利用噬菌体肽库筛选与计算机模拟分子对接技术,优化异柠檬酸裂解酶肽类抑制剂的筛选.先通过噬菌体肽库筛选出与异柠檬酸裂解酶(ICL)具有高亲和力的结合肽,再利用Discovery Studio 2.1模拟多肽与ICL蛋白晶体(1F8I)的分子对接,最后用Fmoc...利用噬菌体肽库筛选与计算机模拟分子对接技术,优化异柠檬酸裂解酶肽类抑制剂的筛选.先通过噬菌体肽库筛选出与异柠檬酸裂解酶(ICL)具有高亲和力的结合肽,再利用Discovery Studio 2.1模拟多肽与ICL蛋白晶体(1F8I)的分子对接,最后用Fmoc固相合成法合成多肽,并对其生物活性进行检测.实验结果表明,通过噬菌体肽库筛选得到了29条七肽序列,其中12条可与ICL蛋白晶体成功对接.体外生物活性检测结果显示,得到的12条七肽均对ICL的活性有明显抑制作用(抑制率均超过50%).展开更多
在谷氨酸棒状杆菌乙酸盐代谢调控关键酶—异柠檬酸裂解酶 ace A基因两段启动子区域后面组装了无启动子的β-半乳糖苷酶报道基因 ,并且带上四环素抗性标记基因构建了两个检测质粒 p ROH7和 p ROHO.通过该两个质粒转化了谷氨酸棒状杆菌野...在谷氨酸棒状杆菌乙酸盐代谢调控关键酶—异柠檬酸裂解酶 ace A基因两段启动子区域后面组装了无启动子的β-半乳糖苷酶报道基因 ,并且带上四环素抗性标记基因构建了两个检测质粒 p ROH7和 p ROHO.通过该两个质粒转化了谷氨酸棒状杆菌野生型菌株 Corynebacterium glutamicum ACTT14 75 2 ,分别获得了含有两个检测质粒的两种谷氨酸棒状杆菌 ,由此建立了谷氨酸棒状杆菌在乙酸盐和葡萄糖基质上的两个蓝白生长筛选系统 .结果显示当两种菌株生长在含有葡萄糖的基本培养基上时呈现白色菌落 ,而生长在含有乙酸盐的基本培养基上时呈现蓝色菌落 ;其中菌落颜色还随菌株中检测质粒p ROH7和 p ROHO的不同而呈现淡蓝色和深蓝色的变化 .含有检测质粒 p ROH7和 p ROHO菌落的颜色变化反映了细胞在葡萄糖和乙酸盐不同和碳源上的调控状态 。展开更多
文摘利用噬菌体肽库筛选与计算机模拟分子对接技术,优化异柠檬酸裂解酶肽类抑制剂的筛选.先通过噬菌体肽库筛选出与异柠檬酸裂解酶(ICL)具有高亲和力的结合肽,再利用Discovery Studio 2.1模拟多肽与ICL蛋白晶体(1F8I)的分子对接,最后用Fmoc固相合成法合成多肽,并对其生物活性进行检测.实验结果表明,通过噬菌体肽库筛选得到了29条七肽序列,其中12条可与ICL蛋白晶体成功对接.体外生物活性检测结果显示,得到的12条七肽均对ICL的活性有明显抑制作用(抑制率均超过50%).
