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弓形虫表面抗原SAG3基因和IL-2基因佐剂混合诱导小鼠免疫应答研究 被引量:18
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作者 周永安 余新炳 +4 位作者 陈海峰 郑焕钦 殷国荣 吴忠道 陈观今 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第11期945-948,共4页
目的了解编码SAG3的重组质粒和IL-2基因佐剂在小鼠体内的免疫反应,为进一步的核酸疫苗及免疫学研究创造条件。方法将编码SAG3的质粒和鼠源性IL-2表达载体以100μg的剂量感染小鼠,3周中两次以相同的剂量加强免疫,分别以PBS和空质粒pcDNA... 目的了解编码SAG3的重组质粒和IL-2基因佐剂在小鼠体内的免疫反应,为进一步的核酸疫苗及免疫学研究创造条件。方法将编码SAG3的质粒和鼠源性IL-2表达载体以100μg的剂量感染小鼠,3周中两次以相同的剂量加强免疫,分别以PBS和空质粒pcDNA3.1感染。采用ELISA法测定抗体水平、亚型、IFN-γI、L-4和IL-2的含量,RT-PCR方法检测注射部位目的基因的转录,所有鼠均由强毒力ZS2株弓形虫感染。结果SAG3表达质粒3次免疫后鼠体内特异IgG水平明显上升,IL-2表达质粒的联合使用导致IgG2a水平的升高和IFN-γ的产生,提高了其分泌IL-2的水平,但对IL-4的水平产生轻微的影响;RT-PCR显示首次使用导致IgG2a水平的升高和IFN-γ的产生,提高了其分泌IL-2的水平,但对IL-4的水平产生轻微的影响;RT-PCR显示首次免疫15天后,目的基因在肌肉组织中仍有表达;混合质粒注射和小鼠抗弓形虫感染的存活时间延长。结论由SAG3 DNA诱导的免疫应答因IL-2表达质粒的共同注射而增强,DNA疫苗和适当细胞因子的共注射对抵抗弓形虫感染的效果值得进一步研究。 展开更多
关键词 DNA免疫 弓形虫表面抗原SAG3 基因佐剂 免疫应答
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弓形虫表面抗原SAG2基因片段的克隆与原核表达 被引量:7
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作者 龙彩虹 吴少庭 +4 位作者 翁亚彪 高世同 张仁利 林敏 周爱琴 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期42-45,共4页
目的 扩增弓形虫主要表面抗原 (SAG2 )编码基因片段并进行重组表达。方法 设计合成 1对引物 ,从弓形虫基因组DNA中扩增SAG2基因序列 ,以低熔点琼脂糖回收纯化 ,并以限制性内切酶BamHⅠ和SalⅠ进行双酶切、纯化后 ,再插入表达载体 pGEX... 目的 扩增弓形虫主要表面抗原 (SAG2 )编码基因片段并进行重组表达。方法 设计合成 1对引物 ,从弓形虫基因组DNA中扩增SAG2基因序列 ,以低熔点琼脂糖回收纯化 ,并以限制性内切酶BamHⅠ和SalⅠ进行双酶切、纯化后 ,再插入表达载体 pGEX - 4T - 2 ,经PCR和双酶切筛选 ,测序验证后 ,在大肠杆菌中进行表达 ,并用SDS -PAGE和Westernblot鉴定。结果 从弓形虫核酸提取物中扩增出约 477bp的SAG2基因 ,构建成功了重组质粒 pGEX - 4T - 2 -SAG2 ;SAG2基因在大肠杆菌中得到高效表达。SDS -PAGE电泳 pGEX - 4T - 2 -SAG2的融合蛋白条带的分子量约为 42kD ,Westen -blot显示融合蛋白能被兔抗弓形虫血清识别。结论 GST融合表达载体的构建和SAG2基因片段成功表达 ,为进一步为SAG2重组疫苗及重组诊断抗原的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 弓形虫表面抗原 SAG2基因片段 克隆 原核表达 免疫印迹
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弓形虫表面抗原和致密颗粒蛋白的研究进展 被引量:3
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作者 苑文英 刘辉 +1 位作者 刘秀华 刘嘉琳 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期289-292,共4页
关键词 弓形虫表面抗原 致密颗粒蛋白 致密颗粒抗原 棒状体蛋白 滋养体 生活史 配子体 裂殖体
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完整弓形虫P35重组蛋白IgM-酶联免疫吸附测定法检测弓形虫急性感染 被引量:4
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作者 吕斌 吴少廷 +5 位作者 周宜开 徐顺清 张仁利 高世同 林敏 张志仁 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第1期134-137,共4页
为利用重组的完整弓形虫表面抗原P35 GST蛋白对弓形虫感染进行血清学诊断 ,构建了可表达P35 GST的JM10 9细胞株 .采用亲和层析对融合蛋白进行分离和纯化 ,用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和蛋白质印迹 (Westernblot)分析所表达... 为利用重组的完整弓形虫表面抗原P35 GST蛋白对弓形虫感染进行血清学诊断 ,构建了可表达P35 GST的JM10 9细胞株 .采用亲和层析对融合蛋白进行分离和纯化 ,用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和蛋白质印迹 (Westernblot)分析所表达的蛋白质 ,并用纯化的重组蛋白进行IgM 酶联免疫吸附测定法 (IgM ELISA)检测不同病人血清中的抗 P35抗体 .SDS PAGE分析发现P35 GST重组蛋白的大小约 6 0ku ,为一亲水性蛋白 ,蛋白质印迹分析表明该蛋白与弓形虫阳性感染病人的血清有特异性反应 .利用P35 GST为抗原 ,对 6 0例血清进行IgM ELISA分析 ,发现P35 GST可明显区分近期感染和既往感染 ,在弓形虫的诊断上有很大的应用前景 . 展开更多
关键词 完整弓形虫表面抗原 P35-GST蛋白 弓形虫感染 IgM-酶联免疫吸附测定法
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寄生虫学
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《中国医学文摘(基础医学)》 CSCD 2005年第4期220-225,共6页
抗恶性疟原虫重组谷氨酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其鉴定;恶性疟原虫MESA基因的克隆和测序;海南省恶性疟原虫氯喹抗性相关基因Pfmdr1多态性分析;间日疟原虫MSPIC端基因亚克隆及在大肠埃希菌中的融合表达;NO在IL-12诱导抗伯氏疟原虫... 抗恶性疟原虫重组谷氨酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其鉴定;恶性疟原虫MESA基因的克隆和测序;海南省恶性疟原虫氯喹抗性相关基因Pfmdr1多态性分析;间日疟原虫MSPIC端基因亚克隆及在大肠埃希菌中的融合表达;NO在IL-12诱导抗伯氏疟原虫感染免疫效应中的作用;IL-12对伯氏疟原虫红内期感染小鼠Th1/Th2细胞因子表达水平的影响;儿童先天性病残与弓形虫感染关系的研究;宫内感染弓形虫影响儿童生长发育的观察;弓形虫表面抗原P22基因片段的克隆、表达及鉴定;弓形虫和乙型肝炎病毒混合核酸疫苗的研究Ⅱ.pcDNA3-HBsAg-GRA1在COS-7细胞中的表达及鉴定;弓形虫GRA7基因在大肠埃希菌中的表达;小鼠过继转移致敏小肠IEL抗弓形虫感染;弓形虫SAG1基因成熟蛋白编码区在大,肠杆菌中的表达;卡氏肺孢子虫肺炎动物模型的实验观察;丝虫特异IgG4检测试剂盒的研制;日本血吸虫FKBP12基因的原核克隆表达及表达产物的纯化;日本血吸虫中国大陆株雌性特异性DNA片段及重复序列的分离与鉴定;左旋咪唑防御日本血吸虫尾蚴感染的实验研究;核酸疫苗VR1012/Sj31粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染的研究;日本血吸虫染色体核型及其G带带型分析;蚯蚓与日本血吸虫间共同抗原的初步研究;致弱日本血吸虫尾蚴感染小鼠皮肤组织中CD11c分子的动态表达;日本血吸虫副肌球蛋白T细胞表位的预测和鉴定;日本血吸虫Sj14FABP与细胞因子IL-12重组质粒的构建和表达;Mago nashi:一个日本血吸虫性别决定基因的发现与鉴定;CpG ODN对B本血吸虫感染小鼠Th1/Th2细胞因子表达水平的影响;日本血吸虫Sj16基因重组杆状病毒的构建和鉴定;日本血吸虫精蠹酸酶基因启动子序列的扩增及序列分析;日本血吸虫天然抗原分子的柱纯析分离纯化与鉴定;铜锈环梭螺(Bellamya aeruginosa)作为广州管圆线虫中间宿主的发现;抗华支睾吸虫代谢抗原单克隆抗体的制备及鉴定研究;华支睾吸虫病大鼠肝细胞凋亡的实验研究;猪囊尾蚴液、固相多种抗原对囊虫病免疫诊断效果评价。 展开更多
关键词 日本血吸虫中国大陆株 寄生虫学 细胞因子表达水平 日本血吸虫尾蚴感染 Th1/Th2 弓形虫表面抗原 弓形虫感染 单克隆抗体 卡氏肺孢子虫肺炎
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