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稳定转染MiR-499对P19CL6细胞向心肌细胞分化的影响 被引量:3
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作者 李贤慧 贾竹青 +2 位作者 崔庆华 马康涛 周春燕 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期316-322,共7页
小鼠miR-499基因包含在心肌重链肌球蛋白Myh7b基因的第19内含子中,并且在心肌细胞中特异表达,然而其在心肌细胞中表达的生物学功能和意义尚不清楚.利用可体外分化为心肌细胞的P19CL6细胞建立稳定表达miR-499的细胞株对研究miR-499的生... 小鼠miR-499基因包含在心肌重链肌球蛋白Myh7b基因的第19内含子中,并且在心肌细胞中特异表达,然而其在心肌细胞中表达的生物学功能和意义尚不清楚.利用可体外分化为心肌细胞的P19CL6细胞建立稳定表达miR-499的细胞株对研究miR-499的生物学功能具有重要意义.根据小鼠miR-499基因序列,设计PCR引物并将扩增产物定向克隆到pcDNA3.1中构建为真核表达载体并转染小鼠P19CL6细胞,经G418筛选建立了稳定转染的P19CL6-miR-499细胞株.用TaqMan探针实时定量PCR检测表明,P19CL6-miR-499细胞可成功表达成熟的miR-499.经1%DMSO诱导分化,RT-PCR、real-time PCR和激光共聚焦显微镜免疫荧光分析,结果表明,稳定转染miR-499对细胞分化早期的分子标志Isl1和Tbx5的表达没有明显影响,但是对分化晚期的特异性分子心肌α-肌动蛋白(α-cardiac actin)和心肌肌钙蛋白(troponin I)的表达有明显抑制作用,这提示miR-499主要对心肌细胞分化晚期有影响. 展开更多
关键词 小鼠miR-499 稳定转染 真核表达 心肌细胞分化 P19CL6细胞
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ISL1与PHF8相互作用促进小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化 被引量:1
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作者 李月娇 王洋 +5 位作者 郭晨 贾竹青 王卫平 陈苹 马康涛 周春燕 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1192-1198,共7页
近年的研究发现,在心肌细胞分化过程中,转录因子可以与表观修饰蛋白质结合进行更为精细的转录调控.作为转录因子的胰岛素基因增强子结合蛋白1(islet1,ISL1),在心血管发育过程中发挥至关重要的作用.然而,ISL1是否能够与表观修饰蛋白质相... 近年的研究发现,在心肌细胞分化过程中,转录因子可以与表观修饰蛋白质结合进行更为精细的转录调控.作为转录因子的胰岛素基因增强子结合蛋白1(islet1,ISL1),在心血管发育过程中发挥至关重要的作用.然而,ISL1是否能够与表观修饰蛋白质相互作用,从而发挥更为精细的调控作用,目前尚未明确.本室研究发现,ISL1在小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化过程中,能够与组蛋白去甲基化酶PHD指蛋白8(PHF8)相互作用从而促进分化.实时RT-PCR和Western印迹的方法检测显示,ES细胞向心肌细胞分化过程中ISL1和PHF8具有相似的表达谱.通过免疫共沉淀的方法检测分化过程中ISL1与PHF8的结合,通过染色质免疫沉淀的方法对二者在ISL1下游靶基因增强子区的结合水平进行检测,利用实时RT-PCR检测二者的相互结合对心肌细胞分化的影响.结果显示,ISL1能够与PHF8相互作用,共同结合在ISL1下游靶基因Mef2c和Myocd的增强子区,协同促进ES细胞向心肌细胞的分化.本研究证实,在心肌细胞分化过程中,ISL1存在与表观修饰蛋白质PHF8的相互作用,从而进一步促进心肌细胞的分化. 展开更多
关键词 胰岛素基因增强子结合蛋白1 PHF8 相互作用 心肌细胞分化
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shRNA沉默芳香烃受体表达对心肌细胞分化过程中WNT信号通路的影响
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作者 范志刚 朱春 +5 位作者 余章斌 胡晓山 李萌萌 朱金改 朱莎莎 韩树萍 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期666-669,共4页
目的观察芳香烃受体(AHR)基因沉默后对P19细胞向心肌分化进程中WNT信号通路的影响。方法根据小鼠AHR基因序列设计并构建AHR基因的shRNA真核表达载体,将AHR干扰质粒转染至P19细胞,通过G418筛选出稳定的AHR基因沉默表达的阳性细胞株,应用... 目的观察芳香烃受体(AHR)基因沉默后对P19细胞向心肌分化进程中WNT信号通路的影响。方法根据小鼠AHR基因序列设计并构建AHR基因的shRNA真核表达载体,将AHR干扰质粒转染至P19细胞,通过G418筛选出稳定的AHR基因沉默表达的阳性细胞株,应用实时荧光定量RT-PCR技术检测P19细胞分化过程中WNT信号通路中关键基因GSK3β、β-catenin mRNA的表达水平。结果构建的AHR-shRNA表达质粒能显著抑制AHR基因的表达;随着P19细胞向心肌细胞分化,实验组β-catenin基因的相对表达量低于对照组,而GSK3β基因的相对表达量则高于对照组,差异均有统计学意义(P均<0.01)。结论干扰AHR基因表达对心脏发育过程中WNT信号通路产生调节作用。 展开更多
关键词 芳香烃受体 心肌细胞分化 WNT信号通路 小鼠
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苯并[a]芘和1-羟基芘诱导人胚胎干细胞分化心肌细胞ROS、CYP基因表达和DNA损伤 被引量:4
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作者 吴彬彬 晏斌 +2 位作者 胡梅 陈曦 梁岩 《生态毒理学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期96-103,共8页
多环芳烃(PAHs)化合物中的苯并[a]芘和PAHs暴露检测标志物1-羟基芘与心脏功能障碍有关,但其生物学机制尚不清楚。为研究苯并[a]芘和1-羟基芘对心脏的毒性作用,基于人胚胎干细胞分化心肌细胞(hESC-CM)研究了苯并[a]芘和1-羟基芘对心肌细... 多环芳烃(PAHs)化合物中的苯并[a]芘和PAHs暴露检测标志物1-羟基芘与心脏功能障碍有关,但其生物学机制尚不清楚。为研究苯并[a]芘和1-羟基芘对心脏的毒性作用,基于人胚胎干细胞分化心肌细胞(hESC-CM)研究了苯并[a]芘和1-羟基芘对心肌细胞活性氧(ROS)生成、CYP基因表达和DNA损伤等的影响。结果表明,苯并[a]芘和1-羟基芘对h ESC-CM活性无影响,但能显著增强细胞ROS水平,诱导DNA损伤。此外,苯并[a]芘还能诱导细胞线粒体促凋亡基因的表达。研究表明,苯并[a]芘和1-羟基芘能通过诱导氧化应激和DNA损伤事件导致h ESC-CM损伤,在一定程度上解释了多环芳烃暴露导致心脏疾病的分子机制。 展开更多
关键词 多环芳烃 胚胎干细胞分化心肌细胞 DNA损伤
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hhlim促进DMSO诱导的P19细胞向心肌分化 被引量:4
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作者 郑斌 温进坤 +1 位作者 韩梅 周爱儒 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第6期506-511,共6页
为了确定hhlim是否参与胚胎期的心肌分化和发育过程 ,用可表达hhlim蛋白和hhlim反义RNA的真核表达质粒转染P19胚胎干细胞 ,经G4 18筛选得到稳定表达hhlim和hhlim反义RNA的P19细胞克隆后 ,观察hhlim对P19细胞向心肌分化和发育的影响 .结... 为了确定hhlim是否参与胚胎期的心肌分化和发育过程 ,用可表达hhlim蛋白和hhlim反义RNA的真核表达质粒转染P19胚胎干细胞 ,经G4 18筛选得到稳定表达hhlim和hhlim反义RNA的P19细胞克隆后 ,观察hhlim对P19细胞向心肌分化和发育的影响 .结果显示 ,Nkx2 5和GATA 4在未被外源性hhlim基因转染的P19细胞中不表达 .DMSO刺激细胞 2天后 ,GATA 4开始表达 ,3天后Nkx2 5的表达活性显著升高 .hhlim的过表达不但有利于P19细胞的存活和生长 ,而且还可以使Nkx2 5和GATA 4的表达比对照细胞提前 1天 .反义hhlim细胞株被DMSO诱导 5天后 ,细胞仍呈集落化生长 .同时 ,Nkx2 5和GATA 4开始表达的时间明显延滞 .结果表明 ,hhlim能促进P19细胞向心肌细胞分化 ,其作用是通过促进转录因子GATA 4和Nkx2 展开更多
关键词 hhlim基因 心肌细胞 转录因子 P19细胞 分化
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急性心肌梗死患者干细胞治疗的临床研究现状 被引量:2
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作者 陈韵岱 杨俊杰 《中国医学前沿杂志(电子版)》 2012年第6期1-4,6,共4页
急性心肌梗死严重危害人类健康,心肌细胞的不可再生和持续的心功能恶化导致其预后不良[1]。近年来,干细胞移植治疗缺血性心脏疾病正受到普遍关注[2]。从1998年美国生物学家发现人体多能干细胞开始[3],已预示着它在心肌梗死治疗领域巨大... 急性心肌梗死严重危害人类健康,心肌细胞的不可再生和持续的心功能恶化导致其预后不良[1]。近年来,干细胞移植治疗缺血性心脏疾病正受到普遍关注[2]。从1998年美国生物学家发现人体多能干细胞开始[3],已预示着它在心肌梗死治疗领域巨大的生物学理论意义及应用前景。 展开更多
关键词 临床研究 细胞治疗 心肌梗死后 骨骼肌成肌细胞 心肌细胞分化 缺血性心肌 胚胎心肌细胞 心脏功能 胚胎干细胞 左室收缩
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