用差异显示反转录PCR银染技术研究植物基因表达的差异 被引量：7

1

作者 毛爱军 王台 宋艳茹 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第5期736-739,共4页

通过调整差异显示反转录PCR (DDRT PCR)中总RNA、锚定引物、随机引物、cDNA和dNTP等关键试剂的用量 ,优化了适用于银染检测的DDRT PCR方法 .PCR扩增产物经 6 %变性聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳分离后 ,银染能检测到多而清晰的条带 .泳道中的... 通过调整差异显示反转录PCR (DDRT PCR)中总RNA、锚定引物、随机引物、cDNA和dNTP等关键试剂的用量 ,优化了适用于银染检测的DDRT PCR方法 .PCR扩增产物经 6 %变性聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳分离后 ,银染能检测到多而清晰的条带 .泳道中的条带数最少为 40个 ,最多达 80个 ,平均为 6 0个 ,条带大小分布在 10 0～ 90 0bp范围 ,灵敏度为 5pg/mm2 .此方法操作简便快速 ,灵敏度高 ,重复性好 .采用这个改良的方法 ,分析了拟南芥野生型和ast突变型基因表达的差异 .从 16 0 0 0个cDNA扩增产物条带中筛选出 2 8个差异条带 .二次PCR扩增后 ,进一步筛选出 13个差异条带 ,其中 7个是野生型特异表达的 ,6个是突变型特异表达的 。 展开更多

关键词 差异显示反转录PCR 银染 拟南芥 ast突变型 植物 基因表达

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苏太猪肌内脂肪沉积相关基因SRC-1的差异显示反转录PCR鉴定 被引量：1

2

作者 薛春阳 汪秀星 +4 位作者 王晓娜 刘红林 徐银学 程占军 陈杰 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期126-129,共4页

采取90头180日龄去势苏太猪的背最长肌组织测定肌内脂肪含量,从中选取肌内脂肪含量差异极显著(P<0.01)的最高和最低各6头组成RNA池,采用差异显示反转录PCR(DDRT-PCR)鉴定两组间差异表达的基因,结果共获得14条表达序列标签(expressed ... 采取90头180日龄去势苏太猪的背最长肌组织测定肌内脂肪含量,从中选取肌内脂肪含量差异极显著(P<0.01)的最高和最低各6头组成RNA池,采用差异显示反转录PCR(DDRT-PCR)鉴定两组间差异表达的基因,结果共获得14条表达序列标签(expressed sequence tags),即EST序列,通过GenBank比对发现其中3条为已知序列。为进一步验证这3个已知基因与肌内脂肪之间的关系,从90个个体中选取肌内脂肪最高和最低各15个个体进行实时定量PCR检测。结果表明,细胞核受体共激活因子1基因(SRC-1)mRNA表达水平与肌内脂肪含量存在负相关关系(r=-0.38,P<0.05)。提示:SRC-1蛋白有可能参与了肌内脂肪沉积的调节。 展开更多

关键词 差异显示反转录PCR 肌内脂肪 实时荧光定量PCR 细胞核受体共激活因子1基因(SRC-1) 苏太猪

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差异显示反转录-PCR及抑制性扣除杂交在基因表达差异分析中的应用 被引量：2

3

作者 黄升谋 邹应斌 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 2002年第2期183-185,共3页

差异显示反转录 -PCR和抑制性扣除杂交是目前广泛应用于基因表达差异分析的方法 ,它们分别具有灵敏度高假阳性率低等特点 ,对其原理、技术。

关键词 差异显示反转录-PCR 抑制性扣除杂交 基因表达差异分析 应用

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mRNA差异显示反转录PCR技术的发展及其在神经科学中的应用 被引量：1

4

作者 胡震 杨树源 《现代神经疾病杂志》 2003年第5期286-290,共5页

关键词 mRNA差异显示反转录PCR技术 神经科学 差别性表达 功能基因组

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反转录差异显示技术及其方法的改进 被引量：6

5

作者 朱靖 杜立新 《动物医学进展》 CSCD 2005年第1期19-21,共3页

运用mRNA反转录差异显示技术可以了解不同细胞或同类细胞在不同发育阶段、不同生理状态下的基因表达状况 ,为研究生命活动过程提供重要信息。文章对差异显示反转录聚合酶链式反应技术的基本原理 ,优点与缺点 ,以及近年来对该技术涉及的R... 运用mRNA反转录差异显示技术可以了解不同细胞或同类细胞在不同发育阶段、不同生理状态下的基因表达状况 ,为研究生命活动过程提供重要信息。文章对差异显示反转录聚合酶链式反应技术的基本原理 ,优点与缺点 ,以及近年来对该技术涉及的RT PCR方法、引物设计、PCR反应参数、电泳及差异条带的显示方法以及杂交方式进行了论述和评价 ,并对其应用前景进行了简单分析。 展开更多

关键词 反转录差异显示PCR 反向northern印迹 银染

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人胎脑mRNA的差异显示分析及脑表达新ESTs的分离 被引量：4

6

作者 潘美辉 袁建刚 +4 位作者 陈斌 周彦 方鸣武 梁植权 强伯勤 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期93-99,共7页

应用mRNA差异显示技术分析人胎脑组织不同发育阶段及不同部位基因表达的差异并研究其特异表达的基因。以3个锚定引物Oligo（dT）12M（M=A，G，C）及20个随机引物，对脑组织mRNA进行了近50次差异显示分析，共分离出上百个差示产物。对其... 应用mRNA差异显示技术分析人胎脑组织不同发育阶段及不同部位基因表达的差异并研究其特异表达的基因。以3个锚定引物Oligo（dT）12M（M=A，G，C）及20个随机引物，对脑组织mRNA进行了近50次差异显示分析，共分离出上百个差示产物。对其中部分产物进行克隆、测序获得了39个CDNA序列，长度为100～500bp。其中34个已被Genbank接受并给予新序列编号。 展开更多

关键词 差异显示反转录 PCR 人胎脑 表达序列标签

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差异基因的高通量筛选研究 被引量：1

7

作者 刘岩 王海龙 孟智启 《浙江农业科学》 2009年第3期611-613,共3页

随着多个生物体全基因组序列的公布,研究重点更多地转移到基因功能分析上,基于生物品质改良、基因诊断及疾病治疗等考虑,分离并克隆生命体生长发育等过程的时空特异性差异表达基因也越来越受到关注。论文围绕近年来较具代表性的5种分析... 随着多个生物体全基因组序列的公布,研究重点更多地转移到基因功能分析上,基于生物品质改良、基因诊断及疾病治疗等考虑,分离并克隆生命体生长发育等过程的时空特异性差异表达基因也越来越受到关注。论文围绕近年来较具代表性的5种分析方法,即表达序列标签、差异显示反转录PCR、抑制消减杂交、基因表达系列分析和微阵列技术,分析各方法的原理及优缺点,以期对今后开展研究时的选择起到参考作用。 展开更多

关键词 差异基因 表达序列标签 差异显示反转录PCR 抑制消减杂交 基因表达系列分析 微阵列技术

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EGF作用下人脑胶质瘤细胞生长抑制的机理

8

作者 王欣 周明锐 +1 位作者 黄秉仁 蔡良琬 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期139-144,共6页

目的 克隆、测序胶质细胞瘤 BT325细胞在生长抑制量表皮生长因子 (epithelial growth factor EGF)作用下差异表达的基因,了解 BT325细胞生长抑制的分子机制。方法 在生长抑制量 EGF 作用下,用差异显示反转录聚合酶链反应 (differential ... 目的 克隆、测序胶质细胞瘤 BT325细胞在生长抑制量表皮生长因子 (epithelial growth factor EGF)作用下差异表达的基因,了解 BT325细胞生长抑制的分子机制。方法 在生长抑制量 EGF 作用下,用差异显示反转录聚合酶链反应 (differential display reversed transcription polym erase chain reaction DDRT-PCR ) 技 术 分析 人 胶 质 细胞瘤 BT325细胞表达 水 平 明显 差 异 的 cDNA , 对差 异 显 示 基因 进 行 序 列 测定 和 同 源 比较 , 并 用 Dot blot及 Northernblot等方法进行验证。结果 在 EGF 作用下,生长抑制的胶质瘤细胞中出现一些上调和下调表达的 cDNA 片段。克隆、分离了 6个表达明显上调的 ESTs,1个序列为新的基因片段,另 5个与已知基因有不同程度的同源,其中 1个与转醛缩酶基因的编码区同源。新近的研究已发现,转醛缩酶与细胞凋亡有关。结论 高剂量 EGF 可诱导 BT325中许多基因表达水平的改变,EGF 抑制 BT325细胞生长可能与促进转醛缩酶基因的表达而诱导细胞凋亡有关。 展开更多

关键词 胶质细胞瘤BT325 差异显示反转录聚合酶链反应 表皮生长因子 基因表达

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K562细胞向红系分化相关EST的鉴别与分析

9

作者 余佳 张俊武 +1 位作者 彭瀚 陈等 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期150-154,共5页

目的 鉴别并获取与 K562细胞向红系分化相关的表达序列标签 (expressed sequence tags,EST)。方法利用改进的差异显示反转录聚合酶链反应 (differential display reverse transcription polym erase chain reaction DDRT-PCR )方法,分... 目的 鉴别并获取与 K562细胞向红系分化相关的表达序列标签 (expressed sequence tags,EST)。方法利用改进的差异显示反转录聚合酶链反应 (differential display reverse transcription polym erase chain reaction DDRT-PCR )方法,分析诱导前及用氯高铁血红素 (hem in)诱导 36h 后 K 562细胞的差异表达 cDNA 片段,挑选其中差异明显的cDNA 片段,经克隆、测序和基因信息学分析,挑选代表新序列或有一定功能线索的差异表达 EST 进行 Northern 印迹分析。结果 获得诱导前后 K 562细胞的差异表达 cDNA 片段 60条,其中 38条表达上调,22条表达下调。对 40个差异表达明显的 cDNA 片段的生物信息学分析说明,23个 EST 与 GenBank 中已知序列有 95%以上同源性,10个为只与 dbEST 有高度同源的序列,7个未发现同源序列;进行 Northern 印迹分析的 8个差异表达 EST 中,6个 EST 的杂交结果与 DDRT-PCR 显示的差异表达状况一致。结论 改进的 DDRT-PCR 方法能够较好地克服假阳性问题,这些差异表达 EST 的获得为进一步研究红系分化的分子机制和控调网络提供了一定线索。 展开更多

关键词 差异显示反转录聚合酶链反应 K562细胞 细胞分化 表达序列标签

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小鼠衰老相关新基因Arzc的克隆 被引量：1

10

作者 陈等 张俊武 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期194-198,共5页

目的鉴别和克隆与小鼠衰老相关的新基因。方法采用改进的差异显示反转录聚合酶链反应(D DR T-PCR)技术分析正常老化和年轻BA LB/C小鼠大脑皮层m R NA的差异表达,差异显示的新表达序列标签(EST)经N orthern杂交验证后,作为出发序列,利用... 目的鉴别和克隆与小鼠衰老相关的新基因。方法采用改进的差异显示反转录聚合酶链反应(D DR T-PCR)技术分析正常老化和年轻BA LB/C小鼠大脑皮层m R NA的差异表达,差异显示的新表达序列标签(EST)经N orthern杂交验证后,作为出发序列,利用生物信息学方法设计引物,以小鼠大脑皮层总R NA的反转录产物为模板通过PCR克隆全长cD NA。结果差异显示分析共获得表达差异明显的EST42条,序列同源性分析显示其中29条为已知基因cD NA片段,13条可能为新EST。对新EST进行N orthern杂交验证后,对确证在正常老化鼠皮层表达明显下调的1个EST,通过生物信息学方法克隆全长cDN A,得到1个新的1382bp的cD NA序列,命名为Arzc,获得G enBank注册号A Y344585。该序列含有1个261bp的开放阅读框,推测的编码多肽包含86个氨基酸残基,与噬菌体编码的重组酶/整合酶的一段氨基酸序列有较高同源性。结论鉴别并克隆到一个可能与小鼠衰老相关的新基因A rzc。 展开更多

关键词 差异显示反转录多聚酶链反应 小鼠 衰老 表达序列标签 基因

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功能基因组学研究进展 被引量：2

11

作者 庄金秋 贾杏林 《动物医学进展》 CSCD 2004年第4期32-36,共5页

2 1世纪是生物时代和信息时代 ,基因组学的研究已从结构基因组学转向功能基因组学 ,对于基因功能的研究也由单一基因转向大规模、批量分析。文章对功能基因组学及相关学科的概念作了概述 ,介绍了功能基因组学的研究内容与研究方法 ,主... 2 1世纪是生物时代和信息时代 ,基因组学的研究已从结构基因组学转向功能基因组学 ,对于基因功能的研究也由单一基因转向大规模、批量分析。文章对功能基因组学及相关学科的概念作了概述 ,介绍了功能基因组学的研究内容与研究方法 ,主要包括应用差异显示反转录 PCR、基因表达序列分析 (SAGE)、微点阵、蛋白质组学和生物信息学等研究基因组表达概况、基因组多样性和模式生物学等。 展开更多

关键词 功能基因组学 差异显示反转录PCR 基因表达 序列分析 微点阵 蛋白质组学 生物信息学

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花生果种皮特异表达基因候选片段的分离

12

作者 蔡宁波 张君诚 +3 位作者 兰岚 庄伟建 赵永莉 李毓 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第6期596-598,共3页

应用改良的琼脂糖凝胶电泳展示DDRT-PCR产物的方法分离花生果种皮特异表达基因,共分离出24条差异表达片段.经测序后排除重复,最终得到8条差异片段.其中1条为花生上已知基因片段,余下7条均为花生上尚未报道过的基因.此7个片段序列已登录G... 应用改良的琼脂糖凝胶电泳展示DDRT-PCR产物的方法分离花生果种皮特异表达基因,共分离出24条差异表达片段.经测序后排除重复,最终得到8条差异片段.其中1条为花生上已知基因片段,余下7条均为花生上尚未报道过的基因.此7个片段序列已登录Genbank,其登录号分别为DQ450065、DQ450066、DQ450067、DQ450068、DQ450069、DQ450070、DQ450071.同时本研究还对应用琼脂糖电泳分离DD-PCR产物的方法进行了探讨. 展开更多

关键词 花生 果种皮 特异基因 反转录差异显示技术

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