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巴斯德毕赤酵母表达系统的研究进展和前景展望 被引量:20
1
作者 娄瑞娟 罗利龙 +2 位作者 张霞 张瑞刚 宋水山 《生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第5期73-76,共4页
巴斯德毕赤酵母经过近二十来年的发展,已经成为表达外源基因的优秀表达系统之一,成功地表达了许多重组异源蛋白。从表达菌株,表达载体等方面详细综述了毕赤酵母表达系统的优点,如:营养要求低、可高密度发酵、遗传稳定性高等;分析了可能... 巴斯德毕赤酵母经过近二十来年的发展,已经成为表达外源基因的优秀表达系统之一,成功地表达了许多重组异源蛋白。从表达菌株,表达载体等方面详细综述了毕赤酵母表达系统的优点,如:营养要求低、可高密度发酵、遗传稳定性高等;分析了可能影响巴斯德毕赤酵母表达系统的相关因素,这些因素包括外源基因的特性、基因拷贝数、产物稳定性及发酵策略等,结合这些因素和具体实践经验,就如何提高外源基因在巴斯德毕赤酵母中表达量进行了阐述;讨论了该表达系统存在的不足之处并且展望了其发展前景。 展开更多
关键词 巴斯德毕赤酵母 表达系统 外源基因 高效表达
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巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展 被引量:10
2
作者 王黎明 王琦 梅汝鸿 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2004年第2期42-45,共4页
巴斯德毕赤酵母外源基因表达系统是近年来发展的一种优秀的真核表达系统 ,与传统的大肠杆菌和酿酒酵母表达体系相比 ,其具有的诸多优势使之研究价值及应用价值不断体现。综述了其在生物学特性、表达载体、基因整合、外源蛋白的分泌、诱... 巴斯德毕赤酵母外源基因表达系统是近年来发展的一种优秀的真核表达系统 ,与传统的大肠杆菌和酿酒酵母表达体系相比 ,其具有的诸多优势使之研究价值及应用价值不断体现。综述了其在生物学特性、表达载体、基因整合、外源蛋白的分泌、诱导表达及发酵等方面的基础研究及新近研究进展。 展开更多
关键词 巴斯德毕赤酵母 基因表达系统 外源蛋白 生物学特性 表达载体 基因整合 真核表达系统
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巴斯德毕赤酵母表达系统在外源基因表达中的研究进展 被引量:26
3
作者 罗竞红 游自立 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第3期75-79,共5页
巴斯德毕赤酵母是目前应用最广泛的外源蛋白表达系统。分别从的菌株、载体、外源基因整合、表达产物糖基化和外源基因高效表达等方面综述了毕赤酵母表达系统的研究进展。
关键词 巴斯德毕赤酵母 表达系统 外源基因 糖基化 高效表达
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巴斯德毕赤酵母表达系统及其在饲料添加剂开发上的应用前景 被引量:6
4
作者 许英蕾 孙建义 刘明启 《饲料工业》 2005年第2期40-42,共3页
经过近15年来的不断开发和完善,巴斯德毕赤酵母已经成为目前最成功的酵母表达系统之一。由于该酵母具有高水平表达的潜力和能进行高密度发酵,它的大规模发酵可用于生产多种新的蛋白。一些生长激素、酶、抗菌肽在毕赤酵母中的成功表达展... 经过近15年来的不断开发和完善,巴斯德毕赤酵母已经成为目前最成功的酵母表达系统之一。由于该酵母具有高水平表达的潜力和能进行高密度发酵,它的大规模发酵可用于生产多种新的蛋白。一些生长激素、酶、抗菌肽在毕赤酵母中的成功表达展示了该表达系统在饲料添加剂开发上的广阔应用前景。 展开更多
关键词 巴斯德毕赤酵母 酵母表达系统 抗菌肽 蛋白 高密度发酵 生长激素 展示 饲料添加剂 应用前景 生产
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巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展 被引量:1
5
作者 魏凡华 曹瑞兵 +1 位作者 吴润 陈溥言 《农业科学研究》 2007年第1期68-71,共4页
巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统是基因工程研究中广泛使用的真核表达系统,对Pichia pastoris基因结构、载体元件以及影响外源基因表达的因素等进行了较为全面的综述.
关键词 巴斯德毕赤酵母 基因表达系统 研究进展
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巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展 被引量:6
6
作者 李志龙 张富春 《生物技术通报》 CAS CSCD 2006年第6期9-13,共5页
巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)表达体系是近年发展起来的最为成功的真核表达体系。对巴斯德毕赤酵母表达系统及影响外源基因在巴斯德毕赤酵母中表达的因素进行了简要综述。
关键词 巴斯德毕赤酵母 外源基因 表达
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浅析巴斯德毕赤酵母表达系统的研究 被引量:1
7
作者 王艳 《山东畜牧兽医》 2010年第10期86-87,共2页
对于一个有商业潜质和广阔市场前景的兽用蛋白质类药物的研究,主要是要寻找一条稳定的工艺条件和获得较高的工作效率,巴斯德毕赤酵母表达系统就具有这方面的优点,其优越性表现在:分泌性表达,不需要复性,有效率为100%,纯化程序简单,大... 对于一个有商业潜质和广阔市场前景的兽用蛋白质类药物的研究,主要是要寻找一条稳定的工艺条件和获得较高的工作效率,巴斯德毕赤酵母表达系统就具有这方面的优点,其优越性表现在:分泌性表达,不需要复性,有效率为100%,纯化程序简单,大大降低了生产成本,尤其适用于动物干扰素的表达。 展开更多
关键词 毕赤酵母表达系统 巴斯德 分泌性表达 蛋白质类 市场前景 工作效率 工艺条件 生产成本
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巴斯德毕赤酵母的基因表达系统研究进展 被引量:65
8
作者 欧阳立明 张惠展 +1 位作者 张嗣良 刘志敏 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第2期151-154,共4页
巴斯德毕赤酵母是一种近年来广泛使用的基因表达系统 ,它具有表达率高、遗传稳定、产物可分泌、发酵工艺成熟等许多优点 .综述了该系统在载体类型、载体元件 (包括启动子、选择标记和信号肽序列 )、受体类型。
关键词 巴斯德毕赤酵母 基因表达系统 载体 受体
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纳豆激酶基因在巴斯德毕赤酵母中的表达 被引量:14
9
作者 罗立新 黄志立 +2 位作者 潘力 杨汝德 梁世中 《华南理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第2期1-4,共4页
构建pPICZαA-NK重组质粒,并转化入E-coli TOP-10中,得到转纳豆激酶基因工程菌,提取重组质粒经单酶切、双酶切、PCR分析及序列测定,证明克隆到载体pPICZαA上的外源基因即为纳豆激酶基因.将重组质粒pPICZαA-NK线性化后,分别转化毕赤酵... 构建pPICZαA-NK重组质粒,并转化入E-coli TOP-10中,得到转纳豆激酶基因工程菌,提取重组质粒经单酶切、双酶切、PCR分析及序列测定,证明克隆到载体pPICZαA上的外源基因即为纳豆激酶基因.将重组质粒pPICZαA-NK线性化后,分别转化毕赤酵母GS115与KM71,在含ZeocinTM的选择性YEPD平板筛选到重组酵母.经检测重组酵母发酵上清液中具纳豆激酶溶纤活性,SDS-PAGE电泳结果表明外源蛋白的表达量占菌体蛋白的10%左右. 展开更多
关键词 巴斯德毕赤酵母 纳豆激酶基因 基因表达 基因工程 溶纤活性 基因克隆 重组质粒
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猪囊尾蚴抗原cC1在巴斯德毕赤酵母中的表达 被引量:11
10
作者 杨湘越 孙树汉 +2 位作者 陈蕊雯 郭瀛军 颜宏利 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第3期31-33,67,共4页
目的 克隆并在巴斯德毕赤酵母中表达猪囊尾蚴抗原cC1。方法 用PCR法在cC1cDNA5′端引入所需限制酶位点和酵母分泌信号肽 ,与酵母表达载体pPIC9k重组 ,构建表达质粒 pPIC9k -cC1。采用电穿孔法转化酵母菌SMD116 8,在MD平板上筛选重组克... 目的 克隆并在巴斯德毕赤酵母中表达猪囊尾蚴抗原cC1。方法 用PCR法在cC1cDNA5′端引入所需限制酶位点和酵母分泌信号肽 ,与酵母表达载体pPIC9k重组 ,构建表达质粒 pPIC9k -cC1。采用电穿孔法转化酵母菌SMD116 8,在MD平板上筛选重组克隆 ,用G4 18快速筛选高拷贝转化子 ,阳性克隆经甲醇诱导表达后 ,培养上清SDS -PAGE和Westernblot鉴定。结果 PCR产物经测序无误 ,pPIC9-cC1和 pPIC9k -cC1酶切分析与预期相符 ,获取 86 3个酵母阳性重组克隆及9个高拷贝转化子。表达产物cC1的分子量约 4 2kDa ,占分泌总蛋白 80 %以上 ,产物浓度为 2 0 0 - 35 0mg/L。Westernblot证实表达产物具有天然cC1分子的免疫原性。结论 在巴斯德毕赤酵母中成功表达了猪囊尾蚴cC1抗原 。 展开更多
关键词 cC1cDNA 克隆表达 巴斯德毕赤酵母 囊虫病 猪囊尾蚴
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乙型脑炎病毒E蛋白在巴斯德毕赤酵母中的表达 被引量:5
11
作者 吴玉水 任君萍 +6 位作者 黄庆生 丁天兵 张伟 宋建华 朱忠勇 张红毅 马文煜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期130-131,135,共3页
目的 :用巴斯德毕赤酵母系统表达乙型脑炎病毒 (JEV)E蛋白。方法 :将JEVE蛋白基因亚克隆入真核表达载体 pPIC9K ,以电穿孔法转化酵母SMD116 8。用MD平板筛选重组子、G4 18筛选高拷贝转化子 ,经甲醇诱导表达后 ,SDS PAGE和免疫印迹分析... 目的 :用巴斯德毕赤酵母系统表达乙型脑炎病毒 (JEV)E蛋白。方法 :将JEVE蛋白基因亚克隆入真核表达载体 pPIC9K ,以电穿孔法转化酵母SMD116 8。用MD平板筛选重组子、G4 18筛选高拷贝转化子 ,经甲醇诱导表达后 ,SDS PAGE和免疫印迹分析表达产物。结果 :由于糖基化不同 ,所表达产物的相对分子质量 (Mr)约为 1130 0 0和 780 0 0 ,表达量约为5 0mg/L。结论 :在巴斯德比赤酵母中成功地表达了JEVE蛋白 。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 E蛋白 基因克隆 蛋白表达 巴斯德毕赤酵母 电穿孔法
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人干燥综合征B抗原在巴斯德毕赤酵母菌中的高效分泌表达研究 被引量:5
12
作者 杨湘越 兰小鹏 +3 位作者 吴文冰 冯福英 廖剑 朱忠勇 《医学研究生学报》 CAS 2006年第11期976-979,共4页
目的:通过基因克隆在巴斯德毕赤酵母菌中表达人干燥综合征B(SS—B)抗原。方法:PCR扩增SS—B基因,与酵母菌表达载体pPIC9k重组,构建表达质粒pPIC9k—SS—B。用电穿孔法转化酵母菌SMD1168,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选... 目的:通过基因克隆在巴斯德毕赤酵母菌中表达人干燥综合征B(SS—B)抗原。方法:PCR扩增SS—B基因,与酵母菌表达载体pPIC9k重组,构建表达质粒pPIC9k—SS—B。用电穿孔法转化酵母菌SMD1168,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选高拷贝转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达后,培养上清用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)和免疫酶斑点法鉴定。结果:PCR产物约为1200bp,与预期1224bp接近;pPIC9k—SS-B重组阳性克隆测序结果与GenBank核酸数据库报道完全一致,双酶切鉴定正确。表达产物SS-B的相对分子质量约48000,高拷贝毕赤酵母菌转化菌显著高于低拷贝的表达水平,表达量占分泌总蛋白的60%以上,产物浓度为800~900mg/L。免疫酶斑点法证实表达产物具有天然SS—B分子的免疫原性。阴性对照菌未见目的表达条带。结论:SS—B存巴斯德毕赤酵母菌中获得高效分泌表达,为下一步研究打下了基础。 展开更多
关键词 人干燥综合征B抗原 克隆表达 巴斯德毕赤酵母
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人白细胞介素12基因在巴斯德毕赤酵母细胞中的表达(英文) 被引量:4
13
作者 陈新华 敖敬群 +3 位作者 杨林 龙綮新 王珣章 陈曲侯 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期423-427,共5页
人白细胞介素 12 (hIL 12 )是人体内具有多种生物学活性的免疫调节因子 ,由p4 0和p35两个亚基经多对二硫键连接而成 .根据hIL 12的结构特点 ,采用LiCl二次转化将hIL 12的p4 0和p35两亚基基因导入巴斯德毕赤酵母X33细胞中 ,并经同... 人白细胞介素 12 (hIL 12 )是人体内具有多种生物学活性的免疫调节因子 ,由p4 0和p35两个亚基经多对二硫键连接而成 .根据hIL 12的结构特点 ,采用LiCl二次转化将hIL 12的p4 0和p35两亚基基因导入巴斯德毕赤酵母X33细胞中 ,并经同源交换分别插入酵母基因组AOX1区域 ,构建成含hIL 12双亚基基因的酵母工程菌PichiapastorisX33 p4 0 p35 .经 0 .5 %甲醇诱导 ,p4 0和p35两亚基在同一酵母细胞中得到了表达 ,并组装成具有生物学活性的hIL 展开更多
关键词 人白细胞介素-12基因 巴斯德毕赤酵母细胞 LiCl二次转化 活性表达
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突变型人白细胞介素-2基因在巴斯德毕赤酵母中的表达 被引量:6
14
作者 刘堰 胡应和 +1 位作者 欧阳克清 蔡绍皙 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期618-624,共7页
为了提高人重组白细胞介素 2的稳定性和活性以及减少毒副作用 ,有必要定向改造rhIL 2的分子结构 .用PCR法从白细胞介素 2 (IL 2 )cDNA全序列中扩增成熟的肽基因片段 ,并利用定点突变技术将人重组白细胞介素 2第 12 5位游离的半胱氨酸... 为了提高人重组白细胞介素 2的稳定性和活性以及减少毒副作用 ,有必要定向改造rhIL 2的分子结构 .用PCR法从白细胞介素 2 (IL 2 )cDNA全序列中扩增成熟的肽基因片段 ,并利用定点突变技术将人重组白细胞介素 2第 12 5位游离的半胱氨酸编码序列突变为丙氨酸序列 .编码 18位亮氨酸的序列突变为蛋氨酸序列 ;编码 19位亮氨酸的序列突变为丝氨酸序列 .突变型人白细胞介素 2 (MvIL 2 )基因与表达载体pPIC9K重组 ,酶切线性化后用Invitrogen转化毕赤酵母试剂盒导入酵母细胞进行整合 ,经筛选得到一高表达白介素 2的克隆 .SDS PAGE显示 ,表达量约占总量的4 5 7% .经Western印迹验证 ,重组人白介素 2有免疫活性 ;与野生型IL 2相比 ,所获得的突变型IL 2纯品的比活性为 4 0× 10 7IU mg蛋白 ,比天然型IL 2高 4~ 展开更多
关键词 突变型人白细胞介素—2基因 巴斯德毕赤酵母 表达 定点突变
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提高外源基因在巴斯德毕赤酵母中表达量的研究进展 被引量:5
15
作者 肖生科 王磊 陈毓荃 《生物技术通报》 CAS CSCD 2004年第2期23-26,30,共5页
巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达系统是基因工程研究中广泛使用的真核表达系统 ,与现有的其它表达系统相比 ,巴斯德毕赤酵母在表达产物的糖基化修饰、折叠、加工、外分泌及表达量等方面有明显的优势。外源基因在该系统中表达时 ,... 巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达系统是基因工程研究中广泛使用的真核表达系统 ,与现有的其它表达系统相比 ,巴斯德毕赤酵母在表达产物的糖基化修饰、折叠、加工、外分泌及表达量等方面有明显的优势。外源基因在该系统中表达时 ,由于受基因内部的结构、分泌信号、甲醇诱导的浓度及诱导时间、培养温度、启动子、表达环境的 pH值等诸多因素的影响 ,一些外源蛋白的表达也存在着表达不够稳定、表达量较低 ,甚至不表达的情况。对影响巴斯德毕赤酵母表达的各种可能因素进行了分析 ,结合具体实践经验 ,就如何提高外源基因在巴斯德毕赤酵母中表达量的问题进行了综述。 展开更多
关键词 外源基因 巴斯德毕赤酵母 表达 基因工程 真核表达系统 表达产物
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人骨唾液酸蛋白在巴斯德毕赤酵母中的高效分泌表达 被引量:2
16
作者 董燕 王捷 +2 位作者 杨连生 张宏斌 郑文岭 《华南理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第1期26-29,共4页
以PCR方法扩增人bsp基因 ,与分泌型表达载体 pPICZαA重组 ,重组质粒经电击转化毕赤酵母GS115菌株 ,获得的GS115 /pPICZαA_hbsp表达菌株能高效分泌表达rhBSP .SDS_PAGE和Westernblot分析结果表明 ,产物的分子质量接近 6 6ku ,能发生特... 以PCR方法扩增人bsp基因 ,与分泌型表达载体 pPICZαA重组 ,重组质粒经电击转化毕赤酵母GS115菌株 ,获得的GS115 /pPICZαA_hbsp表达菌株能高效分泌表达rhBSP .SDS_PAGE和Westernblot分析结果表明 ,产物的分子质量接近 6 6ku ,能发生特异性抗原 展开更多
关键词 人骨唾液酸蛋白 巴斯德毕赤酵母 基因表达 分泌型表达载体 PCR方法 抗原-抗体反应
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巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白的优化策略 被引量:2
17
作者 樊英 李天保 +2 位作者 杨秀生 王建华 滕达 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期41-45,49,共6页
巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统已成为外源蛋白最理想的表达系统之一,诸多的优点体现了其广泛的研究价值和应用价值。综述了P.pastoris表达外源蛋白时在载体选择与利用、外源基因改造、翻译后修饰及表达稳定性等方面的优化策... 巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统已成为外源蛋白最理想的表达系统之一,诸多的优点体现了其广泛的研究价值和应用价值。综述了P.pastoris表达外源蛋白时在载体选择与利用、外源基因改造、翻译后修饰及表达稳定性等方面的优化策略,以加速其应用。 展开更多
关键词 巴斯德毕赤酵母 外源蛋白 优化表达
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巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)高效异源表达脂肪酶研究进展 被引量:2
18
作者 李杨 蔡海莺 +2 位作者 赵敏洁 李阳 冯凤琴 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期377-381,共5页
脂肪酶作为一种常见的工业用酶,广泛应用于食品、化妆品等与生活密切相关的工业领域,但较高的生产成本和使用成本,在一定程度上限制了其进一步应用。通过巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)异源表达系统重组表达脂肪酶,成为解决限制脂肪... 脂肪酶作为一种常见的工业用酶,广泛应用于食品、化妆品等与生活密切相关的工业领域,但较高的生产成本和使用成本,在一定程度上限制了其进一步应用。通过巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)异源表达系统重组表达脂肪酶,成为解决限制脂肪酶发展的方法之一。本文介绍了脂肪酶在P.pastoris表达系统中的异源表达及其优化策略,并对毕赤酵母表面展示异源脂肪酶的技术及应用进行了归纳。 展开更多
关键词 巴斯德毕赤酵母(P.pastoris) 脂肪酶 重组表达优化方法 表面展示技术
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BPI_(m23)重组抗菌蛋白在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达 被引量:3
19
作者 靖学芳 安云庆 杨贵贞 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期374-378,共5页
目的 :采用巴斯德毕赤酵母表达系统表达分泌型功能性rBPIm2 3抗菌蛋白。方法 :利用构建的pUC1 8 synBPI4 1 4质粒和PBV2 2 0 BPIm4 2 0 质粒 ,按分子克隆方法构建pPICZα synBPIm6 0 0 重组表达载体 ;用线性化pPICZα synBPIm6 0 0 质... 目的 :采用巴斯德毕赤酵母表达系统表达分泌型功能性rBPIm2 3抗菌蛋白。方法 :利用构建的pUC1 8 synBPI4 1 4质粒和PBV2 2 0 BPIm4 2 0 质粒 ,按分子克隆方法构建pPICZα synBPIm6 0 0 重组表达载体 ;用线性化pPICZα synBPIm6 0 0 质粒电转化PichiapastorisGS1 1 5 ,筛选抗性转化子 ,进行PCR和Mut表型鉴定 ;用甲醇诱导目的蛋白rBPIm2 3的表达 ;用离子交换层析纯化rBPIm2 3,并进行SDS PAGE分析、Westernblot鉴定和用BCA法定量。结果 :①成功构建了pPICZα synBPIm6 0 0 重组表达载体 ;②获得稳定整合目的基因的GS1 1 5菌株 ;③表达产物相对分子量约为 2 3kD ,可与抗BPI抗体特异性结合 ;④培养上清液中目的蛋白表达量约为 2 9mg L。结论 :BPIm2 3重组抗菌蛋白在毕赤酵母GS1 1 5中得到分泌表达。 展开更多
关键词 杀菌/渗透增强蛋白 BPIm23重组抗菌蛋白 巴斯德毕赤酵母 分泌表达
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捻转血矛线虫H11基因在巴斯德毕赤酵母中的表达 被引量:4
20
作者 严若峰 李祥瑞 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期85-89,共5页
将捻转血矛线虫H11基因亚克隆到酵母表达载体pPICZαB后,用氯化锂法转化巴斯德毕赤酵母菌株X33,通过含ZeocineTM抗生素的YPD平板筛选出72个重组子。重组酵母用甲醇诱导后,经RTPCR、SDSPAGE和Westernblot检测,结果表明捻转血矛线虫H11在... 将捻转血矛线虫H11基因亚克隆到酵母表达载体pPICZαB后,用氯化锂法转化巴斯德毕赤酵母菌株X33,通过含ZeocineTM抗生素的YPD平板筛选出72个重组子。重组酵母用甲醇诱导后,经RTPCR、SDSPAGE和Westernblot检测,结果表明捻转血矛线虫H11在巴斯德毕赤酵母中实现了表达。 展开更多
关键词 捻转血矛线虫 H11 巴斯德毕赤酵母 基因表达
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