单基因PCR分别检测6种毒力基因相比具有相近的灵敏度与特异性。应用多重PCR方法检测115株志贺菌,除stx1外,其余5种毒力基因的阳性率均在85%以上。结论:多重PCR鉴定志贺菌毒力基因具有简便、快速的特点,适用于毒力基因鉴定和流行病学调查研究。 展开更多
关键词 志贺菌 多重PCR 志贺菌肠毒素1基因 志贺菌肠毒素2基因 侵袭性质粒抗原H基因 侵袭相关蛋白基因 志贺毒素1基因 调控基因
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致猪水肿病大肠埃希菌多重PCR检测方法的建立及应用 被引量：5
8
作者 李伟杰 赵耘 +3 位作者 魏财文 岂晓鑫 田野 蒋桃珍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第3期537-543,共7页
本研究旨在建立一种快速鉴定致猪水肿病大肠埃希菌的多重PCR检测方法。分别针对大肠埃希菌16SrDNA、志贺毒素Stx2eA亚基和菌毛F18ab A亚基保守序列设计合成3对特异性引物,优化多重PCR反应条件,并进行特异性和敏感性检测。结果显示,阳性... 本研究旨在建立一种快速鉴定致猪水肿病大肠埃希菌的多重PCR检测方法。分别针对大肠埃希菌16SrDNA、志贺毒素Stx2eA亚基和菌毛F18ab A亚基保守序列设计合成3对特异性引物,优化多重PCR反应条件,并进行特异性和敏感性检测。结果显示,阳性对照菌株扩增产物大小分别为1 062、733和313bp。特异性和灵敏性检测结果表明,与肠炎沙门菌、多杀性巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌、支气管败血波氏杆菌和猪链球菌等猪常见致病菌均无交叉反应;菌体直接扩增法最低检出量为1 875CFU。利用建立的多重PCR检测方法对分离收集的128株大肠埃希菌进行鉴定,得到36株致猪水肿病大肠埃希菌,其中30株既有菌毛F18ab又产志贺毒素Stx2e,另外6株仅产志贺毒素Stx2e。结果表明,本试验所建立的多重PCR检测方法对致猪水肿病大肠埃希菌的快速诊断和流行病学调查具有一定的应用价值。 展开更多
关键词 猪水肿病 大肠埃希菌 志贺毒素Stx2e 菌毛F18ab
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海安县猪水肿病的流行病学与病原特性研究
9
作者 朱润芝 洪小花 +4 位作者 庞全海 李宏全 高崧 杨宏伟 丁永龙 《广东畜牧兽医科技》 2005年第2期34-38,共5页
对江苏省海安县2003年5月-2004年5月各乡镇猪水肿病的发病和死亡情况进行了流行病学调查,发现猪水肿病在该地区呈零星散发性发生,发病率为0.31%～1.84%,死亡率为0.07%～0.56%,病死率为16.0%～35.0%。水肿病主要侵害仔猪,育成猪也偶有发... 对江苏省海安县2003年5月-2004年5月各乡镇猪水肿病的发病和死亡情况进行了流行病学调查,发现猪水肿病在该地区呈零星散发性发生,发病率为0.31%～1.84%,死亡率为0.07%～0.56%,病死率为16.0%～35.0%。水肿病主要侵害仔猪,育成猪也偶有发生,一般以气温比较高的季节多发。同时从疑似猪水肿病的病料中分离到12株大肠杆菌,经O血清型鉴定,5株为O139,2株为O45,O55、O93、O9、O101、O119各1株。经多重PCR检测毒素基因(STa、STb、LT、SLT-2e)和大肠杆菌粘附素单抗(F4、F5、F6、F41、F18)检测菌毛,共6个分离株带有SLT-2e基因,其中O139分离株5株,O55分离株1株,其余6株均带STb基因。12个分离株中,单独表达F18菌毛的4株(O1392株,O45、O119各1株),F5+F411株(O93),F41+F181株(O139),F5+F41+F182株(均为O139)。经药敏试验,多数分离菌株对壮观霉素和新霉素高度敏感。 展开更多
关键词 猪 水肿病 大肠杆菌 O血清型 F38菌毛 致水肿病2型类志贺毒素 流行病学 海安县
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