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未知基因KH开放阅读框架真核表达载体的构建及其对K562细胞增殖的影响
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作者 何於娟 张彦 +3 位作者 刘小珊 马凌娣 欧一衡 蒋纪恺 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2004年第5期559-562,共4页
目的 :构建未知基因KH的开放阅读框架 (openreadingframe,ORF)的真核表达体系 ,初步探讨未知基因KH的功能。方法 :采用DNA重组技术将KH基因片段的开放阅读框架 (KH -ORF)亚克隆于表达载体 pCl-neoMammalianExpres sionVector,重组为pCI-... 目的 :构建未知基因KH的开放阅读框架 (openreadingframe,ORF)的真核表达体系 ,初步探讨未知基因KH的功能。方法 :采用DNA重组技术将KH基因片段的开放阅读框架 (KH -ORF)亚克隆于表达载体 pCl-neoMammalianExpres sionVector,重组为pCI-neo -KH -ORF真核表达体系 ,脂质体转染K5 6 2细胞 ,RT -PCR检测目的基因KH的表达。采用体外培养技术 ,通过 pCI -neo -KH -ORF质粒转染K5 6 2细胞前后的生长曲线和乳酸脱氢酶活性测定观察KH -ORF对K5 6 2细胞增殖速度的影响。结果 :KH -ORF在K5 6 2细胞中获得表达 ,对细胞增殖速度有明显影响。结论 :KH -ORF表达产物可能是一个与K5 6 2细胞增殖有关的功能蛋白质 。 展开更多
关键词 KH基因 开放阅读框架 真核表达 K562细胞 增殖
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K562细胞未知基因KH的开放阅读框架在大肠杆菌中的表达
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作者 何於娟 欧一衡 +4 位作者 张彦 刘小珊 马凌娣 涂植光 蒋纪恺 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2004年第2期124-126,共3页
目的 :构建K5 6 2细胞未知基因KH的开放阅读框架 (openreadingflame ,ORF)的原核表达体系。 方法 :采用DNA重组技术构建KH基因片段的开放阅读框架 (KH -ORF)的表达载体pCI-neo-KH -ORF ,热休克法转化大肠杆菌BL2 1(DE3)plysS ,IPTG诱导... 目的 :构建K5 6 2细胞未知基因KH的开放阅读框架 (openreadingflame ,ORF)的原核表达体系。 方法 :采用DNA重组技术构建KH基因片段的开放阅读框架 (KH -ORF)的表达载体pCI-neo-KH -ORF ,热休克法转化大肠杆菌BL2 1(DE3)plysS ,IPTG诱导后 ,SDS -PAGE鉴定目的蛋白的表达。结果 :经IPTG诱导 0 .5h后KH -ORF在BL2 1(DE3)plysS中获得表达 ,表达产物以包涵体形式存在 ,分子产量约 2 4kD。结论 :成功构建了KH -ORF的原核表达体系 ,为进一步研究其功能奠定了基础。 展开更多
关键词 K562细胞 KH基因 开放阅读框架 原核表达
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小鹅瘟病毒GPV-YG株主要开放性阅读框架核苷酸序列分析
3
作者 葛艳 尤永进 +2 位作者 徐泉兴 陈谊 饶忠 《上海农业学报》 CSCD 2005年第2期11-15,共5页
通过PCR技术分段扩增小鹅瘟病毒(Gooseparvovirus,GPV)扬州分离株GPV YG的2个主要开放性阅读框架(openreadingframe,ORF)基因,对扩增产物进行核苷酸序列测定,其结果在GenBank登录。将上述序列与登录的国外参考株GPV-B株作比较,GPV-YG主... 通过PCR技术分段扩增小鹅瘟病毒(Gooseparvovirus,GPV)扬州分离株GPV YG的2个主要开放性阅读框架(openreadingframe,ORF)基因,对扩增产物进行核苷酸序列测定,其结果在GenBank登录。将上述序列与登录的国外参考株GPV-B株作比较,GPV-YG主要ORF核苷酸序列与GPV-B的同源性为94%,显示二者亲缘关系密切。在此基础上,分别确定了GPV-YG编码结构蛋白和非结构蛋白的基因组序列,并推导出GPV-YG结构蛋白和非结构蛋白的相应的氨基酸序列,GPV-YG与GPV B结构蛋白的氨基酸序列同源性为96.4%,非结构蛋白同源性为97.9%,由此进一步分析了GPV-YG结构蛋白和非结构蛋白的氨基酸序列与功能特征。同时,将GPV-YG主要ORF与番鸭细小病毒(MuscovyDuckParvovirus,MDPV)FM作比较,核苷酸序列同源性为80%,非结构蛋白推导氨基酸序列同源性为89.6%,结构蛋白为84.6%。 展开更多
关键词 小鹅瘟病毒 开放阅读框架 核苷酸序列分析 GPV-YG株 小鹅瘟
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戊型肝炎病毒开读框架(ORF2)1.3kb片断巴斯德毕赤酵母表达载体的构建
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作者 张春江 沈心亮 +1 位作者 雷清 李启民 《兰州大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期127-131,共5页
戊型肝炎病毒 (HEV)基因组为单链正股 RNA,整个基因组有 3个开放性阅读框架(ORFs) ,ORF2是主要结构基因编码区 ,将 HEV ORF2 1.3Kb基因与分泌性表达质粒 p HIL - S1和 p PIC9重组 ,构成受醇氧化酶 (AOX1)的启动子与转录终止区控制的酵... 戊型肝炎病毒 (HEV)基因组为单链正股 RNA,整个基因组有 3个开放性阅读框架(ORFs) ,ORF2是主要结构基因编码区 ,将 HEV ORF2 1.3Kb基因与分泌性表达质粒 p HIL - S1和 p PIC9重组 ,构成受醇氧化酶 (AOX1)的启动子与转录终止区控制的酵母表达质粒 ,酶切线性化后转化入 GS115酵母菌 ,经表型筛选 ,PCR扩增筛选阳性克隆 。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 开放阅读框架 orf2 1.3kb基因 巴斯德毕赤酵母 表达载体
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细胞质雄性不育表型及不育机制研究进展
5
作者 王雪松 邹益 +2 位作者 王杰 聂丽云 武志强 《广西植物》 北大核心 2025年第3期483-499,共17页
植物线粒体基因组内特殊的开放阅读框(open reading frame,ORF)导致植物不产生雄配子或产生的雄配子无法正常受精,这种现象被称为细胞质雄性不育(cytoplasmic male sterility,CMS)。CMS材料雄配子稳定败育的特性使其在杂交种商业化生产... 植物线粒体基因组内特殊的开放阅读框(open reading frame,ORF)导致植物不产生雄配子或产生的雄配子无法正常受精,这种现象被称为细胞质雄性不育(cytoplasmic male sterility,CMS)。CMS材料雄配子稳定败育的特性使其在杂交种商业化生产中一直扮演着重要角色,有效降低了制种成本,提高了杂交种纯度。随着对CMS现象研究的深入,新的CMS材料通过各种手段被不断创制出来,相关的不育基因也逐渐被定位和克隆。该文首先概述了目前对CMS基因进化的研究和常用CMS材料及其相关CMS基因的挖掘情况,随后总结了CMS材料在物质能量代谢、激素水平等方面的表型特点。同时整合了当前对CMS分子机制的几种假说,并结合实验证据提出对CMS分子机制的观点。以期在总结当前细胞质雄性不育研究的基础上对未来更加深入的理论和实验研究提供参考。 展开更多
关键词 细胞质雄性不育 线粒体基因组 活性氧(ROS) 开放阅读框(orf) CMS分子机制
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用带有猪IL-15基因和PRRSV的ORF5基因的质粒免疫小鼠可提高免疫效果
6
《中国猪业》 2011年第11期69-69,共1页
猪PRRSV的开放阅读框5(ORF5)编码了主要的衣壳糖蛋白GP5。GP5蛋白作为一个候选基因可预防PRRSV感染。在本研究中,重组构建了表达GP5基因和IL-15基因的质粒。小鼠用质粒进行免疫,
关键词 PRRSV感染 orf5基因 免疫效果 免疫小鼠 质粒 GP5蛋白 开放阅读
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猫杯状病毒实时荧光定量逆转录PCR检测方法的建立
7
作者 李静怡 熊雷 +4 位作者 黄莉璎 刘晓鹏 杨盛奋 金京勋 王弋 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第12期64-72,共9页
为了建立可快速检测猫杯状病毒(FCV)的方法,本试验采用肽核酸(PNA)设计分子信标荧光探针,优化反应体系和条件,建立了FCV实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测方法,对该方法的敏感性、特异性和重复性进行验证,并进行临床样本检测。结果显... 为了建立可快速检测猫杯状病毒(FCV)的方法,本试验采用肽核酸(PNA)设计分子信标荧光探针,优化反应体系和条件,建立了FCV实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测方法,对该方法的敏感性、特异性和重复性进行验证,并进行临床样本检测。结果显示,建立的RT-qPCR检测FCV参考株具有良好的线性关系(R^(2)=0.9995),最低检测限为1×10^(2)TCID_(50)/mL,对其他相关病毒无有效响应,组内变异系数和组间变异系数均小于1%。应用该方法检测33份临床样本,阳性率为51.5%。由此可见,本试验建立的RT-qPCR敏感性、特异性和重复性均良好,可为FCV的早期快速诊断和疫病防控等提供检测手段。 展开更多
关键词 猫杯状病毒(FCV) 肽核酸(PNA) 分子信标荧光探针 实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR) 开放阅读框(orf)
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RT-nPCR检测屠宰场胆汁中猪戊型肝炎病毒 被引量:6
8
作者 张维谊 刘健 +1 位作者 鞠厚斌 周锦萍 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2009年第11期29-31,共3页
关键词 戊型肝炎病毒 PCR检测 屠宰场 中猪 胆汁 开放读码框架 virus orf2
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大白菜细胞质雄性不育系RAPD特异扩增片段的克隆及其序列分析 被引量:8
9
作者 王永飞 马三梅 +2 位作者 张鲁刚 王鸣 郑学勤 《西北植物学报》 CAS CSCD 2003年第1期49-53,共5页
利用RAPD技术从大白菜细胞质雄性不育系CMS3411-7的DNA中得到1个特异扩增片段CMSO-PL01670,进一步以该片段为探针进行Dot和Southern杂交证实了该片段为不育系所特有。回收该特异扩增片段并将其克隆到pGEM-TEasy载体上进行序列测定。测... 利用RAPD技术从大白菜细胞质雄性不育系CMS3411-7的DNA中得到1个特异扩增片段CMSO-PL01670,进一步以该片段为探针进行Dot和Southern杂交证实了该片段为不育系所特有。回收该特异扩增片段并将其克隆到pGEM-TEasy载体上进行序列测定。测序结果表明该片段全长673bp,其碱基组成为A+T=67.16%。通过与GenBank+EMBL+DDBJ+PDB中的455972个序列进行比较,同源性均小于30%,表明该片段为一新发现序列。并且该序列的+4~+216的区域内含有1个可编码70个氨基酸的开放阅读框架。上述结果为今后从分子水平进一步研究大白菜细胞质雄性不育打下了坚实的基础。 展开更多
关键词 大白菜 细胞质雄性不育系 RAPD特异扩增 克隆 序列分析 开放阅读框架
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江门株诺如病毒重组鉴定及分析 被引量:6
10
作者 宋灿磊 戴迎春 +2 位作者 胡贵方 向文龙 聂军 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2010年第7期1104-1106,共3页
目的:对诺如病毒(norovirus,NoV)NoV/Jiangmen056/2006/china和NoV/Jiangmen380/2006/china株进行重组鉴定分析。方法:用JV12Y/JV13I、COG2F/GⅡSKR、JV12Y/GⅡSKR三对引物对NoV基因组不同区域分别进行RT-PCR,PCR产物纯化回收、测序,利... 目的:对诺如病毒(norovirus,NoV)NoV/Jiangmen056/2006/china和NoV/Jiangmen380/2006/china株进行重组鉴定分析。方法:用JV12Y/JV13I、COG2F/GⅡSKR、JV12Y/GⅡSKR三对引物对NoV基因组不同区域分别进行RT-PCR,PCR产物纯化回收、测序,利用ClustalX、MEGA4.1、SimPlot3.5.1软件分析其基因序列。结果:NoV/Jiangmen056/2006/china株由Lordsdal株的RdRp区和Mexico株的capsid区重组而成,而NoV/Jiangmen380/2006/china株由NLV/VannesL169/2000株的RdRp区和SaKaeo-53株的capsid区重组而成。结论:NoV/Jiangmen056/2006/china和NoV/Jiangmen380/2006/china是两种不同型别NoV重组株,而后者是国内首次检出的新型GⅡ.bNoV重组株,上述结果丰富了我国重组NoV的研究资料。 展开更多
关键词 诺罗病毒 重组 RNA依赖RNA聚合酶 衣壳 开放阅读框架
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植物CMS不育基因的研究进展 被引量:2
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作者 杨慧丽 杨露 +3 位作者 张怀胜 林亚楠 李冰 薛亚东 《广东农业科学》 CAS 2018年第10期9-16,共8页
植物细胞质雄性不育是指植物的生殖器官不能产生雄配子,而雌器官发育正常,可接受外来花粉正常结实的一种生物学现象。细胞质雄性不育是由核基因和线粒体基因互作共同起作用,影响了植物花药的绒毡层和正在进行减数分裂的细胞,从而导致植... 植物细胞质雄性不育是指植物的生殖器官不能产生雄配子,而雌器官发育正常,可接受外来花粉正常结实的一种生物学现象。细胞质雄性不育是由核基因和线粒体基因互作共同起作用,影响了植物花药的绒毡层和正在进行减数分裂的细胞,从而导致植物体花粉产生败育。在生产上细胞质雄性不育对于作物杂种优势的利用、杂交种的制种都有重要意义。雄性不育现象无论是在遗传方向还是分子水平上一直以来都是科学家们研究的热点,深入研究细胞质雄性不育的机制有利于更有效地在生产上加以利用。对近年来植物细胞质雄性不育中发现的细胞质雄性不育基因的来源及分类、细胞质雄性不育与杂种优的相互关系、细胞质雄性不育的机理及目前发现的细胞质雄性不育基因进行概述,并探讨了植物细胞质雄性不育研究的发展前景。 展开更多
关键词 细胞质雄性不育 杂种优势 线粒体基因 细胞核基因 开放阅读框(orf) 基因重组
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真核生物中的“双重编码”现象 被引量:1
12
作者 申志勇 李稚锋 +1 位作者 杭兴宜 张成岗 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第5期536-540,共5页
双重编码(dual coding)是指一段mRNA序列同方向上存在两个开放阅读框架,从而可编码不同氨基酸序列的现象.双重编码现象在原核生物、噬菌体和病毒中作为一种可有效利用基因组的方式而普遍存在.新近报道,在真核生物中也存在双重编码现象,... 双重编码(dual coding)是指一段mRNA序列同方向上存在两个开放阅读框架,从而可编码不同氨基酸序列的现象.双重编码现象在原核生物、噬菌体和病毒中作为一种可有效利用基因组的方式而普遍存在.新近报道,在真核生物中也存在双重编码现象,对于认识真核生物基因表达调控的机制提供了新的信息. 展开更多
关键词 双重编码基因 开放阅读框架 真核生物
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黄颡鱼生长激素cDNA序列克隆及其序列分析 被引量:5
13
作者 孙玉华 谢从新 《水利渔业》 北大核心 2006年第3期10-13,共4页
采用RT-PCR方法,首次从黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)脑垂体总RNA中克隆出生长激素(growth hormone,GH)cDNA的开放阅读框ORF(open reading frame)序列,长603nt,推导的GH前体由200个氨基酸组成。以生长激素氨基酸序列为分子标记,比较... 采用RT-PCR方法,首次从黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)脑垂体总RNA中克隆出生长激素(growth hormone,GH)cDNA的开放阅读框ORF(open reading frame)序列,长603nt,推导的GH前体由200个氨基酸组成。以生长激素氨基酸序列为分子标记,比较了包括黄颡鱼在内的鲇形目6科9种鱼类的生长激素氨基酸序列同源性,并用PHYLIP软件构建了鲇形目6科9种鱼类的系统发育树,可识别3个大的单系类群,即类群Ⅰ:鲇科Siluridae;类群Ⅱ:芒鲇科Pangasiidae+(鱼尝科Bagridae+异囊鲇科Heteropneustidae);类群Ⅲ:鱼回科Ictaluridae+胡子鲇科Clariidae。 展开更多
关键词 黄颖鱼 鲇形目 生长激素eDNA 开放阅读orf
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口蹄疫病毒基因组结构及功能最新研究进展 被引量:5
14
作者 张克山 刘永杰 +1 位作者 卢国栋 刘湘涛 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期836-838,共3页
口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth dis-ease virus,FMDV)引起的一种急性、热性、高度接触性人兽共患传染病。口蹄疫的暴发和流行带来严重的经济损失和不良的政治影响,同时对人们身体健康带来严重威胁,被世界动物卫生组织列为必须... 口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth dis-ease virus,FMDV)引起的一种急性、热性、高度接触性人兽共患传染病。口蹄疫的暴发和流行带来严重的经济损失和不良的政治影响,同时对人们身体健康带来严重威胁,被世界动物卫生组织列为必须上报的动物传染病之首。FMDV基因组RNA全长约为8.5kb,由5′非翻译区(5′UTR),开放阅读框架(ORF)和3′非翻译区(3′UTR)组成, 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 病毒基因组结构 世界动物卫生组织 人兽共患传染病 基因组RNA 开放阅读框架 非翻译区 动物传染病
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反向遗传学在猪繁殖与呼吸综合征病毒研究中的应用 被引量:3
15
作者 翟新验 韩焘 周智 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2014年第4期52-53,共2页
反向遗传学遵循“中心法则”,在获得生物体基因组全部序列的基础上,通过对靶基因进行必要的加工和修饰,再按组成顺序构建含生物体必需元件的修饰基因组,让其装配出具有生命活性的个体[1].猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)为单股正链RNA... 反向遗传学遵循“中心法则”,在获得生物体基因组全部序列的基础上,通过对靶基因进行必要的加工和修饰,再按组成顺序构建含生物体必需元件的修饰基因组,让其装配出具有生命活性的个体[1].猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)为单股正链RNA病毒,基因组约为15 kb,有8个开放阅读框架(ORF),ORF1位于基因组的5’末端,编码病毒非结构蛋白,ORF2~7位于基因组的3’末端,编码病毒结构蛋白,PRRSV能引起母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疫病. 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 反向遗传学 正链RNA病毒 应用 开放阅读框架 病毒结构蛋白 母猪繁殖障碍 基因组
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PRRSV的荧光抗体和RT-PCR方法检测 被引量:1
16
作者 赵化阳 白玉 +6 位作者 李玉荣 苏晓鸥 尹小敏 周向梅 杨建民 赵德明 刘思当 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第8期68-69,共2页
关键词 PRRSV PCR方法 荧光抗体 正链RNA病毒 猪繁殖与呼吸综合征 检测 RT 开放阅读框架
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生物信息流中序列分析软件的设计与开发
17
作者 郭涛 唐善虎 唐维敏 《计算机工程》 CAS CSCD 北大核心 2006年第17期271-273,共3页
介绍了基于Java语言的跨平台生物信息分析平台的设计与实现过程,并对软件系统结构、功能模块、关键技术进行了阐述。该系统能完成生物信息流中序列分析工作。它的开发为从事生物信息学研究的人员提供了有效的数据处理和分析工具。
关键词 酶切位图 多序列比对 开放阅读框架(orf)
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鸡痘病毒282E_4株基因组末端非必需区的序列测定与分析
18
作者 金宁一 司兴奎 +3 位作者 顾万钧 郭志儒 罗坤石 毅殷震 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1999年第9期46-51,共6页
将鸡痘病毒(fowlpox virus, FPV)282E4 株73kb 的Bam HI片段经亚克隆后,获得pUFa、pKSFb、pUFc和pUFd 四个重组策粒。采用ABI377DNA测序仪荧光标记法对上述质粒进行了序... 将鸡痘病毒(fowlpox virus, FPV)282E4 株73kb 的Bam HI片段经亚克隆后,获得pUFa、pKSFb、pUFc和pUFd 四个重组策粒。采用ABI377DNA测序仪荧光标记法对上述质粒进行了序列测定, 并应用DNAsis V70 同GenBank 中已知的FPV序列和痘苗病毒(vaccinia virus, VV) 的Copenhagen 株的全序列进行同源性比较。此外, 对所测序列的开放读码框架(open reading fram es,ORF) 的氨基酸序列同上述VV株中所有ORF的氨基酸序列进行了同源性比较,并对各ORF编码蛋白的疏水性、等电点。 展开更多
关键词 鸡痘病毒 序列分析 开放读码框架 FPV orf
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广东省猪繁殖与呼吸综合征病毒的限制性片段长度多态性分析
19
作者 周丽萍 罗满林 +1 位作者 刘镇明 贺东生 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第11期13-15,共3页
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 限制性片段长度多态性分析 广东省 RNA病毒 结构蛋白 orf5 开放阅读 核衣壳蛋白
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猪瘟病毒HL-LY地方株E2基因在毕赤酵母中的高效表达
20
作者 于晓龙 张海峰 +1 位作者 宋岩 李一经 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2006年第6期25-27,共3页
关键词 猪瘟病毒 E2基因 高效表达 毕赤酵母 地方株 非结构蛋白 开放阅读框架 多聚蛋白 基因组大小 黄病毒科
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